Nghiên cứu thành phần hóa học và thử tác dụng dược lý của một số chế phẩm tọa an

NGUYỄN THỊ BÍCH NGỌC NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ THỬ MỘT SỐ TÁC DỤNG DƯỢC LÝ CỦA CHẾ PHẨM TỌA AN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI – 2014... LỜI CẢM ƠN Sau một thời gian nghiê

NGUYỄN THỊ BÍCH NGỌC NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC

VÀ THỬ MỘT SỐ TÁC DỤNG DƯỢC LÝ

CỦA CHẾ PHẨM TỌA AN

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ

HÀ NỘI – 2014

LỜI CẢM ƠN

Sau một thời gian nghiên cứu khoa học, được sự giúp đỡ tận tình của các thầy

cô giáo, các anh chị kĩ thuật viên, bạn bè, gia đình, tôi đã hoàn thành khóa luận tốt

nghiệp “Nghiên cứu thành phần hóa học và một số tác dụng sinh học chế

phẩm Tọa An”

Nhân dịp này, tôi xin được bày tỏ lòng cảm ơn chân thành và sâu sắc tới

PGS.TSPhùng Hòa Bình, người thầy giáo đáng kính đã dành nhiều thời gian, tâm

huyết để tận tình hướng dẫn, chỉ bảo tôi trong quá trình thực hiện đề tài

Tôi cũng xin gửi lời cảm ơn chân thành tới DS Nguyễn Thị Hải Yến đã nhiệt

tình hướng dẫn, trao đổi, giúp đỡ tôi trong qúa trình thực nghiệm

Đồng thời, xin trân trọng cảm ơn các thầy cô giáo, các anh chị kĩ thuật viên thuộc Bộ môn Dược họa cổ truyền, Bộ môn Dược lực Trường Đại học Dược Hà Nội, phòng Mỹ phẩm Viện kiểm nghiệm thuốc trung ương đã tận tình giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi để tôi có thể hoàn thành khóa luận

Cuối cùng, xin cảm ơn gia đình, người thân, bạn bè đã khuyến khích, động viên để tôi có được kết quả hôm nay

Hà Nội, ngày 14 tháng 05 năm 2014 Sinh viên

Nguyễn Thị Bích Ngọc

MỤC LỤC

ĐẶT VẤN ĐỀ 1

CHƯƠNG I: TỔNG QUAN 2

1.1 Đại cương về bệnh trĩ 2

1.1.1 Định nghĩa 2

1.1.2 Phân loại 2

1.1.3 Nguyên nhân 3

1.1.4 Cơ chế bệnh sinh 3

1.1.5 Triệu chứng lâm sàng 4

1.1.6 Điều trị bệnh trĩ 4

1.2 Tóm tắt về chế phẩm Tọa An 6

1.2.1 Nguồn gốc thành phần chế phẩm Tọa An 6

1.2.2 Tóm tắt thông tin các vị thuốc trong chế phẩm 6

CHƯƠNG II: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20

2.1 Nguyên vật liệu, phương tiện 20

2.1.1 Nguyên liệu 20

2.1.2 Phương tiện 20

2.2 Nội dung nghiên cứu 21

2.2.1 Xác định tính đúng của các vị thuốc 21

2.2.2 Nghiên cứu thành phần hóa học chế phẩm TA 21

2.2.3 Thử tác dụng dược lý 21

2.3 Phương pháp nghiên cứu 21

2.3.1 Xác định tính đúng các vị dược liệu 21

2.3.2 Nghiên cứu thành phần hóa học chế phẩm Tọa An 22

2.3.3 Thử tác dụng dược lý 23

CHƯƠNG III: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ, BÀN LUẬN 26

3.1 Thực nghiệm, kết q uả 26

3.1.1 Xác định tính đúng các vị thuốc 26

3.1.2 Nghiên cứu thành phần hóa học chế phẩm Tọa An 37

3.1.3 Thử tác dụng dược lý 51

3.2 Bàn luận 54

3.2.1 Xác định đúng của các vị thuốc 54

3.2.2 Nghiên cứu thành phần hóa học chế phẩm 54

3.2.3 Thử tác dụng dược lý 55

KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 56

1 Kết luận 56

2 Kiến nghị 56 TÀI LIỆU THAM KHẢO

PHỤ LỤC

DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT

AND: Acid deoxyribo nucleic

cAMP: AMP vòng

cGMP: GMP vòng

BuOH: n – Buthanol

Cyt P450: Cytochrom P450

DĐVN IV: Dược điển Việt Nam IV

TM: hăng ma

TNHH: Trách nhiệm hữu hạn TT: Thuốc thử

TTM: Tiêm tĩnh mạch VĐ: Vừng đen

HH: Hòe hoa DC: Diếp cá ĐC: Đối chiếu HK: Hoàng kì dd: Dung dịch HPLC: High Performance Liuid Chromatography

