Luận văn sư phạm Bước đầu nghiên cứu thành phần hoá học của cây Đa (Ficus Depressa BL.)

Tr ng HSP Hà N i TR Khóa lu n t t nghi p NG I H C S PH M HÀ N I KHOA HịA H C - - Nguy n v n toƠn B c đ u nghiên c u thƠnh ph n hóa h c c a da (ficus depressa bl.) KHOÁ LU N T T NGHI P IH C Chuyên ngƠnh: Hoá h u c Ng i h ng d n khoa h c PGS.TS Nguy n V n Tuy n HƠ N I - 2010 Nguy n V n Tồn K32C - Khoa Hóa h c Tr ng HSP Hà N i Khóa lu n t t nghi p L IăC Mă N V i lòng bi t n sâu s c, xin chân thành c m n ẫẢẮ.TẮăNguy nă V nă Tuy n, ng i giao đ tài, t n tình h ng d n giúp đ tơi hồn thành khóa lu n Tôi xin chân thành c m n Th.ẮăNguy nă anh ch t p th phịng Hóa D th c t p t i phịng Hóa D ẾăVinh, c t n tình giúp đ ch b o làm c – Vi n Hóa h c – Vi n Khoa h c Công ngh Vi t Nam Tôi xin g i l i c m n t i TẮ.ă Nguy nă V nă B ng, th y cô giáo Khoa Hóa h c – Tr ng HSP Hà N i 2, b n bè ng i thân t o u ki n đ tơi hồn thành t t khóa lu n Tơi xin chân thành c m n! Hà N i, tháng n m 2010 Sinh viên Nguy năV năToàn Nguy n V n Toàn K32C - Khoa Hóa h c Tr ng HSP Hà N i Khóa lu n t t nghi p CÁCăCH ăVI TăT TăDÙNẢăTậONẢăLU NăV N 13 C-NMR: Carbon- 13 Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy H-NMR: Proton Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy DEPT: Distortionless Enhancement by Polarisation Transfer ESI-MS: Ph kh i ion hoá b i n t EI-MS: Ph kh i va ch m n đ HMQC: Heteronuclear Multiple Quantum Corehence HMBC: Heteronuclear Multiple Bond Correlation COSY: Correlated Spectroscopy IR: Infrared Spectroscopy CC: Column Chromatography MPLC: Median Pressure Liquid Chromatography HPLC: Hight Perfomence Liquid Chromatography CTPT: Công th c phân t s: Singlet d: Doublet t: Triplet q: Quartet dd: Doublet doublet m: Multiplet : d ch chuy n hoá h c J: H ng s t ng tác TMS: tetrametyl silan nc: i m nóng ch y ppm: Part per milion Hz: Hertz Nguy n V n Tồn K32C - Khoa Hóa h c Tr ng HSP Hà N i Nguy n V n Tồn Khóa lu n t t nghi p K32C - Khoa Hóa h c Tr ng HSP Hà N i Khóa lu n t t nghi p L I CAM OAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên c u c a riêng tơi Các s li u, k t qu khóa lu n trung th c c a b n thân Các k t qu nghiên c u không h chép c a N u có v n đ khơng tơi xin hồn tồn ch u trách nhi m Sinh viên Nguy n V n Toàn Nguy n V n Toàn K32C - Khoa Hóa h c Tr ng HSP Hà N i Khóa lu n t t nghi p M cl c Trang M U………………………………………………………………………01 CH NG 1: T NG QUAN…………………………………………………03 1.1 Tìm hi u chung v h Dơu T m (Moraceae) vƠ cơy thu c chi Ficus………………………………………………………………………… 03 1.1.1 H Dâu t m (Moraceae) 03 1.1.2 Chi Sung (Ficus)……………………………………………………… 03 1.2 Gi i thi u loài Ficus…………………………………………………04 1.3 M t s k t qu nghiên c u hoá h c c a chi Ficus…………………… 07 1.3.1 Các h p ch t tecpenoit .07 1.3.2 Các h p ch t ancaloit 16 1.3.3 Các h p ch t flavonoit 18 CH NG 2: IT Nguy n V n Toàn NG, NHI M V , PH NG PHÁP .21 K32C - Khoa Hóa h c Tr ng HSP Hà N i 2.1 it Khóa lu n t t nghi p ng, nhi m v c a lu n v n 21 2.2 Ph ng pháp nghiên c u .21 2.2.1 Ph ngăphápăphânăl păẾáẾăh pă Ếh t 21 2.2.2.