Góp phần nghiên cứu tác dụng dược lý của cây xuân hoa lá hoa

Do đó, việc nghiên cứu nhằm làm sáng tỏ kinh nghiệm dân gian bằng phương pháp khoa học hiện đại, để nâng cao hiệu lực chữa bệnh của cây thuốc là rất cần thiết.. Trong các tài liệu nghiên

BỘ Y TÊ TRƯỜNG ĐAI HOC D ư ơ c HÀ NÔI

NGUYỄN THỊ LAN

DƯỢC LÝ CỦA CÂY XUÂN HOA LÁ HOA

(KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP D ược SỸ KHOÁ 2002-2007)

DS VŨ CÔNG THỌ

BỘ MỒN DƯỢC HỌC c ổ TRUYỂN

BỘ MÔN D ự ơ c L ực -

TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI

<JhM gian Ouủi hiịti ; 10/2006 - 5/2007

OtạẮMỂỈi hưênụ íLẫễt

Qtối thjựa ItỉỀn.

HÀ NỘI, 5/2007

m

%ẤM ƠQi

^ )êi lÀntf Uính ầ ỉùêi ổn 3 ÛU e^n ỉin Imy tẳ ljầMtjg lứèi én ehân thành tổl:

^ijS Ç/S ^í^ưitn (X)uât^i Sỉnh — frưồng Im ỆặtầỆi nyưđií Çỵytiiieêt^ Çỵt^ïèHij^ ^Đại kọ4i Gyưéa 'Jf)à Qtạl; Ơ)S^ ^níậ Qíkữ — ằniặ iáa tại f%enh men QẠ- lf)ú<i Q’t^4íifen ^ ắ e QUnhy itã tiẻịi kưổiui dẫn^ iạũ mởl điều k i en thuận ỈỔÌ t)/i c4ií búũ eliũ em n k ữ n iị kìen thii'íi qtJự ỉ%áu im n iị q u á trìn h th ư e h iên tm hũàn thítễih kheit luận

Ç/S ^Oíí Çỵhi Çỵýwi/L “ ỉvuềnẨẬ hề n^tềặíL úà n^ưđiítụ Çỵhi J¿!^ ^m ìíníị ijianiß men Im mêếi £dïe^ ỉi^ồnạ^ Œ)ai hũ<i n^ựđíi 'Jf)à Qlợi ¿tã ạ iá p đđ^ elii luíở tíìễt tìíth^ tạở mởí đ ìỉu kiẻn thu án íé i ehở em tien kành ikuìí njạliiê^i^L tại bề mèềì ũ/i liởliti ihàtik Iđmá luận nàii.

ÇTâfi thẻ úAn Im — ntêề^L n^ưđíi hjỌ<i ừA íruụỉn^ Qlậ/i tkẩ eún Im “ mèn

^Dựe ỉựe^ trẮĩèníị nữạì kọe G}uđíi 7 ỗà Q lẽi đã nkiei tình ạiúft ítẽ\ tạở ínẹi đỉỉít kìệễt ekú ein ỉmnạ^ qxiá trình thiïü hiên híiũá luận

Qỉliản dịp nàụ^^ eítJỨ fdiéjfi emt ụửl lồl eÁíi^L đn tởì íịiám hìèiM nha tyiíịnự^

^phồnự đàú iạũ^ ^hồnụ^ ạiáe iàly ^hồníỊ^ quản ÍẬ khứa aÙHẮj iền tkê ếe tkầụ eê tvẮtịng ^ ạ ì hửii ơ)ưổi' Jơà Qíậi itã tễ^anự lừ kiến thứit^ dìu dắty ụiúp đõ ein

tm níị ắitêt thđỉ ạian hfị4i lậ^ oỉt ỉạe (tiều kiên thuận iđi itẻ ewi eĩ kêí quả ễihit hêễễt

