Bước đầu nghiên cứu thành phần hóa học của cây xuân hoa lá hoa

. . \\Ễ BỘ YTẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI LƯU THANH DUYÊN BƯỚC ĐẨU NGHIÊN cứu THÀNH PHẦN h ó a h ọ c CỦA CÂY XUÂN HOA LÁ HOA (KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC sĩ KHÓA 2002-2MJ^. í t i i i m i ê n : Người hướng dẫn : GS.TS. PHẠM XUÂN SINH Nơi thực hiện ; BỘ MÔN D ư ợ c HỌC c ổ TRUYỂN TRƯỜNG ĐH DƯỢC HÀ NỘI Thời gian : 02/2007 - 05/2007 HÀ NỘI, 05/2007 [II] ^ . "ffi JHôi eàjm , ổn. ( ĩ ) ổ i í ề n ạ . k ú t h t r ọ n g , ú à . b i â . ổ n . í ă i L ¡ Ấ e . , l & i æ ù t h à ụ . tó l ồ t t ạ . b ỉ â đ n . e h ă n t h à n h , t ổ i ĩ (J)hạnt ^uản. Sinhf ehA nhiịm. (Bà mèn. n)ưđe. hạa eẩ imiụỀn, ^Oiitíe iĩ (Zỉũ ^ềng, Çîltii lù nlũinụ HÍỊIÌÓÌ títíỉụ đã. tận tình í4ti bủú, tạtì múi ítỉễa liiên, trụ’e tiêp hiiốnạ, dẫn tòi ỉtOííH thù nil khấu. luận. tfít ntjiiièp nàiỊ. ^ậft thỉ. eáít bẠ — (Bậ mồn. ^uẺổe. hợe. eẩ íeuụỀn. u^ưànạ. ^ĩỉại kạe. (Dưiổe. ^ôfi Qlặi itũ tận tình ạiÚỊt ítđ, tạ tì niởi ítỉều kiên, ehớ- tôi tmng, qtiủ tvì nil tíuỊe. hiệti khẩ€L UtẠn. Q l h â n . d Ì Ị t , n à ụ . e h ớ - f t h é f t l ờ i t t ư ự e . ạ ử i I M e ả n t ổ t t l ớ i ( B a * t g i á m , h i ệ u n h à t r ư ồ n i g .f ệ i h à n ụ . t ạ & , ệ i h ò n g , ^ i é u ^ t à i^ p h ề n ạ . Q ju è u t l ậ . k h ờ € L h ợ ^ e ù t i g , í t ì ì i t t t h ê e á e . t h ầ y , e ỗ - ạ i á o - t r m i g , t r ư ồ n g , i t ũ t e u n í Ị b i l í ì ê t i ỉ h ứ o , d ì u d ắ t , q i Ú Ị t đ s ^ t ò i I m ề t g , A i m t t h ờ i g Ầ O M t k ọ ^ t ậ p , o A t ạ ú ^ đ í ề i i k í ê t t e f u % i  i e ổ - k ũ q u A n h t i t i ụ à ụ h ồ t n n a ụ . ũ i í ế i e ù t t ạ . x i n . e ả n t i f n . g i í L đ i n h o A h ạ n . h è i t ã đ & t t ạ , o i Ề r L , k h í e h l ê . t ờ i r â í n h ì ề t í đ ẻ t ồ i e á t h ề m . u Ị t n i ệ l m à i t m n g , n g h i ế n , e ứ u k h ù 4L h ạ e . Hà Nội, ngày 18 tháng 5 năm 2007 Sinh viền: Lưu Thanh Duyên MỤC LỤC. Đặt vấn đề 1 Phần 1: Tổng quan 1 1.1. Đặc điểm thực vật chi Pseuderanthemum 1 1.1.1. Vị trí phân loại chi Pseuderanthemum 1 1.1.2. Đặc điểm thực vật một số cây trong chi Pseuderanthemum 4 1.2. Phân bố, sinh thái, nhân giống 5 1.3. Thành phần hoá học 7 1.4. Tác dụng sinh học 7 1.5. Công dụng 9 Phần 2: Thực nghiệm, kết quả và bàn luận 11 2.1. Nguyên vật liệu và phương pháp nghiên cứu 11 2.1.1. Nguyên liệu 11 2.1.2. Dụng cụ và hóa chất dùng trong phân tích 11 2.1.3. Phuofng pháp nghiên cứu 12 2.2. Thực nghiệm, kết quả và bàn luận 12 2.2.1. Đặc điểm thực vật của cây XHLH 12 2.2.2. Định tmh sơ bộ các nhóm chất trong dược liệu XHLH . 14 2.2.3. SKLM Flavonoid, Saponin, Sterol trong dược liệu XHLH 22 2.2.4. Xác định hàm lượng một số phân đoạn chiết trong dược liệu XHLH 28 2.2.5. Định lượng Flavonoid toàn phần trong dược liệu XHLH 30 2.2.6. Định lượng Saponin toàn phần trong dược liệu XHLH . 