Bước đầu nghiên cứu thành phần hóa học của cây xuân hoa lá hoa

- Dùng phần trên mặt đất thân và lá và lá của cây XHLH thu hái ở xã Bình Minh, huyện Kiến Xương, Thái Bình vào tháng 12/2006 để nghiên cứu thành phần hóa học - Một phần dược liệu XHLH sa

Trang 1

\\Ễ

BỘ Y T ẾTRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI

LƯU THANH DUYÊN

CỦA CÂY XUÂN HOA LÁ HOA

(KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC sĩ KHÓA 2002-2M J^

í t i i i m i ê n:

Người hướng dẫn : GS.TS PHẠM XUÂN SINH

TRƯỜNG ĐH DƯỢC HÀ NỘI

Trang 2

JH ôi eà jm , ổ n

( ĩ ) ổ i í ề n ạ k ú t h t r ọ n g , ú à b i â ổ n í ă i L ¡Ấ e , l& i æ ù t h à ụ t ó lồ t t ạ b ỉ â đ n

e h ă n t h à n h , t ổ i ĩ

(J)hạnt ^uản Sinhf ehA nhiịm (Bà mèn n)ưđe hạa eẩ imiụỀn,

^Oiitíe iĩ (Zỉũ ^ềng, Çîltii lù nlũinụ HÍỊIÌÓÌ títíỉụ đã tận tình í4ti bủú, tạtì múi ítỉễa liiên, trụ’e tiêp hiiốnạ, dẫn tòi ỉtOííH thù nil khấu luận tfít ntjiiièp nàiỊ.

^ ậ ft thỉ eáít bẠ — (Bậ mồn ^uẺổe hợe eẩ íeuụỀn u^ưànạ ^ĩỉại kạe (Dưiổe

^ôfi Qlặi itũ tận tình ạiÚỊt ítđ, tạ tì niởi ítỉều kiên, ehớ- tôi tmng, qtiủ tvì nil tíuỊe hiệti khẩ€L UtẠn.

Trang 3

MỤC LỤC.

Đặt vấn đề 1

Phần 1: Tổng quan 1

1.1 Đặc điểm thực vật chi Pseuderanthemum 1

1.1.1 Vị trí phân loại chi Pseuderanthemum 1

1.1.2 Đặc điểm thực vật một số cây trong chi Pseuderanthemum 4

1.2 Phân bố, sinh thái, nhân giống 5

1.3 Thành phần hoá học 7

1.4 Tác dụng sinh học 7

1.5 Công dụng 9

Phần 2: Thực nghiệm, kết quả và bàn luận 11

2.1 Nguyên vật liệu và phương pháp nghiên cứu 11

2.1.1 Nguyên liệu 11

2.1.2 Dụng cụ và hóa chất dùng trong phân tích 11

2.1.3 Phuofng pháp nghiên cứu 12

2.2 Thực nghiệm, kết quả và bàn luận 12

2.2.1 Đặc điểm thực vật của cây XHLH 12

2.2.2 Định tmh sơ bộ các nhóm chất trong dược liệu XHLH 14

2.2.3 SKLM Flavonoid, Saponin, Sterol trong dược liệu XHLH 22

2.2.4 Xác định hàm lượng một số phân đoạn chiết trong dược liệu XHLH 28

Trang 4

2.3 Bàn luận 35

Phần 3: Kết luận và đề xuất 36

3.1 Kết luận 36

3.2 Đề xuất 36 Tài liệu tham khảo

Phụ lục

Trang 6

ĐẶT VẤN ĐỂ

Từ lâu, loài người đã biết dựa vào nguồn nguyên liệu thực vật, động vật, khoáng vật để làm thuốc chữa bệnh Những bài thuốc có nguồn gốc dược liệu vẫn còn giá trị cho đến ngày nay Không những thế, con người ngày càng có

xu hướng coi trọng việc dùng cây thuốc để giảm bớt việc đưa hóa chất vào cơthể ở nước ta việc dùng cây thuốc để chữa bệnh có nhiều thuận lợi vì có một nền y học dân tộc lâu đời, đồng thòi có nguồn dược liệu vô cùng phong phú Tuy nhiên nhiều cây thuốc mói chỉ được sử dụng theo kinh nghiệm dân gian

mà chưa được nghiên cứu về mặt khoa học Do đó việc nghiên cứu nhằm làm sáng tỏ công dụng của cây thuốc bằng phưcíng pháp khoa học hiện đại là rất cần thiết

Cây Xuân hoa lá hoa {Pseuderanthemum bracteatum Imlay., Acanthaceae)

là một cây thuốc đã được dùng trong dân gian với tên gọi Hồng ngọc, Hoàn ngọc đỏ, cây Con khỉ đỏ để chữa bệnh nhiễm khuẩn đường tiêu hóa, viêm đại tràng, chảy máu đường ruột, chấn thương chảy máu, làm rau ăn sống Tuy nhiên việc sử dụng cây thuốc còn hạn chế và cho đến nay vẫn chưa có công trình nghiên cứu nào công bố về cây thuốc này ở Việt Nam