MỤC LỤC

Đặt vấn đề 1

Phần 1: Tổng quan 2

1.1 Thực vật chi Pseuderanthemum 2

1.1.1 Vị trí phân loại của chi pseuderanthemum 2

1.1.2 Khái quát đặc điểm thực vật của chi Pseuderanthemum 4

1.1.3 Phân bố, sinh thái, nhân giống 5

1.2 Thành phần hoá học 6

1.3 Tác dụng sinh học 6

1.4 Công dụng 8

Phần 2: Thực nghiệm và kết quả 10

2.1 Đôi tượng và phương pháp nghiên cứu 10

2.1.1 Đối tượng 10

2.1.2 Phương pháp nghiên cứu 11

2.1.3 Xử lý số liệu 16

2.2 Thực nghiệm và kết quả 17

2.2.1 Chuẩn bị nguyên liệu 17

2.2.2 Đánh giá tác dụng dược lý của thuốc 18

2.3 Bàn luận 31

2.3.1 Về độc tính cấp 31

2.3.2 Về tác dụng cầm máu của vị thuốc XHLH 3 1 2.3.3 Về mối quan hệ giữa công dụng điều trị bệnh viêm đại tràng và dụng dược lý của XHLH 32

Phần 3: Kết luận và đề xuất 33

3.1 Kết luận 33

3.2 Đề xuất 33

Tài liệu tham khảo - phụ lục 34

D A N H M Ụ C B Ả N G

thức ăn

24

2.8 Ảnh hưởng của XHLH khi dùng qua đường uống lên thời

gian chảy máu đuôi chuột

29

2.9 Ảnh hưởng của XHLH khi dùng tại chỗ lên thời gian chảy

máu đuôi chuột

ĐẶT VẤN ĐỂ

ở Việt Nam, nền Y dược học cổ trayền sử dụng nguồn duợc liệu để làm

thuốc chữa bệnh, đã có từ lâu đời Cho đến nay, thuốc cổ truyền vẫn được sử dụng rộng rãi trong nhân dân Tuy nhiên, nhiều cây thuốc trong số đó mới chỉ được sử dụng theo kinh nghiệm dân gian mà chưa đựơc nghiên cứu một cách đầy đủ Do đó, việc nghiên cứu nhằm làm sáng tỏ kinh nghiệm dân gian bằng phương pháp khoa học hiện đại, để nâng cao hiệu lực chữa bệnh của cây thuốc

là rất cần thiết

Cây Xuân hoa lá hoa {Pseuderanthemum bracteatum Imlay.,

Acanthaceae) được dùng trong dân gian với tên gọi là Hoàn ngọc đỏ, hồng ngọc, cây con khỉ đỏ để chữa viêm đại tràng, chướng hcà, đầy bụng, đau quặn ruột, xuất huyết đường tiêu hoá, chấn thương chảy máu, huyết áp cao, mụn nhọt ngoài da Trong các tài liệu nghiên cứu trên thế giới cũng như ở Việt Nam mà chúng tôi đã tham khảo thì vẫn chưa có công trình nghiên cứu nào công bố về tác dụng dược lý của cây thuốc này

Từ thực tế trên, chúng tôi tiến hành khoá luận:

“Góp phần nghiên cứu một sô tác dụng dược lý của cây xuân hoa lá hoa”

M ục tiêu của đê tài: nghiên cứu sơ bộ độc tính cấp và thăm dò một số

tác dụng dược lý của cây Xuân hoa lá hoa để góp phần chứng minh tác dụng cầm máu và tác dụng chữa viêm đại tràng đã được sử dụng trong dân gian

Khoá luận tiến hành với các nội dung sau:

- Đánh giá độc tính cấp của dược liệu XHLH

- Đánh giá ảnh hưởng của thuốc trên cơ trơn ruột thỏ cô lập và trên nhu động thức ăn của chuột nhắt trắng thực nghiệm

- Đánh giá tác dụng cầm máu thông qua việc xác định sự ảnh hưởng của thuốc trên thời gian Quick và thời gian chảy máu đuôi chuột

PHẦN 1: TỔNG QUAN

1.1.1 Vị trí phân loại của chi Pseuderanthemum

Theo hệ thống phân loại của Takhtajan (1987), Họ Ô rô (Acanthaceae) thuộc bộ hoa mõm sói (Scrophulariales) trong phân lớp hoa môi (lamiidae), lớp Ngọc lan (Magnoliopsida), thuộc ngành Ngọc lan (Magnoliophyta) Họ này có khoảng 250 chi và 2600 loài, trung tâm phân bố chủ yếu ở Nam và Đông nam Á, châu Phi, và Nam Mỹ

Bộ Hoa mõm sói: Scrophulariales

Phân lớp Hoa môi: Lamiidae

- Cây Ô rô {Acanthus ilicifolius L.), cây thanh táo {Justicia gendarussa L.)