32 2.3. Bàn luận 35 Phần 3: Kết luận và đề xuất 36 3.1. Kết luận 36 3.2. Đề xuất 36 Tài liệu tham khảo. Phụ lục. ATT CHÚ GIẢICHỮ VIẾT TẮT Alanine aminotransferase AST Aspartat aminotransferase As Ánh sáng CHCI3 Qoroform cs cộng sự d/c Dịch chiết dm Dung môi EtOH Ethanol EtOAc Ethyl acetat KH&KT Khoa học và kỹ thuật MeOH Methanol MIC Minimum Inhibitory Concentration NXB Nhà xuất bản n-BuOH n- Butanol SKĐ Sắc ký đồ SKLM Sắc ký lớp mỏng TB Trung bình ri' Thuốc thử uv Ánh sáng tử ngoại (Ultra violet spectroscopy) XH Xuân hoa XHLH Xuân hoa lá hoa ĐẶT VẤN ĐỂ Từ lâu, loài người đã biết dựa vào nguồn nguyên liệu thực vật, động vật, khoáng vật để làm thuốc chữa bệnh. Những bài thuốc có nguồn gốc dược liệu vẫn còn giá trị cho đến ngày nay. Không những thế, con người ngày càng có xu hướng coi trọng việc dùng cây thuốc để giảm bớt việc đưa hóa chất vào cơ thể. ở nước ta việc dùng cây thuốc để chữa bệnh có nhiều thuận lợi vì có một nền y học dân tộc lâu đời, đồng thòi có nguồn dược liệu vô cùng phong phú. Tuy nhiên nhiều cây thuốc mói chỉ được sử dụng theo kinh nghiệm dân gian mà chưa được nghiên cứu về mặt khoa học. Do đó việc nghiên cứu nhằm làm sáng tỏ công dụng của cây thuốc bằng phưcíng pháp khoa học hiện đại là rất cần thiết. Cây Xuân hoa lá hoa {Pseuderanthemum bracteatum Imlay., Acanthaceae) là một cây thuốc đã được dùng trong dân gian với tên gọi Hồng ngọc, Hoàn ngọc đỏ, cây Con khỉ đỏ để chữa bệnh nhiễm khuẩn đường tiêu hóa, viêm đại tràng, chảy máu đường ruột, chấn thương chảy máu, làm rau ăn sống Tuy nhiên việc sử dụng cây thuốc còn hạn chế và cho đến nay vẫn chưa có công trình nghiên cứu nào công bố về cây thuốc này ở Việt Nam. Với mục tiêu góp phần làm sáng tỏ thành phần hóa học của cây XHLH nhằm chứng minh về mặt khoa học, góp phần vào việc giới thiệu rộng rãi và nâng cao giá trị sử dụng của cây thuốc. Chúng tôi tiến hành đề tài: “Bước đầu nghiên cứu thành phần hóa học của cây Xuân hoa lá hoa” vói các nội dung sau: 1. Định tính các nhóm hoạt chất trong cây XHLH: thân, lá và riêng phần lá bằng phương pháp ống nghiệm và SKLM. 2. Xác định hàm lượng một số phân đoạn chiết trong cây. 3. EMnh lượng Flavonoid và Saponin toàn phần trong cây bằng phương pháp cân. Do điều kiện thời gian và kinh phí có hạn nên công trình không thể giải quyết hết mọi yêu cầu nghiên cứu cần thiết và không thể tránh khỏi sai sót, nhưng tôi hy vọng kết quả nghiên cứu sẽ đóng góp phần nào vào việc chứng minh khoa học về thành phần hóa học của cây XHLH. PHẦN 1: TỔNG QUAN 1.1. ĐẶC ĐIỂM THựC VẬT CHI PSEUDERANTHEMVM. 1.1.1. Vị trí phân loại chi Pseuderanthemum: [4], [5], [6], [8], [23]. Theo hệ thống phân loại của Takhtajan (1987), họ Ô rô (Acanthaceae) thuộc bộ Hoa mõm sói (Scrophulariales), trong phân lớp Hoa môi (Lamiidae), lớp Ngọc lan (Magnoliopsida), thuộc ngành Ngọc lan (Magnoliophyta). Họ này có khoảng 250 chi và 2600 loài, trung tâm phân bố chủ yếu ở Nam và Đông nam Á, châu Phi và Nam Mỹ.