HIV: Human Immuno-deficiency Virus

HVS: Herpes Virus Simplex

MTT: 3-(4,5-dimethylthiazol)-2-yl-2,5-diphenyltetrazolium

ACN: Aceton nitril

DANH MỤC CÁC BẢNG

Bảng 3.1: Kết quả định tính Tọa An và thăng ma bằng phản ứng hóa học 38

Bảng 3.2 Kết quả sắc kí so sánh TA, DC,quercetin 39

Bảng 3.3 Kết quả sắc kí so sánhTA, TBD, quercetin 41

Bảng 3.4 Kết quả sắc kí so sánh TA, TM 42

Bảng 3.5 Kết quảsắc kí so sánh TA, HH, rutin 44

Bảng 3.6 Kết quả sắc kí so sánh TA, HK, astragalosid IV 45

Bảng 3.7 Kết quả sắc kí so sánh TA,VĐ 46

Bảng 3.8 Hàm lượng cắn phân đoạn EtOAc chế phẩm TA theo khối lượng…… 47

Bảng 3.9 Thành phần pha động định lượng đồng rutin, quercetin bằng HPLC 49

Bảng 3.10 Tính thích hợp hệ thống HPLC với rutin 49

Bảng 3.11 Tính thích hợp hệ thống HPLC với quercetin 50

Bảng 3.12 Hàm lượng rutin trong chế phẩm TA 50

Bảng 3.13 : Hàm lượng quercitin trong chế phẩm TA 50

Bảng 3.14 Ảnh hưởng của TA đến thời gian chảy máu đuôi chuột 51

Bảng 3.15 Ảnh hưởng của TA đến độ phù chân chuột 53

DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ

Hình 1.1 Giải phẫu vị trí trĩ 2

Hình 2.1 Qui trình thí nghiệm tác dụng chống viêm cấp trên mô hình gây phù bàn chân chuột 25

Hình 3.1 Ảnh dược liệu diếp cá 26

Hình 3.2 Ảnh đặc điểm bột diếp cá 26

Hình 3.3 Ảnh dược liệu trắc bách diệp 27

Hình 3.4 Ảnh đặc điểm bột trắc bách diệp 28

Hình 3.5 Ảnh dược liệu thăng ma 28

Hình 3.6 Ảnh đặc điểm bột thăng ma 29

Hình 3.7 Ảnh dược liệu Hòe hoa 33

Hình 3.8 Ảnh đặc điểm bột Hòe hoa 34

Hình 3.9 Ảnh dược liệu Hoàng kỳ 35

Hình 3.10 Ảnh đặc điểm bột Hoàng kỳ 35

Hình 3.11 Ảnh dược liệu Vừng đen 36

Hình 3.12.Ảnh đặc điểm bột Vừng đen 36

Hình 3.13 Ảnh sắc kí so sánh TA, DC, ĐC quercetin (λ = 254 nm) 39

Hình 3.14 Ảnh sắc kí so sánh TA, TBD, ĐC quercetin (λ = 366 nm) 41

Hình 3.15 Ảnh sắc kí so sánh TA và TM (λ = 366 nm) 42

Hình 3.16 Ảnh sắc kí so sánh TA, HH, rutin (λ = 366 nm ) 44

Hình 3.17 Ảnh sắc kí so sánh Hoàng kỳ, TA và ĐC astragalosid IV hiện màu 45

Hình 3 18 Ảnh sắc kí so sánh TA và VĐ (λ = 366 nm) 46

Hình 3.19 Ảnh hưởng của Toạ an đến thời gian chảy máu đuôi chuột 52

Hình 3.20.Ảnh hưởng của Tọa An đến độ phù chân chuột 52

ĐẶT VẤN ĐỀ

Việt Nam được Tổ chức Y tế thế giới đánh giá là một trong năm nước hàng đầu trên thế giới có hệ thống y học cổ truyền phát triển lâu đời và đóng góp tích cực vào sự nghiệp chăm sóc sức khỏe nhân dân Từ năm 1955, chủ tịch Hồ Chí Minh đã định hướng phát triển nghành y tế Việt Nam theo hướng hiện đại, khoa học, kết hợp chặt chẽ giữa cổ truyền và hiện đại, tận dụng triệt để nguồn dược liệu phong phú, dồi dào và các kinh nghiệm chữa bệnh lâu đời Nhiều bài thuốc, phương pháp trị liệu của Y học cổ truyền đã được nghiên cứu, phát triển để phục vụ công tác phòng bệnh, chữa bệnh, nâng cao sức khỏe người bệnh