được dùng để chữa bệnh phong thấp, nhức mỏi gân cốt

- Cây Hoa chuông (Barleria cristata L.), cây quả nổ {Ruellia tuberosa L.)

được dùng làm thuốc chữa cảm mạo

- Cây Bạch hạc (Rhinacanthus nasutus L.) được dùng làm thuốc tiêu viêm,

chữa mụn nhọt, bệnh ngoài da

- Cây Gióng xanh (Justicia ventricosa Wall.), cây dây bông xanh hay bông báo Ợhunbergia grandiflora Roxb.) được dùng làm thuốc chữa rắn cắn.

- Cây Xuân hoa {Pseuderanthemum palatiferum Radlk.) trong dân gian dùng

để chữa nhiều bệnh: khôi phục sức khoẻ, rối loạn tiêu hoá, điều chỉnh huyết áp Cây thuốc này đã được nghiên cứu chứng minh có tác dụng bảo vệ tế bào gan [17] và có tác dụng kháng khuẩn [13]

ở Việt Nam họ Ô rô có 47 chi với khoảng 217 loài [7]

Theo Raymond Benoist [23], chi Pseuderanthemum à Đông dương có 9

loài, trong đó Việt Nam có 7 loài

Theo Phạm Hoàng Hộ [10], chi Pseuderanthemum ở Việt Nam có 9

loài, 2 th ứ :

p carrutherssi var ovatifolium (Brem.) Brem (Nấp vũm),

p carrutherssi (Seem.) Guill Var atropurpureum (Bull) Fosb.

(Xuân hoa đỏ)

p acuminatissium Miq (Xuân hoa nhọn)

p bracteatum Imlay (Xuân hoa lá hoa)

p crelunatim (Lindl.) R.Ben

Trong đó, cây Xuân hoa lá hoa (Pseuderanthemum bracteatum Imlay.,

Acanthaceae) trong dân gian còn được gọi là cây con khỉ đỏ, cây hoàn ngọc

đỏ, hồng ngọc

1.1.2 Khái quát đặc điểm thực vật của chi Pseuderanthemum

Chi Pseuderanthemum có 9 loài với đặc điểm riêng là: cánh hoa liền,

có 5 thuỳ, ống tràng nhỏ và dài, 2 nhị sinh sản [7]

Cây Xuân hoa đỏ {Pseuderanthemum carruthersii; Acanthaceae): cây

nhỏ cao 1-2 cm, phân nhánh nhiều, không lông, lá có phiến xoan, bầu dục, mỏng, không lông dài 7 - 10 cm đỏ bầm có bớt đậm, ít khi vàng có bớt đỏ, cuống ngắn Chùm hoa ở ngọn, hoa trắng có trung tâm hồng, thuỳ thường có đốm đỏ, nhị 2 thò [5],[6]

Cây Xuân hoa (Pseuderanthemum palatiferum Radlk., Acanthaceae);

Cây bụi, cao 1-2 m, sống nhiều năm, thân non màu xanh lục, rải rác có lông che chở đa bào, phần già hoá gỗ màu nâu nhẵn, phân nhiều cành mảnh Lá mọc đối, phiến lá hình mũi mác, hai đầu nhọn, dài 12-17 cm, rộng 3,5-5 cm, mép lá nguyên, gốc lá hơi men xuống, hai mặt phiến lá có ít lông che chở đa bào ngắn và lông tiết có chân đơn bào, đầu đa bào Dọc gân giữa có nhiều lông hơn Cuống lá dài 1,5- 2,5 cm Cụm hoa dài 10-16 cm, ở kẽ lá hay ở đầu

cành, gồm các xim ngắn ở đầu mấu Hoa lưỡng tính, không đều, 5 đài rời tồn

tại đến khi quả già Tràng hợp, màu trắng, ống tràng hẹp và dài khoảng 2,5

cm, có 5 thuỳ, chia thành hai môi, môi trên gồm hai thuỳ nhỏ dính liền nhau đến nửa chiều dài của thuỳ, môi dưới gồm 3 thuỳ to, thuỳ giữa của môi dưới

có các chấm màu tím, 2 nhị lép nhỏ dính ở gốc 2 chỉ nhị Bầu trên, nhẵn, dài

khoảng 1,5 mm, 2 lá noãn liền nhau tạo thành bầu 2 ô, vòi nhuỵ dài 2,5 - 2,7

cm, nửa dưới của vòi có lông, 2/3 vòi về phía trên có màu tím nhạt Quả nang

2 ô, mỗi ô chứa 2 hạt Mùa ra hoa: tháng 4-5 Cây mọc hoang ra hoa gần như quanh năm [11], [13], [16]