ăẫh ngăphápăxáẾăđ nhăẾ uă trúc……………………………………….21 2.2.3.ăẫh ngăpháp:ăTh ăho tătínhăkhángăviăsinhăv tăki măđ nhă(ẫhaă lỗngăđaăn ngă đ ) 22 D ng 2.3 c vƠ thi t b nghiên mơi hố li u th c c u 22 2.4 Dung ch t .23 2.5 Nguyên v t 23 2.6 Chi t xu t vƠ phơn l p ch t 23 2.6.1.ăăThuăháiăvàăx ăălýă m u 23 2.6.2 Ắ ăđ ăẾhi tăt ăẾâyă Da .24 Nguy n V n Tồn K32C - Khoa Hóa h c Tr ng HSP Hà N i 2.6.3 ẫhână Khóa lu n t t nghi p l pă Ếh tă t ă Ế nă hexan- diclometan 25 Ch ng 3: k t qu th o lu n .26 3.1 đ H ng s v t lý vƠ d ki n ph c a ch t phơn l p c .26 3.1.1 Ch t 83 (3-O-(E)-cinnamoyl -amyrin): 26 3.1.2 Ch t 84 ( -sitosterol): 27 3.1.3 Ch t (axit betulinic): 28 3.2 Xác đ nh c u trúc h p ch t phân l p đ c t Da : 28 3.2.1 Ch t 83 (3-O-(E)-cinnamoyl - amyrin): 28 3.2.2 Ch t 84 ( - sitosterol): 33 3.2.3 Ch t (axit betulinic) 34 3.3.Kh o sát ho t tính c a ch t phơn l p vƠ t ng h p đ c: .36 K T LU N 37 Nguy n V n Toàn K32C - Khoa Hóa h c Tr ng HSP Hà N i TÀI Khóa lu n t t nghi p LI U THAM KH O 38 PH L C 41 Nguy n V n Toàn K32C - Khoa Hóa h c Tr ng HSP Hà N i Khóa lu n t t nghi p M Vi t Nam n U c n m vùng khí h u nhi t đ i gió mùa, đ m cao V i u ki n thiên nhiên thu n l i nh v y nên h th c v t Vi t Nam phát tri n r t đa d ng phong phú v i kho ng 12.000 loài th c v t b c cao, khơng k đ n lồi t o, rêu n m Nhi u lồi s t xa x a đ n đ c s d ng y h c c truy n m c đích khác ph c v đ i s ng c a nhân dân ta Nghiên c u, tìm ki m h p ch t có ngu n g c thiên nhiên có ho t tính sinh h c cao đ đ i s ng ng đ ng d ng y h c, nơng nghi p m c đích khác i m t nh ng nhi m v quan tr ng c nhà khoa h c n c h t s c quan tâm V i s phát hi n nhi u ch t có ho t tính sinh h c có giá tr t thiên nhiên, nhà khoa h c có nh ng đóng góp đáng k vi c t o lo i thu c u tr nh ng b nh nhi t đ i b nh hi m nghèo nh : penicillin (1941); artemisinin (nh ng n m 1970); , đ kéo dài tu i th nâng cao ch t l ng cu c s ng c a ng i Thiên nhiên không ch ngu n nguyên li u cung c p ho t ch t quý hi m đ t o bi t d ch t d n đ đ c mà cung c p ng đ t ng h p lo i thu c m i T nh ng ti n ch t c phân l p t thiên nhiên, nhà khoa h c chuy n hoá chúng thành nh ng ho t ch t có kh n ng tr b nh r t cao T công d ng dân gian nghiên c u hi n đ i nhà khoa h c, v ho t tính sinh h c c a chi … tơi l a ch n chi làm đ i t ng nghiên c u M c đích c a khóa lu n nghiên c u thành ph n Hóa h c c a Ficcus Depressa Bl đ tìm tác d ng c a T m c đích nghiên c u trên, tơi đ a n i dung nghiên c u c a khóa lu n nh sau:  Nghiên c u thành ph