Tọa An là chế phẩm hỗ trợ điều trị trĩ được Bộ Y tế Việt Nam cấp phép lưu hành, sản xuất bởi công ty TNHH Giai Cảnh Sản phẩm có nguồn gốc thảo dược Công thức Tọa An dựa trên bài thuốc gia truyền Song, Tọa An chưa có bằng chứng

về tác dụng trên thực nghiệm khoa học Mặt khác, nhu cầu của công ty Giai Cảnh là xây dựng tiêu chuẩn của sản phẩm nhằm đảm bảo tính ổn định Vì vậy, chúng tôi

thực hiện đề tài “Nghiên cứu thành phần hóa học và thử một số tác dụng dược

lý của chế phẩm Tọa An” nhằm mục tiêu kiểm định các thành phần hóa học và thử

một số tác dụng dược lý của chế phẩm Tọa An

Để đạt được mục tiêu đó, khóa luận đã tiến hành các nội dung sau:

- Xác định tính đúng các dược liệu trong thành phần chế phẩm Tọa An

- Nghiên cứu thành phần hóa học của chế phẩm Tọa An

- Thử một số tác dụng dược lý liên quan tới tác dụng điều trị của chế phẩm: tác dụng cầm máu và tác dụng chống viêm cấp

CHƯƠNG I TỔNG QUAN

1.1 Đại cương về bệnh trĩ

1.1.1 Định nghĩa

Bệnh trĩ, hay còn gọi là bệnh lòi dom (theo dân gian), là bệnh được tạo thành

do giãn quá mức các đám rối tĩnh mạch trĩ (hay sự phình tĩnh mạch) ở mô xung quanh hậu môn; là bệnh rất phổ biến, đứng hàng đầu trong các bệnh lý về vùng hậu

môn phải nhập viện [1],[5],[15]

1.1.2 Phân loại

Bệnh trĩ là sự phồng lớn của một hay nhiều tĩnh mạch thuộc hệ thống tĩnh mạch trĩ trên hoặc tĩnh mạch trĩ dưới Dựa vào đặc điểm này, có thể phân loại bệnh trĩ thành trĩ nội, trĩ ngoại hay trĩ hỗn hợp [1], [15]

 Trĩ nội: Các xoang tĩnh mạch trĩ trên

phồng to, trĩ được hình thành ở trên

đường lược,thường nằm trong ống hậu

môn và khi phình lớn sẽ sa ra ngoài Trĩ

nội được phân chia làm 4 cấp độ:

- Trĩ nội độ1: Các búi trĩ nằm hoàn toàn

trong ống hậu môn, thường chỉ có biểu

hiện đau rát và ra máu Hình 1.1 Giải phẫu vị trí trĩ

- Trĩ nội độ 2: Búi trĩ thập thò ở hậu môn khi đi đại tiện, sau đó tự co vào trong ống hậu môn

- Trĩ nội độ 3: Búi trĩ sa hẳn ra ngoài sau khi đại tiện và không tự co vào trong ống hậu môn mà phải dùng tay đẩy búi trĩ mới vào trong được

- Trĩ nội độ 4: Bũi trĩ sa ra ngoài hậu môn và thường trực ở bên ngoài, dùng tay đẩy nhưng không vào được hoặc vào sau đó lại sa ra ngay

 Trĩ ngoại: Các xoang tĩnh mạch trĩ dưới phồng to, trĩ được hình thành ở

dướiđường lược ở phía ngoài hậu môn (ngay rìa hậu môn) Khác với trĩ nội là hình thành trong ống hậu môn rồi mới sa ra ngoài

 Trĩ hỗn hợp: Tức là trên cùng một bệnh nhân xuất hiện cả trĩ nội và trĩ ngoại

Thông thường, khi diễn tiến lâu ngày, phần trĩ nội và phần trĩ ngoại sẽ liên kết với nhau, tạo thành trĩ hỗn hợp