Hình L I: Cây Xuân hoa

Cây Xuân hoa lá hoa (Pseuderanthemum bracteatum Imlay.,

Acanthaceae): Cây cỏ cao 50 - 60 cm, ít nhánh, thân vàng đỏ, có 4 cạnh, có lông mịn lúc non Lá có phiến thon, to 5-9 X 3-5 cm có lông mịn hai mặt, gân phụ 5-6 cặp, cuống dài 2-3 cm Phát hoa cao 8-10 cm; Lá hoa như lá, to 2x 0,7

cm, có lông mịn, vành nhỏ cao 1,5 cm, thuỳ cao 6-7 mm; tiểu nhuỵ 2, nang cao 2 cm; có lông mịn [10]

1.1.3 Phân bố, sinh thái, nhân giống

Phân bố: chi p senderanthemum Radlk chưa xác định được có bao

nhiêu loài ở Việt Nam Theo Raymond Benoist, 1939 có 7 loài; Phạm Hoàng

Hộ, 1993 có 9 loài; Nguyễn Tiến Bân, 1999 có 10 loài Song trong tất cả tài liệu của các tác giả trên đều ghi nhận các cây trong chi này thường mọc tự nhiên ở vùng núi, vài năm gần đây được trồng làm cảnh và làm thuốc [19]

Sinh thái: ưa ẩm, ưa sáng và có thể chịu bóng nhất là khi còn nhỏ; cây

trồng sinh trưởng mạnh vào mùa Xuân- Hè; mùa Đông có hiện tượng nửa rụng

lá Cây trên 1 tuổi mới có hoa quả Tái sinh chủ yếu từ hạt, có khả năng tái

sinh cây chồi khoẻ sau khi bị chặt Ngoài ra, cách cắm cành, giâm cành đều

có thể tạo thành cây mới [19]

Cách trồns: có thể dễ dàng nhân giống bằng cách giâm cành Lấy đoạn

cành già dài khoảng 20 - 25 cm cắm xuống đất ẩm là ra rễ [19]

1.2 THÀNH PHẦN HOÁ HỌC:

Trong thực tế, nhân dân ta đã dùng nhiều loài thuộc chi

(Pseuderanthemum) làm thuốc chữa bệnh nhưng các công trình nghiên cứu về

thành phần hoá học, tác dụng sinh học còn hạn chế Chỉ mới có tài liệu công

bố về cây Xuân hoa (P palatiferum) của một số tác giả sau:

* Theo Trần Công Khánh và cộng sự (1998); Nguyễn Thị Minh Thu (1999) thì thấy trong dịch chiết lá cây xuân hoa có: acid hữu cơ, carotenoid, coumarin, đường khử, steroid, flavonoid, saponin Các chất này đã được phân lập, trong đó có 4 chất : phytol (2-hexadecen-l-ol, 3,7,11,15-tetramethyl); ß-sitosterol; hỗn hợp đồng phân epimer của Stigmasterol poriferasterol; ß-D-glucopyranosyl-3-ol-sitosterol [11], [18]

* Theo Nguyễn Thị Lan Oanh, lá chứa diệp lục toàn phần 2,65 mg/g (lá tươi), N toàn phần 4,9% (chất khô); Protein hoà tan 25,50 mg/g (lá tươi), Polysaccharid hoà tan 0,80%; Lá tươi chứa Ca 875,5 mg%; Mg 837,6 mg%;

K 587,5 mg%; Na 162,7 mg%; Fe 38,75 mg%; AI 37,50 mg%; V 3,75 mg%;

Cu 0,43 mg%; Mn 0,34 mg%; Ni 0,19 mg% Lá có enzym với hoạt tính cao ở

pH 7,5; nhiệt độ 70°c và tương đối bền vững ở nhiệt độ cao, thời gian bảo quản dài Đã tạo ra được proteinase có hoạt tính tăng gấp 5 lần so với hoạt tính trong dịch chiết và chiếm 0,4% protein trong dịch chiết [14], [15], [19]

