KHÓA LUẬN tốt NGHIỆP dược học FULL (dược LIỆU và dược cổ TRUYỀN) bước đầu nghiên cứu thành phần hóa học của cây cỏ rươi lá bắc

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC - - BƯỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY CỎ RƯƠI LÁ BẮC (Murdannia bracteata J.K.Morton ex D.Y.Hong) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC HÀ NỘI – 2020 DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt δ (ppm) Tên tiếng Anh δ (ppm = part per million) ALT Alanine transaminase AST Aspartate transaminase d doublet dd double doublet 13 Tên tiếng Việt Độ dịch chuyển hóa học C-NMR C Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy Phổ cộng hưởng từ hạt nhân cacbon-13 DEPT Distortionless Enhancement by Polarization Transfer Phổ DEPT 13 D-GalN dLGG D-galactosamine N 1,2-di-O-α-linolenoyl-3-O-βgalactopyranosyl-sn-glycerol Half Maximal Effective Concentration Nồng độ cho 50% tác dụng tối đa ESI-MS Electrospray Ionization Mass Spectrometry Khối phổ đo phương pháp ion hóa phun điện tử EtOAc Ethyl acetate EtOH Ethanol FTIR Fourier Transform Infrared Spectroscopy Phổ hồng ngoại biến đổi Fourier GC-MS Gas Chromatography-Mass Spectrometry Sắc ký khí ghép khối phổ Galactolipids-enriched Extract of M bracteata Dịch chiết giàu galactolipid Murdannia bracteata EC50 GLE Chữ viết tắt H-NMR HE Tên tiếng Anh Tên tiếng Việt H Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton Hexane Extract of M bracteata Dịch chiết hexan M bracteata HMBC Heteronuclear Multiple Bond Phổ tương tác dị hạt nhân qua Correlation nhiều liên kết HPLC High Performance Liquid Chromatography Sắc ký lỏng hiệu cao HSQC Heteronuclear Single Quantum Coherence Phổ tương tác dị hạt nhân qua liên kết Half Maximal Inhibitory Concentration Nồng độ ức chế tối đa nửa iNOS Inducible Nitric Oxide Synthase NO synthase cảm ứng IR Infrared Spectroscopy Phổ hồng ngoại J (Hz) J coupling constant Hằng số ghép LPS Lipopolysaccharide ME Methanol Extract of Murdannia bracteata IC50 MeOH MIC Dịch chiết methanol M bracteata Methanol Minimun Inhibitory Concentration Nồng độ ức chế tối thiểu chất có hoạt tính kháng sinh s singlet SI Selective Index Hệ số chọn lọc Ultra Performance Liquid Chromatography Sắc ký lỏng siêu hiệu UPLC DANH MỤC HÌNH ẢNH STT Tên hình Trang Hình 1.1 Đặc điểm thực vật số loài thuộc chi Murdannia Việt Nam Hình 1.2 Hoa số lồi thuộc chi Murdannia Hình 1.3 Đặc điểm quan sinh dưỡng Murdannia bracteata Hình 1.4 Đặc điểm quan sinh sản Murdannia bracteata Hình 3.1 Sơ đồ chiết xuất phân đoạn từ Cỏ rươi bắc 26 Hình 3.2 Sơ đồ phân lập hai hợp chất từ phân đoạn ethyl acetat 27 Hình 3.3 Cấu trúc hóa học hợp chất CT1 29 Hình 3.4 Cấu trúc hóa học hợp chất CT2 30 5-6 DANH MỤC BẢNG BIỂU STT Tên bảng Bảng 1.1 Phân bố loài thuộc chi Murdannia Việt Nam Bảng 1.2 Một số hợp chất phân lập từ Murdannia bracteata Bảng 3.1 Kết định tính nhóm chất hữu phương pháp hóa học Trang 4-5 11 - 12 24 - 25 Số liệu phổ DEPT, 1H- 13C-NMR CT1 chất Bảng 3.2 tham khảo đo DMSO 28 Số liệu phổ DEPT, 1H- 13C-NMR CT2 chất Bảng 3.3 tham khảo đo DMSO 29 - 30 MỤC LỤC MỞ ĐẦU .1 CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan chi Murdannia 1.1.1 Vị trí phân loại chi Murdannia 1.1.2 Số lượng loài phân bố loài thuộc chi Murdannia 1.1.3 Đặc điểm thực vật chi Murdannia 1.2 Tổng quan loài Murdannia bracteata 1.2.1 Đặc điểm hình thái lồi Murdannia bracteata 1.2.2 Đặc điểm phân bố loài Murdannia bracteata 1.2.3 Thành phần hóa học Murdannia bracteata 1.2.4 Tác dụng sinh học Murdannia bracteata 13 1.2.5 Công dụng Murdannia bracteata theo y học cổ truyền 16 1.2.6 Sản phẩm có thành phần Murdannia bracteata thị trường 16 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.1 Đối tượng nghiên cứu 17 2.1.1 Nguyên liệu 17 2.1.2 Hóa chất, trang thiết bị .17 2.2 Phương pháp nghiên cứu 18 2.2.1 Phương pháp định tính nhóm chất hữu có Cỏ rươi bắc 18 2.2.2 Phương pháp chiết xuất, phân lập xác định cấu trúc số hợp chất có Cỏ rươi bắc 22 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN .24 3.1 Kết định tính nhóm chất phương pháp hóa học 24 3.2 Kết chiết xuất, phân lập số hợp chất Cỏ rươi bắc25 3.2.1 Chiết phân đoạn từ Cỏ rươi bắc 25 3.2.2 Phân lập hợp chất sắc ký cột .26 3.2.3 Xác định cấu trúc hợp chất phân lập 27 3.3 Bàn luận 31 3.3.1 Về định tính nhóm chất 31 3.3.2 Về chiết xuất phân lập 32 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 36 MỞ ĐẦU Nhờ có vị trí địa lý thuận lợi, khí hậu nhiệt đới độ ẩm cao, Việt Nam sở hữu hệ sinh thái vô phong phú đa dạng Cây cối sinh trưởng, phát triển mạnh, nguồn tài nguyên quan trọng cho tiềm dược liệu Theo ước tính nước ta có 12000 lồi thực vật bậc cao, số có khoảng 4000 lồi sử dụng làm thuốc [5] Ngày nay, nhu cầu thuốc có nguồn gốc dược liệu ngày tăng, việc sâu vào nghiên cứu, xác minh kinh nghiệm y học cổ truyền tìm kiếm hợp chất tự nhiên có hoạt tính sinh học cao giới quan tâm [1] Đặc biệt Việt Nam, đất nước giàu tài nguyên dược liệu, xu hướng phát triển sản phẩm từ tự nhiên hướng đắn Thảo dược đối tượng lý tưởng để nhà khoa học sàng lọc tìm hoạt chất cho tác dụng mạnh, độc tính thấp, giảm thiểu chi phí nghiên cứu phát triển so với tổng hợp hóa học Mỗi thuốc có chứa hỗn hợp hợp chất khác nhau, nhiên trường hợp hầu hết chưa xác định rõ hợp chất cho tác dụng điều trị Chính vậy, việc nghiên cứu thành phần hóa học loài đem lại ý nghĩa khoa học giá trị thực tiễn cao Những tiến định tính định lượng phân tử thuốc từ thực vật giúp hiểu rõ mối quan hệ thành phần tác dụng chúng Cây Cỏ rươi bắc thuộc chi Murdannia, chi lớn họ Thài lài (Commelinaceae) Chi phân bố chủ yếu vùng nhiệt đới ơn đới ấm [18], thích hợp với khí hậu nóng ẩm; Việt Nam có 16 lồi, loài sử dụng làm thuốc [2] Cỏ rươi bắc, tên khoa học Murdannia bracteata J.K.Morton ex D.Y.Hong, tìm thấy Trung Quốc, Lào, Thái Lan, Việt Nam [48] Một số nghiên cứu giới ghi nhận loài có tác dụng kháng khuẩn [47], chống viêm [46], bảo vệ gan [49], hỗ trợ điều trị ung thư gan tiểu đường [39] Trong y học cổ truyền số nước, Murdannia bracteata dùng để trị ho [30], kháng viêm [2], chữa bệnh gan, thận [39] Tuy nhiên, nghiên cứu cụ thể thành phần hóa học tác dụng sinh học Cỏ rươi bắc Việt Nam cịn hạn chế Để góp phần xây dựng sở khoa học cho việc ứng dụng