1.1.3 Nguyên nhân

Nguyên nhân bệnh trĩ chưa được xác định rõ ràng và chắc chắn Những yếu tố sau đây được coi như là những điều kiện thuận lợi cho bệnh phát sinh:

- Táo bón kinh niên: Những bệnh nhân này mỗi khi đi cầu rặn nhiều, khi rặn áp lực

trong lòng ống hậu môn tăng lên gấp 10 lần Táo bón lâu ngày làm xuất hiện các búi trĩ Các búi trĩ dần dần to lên và khi to quá sẽ sa ra ngoài

- Hội chứng lỵ: Những bệnh nhân bị bệnh lỵ mỗi ngày đại tiện nhiều lần, mỗi lần

đại tiện phải rặn nhiều làm tăng áp lực trong ổ bụng

- Tăng áp lực ổ bụng: Những bệnh nhân viêm phế quản mạn tính, những bệnh

nhân giãn phế quản, phải ho nhiều, những người làm lao động nặng như khuân vác làm tăng áp lực trong ổ bụng, dễ dàng cho bệnh trĩ xuất hiện

- Tư thế đứng: Khi nghiên cứu áp lực tĩnh mạch trĩ, người ta ghi nhận áp lực tĩnh

mạch trĩ là 25cm H2O ở tư thế nằm, tăng vọt lên 75cm H2O ở tư thế đứng Vì vậy, tỉ

lệ mắc bệnh trĩ cao hơn ở người phải đứng lâu, ngồi nhiều, ít đi lại như thư ký bàn giấy, nhân viên bán hàng, thợ may

- U bướu hậu môn trực tràng và vùng chung quanh: Ung thư trực tràng, u bướu

vùng tiểu khung, thai nhiều tháng… khi to có thể chèn ép và cản trở đường về tĩnh mạch hồi lưu làm cho các đám rối trĩ căng phồng lên tạo thành bệnh trĩ Trong những trường hợp này, trĩ được tạo nên do những nguyên nhân cụ thể, rõ ràng nên được gọi là trĩ triệu chứng, khi điều trị ta phải điều trị nguyên nhân chứ không trị như bệnh trĩ

1.1.4 Cơ chế bệnh sinh

- Theo thuyết cơ học:Cho rằng đám rối tĩnh mạch nằm ở mặt phẳng sâu của lớp

dưới niêm mạc được giữ tại chỗ bởi các sợi cơ có tính chất đàn hồi Khi có hiện tượng thoái hoá keo thì các dải này trùng nhẽo, và nếu áp lực trong xoang bụng tăng

lên do táo bón hoặc do rối loạn đại tiện thì các búi trĩ nội căng phồng lên Lúc đầu các búi trĩ còn nằm trong lòng hậu môn nhưng khi các dải treo đứt hẳn thì chúng sa

ra ngoài hậu môn

- Thuyết huyết động học: Cho rằng trong lớp dưới niêm mạc của phần thấp trực

tràng và của ống hậu môn có rất nhiều khoang mạch Vách các khoang này có chỗ dày chỗ mỏng tạo nên tổ chức hang Ở đây có sự thông nối giữa động mạch và tĩnh mạch Hiện tượng chảy máu trong bệnh trĩ là do các rối loạn tuần hoàn tại chỗ của chính các mạch máu thông nối này

1.1.5 Triệu chứng lâm sàng

- Chảy máu: Là triệu chứng có sớm nhất và cũng là triệu chứng thường gặp nhất

hình thức chảy máu rất khác nhau, lúc đầu chảy máu kín đáo về sau mỗi khi đại tiện phải rặn do táo bón thì máu chảy thành giọt hoặc thành tia Khi nặng bệnh nhân ngồi xổm, đi lại nhiều cũng chảy máu thậm chí đại tiện ra máu cục do máu từ búi trĩ chảy vào trong bóng trực tràng và đọng ở đó

- Đau: Hiện tượng đau thường gặp trong các trường hợp tắc mạch, nứt hậu môn,

đặc biệt khi đại tiện Cũng có thể gặp khi có ổ áp xe đi kèm khu trú dưới lớp niêm mạc hậu môn Khi trĩ sa ra ngoài và phù nề, búi trĩ có thể sưng khá to và mắc nghẹt không thể đẩy lên được