1.3 TÁC DỤNG SINH HỌC:

Chi Pseuderanthemum đã có 1 số loài được nghiên cứu và sử dụng như:

p.graciliflorum được nghiên cứu và sử dụng cho phụ nữ sau khi sinh [22

b, Tác dụng sinh học của cây Xuân hoa - Pseuderanthemum palatiferum

(Nees) Radlk [12], [19]

+ Tính kháng khuẩn, kháng nấm:

Đã nghiên cứu Cao đặc chiết bằng Methanol từ cây Xuân hoa trên vi khuẩn và

vi nấm, kết quả cho thấy:

- Nồng độ tối thiểu ức chế (Mic) trên Escherichia coli của mẫu vườn

thực vật Trường Đại học Dược Hà Nội là 200 ỊJg/ml, mẫu lấy tại vườn quốc gia Cúc Phương là 400 ụg/ml; Chưa thấy có tác dụng trên

Pseudomonas aeruginosa.

- Đối với nấm, cao không có tác dụng trên Aspergillus niger ờ nồng

độ 400 ụg/ml, có tác dụng trên các nấm: Fusarium oxysporum,

Rhezhoctona solanỉi, Saccharomyces cerevisae và Candida albicans

với Mic là 200 ụg/ml Có phân đoạn chiết tác dụng mạnh hơn cao chiết thô 4-5 lần

+ Hoạt tính thuỷ phân Protein (Proteinase):

Dựa vào kinh nghiệm dân gian lá cây Xuân hoa giã đắp nên vết thương

để tiêu mủ và làm tan mụn lồi, đã xác định hoạt tính này, Lá Xuân hoa tươi nghiền mịn (có Mercaptoethanol), chiết bằng dung dịch đệm phosphat 0,05- 0,1M, pH 7,6 theo tỷ lệ 1:20 Khuấy nhẹ bằng máy khuấy từ trong 30 phút, sau đó ly tâm 12000 vòng/phút trong 10 phút ở 4°c Lấy dịch trong ở trên định lượng hoạt tính proteinase Kết quả;

- Dịch chiết lá có tác dụng thuỷ phân Protein khá, mạnh nhất ở pH 7,5

+ Tác dụng ức chế MAO (Monoaminoxydase):

Lá cây Xuân hoa chiết bằng Methanol rồi được cô đặc, với nồng độ

6mg/ml ức chế được 69,9% Nguồn MAO lấy từ mitochondri của gan chuột cống và cơ chất dùng là Kynuramin

+ Tác dụng bảo vệ gan:

Chế phẩm dùng là cao toàn phần lá Xuân hoa đã loại hết clorophyl Cho chuột nhắt trắng uống cao 3 ngày liền, liều mỗi ngày 250 mg/kg Gây tổn thương gan bằng tiêm i.p tetưaclorid carbon (CCI4) vào ngày thứ ba sau khi cho uống thuốc được Ih Tổn thương gan sẽ làm tăng quá trình peroxy hoá lipid màng tế bào gan, làm tăng hàm lượng malonyl dialdehyd (MDA) trong gan Ngày thứ tư lấy máu xét nghiệm enzym gan và lấy gan định lượng (MDA)

Kết quả ở lô gây tổn thưcmg bằng CCI4 với liều 0,5 ml/kg, hàm lượng MDA tăng 95,8%; lô dùng thuốc và CCI4 hàm lượng MDA chỉ tăng 5,9% so với lô chứng không dùng CCI4 Khi gây tổn thương gan bằng CCI4 với liều Iml/kg hàm lượng MDA tăng 180,6%; còn lô dùng thuốc và CCI4 chỉ tăng 112,9%

Các enzym gan ASAT và ALAT ở lô dùng CCI4 liều 0,5 ml/kg tăng gấp

2 lần, còn lô dùng thuốc và CCI4 hoạt tính enzym không khác nhiều so với lô chứng không dùng gì

Theo NAPRALERT [22] (cơ sở dữ liệu về cây thuốc trên thế giới, thuộc trường Đại học Illinois ở Chicago, u.s A), đến ngày 5/4/2007 thế giới vẫn chưa có tài liệu nào công bố về tác dụng dược lý cây thuốc Xuân hoa lá hoa

ở Thái Bình, bộ phận trên mặt đất của cây XHLH dùng để chữa viêm đại tràng cấp và mạn tính, đau bụng do co thắt, đầy hơi, chướng bụng, sôi bụng, trĩ xuất huyết, đi ngoài ra máu, chảy máu cam, chảy máu do chấn thương phần mềm.