[3] Ngành Ngọc lan: Magnoliophyta Lớp Ngọc lan; Magnoliopsida Phân lớp Hoa môi: Lamiidae Bộ Hoa mõm sói: Scrophulariales Họ Ô rô: Acanthaceae Chi: Pseuderanthemum ở Việt Nam họ Ô rô có khoảng 47 chi vói 217 loài [6 ]. Qii psenderanthemum có 9 loài với đặc điểm riêng là: Cánh hoa liền Có 5 thùy Ống tràng hoa nhỏ và dài Có 2 nhụy sinh sản Các cây thuộc họ Ô rô cũng thường có hoa đẹp nên nhiều loài được trồng làm cảnh. Cũng có nhiều cây dùng làm thuốc chữa bệnh như: Cây Ô rô {Acanthus ilicifolius L.), cây Thanh táo ựusticia gendarussa Burm.f.), cây Tước sàng ụ.procumbens L.) được dùng chữa phong thấp, nhức mỏi chân tay. Cây Hoa chuông (Barleria cristata L.), cây Quả nổ iRuellia tuberosa L.) chữa cảm mạo. Cây Bạch hạc (Rhinacanthus nasutus L) dùng làm thuốc tiêu viêm, giải độc, chữa bệnh ngoài da. Cây Xuân hoa {Pseuderanthemum palatiferum Radlk.) dùng để chữa rối loạn tiêu hóa, viêm đại tràng, rễ cây còn dùng chữa đòn ngã tổn thương Một số cây trong họ Ô rô đã được nghiên cứu, điều tra tính kháng khuẩn và được xếp vào nhóm “Cây thuốc Việt Nam có tính kháng khuẩn” [10], đó là: Ô rô nước, thanh táo, bạch hạc, quả nổ, xuân hoa. Trong thực tế nhân dân đã dùng nhiều loài thuộc họ Ô rô làm thuốc chữa bệnh nhưng các công trình nghiên cứu về thành phần hóa học, tác dụng sinh học còn hạn chế. Theo Phạm Hoàng Hộ [8 ] chi Pseuderanthemum ở Việt Nam có 9 loài, 2 thứ, trong đó chỉ có các loài, thứ sau có tên Việt Nam là: p.carruthesỉi var. ovatifolium (Brem.) Brem. (Nấp vũm), p.carruthesỉi (Seem.) GmW.ym.atropurpureum (Bull) Fosb. (Xuân hoa đỏ), p.acuminatissimum Miq. (Xuân hoa nhọn), p.bracteatum Imlay. (Xuân hoa lá hoa, Hoàn ngọc đỏ, Con khỉ đ ỏ ). Năm 1995 Trần Công Khánh đã xác định được tên khoa học của “ cây con khỉ” là p .palatiferum và dặt tên Việt Nam là Xuân hoa. Trong dân gian, cây này còn được gọi tên là Nhật nguyệt, Hoàn ngọc, Tu lình [12], [18]. 1.1.2. Đặc điểm thực vật của một số cây trong chi Pseuderanthemum . - Theo Nguyễn Tiến Bân [3] chi Pseuderanthemum ờ Việt Nam có 10 loài. - Theo Raymond Benoist [23] chi Pseuderanthemum có 9 loài. - Theo Phạm Hoàng Hộ [8] chi Pseuderanthemum ở Việt Nam có 9 loài, 2 thứ trong đó 4 loài, 2 thứ có tên Việt Nam: • Pseuderanthemum carruthersiỉ (Seem.) Guill. var. atropurpureum (Bull.) Fosb. (Xuân hoa đỏ): Cây nhỏ, cao 1 - 2 m, phân nhánh nhiều, không lông. Lá có phiến xoan, bầu dục, mỏng không lông, dài 7-10 cm, đỏ bầm có bớt đậm, ít khi vàng có bớt đỏ, cuống ngắn. Chùm hoa ở ngọn, hoa trắng, tâm hồng, tai có đốm đỏ; tiểu nhụy 2, thò. Trồng làm cảnh. Lá, rễ, hoa tiỊ lở miệng, làm lành vết thương. • Pseuderanthemum carruthersii var. ovatifolium (Brem.)Brem. (Nấp vũm) Cây nhỏ, khác thứ trên ờ lá bầu dục, to 8,5 X 4,5 cm, đầu tù, gân phụ 7 - 8 cặp; phát hoa là chùm tụ tán hẹp; hoa thành tụ tán ngắn, vành cao 2 cm, tai xoan như nhau. Sài Gòn, Sông Bé. • Pseuderanthemum palatiferum (Ness) Radik. (Xuân hoa, Hoàn ngọc, Tulình,ConkhL.):[18]. Cầy bụi, cao 1 - 2m, sống nhiều năm, thân non màu xanh lục, rải rác có lông che chở đa bào, phần già hóa gỗ màu nâu nhẵn, phân nhiều cành mảnh. Lá mọc đối, phiến lá hình mũi mác, hai đầu nhọn, dài 12 - 17cm, rộng 3,5 - 5 cm, mép lá nguyên, gốc hoi men xuống, hai mặt phiến lá có lông che chở đa bào ngắn và lông tiết có chân đơn bào, đầu đa bào; dọc gân giữa có nhiều lông hơn. Cuống lá dài 1,5 - 2,5 cm. Cụm hoa dài 10 - 16 cm, ở kẽ lá hay đầu cành, gồm các xim ngắn ở các mấu. Hoa lưỡng tính, không đều, 5 đài ròi tồn tại đến khi quả già. Tràng hợp, màu trắng, ống tràng hẹp và dài khoảng 2,5 cm, có 5 thùy, chia thành 2 môi, môi trên gồm 2 thùy nhỏ dính liền nhau đến nửa chiều dài của thùy, môi dưới gồm 3 thùy to, thùy giữa của môi dưới có các chấm màu tím, 2 nhị lép nhỏ dính ở gốc 2 chỉ nhị. Bầu trên, nhẵn, dài khoảng 1,5 cm, 2 lá noãn liền nhau tạo thành bầu 2 ô, vòi nhụy dài 2,5 - 2,7 cm, nửa dưói của vòi có lông, 2/3 vòi về phía trên có màu tím nhạt. Quả nang 2 ô, mỗi ô chứa 2 hạt. Mùa hoa vào tháng 4-5. Cây mọc hoang gần như ra hoa quanh năm. Bộ phận dùng; lá, thân, rễ. Phân bố: rừng bình nguyên. [...]... acumnatỡssimum Miq (Xuõn hoa nhn) Cõy nh; nhỏnh non vuụng, khụng lụng Lỏ cú phin thon nhn, to ờn 25 X 9 cm, ỏy t t hp trờn cung, mng, bỡa nguyờn, gõn ph 6 cp; cung di 4 - 5 cm Phỏt hoa di n 30 cm, khụng nhỏnh, nh cú rõu vỡ vũi nhy di cũn li; hoa nh chm mi mt; lỏ i 3,5 mm, khụng lụng; vnh 2,5 - 3,7 cm, cú lụng mt ngoi, thựy 1 cm; tiu nhy th 2 Nang di 3,5 cm, khụng lụng Trng v mc hoang Bo Lc, Si Gũn ... th 2 Nang di 3,5 cm, khụng lụng Trng v mc hoang Bo Lc, Si Gũn Pseuderanthemum bracteatum Imlay (Xuõn hoa lỏ hoa) C cao 50 - 60 cm, ớt nhỏnh; thõn vng , cú 4 cnh, cú lụng mn lỳc non Lỏ cú phin thon, t o 5 - 9 x 3 - 5 cm, cú lụng mn 2 mt, gõn ph 5 - 6 cp; cung di 2 - 3 cm Phỏt hoa cao 8 - 1 0 cm; lỏ hoa nh lỏ, to 2 X 0,7 cm, cú lụng mn; vnh nh, cao 1,5 cm, thựy cao 6 - 7 mm; tiu nhy 2 Nang cao 2 cm,... trờn ng trng Bao phn ớnh lng di 0,2 - 0,3 cm Vũi nhy di 1,8-2 cm, u nhy chia 2 hỡnh mi mỏc di 2 - 3 mm Bu trờn, 2 ụ, ng kỳi 1-1,2 mm Mựa hoa: thỏng 4 - 5 GS V Vn Chuyờn nh tờn khoa hc l Pseuderanthemum bracteatum Imiay., h Acanthaceae.