Cỏ rươi bắc điều trị bệnh, lựa chọn thực đề tài: “Bước đầu nghiên cứu thành phần hóa học Cỏ rươi bắc (Murdannia bracteata J.K.Morton ex D.Y.Hong)” với mục tiêu sau: Định tính sơ thành phần hóa học Cỏ rươi bắc Chiết xuất, phân lập xác định cấu trúc 02 hợp chất từ Cỏ rươi bắc CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan chi Murdannia 1.1.1 Vị trí phân loại chi Murdannia Theo hệ thống phân loại thực vật có hoa APG IV (2016) [12], vị trí phân loại chi Murdannia sau: Giới Thực vật (Plantae) Thực vật có hoa (Angiosperms) Thực vật mầm (Monocots) Nhánh Thài lài (Commenlinids) Bộ Thài lài (Commelinales) Họ Thài lài (Commelinaceae) Chi: Murdannia 1.1.2 Số lượng loài phân bố loài thuộc chi Murdannia 1.1.2.1 Trên giới Chi Murdannia chi lớn thuộc họ Commelinaceae, gồm khoảng 60 loài, phân bố chủ yếu vùng nhiệt đới ôn đới ấm; đặc biệt Châu Á với 50% số lượng loài [18] Các nghiên cứu thực nhiều Ấn Độ ghi nhận riêng nước có đến 29 lồi [35] Ngồi ra, Châu Phi có 11 lồi [19], Trung Nam Mỹ có lồi [18] 1.1.2.2 Ở Việt Nam Theo GS.TS Phạm Hồng Hộ, chi Murdannia Việt Nam có 15 loài, phân bố số nơi Bảng 1.1 [2, 3] World Checklist of Selected Plant Families (2004) có ghi nhận thêm 01 loài Murdannia graminea [22] Trong đó, lồi sử dụng làm thuốc M bracteata, M divergens, M edulis, M medica, M nudiflora, M simplex, M triquetra [2] Bảng 1.1 Phân bố loài thuộc chi Murdannia Việt Nam Loài Murdannia bracteata J.K.Morton ex D.Y.Hong Murdannia divergens (C.B.Clarke) Bruckner Tên gọi khác Trai hoa Các tỉnh phía Bắc (Ninh Bình, Nam Định,…) đến Thừa Thiên – Huế, Quảng Nam, Đà Nẵng Trai rẽ Từ Lâm Đồng đến tỉnh Nam Bộ Lõa trai Lâm Đồng, Phú Yên, Ninh Thuận, Bình Phước, TP Hồ Chí Minh Murdannia edulis (Stokes) Faden Phân bố Murdannia gigantea Hoang nguyên – 1500m (Vahl.) Bruckner Murdannia japonica (Thurnb.) Faden Trai Nhật Hà Nam, Nam Định, Ninh Bình, Đồng Nai Murdannia keisak (Hassk.) Handel-Mazz Trai sắc Hồng Liên Sơn, Phú n, Khánh Hịa Murdannia medica (Lour.) D.Y.Hong Trai thuốc Thừa Thiên – Huế, Khánh Hòa, Lâm Đồng, Đồng Nai Lõa trai trần Lào Cai, Lạng Sơn, Quảng Ninh, Bắc Giang, Vĩnh Phúc, Hịa Bình, Hà Nội, Hà Nam, Nghệ An, Quảng Trị, Thừa Thiên – Huế, Đà Nẵng, Quảng Nam, Lâm Đồng, Khánh Hòa, TP Hồ Chí Minh Trai sn Phan Rang Trai đơn giản Khánh Hịa, Ninh Thuận, Lâm Đồng Trai lơng lẩy Từ Huế đến Đà Lạt, Đồng Nai Murdannia nudiflora (L.) Brenan Murdannia semiteres (Dalz.) Santapau Murdannia simplex (Vahl.) Brenan Murdannia spectabilis (Kurz) Faden CT1-DMSO-HMBC ppm 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 13 12 11 10 210 ppm CT1-DMSO-HMBC ppm 95 100 105 110 115 120 125 130 135 140 145 150 155 160 165 170 175 180 185 13 12 11 10 ppm CT1-DMSO-HMBC ppm 95 100 105 110 115 120 125 130 135 140 145 150 155 160 165 170 175 180 8.0 7.8 7.6 7.4 7.2 7.0 6.8 6.6 6.4 6.2 ppm Display Report - Selected Window Selected Analysis Analysis Name: CT2.d Cot150x3mm.m Method: Sample CT2 Name: Column Eclipse XDB-C18, 4.6 x150mm Analysis Info: MSD Trap Report v (A4-Opt2) Instrument: Operator: LC-MSD-Trap-SL 2195410AE0000515 Page of Print Date: 14/4/2020 1:36:14 PM Acq Date: 14/4/2020 1:36:01 PM CT2-DMSO-1H 7.676 7.670 7.549 9.5 39 9.3 3.297 2.508 2.503 Current Data Parameters NAME MAI_CT2 EXPNO 10 PROCNO F2 - Acquisition Parameters Date_ 20200409 Time 16.14 INSTRUM spect PROBHD mm PABBO BB/ PULPROG zg30 TD 65536 SOLVENT DMSO NS 16 DS SWH 10000.000 Hz FIDRES 0.152588 Hz AQ 3.2767999 sec RG 111.09 DW 50.000 usec DE 6.50 usec TE 304.2 K D1 1.00000000 sec TD0 ======== CHANNEL f1 ======== SFO1 500.1920889 MHz NUC1 1H P1 10.20 usec PLW1 22.00000000 W F2 - Processing parameters SI 65536 SF 500.1890051 MHz WDW EM SSB LB 0.30 Hz GB 1.00 PC 14 13 ppm 00 12 11 81 10 0.94 2.00 1.00 1.03 1.02 1.04 1.00 7 1.03 7.676 7.670 7.549 7.543 7.532 7.526 7 7 1.02 6.894 6.875 6 1.04 6.406 6.401 1.02 p p m 6.188 6.183 C T D M S CT2-DMSO-C13CPD 163.83 160.68 156.10 147.65 121.92 119.93 115.56 115.04 40.00 39.83 39.66 Current Data Parameters NAME LOI_CT2 EXPNO PROCNO F2 - Acquisition Parameters Date_ 20200410 Time 6.19 INSTRUM spect PROBHD mm PABBO BB/ PULPROG zgpg30 TD 65536 SOLVENT DMSO NS 256 DS SWH 31250.000 Hz FIDRES 0.476837 Hz AQ 1.0485760 sec RG 198.57 DW 16.000 usec DE 6.50 usec TE 304.7 K D1 2.00000000 sec D11 0.03000000 sec TD0 ======== CHANNEL f1 ======== SFO1 125.7864591 MHz NUC1 13C P1 10.00 usec PLW1 88.00000000 W ======== CHANNEL f2 ======== 0 0 M H z 1H CPDPRG[2 PCPD2 usec PLW2 W PLW12 W PLW13 W waltz16 80.00 22.00000000 0.35764000 0.17989001 F2 - Processing parameters 220 200 20 180 160 ppm 140 120 100 80 60 40 SI SF WDW SSB LB GB PC 0 32768 125.7726885 MHz EM 1.00 Hz 1.40 175.79 163.83 160.68 156.10 147.65 146.77 145.01 135.67 2 1 121.92 119.93 115.56 115.04 1 1 p p 102.97 98.14 93.30 C T D M S O - CT2-DMSO-C13CPD&DEPT DEPT90 210 200 70 190 60 180 50 170 40 160 30 150 20 140 10 130 ppm 120 110 100 90 80 190 60 180 50 170 40 160 30 150 20 140 10 130 ppm 120 110 100 90 80 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 DEPT135 CH&CH3 CH2 210 200 70 C13CPD 210 200 190 180 170 160 150 140 130 120 ppm 210 200 190 180 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 ppm CT2-DMSO-C13CPD&DEPT DEPT90 DEPT135 120 115 110 105 100 95 ppm 120 115 110 105 100 95 ppm 120 115 110 105 100 95 ppm CH&CH3 CH2 C13CPD CT2-DMSO-HSQC ppm 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95 100 105 110 115 120 125 130 ppm CT2-DMSO-HSQC ppm 92 94 96 98 100 102 104 106 108 110 112 114 116 118 120 7.6 7.4 7.2 7.0 6.8 6.6 6.4 6.2 ppm CT2-DMSO-HMBC ppm 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 13 12 11 10 ppm ... Việt Nam cịn hạn chế Để góp phần xây dựng sở khoa học cho việc ứng dụng Cỏ rươi bắc điều trị bệnh, lựa chọn thực đề tài: ? ?Bước đầu nghiên cứu thành phần hóa học Cỏ rươi bắc (Murdannia bracteata... môn Dược liệu Dược học cổ truyền, Bộ môn Bào chế Công nghệ Dược phẩm, Khoa Y Dược, ĐHQGHN 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Phương pháp định tính nhóm chất hữu có Cỏ rươi bắc Nguyên liệu nghiên cứu. .. thư Trà Rumput Beijing Tea – Thành phần chính: Murdannia bracteata CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu 2.1.1 Nguyên liệu Cây Cỏ rươi bắc có hoa thu hái huyện Trực