ở Hoà Bình, XHLH được dùng để chữa cao huyết áp

ở thành phố Thái Nguyên, XHLH dùng để chữa viêm loét dạ dày - tá tràng chảy máu có hiệu quả

Ngoài ra phần lá non còn ăn với nem chạo và gỏi để tăng vị chua chát, phòng đầy bụng

Cách dùng:

- Dùng trong: lá, thân phơi khô, sắc với nước uống

Liều 10 - 12 g/ngày đối với người lớn

- Dùng ngoài: lá tươi, giã nát, đắp lên vết thương, băng lại

Liều 10 - 30 g

PHẦN 2 THỰC NGHIỆM VÀ KÊT QUẢ

2.1 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN c ứ ư

2.1.1 Đối tượng

* Nguvẽn liêu

- Bộ phận trên mặt đất của cây XHLH

(Pseuderanthemum bracteatum Imlay., Acanthaceae)

- Dược liệu được thu hái tại huyện Kiến xương - tỉnh Thái Bình

- Dịch chiết XHLH 2:1 và 5:1 dùng để làm thực nghiệm dược lý

£2 15:11

Hinh 2.1: Ảnh vỊ thuốc XHLH

* Súc vât thí nghiêm

- Chuột nhắt trắng chủng Swiss, có trọng lượng 20 ± 2g, khoẻ mạnh, gồm cả

giống đực và cái do Viện Vệ sinh dịch tễ TW cung cấp

- Thỏ khoẻ mạnh, mua tại Viện Vệ sinh dịch tễ TW, có trọng lượng từ 1,2- 1,5

kg Thỏ được nhịn ăn 10 - 20 giờ trước khi làm thực nghiệm

10

* Máu người

Lấy máu người bình thường (người cho máu tại Viện Huyết học và truyền máu TW) được chống đông bằng dung dịch natri citrat 3,8% theo tỷ lệ 1:9 (dung dịch natri citrat 3,8% : máu = 1:9)

* Hoá chất và thuốc thử

- Hoá chất, dung môi, thuốc thử (tyrode, Propylen glycol, nước cất, mực tàu)

do phòng giáo tài Trường Đại học Dược Hà Nội cung cấp, đạt tiêu chuẩn thí nghiệm

- Hoá chất thiết bị làm thí nghiệm xác định thời gian Quick do hãng Human cung cấp

- Loperamide Hydrochloride: Viên nang 2 mg của hãng UMEDICA (Ấn Độ)

* Máy móc thiết bi

- Máy cất quay Buchi heating beath B- 4900

- Máy ghi hoạt động của ruột cô lập UGO- BASILE

- Máy đông máu HUMACLOT DUO

- Máy li tâm

- Bình cách thuỷ 37°c

- Bộ dụng cụ mổ thỏ và chuột nhắt

- Đồng hồ bấm giây, thước đo

- Các máy móc thiết bị thông thường khác có trong phòng thí nghiệm

2.1.2 Phương pháp nghiên cứu

2.1.2.1 Nghiên cứu độc tính cấp của XHLH

* Nguyên tắc: Tiến hành theo phương pháp BEHRENS- KARBER được trình bày trong tài liệu [9]

* Tiến hành:

- Súc vật thí nghiệm là chuột nhắt trắng chủng Swiss, cả 2 giống đực và cái, cân nặng từ 18 - 22g do Viện Vệ sinh dịch tễ TW cung cấp ơ iuột được chia

11

ngẫu nhiên thành các lô, mỗi lô 6 chuột Chuột được nhịn đói 16h trước khi làm thí nghiệm.