[ph lc] Hỡnh 2.2: Cõy Xuõn hoa lỏ hoa (P.bracteatum., Acanthaceae) 13 2.2.2 nh tớnh s b cỏc nhúm hot cht ca dc liu XHLH Dc liu tin hnh cho cỏc phn ng ny gm b phn trờn mt... mi mỏc, hai u thon nhn kớch thc 12 - 17 cm X 2 - 3 cm, gõn lỏ hỡnh lụng chim, gõn ph 5 - 6 cp Lỏ non cú mu vng , lỏ gi mu xanh, mt trờn xanh m, mt di nht hn Cm hoa di 3 - 4 cm, mc k lỏ hay u cnh, c ph mt lp lụng mn, gm cỏc bụng ngn mc cỏc mu Hoa lng ti, khụng u, mi bụng c bc bd mt lỏ bc riờng Lỏ bc mu xanh lc, kớch thc 1 - 1,2 cm X 0,4 - 0,6 cm i 5, lin 1/3 phớa di, kớch thc mi i 1 -1,2 cm X 0,1 -... khỏng khun, khỏng nm: Nghiờn cu cao c chit bng MeOH ca lỏ XH cho thy: - Nng ti thiu c ch (MIC) ca cao trờn Escherichia coli l 200n g/ml, cha thy tỏc dng trờn Pseudomonas aeruginosa - MIC ca cao XH mc hoang trờn Bacillus subtilis v Staphylococcus aureus l 200 g/ml, trờn Streptococcus pyogenes l 400 g/ml Cao ca XH trng cú tỏc dng yu hn Cú mt phõn on chit cú tỏc dng rt mnh, MIC trờn Staphylococcus aureus... 6 - 7 mm; tiu nhy 2 Nang cao 2 cm, cú lụng mn Nỳi Dinh Pseuderanthemum crenulatum (Lindl.) R.Ben Cõy c cao 40 cm Lỏ mc i; phin thon n hỡnh mung, khụng lụng, mt di nht Nhiu giộ cú nhỏnh, di vo 10 cm; hoa to p; i xanh; vnh cú ng di 2,5 cm, tai tim tớm hay trng, tai trờn cú bt trng v m ; tiu nhy th 2, lộp 2 Nang cú phn di lộp hp 1.2 PHN B, SINH THI, NHN GING:[1 2 ] Oii Pseuderanthemum hin nay cha xỏc... húa hc ca cõy XHLH, ch mi cú cụng trỡnh nghiờn cu v cõy XH {P.palatiferum) - Nm 1997, nhúm tỏc gi Trn Cụng Khỏnh, Nguyn Vn Hựng, Nguyn Th Thanh Nhi v cs ó s b nghiờn cu v thnh phn húa hc ca lỏ cõy Xuõn hoa thỡ thy cú: acid hu c, carotenoid, coumarin, ng kh v sterol Cỏc tỏc gi cng ó phõn lp v xỏc nh c 1 cht l /? - Sitosterol.[9] - Nm 1999, Nguyn Th Minh Thu [18] ó phõn lp v xỏc nh c 4 cht: phytol (2... ng nghim thờm vo Iml dung dch NaOH 10%, lc nh, thy lp CHCI3 cú mu vng rt nht Thờm tip vo ú 1 - 2 git dung dch H2O2 Lc u, un cỏch thy vi phỳt, dung dch tr nờn khụng mu (Phn ng õm tớnh) - Phn ng vi thng hoa: Cho khong 3g bt dc liu vo mt np chai bng nhụm H nh trờn ốn cn cho n khi bay ht nc trong dc liu t lờn np nhụm 1 ming kớnh trờn cú t mt ming bụng tm nc lnh Sau 5 - 1 0 phỳt, ly phin kớnh ra ngui, soi... 10% p. m - úng vũng lacton p. Diazo ha 4 Coumarin p. chuyn dng cis trans p. vi FeQj 5% 5 Tanin p. vi Gelatin 1% p. Liebermann Glycosid tim p. Legal 6 p. Keller- Kiliani p. Bomtraeger Anthra 7 p. vi thng hoa glycosid Hin tng to bt Hin tmg phỏ huyt Saponin 8 p. Salkowski 9 Acid hu c p. vi NajCOò p. vi TT Fehling A v 1 0 ng kh Fehling B 1 1 Polysaccarid p. vi dung dch Lugol 1 2 Acid amin p. vi TT Ninhydrin . dụng của cây thuốc. Chúng tôi tiến hành đề tài: Bước đầu nghiên cứu thành phần hóa học của cây Xuân hoa lá hoa vói các nội dung sau: 1. Định tính các nhóm hoạt chất trong cây XHLH: thân, lá. Trường Đại học Dược Hà Nội. 2.1.3. Phương pháp nghiên cứu. - Về thực vật: Mô tả đặc điểm thực vật của cây XHLH. - Về hóa học: Nghiên cứu về thành phần hoá học của bộ phận trên mặt đất của câyXHLH: +. yêu cầu nghiên cứu cần thiết và không thể tránh khỏi sai sót, nhưng tôi hy vọng kết quả nghiên cứu sẽ đóng góp phần nào vào việc chứng minh khoa học về thành phần hóa học của cây XHLH. PHẦN 1: