Góp phần nghiên cứu tác dụng sinh học của vị thuốc xạ can (belamcanda chinensis, iridaceae) trong điều trị bệnh viêm họng

Bộ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC D ược HÀ NỘI . .s o C Q o s . PHẠM THỊ BÍCH THẢO GÓP PHẤN NGHIÊN c ứ u TÁC DỤNG SINH HỌC CỦA V I THUÔC XẠ CAN (Belamcanda Chỉnensỉs, Iridaceaè) TRONG ĐIỀU T R Ị• BỆNH VIÊM HỌNG • • (KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP Dược s ĩ ĐẠI HỌC KHOÁ 2002 - 2007) Người hướng dẫn : GVC. Nguyễn Duy Th Nơi thực Bộ môn Sinh hoá Bộ môn Vi sinh sinh học Trường Đại học Dược Hà nội Thời gian thực : Từ 2/2007 - 5/2007 HÀ NỘI - 5/2007 LỜI CẢM ƠN Với lòng biết Ơ1Ì sâu sắc xỉn chân thành cảm ơn thầy giáo GVC. Nguyễn Duy Thiệp người thầy đáng kính tận tình hướng dẫn giúp đỡ hoàn thành khoá luận tốt nghiệp. Tôi xin chân thành cảm ơn GS.TS. Nguyễn Xuân Thắng, chủ nhiêm Bộ môn Sinh hoá, TS. Nguyễn Văn Rư, thầy quan tâm, động viên giúp đỡ trình thực đề tài. Tôi xin gửi lời cảm ơn tới thầy cô, chị kỹ thuật viên Bộ môn Sinh hoá tạo điều kiện, giúp đỡ hoàn thành khoá luận tốt nghiệp. Qua xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới thầy cô Trường Đại học Dược Hà nội dạy dỗ giúp đỡ suốt năm năm học vừa qua. Tôi vô biết ơn gia đình người thân bạn bè, người giúp đỡ, động viên qua trình học tập nghiên cứu. Hà nội, ngày 20 tháng năm 2007 Sinh viên Pham Thi Bích Thảo MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỂ PHẦN I: TỔNG QUAN .3 1.1 BỆNH VIÊM HỌNG . 1.1.1 Giải phẫu sinh lý họng 1.1.2 Bệnh sinh viêm họng . 1.2 XẠ CAN 11 1.3 ENZYM CÓ TÁC DỤNG CHỐNG VIÊM .14 PHẦN II: THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ . 17 2.1 NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cú 17 2.1.1 Nguyên liệu .17 2.1.2 Hoá chất thí nghiệm .17 2.1.3 Thiết bị, dụng cụ 17 2.1.4 Chủng vi khuẩn môi trường dinh dưỡng 18 2.1.5 Động vật thí nghiêm . 18 2.1.6 Phương pháp nghiên cứu .19 2.1.7 Phương pháp xử lý số liệu 24 2.2 KẾT QUẢ THỰC NGHỆM VÀ NHÂN XÉT 25 2.2.1 Sơ xác định thành phần hóa học .25 2.2.2 Thử tác dụng giảm ho chuột . 25 2.2.3 Thử tác dụng ức chế vi khuẩn 26 2.2.4 Thử tác dụng chống viêm chuột . 28 2.3 BÀN LUẬN 38 KẾT LUẬN VÀ ĐỂ XUẤT 41 A.KẾT LUẬN 41 B. ĐỀ XUẤT . 42 PHỤ LỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT (+) : Dương a-CT : a-chymotrypsin A/G : Albumin / Globulin BC : Bạch cầu DCXCC : Dịch chiết xạ can cồn DC XCN : Dịch chiết xạ can nước DCXC : Dịch chiết xạ can DĐVN : Dược điển Việt nam EtOH : Ethanol MT/TP : Môi trường/ thành phần NXB : Nhà xuất PL : Pha loãng V.A : Végetation Adénoides VSVKĐ : Vi sinh vật kiểm định xc : Xạ can YHCT : Y học cổ truyền Đ ặT V ắR SỀ Viêm họng bệnh phổ biến nước ta, nhiều nước giới. Bệnh gặp lứa tuổi, giới, nơi, mùa giai đoạn chuyển mùa. Viêm họng có nhiều nguyên nhân, phần lớn virus (chiếm tới 80%) Adenovirus, Rhinovirus, virus hợp bào đường thở, virus cúm, sởi Chỉ có khoảng 20% trường hợp vi khuẩn loại liên cầu, tụ cầu, phế cầu, Haemophilus influenzae Nguy hiểm liên cầu tan huyết nhóm A thủ phạm gây nên biến chứng viêm họng dãn đến thấp tim, viêm khớp, viêm thận .Bên cạnh đó, yếu tố nguy như: thay đổi thời tiết, lạnh quá, nóng quá, hoá chất, bụi, khói thuốc .cũng nguyên nhân gây bệnh. Ngày nay, với phát triển Khoa học kĩ thuật, người tìm nhiều loại thuốc mới, phương pháp điều trị ngày hiệu quả, nhiên, tỷ lệ mắc bệnh viêm họng cao, có nhiều trường hợp khó chữa khỏi. Ở Việt Nam, khí hậu nhiệt đới nóng ẩm, thời tiết thay đổi thất thường, không khí ô nhiễm điều kiện thuận lợi cho bệnh phát sinh phát triển. Vì cách tốt để hạn chế nguy mắc bệnh viêm họng cải thiện môi trường sống nâng cao nhận thức cho người dân phòng bệnh. Do tính chất bệnh đa dạng nên thuốc tân dược chữa viêm họng phong phú chủng loại dạng bào chế. Việc lựa chọn thuốc thích hợp sử dụng cách, đủ liều để điều tri bệnh gặp nhiều khó khăn, tình trạng kháng thuốc kháng sinh xảy diện rộng. Chính nhiều thuốc vị thuốc có nguồn gốc từ dược liệu nghiên cứu ứng dụng có hiệu tốt. Kết từ nhiều công trình nghiên cứu cho thấy hoạt chất nhóm hoạt chất có dược liệu có tác dụng phòng, chữa bệnh viêm họng tốt. Xạ can vị thuốc quý chữa bệnh họng có phổ biến nước ta, quan tâm nghiên cứu nhiều. Xuất phát từ tình hình nhu cầu thực tiễn trên, tiến hành thực đề tài: “ Góp phần nghiên cứu tác dụng sình học vị thuốc xạ can (Belamcanda chinensỉs, Idaceace) điều trị bệnh viêm họng ” Với mục tiêu sau: 1. Tìm hiểu tác dụng giảm ho vị thuốc động vật thực nghiệm. 2. Nghiên cứu tác dụng DCxc số chủng vi khuẩn gây bệnh họng. 3. Tìm hiểu chế tác dụng chống viêm vị thuốc XC, đồng thời theo dõi biến đổi số số hoá sinh động vật thực nghiệm trình gây viêm. PHẦN 1: TỔNG QUAN 1.1 BỆNH VIÊM HỌNG 1.1.1 Giải phẫu sinh ỉý họng ❖ Giải phẫu hạng Họng ngã ba đường tiêu hoá đường hô hấp, nối liền với mũiở phía trên, với miệng phía trước, với quản thực quản phía dưới. Họng chia thành phần: + Họng mũi: Là phần họng trên, tương ứng với hốc mũi phía trước, gọi vòm họng. Thành sau họng mũi hợp với thành hai thành bên làm thành hình vòm, vòm có tổ chức sùi gọi V.A (Végetation adénoides). V.A ban đầu phát triển mạnh trẻ 2-5 tuổi, sau teo dần + Họng miệng: Là phần họng giữa, tương ứng với miệng phía trước. Hai thành bén có amidan nằm hốc amidan. Hốc tạo trụ trước trụ sau. Bao amidan phân cách với thành bên họng lớp vỏ xốp dễ bóc tách. Toàn ạmidan số I, II, III, IV với lympho nằm rải rác niêm mạc tạo thành vùng bạch huyết họng (vùng Waldeyer). + Họng quản: Là phần họng dưới, thành sau liên tiếp với thành sau họng miệng. Thành trước phía đáy lưỡi, sụn thiệt, hai sụn phễu quản [2],[22],[27] ❖ Chức sinh lý họng: Họng tham gia vào chức sau: nuốt, thở, phát âm, nghe, vị giác bảo vệ thể. - Chức thở: Không khí qua mũi xuống họng mũi, phía trước quản khí quản để vào phổi. - Chức nuốt: Khi thức ăn vào họng, tới gốc lưỡi, eo họng gây phản xạ nuốt, mềm đẩy lến, đóng phần họng mũi, xiết họng co lại, đẩy thức ăn xuống dưới, nắp quản đậy kín đường vào auản, môn đóng lại, thức ăn vào thực quản mà không bị rơi vào khí quản. - Chức phát âm: Họng kết hợp với quan mũi, khoang miệng quan cấu thành tiếng nói. - Chức bảo vệ: Dịch tiết từ mũi chảy xuống họng, họng phản xạ ho, đẩy chất tiết ngoài. Tổ chức bạch huyết họng có tác dụng bảo vệ niêm mạc họng, bạch huyết sản xuất kháng thể tạo nên sức đề kháng chỗ (Ig G, IgA). - Chức nghe: Vòi Eustache nối liền họng mũi với thùng tai, có vai trò quan trọng chức nghe. - Chức vị giác: Niêm mạc miệng, họng tham gia phần cảm nhận vị giác [22],[27] 1.1.2 Bệnh sinh viêm họng Viêm họng có nhiều nguyên nhân thường virus vi khuẩn vùng lân cận mũi, viêm xoang mặt . làm dịch tiết chảy xuống họng, mang theo vi khuẩn làm niêm mạc họng bị viêm hay sâu răng, vi khuẩn từ lan đến họng. Thứ hai yếu tố bụi, loại hóa chất. Khi tiếp xúc với nhiều bụi thời gian dài hay nghiện thuốc gây hỏng niêm mạc họng, họng chức bảo vệ. Các yếu tố nguy gây viêm họng khác: thay đổi thời tiết, lạnh quá, nóng quá, tác động thức ăn, đồ uống: rượu, nước lạnh .[22],[39] 1.1.2.1 Viêm họng cấp Viêm họng cấp viêm cấp tính niêm mạc họng, bệnh hay gặp vào mùa lạnh người ỉớn trẻ em. Do vi khuẩn (chiếm 20-30%): liên cầu tan huyết nhóm A, tụ cầu vàng, mô não cầu, Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae .Ngoài ra, viêm họng bạch hầu, vi khuẩn kị khí, xoắn khuẩn giang mai .Do virus (chiếm 70 - 80%): Virus lây qua đường hô hấp hay gặp là: Adenovirus, Rhinovirus, Myxovirus, Herpesvirus. Virus lây theo phân: virus Coxakievirus Echovirus; virus hay gây bệnh truyền nhiễm: sởi, thuỷ đậu, quai bị. ■ Triệu chứng lâm sàng bật: Đau họng kèm theo cảm giác nóng rát, đặc biệt nuốt đau, kèm theo sốt, mệt mỏi. ❖ Viêm họng đỏ thông thường Rất hay gặp vào mùa lạnh thay đổi thời tiết, dễ lây lan thành dịch. Do virus: cúm, sởi; vi khuẩn: phế cầu, liên cầu vi khuẩn khác sẩn có họng. ■ Triệu chứng: - Bắt đầu đột ngột, ớn lạnh, sốt cao 39-40°C, nuốt đau, rát họng, khát nước, đau mình, ăn, ngủ khản tiếng, Ở trẻ em: thường hay gặp sưng, đau hạch cổ. - Khám họng: toàn niêm mạc họng đỏ rực, khô, hai amidan sưng to, đỏ. ■ Tiến triển biến chứng: Nếu bội nhiễm bệnh khỏi hẳn sau 5-7 ngày: sốt giảm, đau họng hết. Ở trẻ em, không xử lí tốt dễ bị bội nhiễm gây: viêm tai cấp, viêm xoang cấp, phế quản, phế viêm. ■ Điều trị: Về bản: nghỉ ngơi, giữ ấm nâng cao sức đề kháng Vitamin c liều cao - Hạ sốt, giảm đau: Efferalgan, Paracetamol, Aspirin, Aspegic . - Chống đau rát họng: Súc miệng với nước muối, dung dịch KC11%, Rhinathiol viên siro, loại thuốc ngậm: Lysopaine . - Giảm phù nề, chống viêm, tiêu đờm: a_CT, Mucomyst . - Chỉ dùng kháng sinh trường hợp có bội nhiễm: nhóm Benzylpenicilin (Amoxicilin, Augmentin .) [27],[29],[39]. ❖ Viêm họng bạch hầu Bệnh thường gặp trẻ em từ 2-7 tuổi, gặp trẻ em lớn người lớn. Do trực khuẩn Klebs_loefler Gram (+) lây qua đường nước bọt. ■ Triệu chứìíg: - Bệnh thường bắt đầu âm ỉ, sốt nhẹ 38-39°C, người ớn rét, mạch nhanh, nuốt đau, bỏ ăn, mệt mỏi, da xanh kèm ngạt mũi rát họng. Khám họng: ngày đầu niêm mạc họng đỏ, từ ngày thứ xuất giả mạc trắng bám bề mặt amidan, bóc bị chảy máu. - Với thể ác tính: Bắt đầu rầm rộ, sốt cao đến 40°c, da xanh tái, chân tay lạnh, hạch cổ sưng to bạnh đau. Đau rát họng rõ rệt, ngạt tắc mũi, chảy mũi mủ hôi gây loét cửa mũi. Khám họng: giả mạc nhiều, màu xám tro, dày cộm[22] ■ Biến chứng: Các biến chứng thần kinh: liệt hầu, liệt điều tiết mắt, liệt chân tay. Viêm tim, viêm quản cấp tính, albumin niệu (+), thiểu thượng thận. ■ Điều trị: - Điều trị bạch hầu: tiêm huyết kháng bạch hầu: trẻ em tiêm bắp 10.00020.000đv, người lớn: 30.000-50.000đv phối hợp với Penicilin, Vitamin c. - Chống biến chứng: chống liệt (tiêm Strychnin, uống Vitamin Bl), chống suy tim (Coramin Spactein), khó thở cần mở khí quản sớm để tránh ngạt thở. [16],[27] ❖ Viêm họng Vincent Do vi khuẩn hình thoi xoắn khuẩn sống kí sinh họng. Điều kiện thuận lợi: thể suy yếu, rối loạn dinh dưỡng, sâu răng, viêm amidan gây rối loạn niêm mạc họng, ■ Triệu chứng: - Bắt đầu cách âm thầm: sốt nhẹ, mệt mỏi, cảm giác nóng rát họng, nuốt đau, thở hôi. Có thể hạch vùng cổ. - Khám họng: mặt amidan bên có giả mạc trắng, dễ bong, bóc giả mạc phía có lớp loét nông. ■ Tiến triển: Sức đề kháng tốt: sau 10 ngày vết loét liền, sức đề kháng kém: vết loét lan lưỡi, miệng. ■ Điều trị: Uống Penicilin, điều trị chỗ: ngậm penicilin bôi vết loét dung dịch penicilin 20.000đv/lml bôi Glycerin sulfasenobezon 1%.[16] c. Theo dõi biến đổi số lượng bạch cầu Bảng 2.11: Tỷ lệ giảm số lượng bạch cầu lô chuột thực nghiệm Lô Liêù Số lượng chuột Chất thử tác dụng Số lương BC Tỷ lệ giảm số p lượng BC (%) 609 ± 31 10g/kg 505 ± 24 17,1 [...]... và viêm họng ở người lớn, đã có kết quả điều trị tốt ở 76,4% bệnh nhân viêm họng cấp tính và 63,8% bệnh nhân viêm họng mạn tính Thuốc được dung nạp tốt, hầu như không gây tác dụng không mong 12 muốn Chế phẩm viên ngậm từ xc, cát cánh, trần bì được ứng dụng lâm sàng cũng có tác dụng tốt điều trị viêm họng, làm giảm đau, chống viêm tấy, làm mềm và làm ẩm niêm mạc họng, kích thích xuất tiết, giảm phản xạ. .. thuốc lọc máu, thuốc khai thông và gây trung tiện, thuốc , tẩy, lợi tiểu và thuốc bổ Ở Malaysia, x c được dùng trị bệnh lậu và nấu nước tắm cho phụ nữ sau khi đẻ Ở Indonesia, x c giã đắp trị đau lưng.[l 1],[12],[32] 1.2.7 Các bài thuốc và dạng bào chế có vị xc trong điều trị bệnh viêm họyi khuẩn [xem phần phụ lục] 1.3 ENZYM CÓ TÁC DỤNG CHỐNG VIÊM 1.3.1 Sơ lược về enzym chống viêm Các enzym có tác dụng. .. trừ đờm, làm đỡ đau họng, thuốc long đờm, điều trị bệnh viêm họng, viêm amidan, ho và khó thở, khạc ra nhiều đờm, ngày dùng 3-9g Ở Ân Độ x c điều trị bong gân bằng cách giã nát thân rệ, bọc trong một lá trầu không, đắp và băng vào cơ của chi bị bong gân Ở các nước Đông Nam Á, thân rễ x c được dùng phổ biến để điều trị viêm họng và bệnh đường hô hấp trên khác như viêm thanh quản, viêm amidan, ho đờm... có độc lính thấp Có tác dụng chống co thắt gây bởi Histamin trên cơ trơn ruột chuột lang cô lập, và có tác dụng lợi tiểu nhẹ Flavonoid toàn phần của x c có tác dụng ức chế yếu hoạt tính của polyphenoloxydase huyết thanh người invitro Hoạt tính của enzym này trong huyết thanh người tăng rõ rệt trong các bệnh nhiễm khuẩn, trong các trạng thái viêm cấp tính hoặc mạn tính, trong các bệnh bạch cầu, xơ gan,... Candida - - - - - - - - - - - - albican 4 Liên cầu Chú giải: (-) không có tác dụng Kết quả trong bảng 2.6 cho thấy: DC XCN có tác dụng ức chế sự phát triển của tụ cầu vàng và phế cầu DC XCN có tác dụng kháng khuẩn mạnh ở nồng độ đậm đặc: 24,72 ± 1,69 (tụ cầu vàng); 26,98 ±1,50 (phế cầu) Tác dụng ức chế vi khuẩn giảm dần khi giảm nồng độ của DC: tác dụng yếu ở nồng độ pha loãng 10'1và không có tác dụng. .. 2.1.6.2 Nghiên cứu tác dụng sinh học a Phương pháp thử tác dụng giảm ho trên chuột: • Nguyên tắc: Chuột nhắt trắng sau khi bị kích thích bằng hơi amoniac trong 1 thơi gian nhất định sẽ bị ho Căn cứ vào số chuột ho và số tiếng ho của từng chuột để đánh giá tác dụng chống ho của vị thuốc • Tiến hành: Chuột được chia thành 3 lô, mỗi lô 10 con - Lô chứng: uống dung dịch NaCl 0,9% - Lô thứ 1 : uống cao thuốc. .. 10'4, 10'5 DC xcc không có tác dụng ức chế sự phát triển của vi nấm Candida albican và liên cầu b Tác dụng ức chế vi khuẩn của DC XCN Để xác định nồng độ của DC XCN có tác dụng ức chế vi khuẩn, chúng tôi tiến hành pha loãng nồng độ DC XCN sau đó tiến hành thử tác dụng ức chế theo phương pháp khoanh giấy Kết quả thu được tại bảng 2.6: Bảng 2.6: Kết quả thử tác dụng ức chế vi khuẩn của DC XCN STT Chủng vi... belamcandol A, desacetylbelamcandal 1.2.4 Tác dụng dược lý của vị thuốc xạ can Trong thí nghiệm invitro cao cồn vị x c có tác dụng ức chế các chủng vi khuẩn: phế cầu, liên cầu tan máu, trực khuẩn ho gà, Bacillus subtilis, và có tác dụng yếu đối với các chủng vi khuẩn: tụ cầu vàng, Shigella dysenteriae, Sh.shigae, Enterococcus Thân rễ x c có tác dụng chống viêm trong mô hình gây phù bàn chân với kaolin,... được xử lý theo toán thống kê 20 c Phương pháp thử tác dụng chống viêm: Tác dụng chống viêm cấp của vị thuốc được thử nghiêm trên chuột cống trắng trên mô hình gây viêm cấp của Winter: Đo thể tích bàn chân sau của chuột vào thời điểm trước và sau khi tiêm thuốc (thời điểm chân chuột phù to nhất sau khi tiêm thuốc) Lô chứng: chuột được uống nước muối sinh lý 0,9%, liều l,5ml/100g Lô thử dược liệu: chuột... chứng viêm hong của DC x c , môt ^% i r y\ - 1 _ triệu chứng điển hình hay gặp trong viêm họng 2.2.3 Thử tác dụng ức chế vi khuẩn Với mục đích thử tác dụng ức chế vi khuẩn của DC x c , chúng tôi tiến hành sử dụng phương pháp khoanh giấy đặt lên môi trường thạch đã có VSVKĐ, sau đó đo các vòng vô khuẩn tạo thành Tác dụng ức chế vi khuẩn của DC xcc a Pha loãng nồng độ DC xcc sau đó tiến hành thử tác . TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI s o C Q o s PHẠM THỊ BÍCH THẢO GÓP PHẤN NGHIÊN c ứ u TÁC DỤNG SINH HỌC CỦA VI THUÔC XẠ CAN (Belamcanda Chỉnensỉs, Iridaceaè) TRONG ĐIỀU T R Ị BỆNH VIÊM HỌNG • •. LỤC ĐẶT VẤN ĐỂ 1 PHẦN I: TỔNG QUAN 3 1.1 BỆNH VIÊM HỌNG . 3 1.1.1 Giải phẫu sinh lý họng 3 1.1.2 Bệnh sinh của viêm họng 4 1.2 XẠ CAN 11 1.3 ENZYM CÓ TÁC DỤNG CHỐNG VIÊM 14 PHẦN II: THỰC NGHIỆM. Idaceace) trong điều trị bệnh viêm họng ” Với 3 mục tiêu sau: 1. Tìm hiểu tác dụng giảm ho của vị thuốc trên động vật thực nghiệm. 2. Nghiên cứu tác dụng của DC xc trên một số chủng vi khuẩn gây bệnh