Với mục tiêu góp phần làm sáng tỏ thành phần hóa học của cây XHLH nhằm chứng minh về mặt khoa học, góp phần vào việc giới thiệu rộng rãi và nâng cao giá trị sử dụng của cây thuốc Chúng tôi tiến hành đề tài: “Bước đầu

nghiên cứu thành phần hóa học của cây Xuân hoa lá hoa” vói các nội

dung sau:

1 Định tính các nhóm hoạt chất trong cây XHLH: thân, lá và riêng phần lá bằng phương pháp ống nghiệm và SKLM

2 Xác định hàm lượng một số phân đoạn chiết trong cây

3 EMnh lượng Flavonoid và Saponin toàn phần trong cây bằng phương pháp cân

Trang 7

Do điều kiện thời gian và kinh phí có hạn nên công trình không thể giải quyết hết mọi yêu cầu nghiên cứu cần thiết và không thể tránh khỏi sai sót, nhưng tôi hy vọng kết quả nghiên cứu sẽ đóng góp phần nào vào việc chứng minh khoa học về thành phần hóa học của cây XHLH.

Trang 8

PHẦN 1: TỔNG QUAN

1.1 ĐẶC ĐIỂM THựC VẬT CHI PSEUDERANTHEMVM.

1.1.1 Vị trí phân loại chi Pseuderanthemum: [4], [5], [6], [8], [23].

Theo hệ thống phân loại của Takhtajan (1987), họ Ô rô (Acanthaceae) thuộc bộ Hoa mõm sói (Scrophulariales), trong phân lớp Hoa môi (Lamiidae), lớp Ngọc lan (Magnoliopsida), thuộc ngành Ngọc lan (Magnoliophyta) Họ này có khoảng 250 chi và 2600 loài, trung tâm phân bố chủ yếu ở Nam và Đông nam Á, châu Phi và Nam Mỹ.[3]

Ngành Ngọc lan: Magnoliophyta

Lớp Ngọc lan; Magnoliopsida

Phân lớp Hoa môi: Lamiidae

Bộ Hoa mõm sói: Scrophulariales

Họ Ô rô: Acanthaceae Chi: Pseuderanthemum

ở Việt Nam họ Ô rô có khoảng 47 chi vói 217 loài [6]

Qii p senderanthemum có 9 loài với đặc điểm riêng là:

Cánh hoa liền

Có 5 thùy

Ống tràng hoa nhỏ và dài

Có 2 nhụy sinh sảnCác cây thuộc họ Ô rô cũng thường có hoa đẹp nên nhiều loài được trồng làm cảnh Cũng có nhiều cây dùng làm thuốc chữa bệnh như: Cây Ô rô

{Acanthus ilicifolius L.), cây Thanh táo ựusticia gendarussa Burm.f.), cây Tước sàng ụ.procumbens L.) được dùng chữa phong thấp, nhức mỏi chân

Trang 9

tay Cây Hoa chuông (Barleria cristata L.), cây Quả nổ iRuellia tuberosa L.) chữa cảm mạo Cây Bạch hạc (Rhinacanthus nasutus L) dùng làm thuốc tiêu viêm, giải độc, chữa bệnh ngoài da Cây Xuân hoa {Pseuderanthemum palatiferum Radlk.) dùng để chữa rối loạn tiêu hóa, viêm đại tràng, rễ cây còn

Theo Phạm Hoàng Hộ [8] chi Pseuderanthemum ở Việt Nam có 9 loài, 2 thứ, trong đó chỉ có các loài, thứ sau có tên Việt Nam là:

p.carruthesỉi var ovatifolium (Brem.) Brem (Nấp vũm), p.carruthesỉi (Seem.) GmW.ym.atropurpureum (Bull) Fosb.

(Xuân hoa đỏ),

p.acuminatissimum Miq (Xuân hoa nhọn), p.bracteatum Imlay (Xuân hoa lá hoa, Hoàn ngọc đỏ, Con khỉ

đ ỏ )

Năm 1995 Trần Công Khánh đã xác định được tên khoa học của “ cây con

khỉ” là p palatiferum và dặt tên Việt Nam là Xuân hoa Trong dân gian, cây

này còn được gọi tên là Nhật nguyệt, Hoàn ngọc, Tu lình [12], [18]

1.1.2 Đặc điểm thực vật của một số cây trong chi Pseuderanthemum

- Theo Nguyễn Tiến Bân [3] chi Pseuderanthemum ờ Việt Nam có 10 loài.

- Theo Raymond Benoist [23] chi Pseuderanthemum có 9 loài.

Trang 10

• Pseuderanthemum carruthersiỉ (Seem.) Guill var atropurpureum

(Bull.) Fosb (Xuân hoa đỏ):

Cây nhỏ, cao 1 - 2 m, phân nhánh nhiều, không lông Lá có phiến xoan, bầu dục, mỏng không lông, dài 7 - 1 0 cm, đỏ bầm có bớt đậm, ít khi vàng có bớt

đỏ, cuống ngắn Chùm hoa ở ngọn, hoa trắng, tâm hồng, tai có đốm đỏ; tiểu nhụy 2, thò Trồng làm cảnh Lá, rễ, hoa tiỊ lở miệng, làm lành vết thương

• Pseuderanthemum carruthersii var ovatifolium (Brem.)Brem (Nấp

vũm)

Cây nhỏ, khác thứ trên ờ lá bầu dục, to 8,5 X 4,5 cm, đầu tù, gân phụ 7 - 8

cặp; phát hoa là chùm tụ tán hẹp; hoa thành tụ tán ngắn, vành cao 2 cm, tai xoan như nhau Sài Gòn, Sông Bé

• Pseuderanthemum palatiferum (Ness) Radik (Xuân hoa, Hoàn ngọc,

Tulình,ConkhL.):[18]

Cầy bụi, cao 1 - 2m, sống nhiều năm, thân non màu xanh lục, rải rác có lông che chở đa bào, phần già hóa gỗ màu nâu nhẵn, phân nhiều cành mảnh

Lá mọc đối, phiến lá hình mũi mác, hai đầu nhọn, dài 12 - 17cm, rộng 3,5 - 5

cm, mép lá nguyên, gốc hoi men xuống, hai mặt phiến lá có lông che chở đa bào ngắn và lông tiết có chân đơn bào, đầu đa bào; dọc gân giữa có nhiều lông hơn Cuống lá dài 1,5 - 2,5 cm Cụm hoa dài 10 - 16 cm, ở kẽ lá hay đầu cành, gồm các xim ngắn ở các mấu Hoa lưỡng tính, không đều, 5 đài ròi tồn tại đến khi quả già Tràng hợp, màu trắng, ống tràng hẹp và dài khoảng 2,5 cm, có 5 thùy, chia thành 2 môi, môi trên gồm 2 thùy nhỏ dính liền nhau đến nửa chiều dài của thùy, môi dưới gồm 3 thùy to, thùy giữa của môi dưới có các chấm màu tím, 2 nhị lép nhỏ dính ở gốc 2 chỉ nhị Bầu trên, nhẵn, dài khoảng 1,5

cm, 2 lá noãn liền nhau tạo thành bầu 2 ô, vòi nhụy dài 2,5 - 2,7 cm, nửa dưói của vòi có lông, 2/3 vòi về phía trên có màu tím nhạt Quả nang 2 ô, mỗi ô chứa 2 hạt Mùa hoa vào tháng 4-5 Cây mọc hoang gần như ra hoa quanh năm Bộ phận dùng; lá, thân, rễ Phân bố: rừng bình nguyên

Trang 11

• Pseuderanthemum acumỉnatìssimum Miq (Xuân hoa nhọn).

Cây nhỏ; nhánh non vuông, không lông Lá có phiến thon nhọn, to đên 25 X

9 cm, đáy từ từ hẹp trên cuống, mỏng, bìa nguyên, gân phụ 6 cặp; cuống dài 4

- 5 cm Phát hoa dài đến 30 cm, không nhánh, như có râu vì vòi nhụy dài còn lại; hoa như chụm ở mỗi mắt; lá đài 3,5 mm, không lông; vành 2,5 - 3,7 cm,

có lông ở mặt ngoài, thùy 1 cm; tiểu nhụy thụ 2 Nang dài 3,5 cm, không lông Trồng và mọc hoang ở Bảo Lộc, Sài Gòn

• Pseuderanthemum bracteatum Imlay (Xuân hoa lá hoa).

Cỏ cao 50 - 60 cm, ít nhánh; thân vàng đỏ, có 4 cạnh, có lông mịn lúc non

Lá có phiến thon, t o 5 - 9 x 3 - 5 cm, có lông mịn 2 mặt, gân phụ 5 - 6 cặp; cuống dài 2 - 3 cm Phát hoa cao 8 - 1 0 cm; lá hoa như lá, to 2 X 0,7 cm, có lông mịn; vành nhỏ, cao 1,5 cm, thùy cao 6 - 7 mm; tiểu nhụy 2 Nang cao 2

cm, có lông mịn Núi Dinh

• Pseuderanthemum crenulatum (Lindl.) R.Ben.

Cây cỏ cao 40 cm Lá mọc đối; phiến thon đến hình muỗng, không lông, mặt dưới nhợt Nhiều gié có nhánh, dài vào 10 cm; hoa to đẹp; đài xanh; vành

có ống dài 2,5 cm, tai tim tím hay trắng, tai trên có bớt trắng và đốm đỏ; tiểu nhụy thụ 2, lép 2 Nang có phần dưới lép hẹp

Oii Pseuderanthemum hiện nay chưa xác định được có bao nhiêu loài.