n Hóa h c c a Ficcus Depressa Bl Nguy n V n Toàn h c 10 K32C - Khoa Hóa Tr ng HSP Hà N i Khóa lu n t t nghi p (J=5Hz J= 11,5Hz) ta có th d đốn proton cacbinol t i C-3, proton C-3 ghép spin v i proton vicinyl v trí c a nhóm OH t i C-3; k t h p v i s phân tích ph có pic t i H = 3,03 multilet đ c tr ng cho proton C-19 Ph 13 C-NMR cho th y rõ có 30 cacbon, có m t nhóm cacboncuar nhóm cacboxyl (>C=O), m t nhóm CH2 = Ph DEPT cho th y có CH3, 10 CH2, Cq So sánh v i ph c a axit betulinic [22], có th kh ng đ nh ch t axit betulinic Hình: 3.2.3.1 Ph Nguy n V n Toàn h c H-NMR c a ch t 46 K32C - Khoa Hóa Tr ng HSP Hà N i Khóa lu n t t nghi p Hình 3.2.3.2 Ph DEPT c a ch t 3.3 Kh o sát ho t tính c a ch t phơn l p vƠ t ng h p đ c: Th ho t tính vi sinh v t ki m đ nh c a ch t phân l p t Fcus Depresssa Bl Các phép th ho t tính kháng khu n kháng n m đ c ti n hành t i Vi n Hoá h c: Các ch t 7, 83 84 đ theo ph c th ho t tính kháng vi sinh v t ki m đ nh ng pháp pha loãng n ng đ K t qu cho th y ch t 83, 84 khơng có ho t tính kháng khu n, kháng n m t t c d ng vi sinh v t ki m đ nh n ng đ 128 µg/ml Trong đó, ch có ch t kháng Chúng tơi nghiên c u chi ti t xác đ nh đ c giá tr IC50 c a ch t kháng khu n Gram (-) Pseudomnas aeruginosa v i n ng đ c ch t i thi u 25µg/ml B ng 3.3 K t qu th ho t tính sinh h c c a ch t tách đ STT Tên Nguy n V n Toàn h c c Tên ch ng vi sinh v t ki m đ nh 47 K32C - Khoa Hóa Tr ng HSP Hà N i m u Khóa lu n t t nghi p Ec: Escherichia coli Pa: Pseudomonas IC50 g/ml aeruginosa IC50 g/ml Bs: Sa: Ca: Bacillus Staphylococcus Candida subtilis aureus albicans IC50 IC50 g/ml IC50 g/ml g/ml >25 >128 >128 >128 >128 83 >128 >128 >128 >128 >128 84 >128 >128 >128 >128 >128 K T LU N B c đ u nghiên c u thành ph n hóa h c c a Da (Ficus Depressa Bl.) Vi t Nam T c n chi t hexan – điclometan phân l p xác đ nh c u trúc hóa h c c a ch t s ch +) 3-O- (E)- cinnamoyl -amyrin (83) +) -sitosterol (84) +) Axit betulinic (7) ã nghiên c u ho t tính kháng khu n, kháng n m ch t nh n đ c k t qu cho th y ch t 83 84 khơng có ho t tính axit Nguy n V n Tồn h c 48 K32C - Khoa Hóa Tr ng HSP Hà N i Khóa lu n t t nghi p betulinic có kh n ng c ch ch ng Gram (-) Pseudomnas aeruginosa v i IC50 25µg/ml TÀI LI U THAM KH O Ti ng Vi t T t L i (2001); Nh ng thu c v thu c Vi t Nam, NXB Y h c Nguy n V n Tuy n, Nguy n V n Hùng c ng s Antimalarial principles of Ficus fistulosa T p chí hóa h c, 2002, 4, 75-78 Nguy n V n Tuy n, Nguy n V n Hùng Nguy n c Vinh Sàng l c kh n ng ch ng s t rét gây đ c t bào c a m t s loài Sung (Ficus) thu c h Dâu t m (Moraceae) Vi t Nam T p chí Khoa h c C ng Ngh , T 43, 6, 34-38 Nguy n V n Toàn h c 49 K32C - Khoa Hóa Tr ng HSP Hà N i Nguy n V n Tuy n, Khóa lu n t t nghi p Nguy n V n Hùng (2002); “3 axetoxyhexanodamaran- 