- Các lô chuột được uống các mức liều khác nhau nhưng đều uống một thể tích 2ml/10g chuột

- Mỗi chuột được uống 2 liều cách nhau 2h (vào 9h và 1 Ih giờ sáng)

- Chuột được cho ăn, uống nước trở lại sau khi uống thuốc lần hai 4h, sau đó quan sát và ghi số chuột chết trong 72h

- Tính L D50: Liều gây chết 50 % số chuột

2.I.2.2 Đánh giá tác dụng của XHLH lên hệ tiêu hoá

a Tác dung của thuốc trẽn cơ trơn mốt cổ lâp

* Nguyên tắc: Cố định một đầu đoạn ruột, đâù thứ hai nối với bút ghi

Đoạn ruột trong môi trường dinh dưỡng (Tyrode) sẽ co bóp, và bút ghi sẽ ghi được sự co bóp đó lên băng giấy [2]

Cho dung dịch thuốc vào dung dịch nuôi dưỡng, thuốc sẽ tác dụng lên

cơ trơn, làm cho co bóp của đoạn ruột thay đổi hoạt động do đó sẽ ghi lại được

đồ thị ảnh hưỏng của thuốc lên nhu động ruột cô lập

* Cách tiến hành : [2], [3], [20]

- Súc vật thí nghiệm là thỏ khoẻ mạnh, do Viện Vệ sinh dịch tễ TW cung cấp,

có trọng lượng từ 1,2 - 1,4 kg, để nhịn đói 1 0 -2 0 giờ trước khi tiến hành thí nghiệm

- Buộc ngửa thỏ trên bàn mổ, mổ một đường giữa bụng để bộc lộ ruột Cô lập một đoạn ruột dài khoảng 2 cm Cần thận trọng để tránh làm tổn thương cơ ruột Cắt bỏ mạc treo ruột sao cho cơ ruột hoàn toàn tự do

- Lắp đặt tiêu bản

12

Buộc một sợi chỉ vào mỗi đầu đoạn ruột bằng cách đâm từ trong ra ngoài, buộc một đầu vào một cái ghim cố định trong bình nuôi dưỡng và đầu còn lại của đoạn ruột được nối vód cần bút ghi.

- Ruột được nuôi trong ống chứa dung dịch tyrode, với nhiệt độ ổn định (36- 38° C) và có dòng khí oxy sục từ dưới đáy lên (do điều kiện của phòng thí nghiệm thay việc sục khí oxy bằng không khí)

- Trước khi thử thuốc: Thay dung dịch tyrode trong ống nuôi 2-3 lần để ruột

co bóp ổn định, ghi co bóp bình thường của ruột

- Thử thuốc: Sau khi đã ghi co bóp bình thường của ruột, cho thêm cao lỏng thuốc vào ống nuôi để đạt nồng độ 0,2 %, để ruột co bóp ổn định rồi ghi hoạt động của ruột (Coi cao lỏng 1:1 tương đương với 100%)

- Thử với nồng độ thuốc khác nhau: Thay đoạn ruột mới và tiến hành thử nghiệm như trên với nồng độ 0,5%, 2%

- Ghi lại toàn bộ kết quả giữa các lần thử thuốc Nhận xét và rút ra kết luận về tác dụng của thuốc trên hoạt động co bóp của ruột

b Tác dung của XHLH lên sư dí chuvển thức ân trong ống tiêu hoá [21

- Súc vật thí nghiệm là chuột nhắt trắng chủng Swiss, có trọng lượng 20±2 g, khoẻ mạnh, gồm cả hai giống đực và cái do Viện Vệ sinh dịch tễ TW cung cấp Chuột được để nhịn đói 18 - 20 giờ (từ 1 giờ chiều hôm trước đến 9 giờ sáng hôm sau bắt đầu tiến hành thí nghiệm) Chuột được chia ngẫu nhiên thành 4 lô, mỗi lô 9 con

Lô 1: Uống nước cất

Lô 2: Uống propylen Glycol 20% (PG : nước = 1:4)

Lô 3: Uống hỗn dịch loperamid trong hệ dung môi (PG ; Nước cất=l :4)

Lô 4: Uống dịch chiết XHLH với liều 15g/ kg

(15 g dược liệu khô trên 1 kg chuột nhắt trắng)

- Sau 45 phút, cho mỗi chuột uống 0,2 ml mực tàu

13

- Sau 15 phút uống mực tàu, giết chuột, bộc lộ toàn bộ đoạn dạ dày- ruột Dùng thước đo chiều dài đoạn ruột có mực tàu (1) và toàn bộ chiều dài ống tiêu hoá từ tâm vị đến hậu môn (L).

2.1.2.3 Đánh giá tác dụng cầm máu của XHLH

Chúng tôi nghiên cứu tác dụng cầm máu của cây thuốc thông qua việc xác định ảnh hưởng của thuốc lên thời gian Quick trên thử nghiệm invitro và đánh giá ảnh hưởng của thuốc lên thời gian chảy máu đuôi chuột,

a Xác đinh thời gian Ouick theo kỹ thuât Quick

* Nguyên tác: Máu chống đông bằng citrat sẽ được phát động quá trìnhđông máu theo con đường ngoại sinh khi hồi phục calci và có mặtthromboplastin Dựa vào đặc tính này, người ta khảo sát thời gian đông của huyết tương sau khi cho thừa thromboplastin calci để đánh giá các yếu tố đông máu ngoại sinh (phức hệ prothrombin: II, V, VII, X) [21]

* Cách tiến hành (trẽn Invitro):

- Máu được chống đông bằng citrat natri 3,8% theo tỷ lệ 9 thể tích máu 1 thể tích chống đông Ly tâm 2000 vòng/phút trong 10 phút, tách lấy huyết tương làm xét nghiệm

- Mẫu huyết tương được bảo quản ở nhiệt độ phòng

- Tiếp tục tiến hành các bước được ghi trong bảng 2.1

14

Bảns 2,1: Các bước tiến hành thử nghiệm xác định thòi gian Quick.

Thuốc thử

Mẫu chứng (mỉ)

Trộn đều, mỗi mẫu được hút 0,1 ml, ủ ở 37°c trong 15 phút

Xác định thời gian từ khi cho calci đến khi xuất hiện màng đông

b Đánh giá ảnh hưòng của XHLH lẽn thời gian chảy máu

+ Đánh giá tác dụng cầm máu của thuốc dùng qua đường uống [21:

- Nhốt chuột vào hộp nhốt, để thò đuôi ra ngoài Dùng kéo sắc cắt bỏ một đoạn đuôi dài 2-3 cm tính từ đầu mút ngoài

- Nhúng ngay phần đuôi chuột còn lại vào một cốc nước ấm 37°c để nhìn thấy dòng máu chảy ra ngoài

- Dùng đồng hồ bấm giây theo dõi thời gian từ khi máu chảy cho đến khi máu ngừng chảy, ghi thời gian máu chảy, đây được gọi là thời gian máu chảy bình thường

15

- Mỗi ngày cho chuột uống thuốc XHLH vói liều 15 g/kg Sau 4 ngày

liền, dùng lưỡi kéo cạo cục máu đã đông ờ đuôi cho máu chảy trở lại, rồi

nhúng đuôi chuột vào cốc nước ấm 37°c và xác định thời gian chảy máu khi

đã dùng thuốc

- Ghi lại kết quả, đánh giá ảnh của thuốc lên thời gian chảy máu trên chuột nhắt

+ Đánh giá tác dụng cầm máu tại chỗ của thuốc:

Dựa vào kinh nghiệm dân gian, XHLH có tác dụng cầm máu cả khi dùng đường uống và khi dùng tại chỗ (lấy lá tươi giã nát đắp vào phần vết thương mô mềm bị chảy máu), chúng tôi đã đánh giá tác dụng cầm máu tại chỗ với mô hình thí nghiệm như sau:

Tiến hành trên 3 lô chuột nhắt trắng

Cho chuột vào hộp nhốt, để thò đuôi ra ngoài Dùng kéo sắc cắt một đoạn đuôi dài khoảng 2- 3 cm tính từ đầu mút ngoài

- Lô 1: Ngâm ngay phần đuôi còn lại vào một cốc nước ấm 37°c để nhìn thấy dòng máu chảy ra ngoài

- Lô 2: Ngâm ngay phần đuôi còn lại vào cốc dịch chiết thuốc XHLH nồng độ 0,2% ở 37°c (Coi cao lỏng 1:1 tương đương với dịch chiết 100%)

- Lô 3: Ngâm ngay phần đuôi còn lại vào cốc dịch chiết thuốc XHLH nồng độ 0,5% ở 37°c

Dùng đồng hồ bấm giây theo dõi từ khi máu chảy ra ngoài cho đến khi máu ngừng chảy Ghi thời gian chảy máu của mỗi lô và so sánh kết quả giữa các lô

2.1.3 Xử lý sô liệu

Số liệu thực nghiêm được xử lý theo phương pháp thống kê toán học trên chương trình Ms Excel

16