- Phân bố: Mọc tự nhiên ở nhiều noi, gần đây được trồng để làm thuốc

- Sinh thái: ưa ẩm, ưa sáng và có thể chịu bóng nhất là khi còn nhỏ, cây sinh trưởng mạnh vào mùa xuân - hè, mùa đông có hiện tượng rụng lá Cây trên 1 tuổi mới có quả Tái sinh bằng hạt hoặc giâm cành

Trang 12

ngày tưới đều Chỉ sau khoảng 1 tuần là ra rễ Cây phát triển nhanh nên mọi gia đình đều có thể trồng được.

1.3 THÀNH PHẦN HÓA HỌC.

Trong thực tế, nhân dân ta đã dùng nhiều loại thuộc chi Pseuderanthemum

làm thuốc chữa bệnh nhưng các công trình nghiên cứu về thành phần hóa học còn hạn chế Cho đến nay, vói những tài liệu tham khảo đã biết, chưa thấy có tài liệu nghiên cứu về thành phần hóa học của cây XHLH, chỉ mới có công

trình nghiên cứu về cây XH {P.palatiferum).

- Năm 1997, nhóm tác giả Trần Công Khánh, Nguyễn Văn Hùng, Nguyễn Thị

Thanh Nhài và cs đã sơ bộ nghiên cứu về thành phần hóa học của lá cây Xuân hoa thì thấy có: acid hữu cơ, carotenoid, coumarin, đường khử và sterol Các tác giả cũng đã phân lập và xác định được 1 chất là /? - Sitosterol.[9]

- Năm 1999, Nguyễn Thị Minh Thu [18] đã phân lập và xác định được 4 chất:

• phytol (2 - hexadecen - 1- ol,3,7,11,15 - tetrametyl),

1.4 TÁC DỤNG SINH HỌC.

Cho đến nay, với những tài liệu tham khảo đã biết chưa thấy có công trình

nào nghiên cứu về tác dụng sinh học của cây XHLH Chi Pseuderanthemum

mới có một số loài được nghiên cứu:

- p graciliflorum được dùng cho phụ nữ sau khi sinh [2 2]

Trang 13

- ở Trung Quốc, người ta dùng rễ của cây XH để chữa đòn ngã tổn thương [4]

- Tác dụng sinh học của cây XH: [13], [14], [18], [20], [21]

MeOH của lá XH cho thấy:

- Nồng độ tối thiểu ức chế (MIC) của cao trên Escherichia coli là 200n g/ml, chưa thấy tác dụng trên Pseudomonas aeruginosa.

- MIC của cao XH mọc hoang trên Bacillus subtilis và Staphylococcus aureus

là 200 ụ g/ml, trên Streptococcus pyogenes là 400 ụ g/ml Cao của XH trồng

có tác dụng yếu hơn Có một phân đoạn chiết có tác dụng rất mạnh, MIC trên

Staphylococcus aureus chỉ là 10 // g/ml.

- Đối vói nấm cao không có tác dụng trên Aspergillus niger ở nồng độ 400 //g/ml Các nấm Fusarium oxysporum, Rhezotonia solaniỉ, Saccharomyces cerevisiae và Candida albicans có MIC là 400 //g/ml, riêng Pyricularia oryzae thì MIC là 200 ỊJ, g/ml Có phân đoạn chiết có tác dụng mạnh hơn cao

4 - 5 lần

gian, dùng lá XH giã nát đắp vết thương và làm tan mụn lồi, đã xác định hoạt tính này Lá XH tươi nghiền mịn (có mercaptoethanol) chiết bằng dung dịch đệm phosphat 0,05 - 0,1 M, pH 7,6 theo tỷ lệ 1 : 20 khuấy nhẹ bằng máy khuấy từ 30 phút, sau đó ly tâm 12000 vòng/phút trong 10 phút ở 4°c Lấy dịch trong ở trên định lượng proteinase Kết quả cho thấy:

+ Dịch chiết lá có tác dụng thủy phân protein khá, mạnh nhất ở pH 7,5 và nhiệt độ 70°c

+ Enzym bền khi phơi, lá phoi khô ở 60°c, hoạt tính còn 30 % Dịch chiết proteinase từ lá để 1 tháng ở 4°c, hoạt tính giảm ít

Trang 14

+ Tinh chế proteinase làm tăng hoạt tính lên 5 lần, đạt mức 1,912 lU/mg protein.