20 - one axetoxy-11 , 12 -taraxerane t Sung đ t (Ficus fistulosa)”, T p chí Hóa h c, 40 ( B); tr 23-25 Ph m Hoàng H (2000); Cây c Vi t Nam, NXB Tr Ti ng Anh Chiang Y M., Kuo Y H., (2000), “Taraxastane-type triterpenes from the aerial roots of Ficus microcarpa”, J Nat Prod., 63(7), pp 898-901 Chiang Y M., Kuo Y H., (2001), “New peoxy triterpenes from the aerial roots of Ficus microcarpa” J Nat Prod., 64 (4), pp 436-439 Chiang Y M., Kuo Y H., (2002), “Novel triterpenes from the aerial roots of Ficus microcarpa”, J Org Chem., 67(22), pp 7656-7661 Kuo Y H., Chiang M., (2000), “Six new ursane and oleanane-type triterpenes from the aerial roots of Ficus microcarpa”, Chem Pharm Bull.(Tokyo), 48(5), pp 593-596 10 Kuo Y H., Li Y C., (1999), “Three new compounds, ficusone, ficuspiolide and ficusolide from the heartwood of Ficus microcarpa”, Chem Pharm Bull (Tokyo), 47(3), pp 299-301 11 Lee J H., Lee K T., Yang J H., Back N I., Kim D K., (2004), “Acetylcholinesterase inhibitors from the twigs of Vaccinium oldhami Miquel”, Arch Pharm Res., 27(1), pp 53-56 12 Lee T H., Kuo Y C., Wangh G J., Kuo Y H., Chang C I., Lu C K., Lee C K., (2002), “Five new phenolics from the roots of Ficus beecheyana”, J Nat Prod., 65, pp 1497-1500 13 Li R W., Leach D N., Myers S P., Leach G J, Waterman P G., (2004) Nguy n V n Tồn h c 50 K32C - Khoa Hóa Tr ng HSP Hà N i Khóa lu n t t nghi p “A new anti- inflammatory glucoside from Ficus racemosa L.”, Planta Med, 70(5), pp 421-426 14 Li Y C., Kuo Y H., (2000), “Four new compounds, ficusal, ficusesquilignan A, B, and ficusolide diacetate from the heartwood of Ficus microcarpa”, Chem Pharm Bull (Tokyo), 48(12), pp 1862-1865 15 Madal S C., Maity T K., Das J., Saba B P., Pal M., (2000), “Anti- inflammatory evaluation of Ficus racemosa Linn leaf extract”, J Ethnopharmacol, 72(1-2), pp 87-82 16 Mandal S C., Ashok Kumar C K., (2002), “Studies on antidiarrhoeal activity of Ficus hispida Leaf extract in rats”, Fitoterapia, 73(7-8), pp 663667 17 Mishara V., Khan N U., Singhal K C., (2005 ), “Potential antifilarial activity of fruit extracts of Ficus racemosa Linn against Setaria cervi in vitro”, Indial J Exp Biol, 43(4), pp 346-350 18 Moriarity, D M.; Huang, J.; Yancey, C A.; Wang, P.; Setzer, W N.; Lawton, R O.; Tates, R B.; Caldesa, S., Planta Medica 1998, 64, 370-372 19 Mousa O., Vuorela P., Kiviranta J., Wahab S A., Hiltunen R., Vuolera H., (1994), “Bioactivity of certain Egyptian Ficus species”, J Ethnomarmacol, 41(1-2), pp 71-76 20 N.V Tuyen, D.S H L Kim, H S Fong, D D Soejarto, T C Khanh, M V Tri, L T Xuan, (1998), “Structure elucidation of two triterpenoids from Ficus fistulosa”, Phytochemistry, 50, pp 467-469 21 Nguyen Van Tuyen, Nguyen Van Hung, Le Mai Huong, Le Thi Xuan (2002), “Antimalarial principles of Ficus fistulosa”, Journal of Chemistry, 40(4), pp 75-78 22 Parnali Chatterjee, Samir A Kouzi, John M Pezzuto, and Mark T Hamann4 , Journal List > Appl Environ Microbiol > v.66(9): 3850-3855 Nguy n V n Toàn h c 51 K32C - Khoa Hóa Tr ng HSP Hà N i Khóa lu n t t nghi p 23 Sheu Y W., Chiang L C., Chen I S., Chen Y C., Tsai I L., (2005), “Cytotoxic flavonoids and new chromenes from Ficus formosana f formosana, Planta Med., 71(12), pp 1165-1167 24 Taira T., Ohdomari A., Nakama N., Shimoji M., Ishihara M., (2005), “Characterization and antifungal activity of gazyumaru (Ficus microcarpa) latex chitinases: both the chitin-binding and the antifungal activities of class I chitinase are reinforced with increasing ionic strength”, Biosci Biotechnol Biochem., 69(4), pp 811-818 PH L C Ph l c 1: Ph H DEPT c a ch t 83 (3-O-(E)-cinnamoyl -amyrin) Ph l c 2: Ph HMBC c a ch t 83 (3-O-(E)-cinnamoyl -amyrin) Ph l c 3: Ph DEPT c a ch t (axit betulinic) Ph l c 4: Ph H-NMR c a ch t (axit betulinic) Ph l c 5: Ph 13 C-NMR c a ch t (axit betulinic) Ph l c 6: Ph HSQC c a ch t (axit betulinic) Ph l c 7: Ph HMBC c a ch t (axit betulinic) Nguy n V n Toàn h c 52 K32C - Khoa Hóa Tr ng HSP Hà N i Nguy n V n Toàn h c Khóa lu n t t nghi p 53 K32C - Khoa Hóa Tr ng HSP Hà N i Khóa lu n t t nghi p Ph l c 1: Ph 1H DEPT c a ch t 83 (3-O-(E)-cinnamoyl -amyrin) Nguy n V n Toàn h c 54 K32C - Khoa Hóa Tr ng HSP Hà N i Khóa lu n t t nghi p Ph l c 2: Ph HMBC c a ch t 83 (3-O-(E)-cinnamoyl -amyrin) Nguy n V n Toàn h c 55 K32C - Khoa Hóa Tr ng HSP Hà N i Ph l c 3: Ph Nguy n V n Toàn h c Khóa lu n t t nghi p H-NMR c a ch t (axit betulinic) 56 K32C - Khoa Hóa Tr ng HSP Hà N i Khóa lu n t t nghi p Ph l c 4: Ph DEPT c a ch t (axit betulinic) Ph l c 5: Ph Nguy n V n Toàn h c 13 C-NMR c a ch t (axit betulinic) 57 K32C - Khoa Hóa Tr ng HSP Hà N i Khóa lu n t t nghi p Ph l c 6: Ph HSQC c a ch t (axit betulinic) Nguy n V n Toàn h c 58 K32C - Khoa Hóa Tr ng HSP Hà N i Nguy n V n Tồn h c Khóa lu n t t nghi p 59 K32C - Khoa Hóa Tr ng HSP Hà N i Khóa lu n t t nghi p Ph l c 7: Ph HMBC c a ch t (axit betulinic) Nguy n V n Tồn h c 60 K32C - Khoa Hóa ... c a khóa lu n nghiên c u thành ph n Hóa h c c a Ficcus Depressa Bl đ tìm tác d ng c a T m c đích nghiên c u trên, tơi đ a n i dung nghiên c u c a khóa lu n nh sau:  Nghiên c u thành ph n Hóa... u m t cách h p lý 1.3 M t s k t qu nghiên c u hoá h c c a chi Ficus Thành ph n hố h c c a m t s lồi Ficus đ gi i c ng nh c nghiên c u th Vi t Nam Theo t n hoá h c h p ch t thiên nhiên, cho đ... >128 >128 >128 >128 >128 84 >128 >128 >128 >128 >128 K T LU N B c đ u nghiên c u thành ph n hóa h c c a Da (Ficus Depressa Bl.) Vi t Nam T c n chi t hexan – điclometan phân l p xác đ nh c u trúc