(monoaminooxydase) của 58 dược liệu cho thấy 9 loại có tác dụng mạnh ( ức chế trên 80 % ) là: Trầm hương, vỏ cây gạo, vỏ và lá gòn, hồi, địa liền, khương hoạt, vỏ rễ mẫu đơn và lá phèn đen Lá cây XH chiết bằng MeOH rồi

từ mitochondri của gan chuột cống trắng và cơ chất dùng là kynuramin

• Tác dụng bảo vệ gan: Chế phẩm dùng là cao toàn phần lá XH đã loại

chlorophyl Cho chuột nhắt trắng uống 3 ngày liền, liều mỗi ngày là 250 mg/kg thể trọng chuột Gây tổn thương gan bằng tiêm i.p.tetrachlorid cacbon (CCI4) vào ngày thứ 3 sau khi uống thuốc được 1 giờ Tổn thưoíng gan sẽ làm tăng quá trình peroxy hóa lipid màng tế bào gan, làm tăng hàm lượng malonyl dialdehyd (MDA) trong gan Ngày thứ 4 lấy máu để xét nghiệm enzym gan và lấy gan định lượng MDA Kết quả ở lô gây tổn thương bằng liều CQ4 là 0,5

ml/kg, hàm lượng MDA tăng 95,8 % so vói lô đối chứng không dùng CCI4 Lô dùng thuốc + CQ4 hàm lượng MDA chỉ tăng 5,9 % Khi gây tổn thưofng gan bằng CQ4 vói liều Iml/kg, hàm lượng MDA tăng 180,6 % còn lô dùng thuốc

+ CCI4 chỉ tăng 112,9 % Các enzym gan AST, ALT ở lô dùng CCI4 liều 0,5 ml/kg tăng hơn 2 lần, còn lô dùng thuốc + CCI4 hoạt tính enzym không khác nhiều so vói lô đối chứng không dùng gì

• Độc tính: Đã cho chuột nhắt trắng uống cao đặc vói liều 0,83; 1,67;

3,13 g/kg, chuột vẫn hoạt động bình thường Tăng liều lên 5,56; 9,19 và 11,5 g/kg, chuột giảm hoạt động nhưng sau 1 giờ trở lại hoạt động bình thường

1.5 CÔNG DỤNG.

- Lá cây XH dừig chữa đau bụng do nhiễm khuẩn đường tiêu hóa, rối loạn tiêu hóa, tiêu chảy, đòn ngã tổn thương, vết tìiương ngoM da, mụn lồi, mụn mủ [2 1]

Trang 15

- Theo kinh nghiệm dân gian, bộ phận trên mặt đất của cây XHLH dùng để chữa viêm đại tràng cấp và mạn tính, rối loạn tiêu hóa, đầy chướng bụng, trî xuất huyết, đi ngoài ra máu, chảy máu cam hoặc chảy máu do chấn thương phần mềm, đau bụng do co th ắt Ngoài ra phần lá non còn được dùng làm rau

ăn sống kèm vái nem chạo, gỏi để tăng vị hơi chát chua và phòng đầy bụng

- ở thành phố Thái Nguyên, còn dùng cây XHLH tưoi để chữa viêm loét dạdày rất hiệu quả ở tỉnh Hoà Bình, ngưòi ta dùng bộ phận trên mặt đất của XHLH để chữa tăng huyết áp

- Cách dùng:

+ Dùng trong: lá, thân, phcd khô, sắc với nước uống, có thể phối hợp vói các vị thuốc chữa viêm đại tràng khác như: Hậu phác, thưcỉng truật, trần b ì + Dùng ngoài: lá tươi, giã nát, đắp lên vết thuofng, băng lại

- Liều dùng: 10 - 12g lá khô,

12 - 30g lá tưcd

Trang 16

PHẦN 2: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN

2.1.1 Nguyên liệu.

- Dùng phần trên mặt đất (thân và lá) và lá của cây XHLH thu hái ở xã Bình Minh, huyện Kiến Xương, Thái Bình vào tháng 12/2006 để nghiên cứu thành phần hóa học

- Một phần dược liệu XHLH sau khi thu hái, cắt đoạn 2-3 cm, sấy ở 70°c đến

khô, nghiền nhỏ, bảo quản ở nơi khô mát để nghiên cứu về hóa học.

- Một phần khác chỉ lấy lá, sấy ở 70®c đến khô, nghiền nhỏ, bảo quản noi khô mát, dùng để nghiên cứu về hóa học

- Máy cất quay Buchi R - 200 (Đức)

- Cân xác định độ ẩm nhanh Precisa (Thụy S)

11

Trang 17

2.1.3 Phương pháp nghiên cứu.

- Về thực vật: Mô tả đặc điểm thực vật của cây XHLH

- Về hóa học: Nghiên cứu về thành phần hoá học của bộ phận trên mặt đất của câyXHLH:

+ Định tính sơ bộ các nhóm hoạt chất trong cây bằng phương pháp ống nghiệm [2], [24]

+ SKLM Flavonoid, Saponin và Sterol trong dược liệu Dùng bản mỏng Silicagel 60 GF254 (Merck) SKLM điều chế thành phần Sterol Các hệ dung môi SKLM phù hợp cho từng thành phần

+ Xác định hàm lượng các phân đoạn chiết trong các dung môi: CHCI3, EtOH, EtOAc

+ Định lượng Flavonoid, Saponin toàn phần trong cây bằng phương pháp cân

- Kết quả thực nghiệm được xử lý bằng phương pháp thống kê với sự hỗ trợ của phần mềm Excel

2.2 THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ

2.2.1 Đặc điểm thực vật của cây XHLH.

Cây bụi, cao 80- 150 cm, sống nhiều năm Thân non trơn nhẵn, màu vàng

đỏ, có lông rất mịn khi còn non đôi khi khó phát hiện Thân già hoá gỗ, bề

Trang 18

mặt sần sùi màu nâu Lá đơn nguyên, mọc đối, không có lá kèm, cuống lá dài khoảng 0 ,8 - 1 cm, phiến lá hình mũi mác, hai đầu thon nhọn kích thước 1 2 -

17 cm X 2 - 3 cm, gân lá hình lông chim, gân phụ 5 - 6 cặp Lá non có màu vàng đỏ, lá già màu xanh, mặt trên xanh đậm, mặt dưới nhạt hơn Cụm hoa dài

3 - 4 cm, mọc ở kẽ lá hay đầu cành, được phủ một lớp lông mịn, gồm các bông ngắn mọc ở các mấu Hoa lưỡng tứửi, không đều, mỗi bông được bọc bỏd một lá bắc riêng Lá bắc màu xanh lục, kích thước 1 - 1,2 cm X 0,4 - 0,6 cm Đài 5, liền 1/3 phía dưới, kích thước mỗi đài 1 -1,2 cm X 0,1 - 0,12 cm Tràng hçfp, hình ống, màu trắng, trung tâm hồng, ống tràng hẹp, dài khoảng 2 - 2,5

cm, không đều nhưng không chia thành môi Bộ nhị 4, gồm 2 nhị dài, 2 nhị ngắn, dài khoảng 1-1,4 cm, chỉ nhị đứứi trên ống tràng Bao phấn đính lưng dài 0,2 - 0,3 cm Vòi nhụy dài 1,8-2 cm, đầu nhụy chia 2 hình mũi mác dài 2

- 3 mm Bầu trên, 2 ô, đường kúửi 1-1,2 mm Mùa hoa: tháng 4 - 5 GS Vũ

Văn Chuyên định tên khoa học là Pseuderanthemum bracteatum Imiay., họ

Acanthaceae.[phụ lục]

Hình 2.2: Cây Xuân hoa lá hoa (P.bracteatum., Acanthaceae)

13

Trang 19

2.2.2 Định tính sơ bộ các nhóm hoạt chất của dược liệu XHLH.

Dược liệu tiến hành cho các phản ứng này gồm bộ phận trên mặt đất (thân, cành và lá) và riêng phần lá

a Định tính chất béo, carotenoid, sterol.

Lấy 15g bột thô XHLH chiết bằng Soxhlet với dung môi là ether dầu hỏa trên cách thủy trong 12 giờ liền Thu hồi dung môi dưói áp suất giảm đến thể tích nhất định, dùng làm một số phản ứng sau:

- Định tính chất béo: Nhỏ 1-2 giọt dịch chiết lên 1 miếng giấy lọc sạch, hơ

khô, thấy để lại vết mờ trên giấy (Phản ứng dương tính)

-Định tính Carotenoỉd: Lấy 5ml dịch chiết cho vào ống nghiệm, bốc hơi trên

nồi cách thủy đến cắn, thêm 1 - 2 giọt H2SO4 đặc, lắc đều, không thấy dịch lỏng chuyển màu xanh (Phản ứng âm tính)

- Định tính Sterol: Cho vào ống nghiệm 5ml dịch chiết, bốc hoi trên nồi cách

thủy đến cắn, hòa cắn trong Iml anhyrid acetic Để nghiêng ống nghiệm 45*^,

th êm từ từ I m l H2SO4 đ ặ c th eo thành ố n g n g h iệ m T h ấ y m ặt p h ân c á c h giữ a

hai lớp chất lỏng có màu xanh bền vững (Phản ứng dương tính)

• Nhận xét: Dược liệu có chất béo, sterol; không có carotenoid.

b Định tính Alcaỉoid:

Lấy 5g bột thô XHLH cho vào 1 bình nón, có dung tích 200 - 250ml, thấm

ẩm bằng dung dịch amoniac 10%, để 30 phút sau đó cho vào bình 50ml CHCI3 Lắc 5 - 10 phút, để yên qua đêm ở nhiệt độ phòng Dịch chiết CHQg lọc qua giấy lọc gấp nếp Bay hơi hết dung môi tới thể tích nhất định, cho dịch lọc này vào bình gạn, thêm 5ml H2SO4 10% Lắc 2 - 3 phút Tách lấy phần acid để làm phản ứng ƠIO vào 3 ống nghiệm, mỗi ống Iml dịch chiết, rồi thêm vào từng ống một trong những loại TT sau đây:

Trang 20

- ống 1: 3 - 5 giọt TT Mayer, thấy dung dịch vẫn trong suốt, không có tủa trắng (Phản ứng âm tính),

- Ống 2: 3 - 5 giọt TT Dragendorff, thấy dung dịch trong suốt, có màu vàng cam đậm, không có tủa (Phản ứng âm tính)

- Ống 3: 3 - 5 giọt TT Bouchardat, thấy dung dịch trong suốt, màu đỏ, không

- Phản ứng Cyanidin: Cho 2ml dịch chiết vào ống nghiệm, thêm một ít bột

Mg kim loại, sau đó cho vài giọt HCl đặc Để trên cách thủy trong vài phút Dung dịch xuất hiện màu vàng chanh (Phản ứng dưofng tính)

- Phản ứng với dung dịch amoniac: Nhỏ 1 - 2 giọt dịch chiết lên giấy lọc, hơ

qua cho khô Sau đó hơ lên miệng lọ amoniac đặc, xuất hiện màu vàng rất rõ (Phản ứng dương tính)

- Phản ứng với dung dịch PeCỈỊ 5%: Cho vào ống nghiệm 2ml dịch chiết,

thêm 1-2 giọt dung dịch FeClj 5%, thấy có tủa đục màu xanh đen (Phản ứng dương tính)

- Phản ứng với dung dịch NaOH: Cho vào ống nghiệm 2ml dịch chiết, thêm

vào 3 giọt dung dịch NaOH 10 %, thấy có tủa màu vàng và màu dịch chiết từ xanh chuyển sang vàng chanh (Phản ứng dương tính)

• Nhận xét: Dược liệu có Flavonoid.

15

Trang 21

d Định tính Coumarin:

Cho 5g bột dược liệu vào bình nón, thêm 20ml EtOH 90°, đun cách thủy 20 phút, lọc qua giấy lọc gấp nếp Dịch lọc để thử các phản ứng sau:

- Phản ứng mỏ, đổng vòng lacton: Cho vào 2 ống nghiệm:

Ống 1: Iml dịch chiết, Iml dung dịch NaOH 10%

- Phản ứng Diazo hóa: Cho vào ống nghiệm 2ml dịch chiết dược liệu, kiềm

hóa bằng dung dịch NajCOj 2%, đun cách thủy, để nguội, thêm vào đó vài giọt TT Diazo mới pha, dung dịch trong ống có màu vàng cam nhạt (Phản ứng

âm tính),

- Phản ứng chuyển dạng đồng phân cis - trans: Nhỏ 1 giọt dịch chiết dược

liệu trong EtOH 90° lên một miếng giấy lọc, nhỏ tiếp lên đó 1 giọt NaOH 1%,

sấy nhẹ cho khô, Che 1/2 vết bằng 1 đồng xu rồi soi dưói đèn tử ngoại (X =

365 nm), thấy phát hình quang xanh Bỏ đồng xu ra, tiếp tục quan sát dưới đèn tử ngoại thấy nửa vết không che cũng sáng như nửa vết bị che (Phản ứng

âm tính)

Nhận xét: Dược liệu không có Coumarin.

Trang 22

e Định tính tanin:

Lấy 5g bột dược liệu cho vào cốc có mỏ, thêm 20ml nước cất, đun sôi vài phút, lọc lấy dịch để làm các phản ứng sau:

- Phản ứng với dung dịch PeCỈỊ 5%: Cho vào ống nghiệm Iml dịch chiết,

thêm 1-2 giọt dung dịch FeClj 5% , thấy có tủa đục màu xanh đen (Phản ứng dương tính)

- Phản ứng với dung dịch Gelatin 1%: Qio vào ống nghiệm Iml dịch chiết, thêm

vào đó vài giọt dung dịch Gelatin 1%, thấy có tủa bông (Phản ứng dương túih)

• Nhận xét: dược liệu có Tanin.

f Định tính Glycosid tim.

Cho lOg dược liệu vào bình nón dung tích 250ml, thêm vào lOOml nước

cất, ngâm ờ nhiệt độ phòng trong 24 giờ Gạn dịch lọc vào cốc có mỏ lOOml,

thêm vào đó dung dịch Pb(CH3COO)2 30% để loại tạp, khuấy đều, lọc qua giấy lọc Kiểm tra cho đến khi dung dịch không còn kết tủa vói Pb(CIỈ3COO)2

30% Loại Pb(CH3COO)2 30% thừa bằng dung dịch Na2S0 4 bão hòa, lọc qua giấy lọc ơiuyển dịch lọc vào bình gạn dung tích 250ml Chiết hỗn hçfp Glycosid bằng CHCI3 (làm 3 lần: lOml, lOml, 5ml) Lắc đều, để lắng, gạn lấy lớp CHCI3 Gộp dịch chiết vào cốc có mỏ, lắc đều Sau đó chia dịch chiết vào

3 ống nghiệm khô, bốc hoi trên nồi cách thủy đến cắn cắn đem tiến hành các phản ứng sau;

- Phản ứng Liebermann - Bourchardt (phản ứng lên nhân Steroid của Glycosid): Cho vào ống nghiệm có chứa cắn ở trên 0,5ml anhydrid acetic, lắc đều để hòa tan hết cắn Đặt nghiêng ống nghiệm 45°, thêm từ từ đồng lượng

H2SO4 đ ặ c th eo th ành ố n g n g h iệ m D ịc h lỏ n g tron g ố n g n g h iệ m b ị c h ia thành

2 lớp (lớp anhydrid acetic ở trên), mặt tiếp xúc giữa 2 lớp không thấy xuất hiện vòng tím đỏ Lắc đều, dịch lỏng trong suốt, không có màu nâu ^

17

Trang 23

- Phản ứng Legal (phản ứng lên vòng butenolic): Cho vào ống nghiệm có

chứa cắn 0,5ml EtOH 90° Lắc đều cho hòa tan hết cắn Thêm 1 - 2 giọt TT Natri nitroprussiat 1% và 2 giọt dung dịch NaOH 10%, không thấy xuất hiện màu hồng (Phản ứng âm tínhj

- Phản ứng Keller - Kiliani: Cho vào ống nghiệm có chứa cắn 0,5ml EtOH

90°, lắc đều để hòa tan hết cắn, thêm vài giọt FeQ3 5% trong CH3COOH Lắc đều, để nghiêng ống nghiệm 45°, thêm từ từ đồng lượng H2SO4 đặc theo thành

ống nghiêm, ồ mặt tiếp xúc giữa 2 lớp chất lỏng không thấy xuất hiện vòng tím đỏ (Phản ứng âm tính)

Nhận xét: Dược liệu không có Glycosid tim.

g Định tính Anthra - Glycosid:

- Phản ứng Borntraeger: Cho 5g bột dược liệu vào bình nón dung tích lOOml,

thêm 20ml dung dịch H2SO4 10%, đun sôi cách thủy trong 15 phút, để nguội rồi lọc Cho dịch lọc vào bình gạn, lắc vói CHCI3, để cho tách lớp, gạn lấy lớp CHCI3 để tiến hành phản ứng: lấy Iml dịch chiết cho vào ống nghiệm thêm vào Iml dung dịch NaOH 10%, lắc nhẹ, thấy lớp CHCI3 có màu vàng rất nhạt Thêm tiếp vào đó 1 - 2 giọt dung dịch H2O2 Lắc đều, đun cách thủy vài phút, dung dịch trở nên không màu (Phản ứng âm tính)

- Phản ứng vi thăng hoa: Cho khoảng 3g bột dược liệu vào một nắp chai bằng

nhôm Hơ nhẹ trên đèn cồn cho đến khi bay hết nước trong dược liệu Đặt lên nắp nhôm 1 miếng kính trên có đặt một miếng bông tẩm nước lạnh Sau 5 - 1 0 phút, lấy phiến kính ra để nguội, soi dưới kính hiển vi không thấy tinh thể (Phản ứng âm tính)

• Nhận xét: Dược liệu không có Anthra glycosid.

Trang 24

h Định tính Saponin.

Cho 5g bột dược liệu vào bình nón dung tích 250ml, thêm 30ml nước cất, đun sôi cách thủy 2 phút, lọc lấy dịch lọc để tiến hành các phản ứng sau:

- Quan sát hiện tượng tạo bọt: Cho 5ml dịch chiết vào ống nghiệm to, bịt

miệng ống và lắc mạnh trong 5 phút theo chiều dọc Để yên, thấy cột bọt bền vững sau 15 phút

- Phân biệt 2 loại Saponin: Cho vào 2 ống nghiệm to, mỗi ống 5ml dịch lọc.

Ống 2: thêm 5ml dung dịch HCl 0,1N (pH 1)

Lắc đều cả 2 ống nghiệm trong 5 phút Quan sát cột bọt thì thấy cột bọt ở

ống 1 cao hơn cột bọt ở ống 2 Có thể sơ bộ kết luận là Saponin steroid.

- Quan sát hiện tượng phá huyết: Trên 1 lam kính, nhỏ 1 giọt máu thỏ 2% đã

loại fibrin, đậy lamen Quan sát hồng cầu dưói kính hiển vi thấy có các hồng cầu màu đỏ và phần dịch ngoài trong Nhỏ 1 giọt dịch lọc vào 1 cạnh lamen