- Sa trĩ: Trĩ nội lúc đầu khu trú hoàn toàn bên trong hậu môn, khi to lên thì sa

xuống nằm ngoài hậu môn

1.1.6 Điều trị bệnh trĩ

Trĩ là một trạng thái sinh lý bình thường, chỉ khi nào có sự mất điều chỉnh mới trở thành bệnh lý Điều trị trĩ khi bệnh nhân có những triệu chứng khó chịu, đau đớn, ngứa, sưng, chảy nước hay chảy máu Vì vậy, điều trị trĩ chủ yếu là điều trị các triệu chứng [7]

1.1.6.1.Điều trị trĩ nội

 Chế độ dinh dưỡng: Chế độ ăn cần bổ sung nhiều chất xơ

 Thuốc dùng toàn thân:

- Dùng thuốc làm bền thành mạch ngăn cản chảy máu: thuốc chứa vitamin PP,

các flavonoid, rutin [7], [15]

- Dùng thuốc giảm đau, tốt nhất là dùng giảm đau bằng paracetamol, không dùng

giảm đau opioid vì có thể gây táo bón

- Khi trĩ có viêm, phù nề hay tắc mạch thì dùng các thuốc chống viêm: Cả corticoid và chống viêm không steroid hay enzym chống viêm như

- Thuốc co mạch: để giảm chảy máu, thuốc cũng làm giảm ngứa và viêm tạm thời: Dung dịch ephedrin sulfat 0.1-0.125%, phenylephrin HCl 0.25%, epinephrin HCl 0.005 – 0.1% Các thuốc này chống chỉ định dùng cho bệnh tim mạch, tăng huyết

áp, cường giáp, tiểu đường, phì đại tuyến tiền liệt

- Chất bảo vệ: Tạo hàng rào vật lý để bảo vệ da, niêm mạc tạm thời giảm ngứa, khó chịu, bỏng rát Đồng thời ngăn kích ứng các mô ở trực tràng – hậu môn và sự mất nước ở lớp sừng biểu bì

Chất hấp phụ: Hút các chất dịch, chất bài tiết trên da hay niêm mạc

Chất bôi trơn, làm dịu, làm mềm: Kết hợp với nước tạo chất keo để bảo vệ da hoặc

là các chất dầu bôi trơn hoặc làm mềm da

Một số chất khác hay được kết hợp do tính chất làm dịu hoặc làm săn niêm mạch như: một số muối bismuth, kẽm oxid, resorcinol, bôm Peru, cao cây kim mai

- Thuốc chống viêm tại chỗ: Có thể dùng cáccorticosteroid như; hydrocortison 0.25-1% để giảm viêm, giảm ngứa…, các chất kết hợp này chỉ có tác dụng ngắn hạn

- Dùng kháng sinh tại chỗ nếu có nhiễm khuẩn: Neomycin, framycetin…

- Thuốc làm lành vết thương: Thuốc kích thích sự làm lành vết thương hoặc tái tạo

mô quanh trực tràng hậu môn

- Tiêm thuốc làm xơ: Tiêm dầu phenol hoặc polidocanol vào chân búi trĩ để gây

xơ hoá làm búi trĩ teo nhỏ lại

- Thắt trĩ: Nhằm gây thiếu máu nuôi dưỡng, búi trĩ sẽ hoại tử và rụng đi

- Các phương pháp khác: Đốt điện, chiếu tia, phương pháp lạnh [15]

- Khối lượng viên: 550 mg

- Quy cách đóng gói: Viên nang màu đỏ sậm, đóng gói vỉ 10 viên, hộp 6 vỉ

- Số ĐK: 289/2011/ YT – CNTC

- Công năng: Bổ khí, chỉ huyết, nhuận tràng

- Chủ trị: Hỗ trợ điều trị bệnh trĩ Thích hợp cho người bị trĩ, sa búi trĩ, đau rát hậu môn do trĩ, táo bón

1.2.2 Tóm tăt thông tin các vị thuốc trong chế phẩm

1.2.2.1.Diếp cá(Ngư tinh thảo)

Vị thuốc là bộ phận trên mặt đất đã phơi hay sấy khô của cây Diếp cá (Houttuynia

cordata Thunb.), họ Lá giấp (Saururaceae)[10], [17], [30]

a) Phân bố

Lục địạ châu Á, từ Nhật Bản, Trung Quốc, Thái Lan, đến Việt Nam¸Lào và các

1/40có tác dụng ức chế mạnh nhiều chủng vi khuẩn nhưStreptococcus aureus,

Pseudomonas aeruginosa, E.coli, Staphylococcus aureus [17], [19],[29], [30],

[33], [34]

- Tác dụng chống viêm: Dịch chiết cloroform, dịch chiết nước, dịch chiết cồn, dịch chiết BuOH của diếp cá đều có tác dụng chống viêm trên chuột cống được gây viêm bằng Xylen Dịch chiết nước cho tác dụng tốt hơn dịch chiết cồn, dịch chiết dược liệu tươi tốt hơn dịch chiết dược liệu khô.Thử nghiệm trên chuột lang cho thấy,quercitrin phân lập từ diếp cá ở mức liều50, 100, và 200 mg/kg đường uống có tác dụng ức chế phù trên chân chuột được gây phù bởi carrageenin, dextran,

- Lợi tiểu do hoạt chất quercitrin: Dung dịch flavonoid toàn phần nồng độ 1mg/ml

ức chế hoạt tính men polyphenoloxydase huyết thanh người bình thường mức

13.5%, nồng độ 5mg/ml ức chế 50% hoạt tính men này[9], [17], [19], [28], [29]

trắng, có tác dụng ức chế vận động tự giác, kéo dài thời gian gây ngủ của thuốc ngủ barbiturat, ức chế co giật do srtychnin Tiêm tĩnh mạch mèo làm biến đổi về điện

- Tác dụng chống đái tháo đường: Dịch chiết diếp cá có tác dụng chống đái tháo

đường trong thử nghiệm trên chuột đái tháo đường gây ra bởi Streptozotocin [45]

- Tác dụng làm bền thành mạch do rutin, quercitrin đã được chứng minh[17]

- Dẫn chất của dioxyflavonon (3-4 dioxyflavonol) có tính chất của rutin: Tăng sức chịu đựng của vi ti huyết quản làm cho huyết quản khó đứt vỡ (Nhật chí dược –

1951) [13]

lập[19]

Thí nghiệm về tác dụng của nọc rắn hổ mang gây vỡ dưỡng bào và giải phóng

g) Liều dùng

Ngày dùng 6 – 12g [6] [13]

1.2.2.2 Trắc bách diệp

Vị thuốc là cành và lá đã phơi hay sấy khô của cây Trắc bá (Platycladus orientalis

(L.) Franco), họ Hoàng đàn (Cupressaceae)[6], [10], [13], [20]

+ Flavonoid: quercetin, myricetin,hinokiflavon, amentoflavon [6], [20]

- Phần sáp sau khi xà phòng hóa chứa 81% acid hữu cơ, chủ yếu gồm các acid juniperic, acid sabinic và 17% hexadecane-1,16- diol Các acid hữu cơ ở dạng estolide [6], [20]

c) Tác dụng dược lý

- Cầm máu: Thí nghiệm in vivo trên chó và thỏ thấy nước sắc trắc bách diệp có tác dụng giống như vitamin K: Làm giảm thời gian Quick, tức làm tăng tỷ lệ prothrombin trong máu sau khi đã dùng thuốc chống đông máu Trong thử nghiệm

lâm sàng một bài thuốc có chứa trắc bách diệp ở 66 bênh nhân trĩ chảy máu, có 92.4% bênh nhân cầm máuhoàn toàn, 4.6% giảm chảy máu [13], [20], [29]

- Ức chế in vitro một số chủng vi khuẩn, siêu vi khuẩn[20]

- Tác dụng trên thành mạch máu cô lập (phương pháp Kravkov): Tiến hành thí nghiệm trên thỏ chừng 2kg Dùng dung dịch 100% trắc bách diệp sao vàng đen, pha loãng với nước Ringer để cho chảy qua tai thỏ Nồng độ 0.2%, 0.5%, 0.8%, 1% đều

có tác dụng co mạch Nồng độ 5% - 10% có tác dụng giãn mạch[13], [20]

- Tác dụng cải thiện sự suy giảm của qúa trình thu nhận của trí nhớ trên chuột nhắt trắng liều 250 và 500 mg/kg/ngày [20]

- Ức chế mạnh sự gắn của các yếu tố hoạt hóa tiểu cầu vào tiểu cầu thỏ [20]

- Tác dụng trên tử cung: Trên tử cung cô lập thỏ thấy nhịp độ co bóp của tử cung mau hơn, biên độ rất cao so với bình thường Tác dụng rõ rệt nhất ở mức liều 1% Với nồng độ 5%, trương lực co bóp mạnh nhất[13]

- Độc tính: Đã thử nghiệm nước sắc trắc bách diệp sao vàng đen trên thỏ, khỉ và chuột lang, thấy: Với thỏ liều 100g/kg một lần, thỏ không chết sau 4 ngày theo dõi Với liều 30g/kg không làm chết, sau nửa tháng theo dõi (dung dịch 200%) Với chuột lang, liều 64g/kg (dung dịch 400%) không thấy chết[13]

1.2.2.3 Thăng ma

Vị thuốc là thân rễ đã phơi hay sấy khô của cây Đại tam diệp Thăng ma (Cimicifuga

heracleifolia Kom.), Hưng an Thăng ma (Cimicifuga dahurica (Turcz) Maxim.),

hoặc Thăng ma (Cimicifuga foetida L.), họ Hoàng liên (Ranunculaceae)[10]

a) Phân bố

Vị thuốc được nhập khẩu từ Trung Quốc Các vị thăng ma thường gặp là:

heracleifolia Komar), họ Mao lương (Ranunculaceae) [13], [20]

D Các phenolic glycoside: isocimifugamid, cimidahurin và cimidahurinin [20], [30]

- Các hợp chất furochromon như: visamminol, visnagin, norvisnagin[20], [30]

- Tác dụng trên gan: 3-O-β-D-xylopyranoid có tác dụng dự phòng tổn thương gan[20]

- Độ độc: Chuột TTM ximitin liều 100mg không thấy trúng độc Người uống quá liều thấy đầu choáng mắt hoa, mạch và hơi thở giảm, kích thích dạ dày, nôn mửa, nặng có thể gây choáng váng, nhức đầu, suy nhược, phát cuồng nhẹ[13]

Vị thuốc là nụ hoa đã phơi hay sấy nhẹ đến khô của cây Hoè (Styphnolobium

japonicum (L.) Schott, Syn Sophora japonica L.), họ Đậu (Fabaceae) [3], [10],

c) Tác dụng dược lý

- Tăng cường sức đề kháng, giảm tính thấm của mao mạch, hồi phục tính đàn hồi của mao mạch đã tổn thương do tác dụng của rutin và quercetin.Trên thỏ thí nghiệm, rutin TTM liều 1 mg/kg làm chậm sự khuếch tán của các chất màu (xanh

trypan, xanh evans ) vào tổ chức dưới da khi chúng được TTM [2], [13], [19],[29]

- Tác dụng chống viêm: Thí nghiệm trên chuột cống trắng cho thấy, rutin và quercetin có tác dụng ức chế phù chân chuột do albumin, histamin, serotonin, và sưng khớp khuỷu do men hyaluronidase Trên thỏ được gây mẫn cảm, rutin TTM giúp phòng ngừa viêm da dị ứng và hiện tượng Arthus Trên chó đã gây viêm tắc

tĩnh mạch, rutin có tác dụng thúc đẩy quá trình hồi phục bệnh[19], [30]

- Tác dụng bảo vệ cơ thể chống chiếu xạ: Chuột nhắt trắng tiêm dưới da rutin liều

2 mg/kg có tác dụng giảm tỉ lệ tử vong khi bị chiếu xạ[19]

- Tác dụng hạ huyết áp: Dịch chiết nụ hòe hoa TTM trên chó đã gây mê có tác dụng hạ huyết áp rõ rệt Trên chuột cống trắng cao huyết áp di truyền, rutin TTM

liều 1 mg/kg có tác dụng hạ huyết áp [13], [19], [29]

- Tác dụng hạ cholesterol máu: Quercetin tiêm dưới da liều 10mg/kg cho chuột cống trắng đã được gây cholesterol máu tăng caobằng cách trộn vào thức ăn hằng ngày cholesterol 30mg/kg và 6-methylthiouracil 90 mg/kg giúp hạ cholesterol máu, đồng thời có tác dụng điều trị và phòng ngừa bệnh xơ vữa động mạch thực nghiệm

thời gian xuất hiện rối loạn nhịp tim, hạ thấp hàm lượng MDA trong tổ chức

g) Liều dùng

Ngày dùng 6 – 12g, có khi đến 20g[10], [12],[19], [30]

1.2.2.5 Hoàng kỳ

Vị thuốc là rễ phơi hay sấy khô của cây hoàng kỳ Mông Cổ (Astragalus

membranaceus (Fisch.) Bge var mongholicus (Bge.) Hsiao, hoặc cây hoàng kỳ

Mạc Giáp (Astragalus membranaceus (Fisch.) Bge.), họ Đậu (Fabaceae) [3], [10],

isoastragalosid I, isoastragalosid II và 2 saponin kiểu olean: astragalosid VIII,

soyasaponin I[6], [12], [19], [21], [30]

- Cholin, betain, nhiều loại acid amin, calycosin[6], [19], [21]

- Trong hoàng kỳ còn có selenium [13]

c) Tác dụng dược lý

- Tác dụng tăng cường miễn dịch: Hoàng kỳ có tác dụng hiệp đồng với interferon,

làm tăng khả năng đáp ứng của interferon đối với nhiễm virus, tăng khả năng thực

bào, tăng kháng thể

+ Thử nghiệm in vitro: Polysaccharid nồng độ 10 mg/ml chiết từ hoàng kỳ làm

tăng khả năng thực bào của các đại thực bào và bạch cầu đa nhân Tách tế bào

đơn nhân từ bệnh nhân ung thư ủ với polysaccharid hoàng kỳ sẽ làm tăng hoạt

tính miễn dịch, điều chỉnh lại chức năng tế bào T đã bị suy giảm

+ Thử nghiệm in vivo: TTM polysaccharid hoàng kỳ khắc phục được sự ức chế

miễn dịch do cyclophosphamid ở chuột cống trắng Nước sắc hoàng kỳ, cho

chuột cống trắng uống hằng ngày hoặc cách ngày trong 1 - 2 tuần làm tăng chức

năng thực bào của hệ lưới nội mô

+ Nghiên cứu lâm sàng: Cao nước nóng hoàng kỳ, cho người uống liều

15.6g/ người/ ngày trong 20 ngày làm tăng có ý nghĩa IgM, IgE, cAMP[6], [12],

[19], [21], [30]

- Tác dụng trên tim: Cao cồn hoàng kì làm tăng tính co bóp và biên độ co bóp của

tim ếch cô lập Saponin hoàng kỳ làm tăng sức co cơ tim cô lập của chuột cống

trắng Trên tế bào cơ tim, hoàng kỳ làm giảm điện thế nghỉ và tăng sức co Trên

bệnh nhân bị đau thắt ngực, dùng hoàng kỳ có đối chiếu với lidocain và mexiletin

làm giảm VLP khoảng 10%[19]

- Tác dụng giãn mạch hạ huyết áp: TTM dịch chiết hoàng kì cho chó, mèo đã gây

mê hoặc thỏ không gây mê thấy giãn mạch và hạ huyết áp kéo dài Hoàng kỳ còn có

tác dụng bảo vệ mao mạch, chống giãn, vỡ do chiếu xạ tia X [19], [30]

- Tác dụng lợi niệu: Nước sắc 0.5g/kg TTM chuột cống có tác dụng lợi niệu rõ rệt

Liều 0.2g/kg cũng có tác dụng lợi niệu Chó uống hoàng kỳ liều 0.5 – 4g/ kg, gây

lợi niệu Thí nghiệm trên thỏ cũng cho tác dụng tương tự Nếu cho uống kéo dài thì

những ngày sau hiệu quả không rõ rệt [13], [19]

- Tác dụng trên gan: Hoàng kỳ làm tăng sinh tổng hợp ADN, tăng tái sinh gan ở chuột nhắt trắng đã cắt một phần gan Hoàng kỳ có tác dụng bảo vệ gan, ngăn ngừa

sự giảm hàm lượng glycogen ở gan, làm tăng hàm lượng protein và albumin toàn phần trong huyết thanh trên chuột nhắt trắng gây tổn thương gan bằng carbon

tetraclorid [19]

- Tác dụng chống viêm: Astramembrannin I chiết từ hoàng kỳ, TTM liều 0.5 mg/kg hoặc uống liều 50 mg/kg ức chế sự tăng tính thấm mạch ở chuột cống trắng

Thuốccòn có tác dụng ức chế phù do carragenin ở chuột cống trắng[13], [19]

- Tác dụng trên hệ sinh dục: Hoàng kỳ có tác dụng kéo dài thời kỳ động dục của chuột bạch, gây hưng phấn co bóp tử cung cô lập ở chuột cống có thai, nhưng lại ức

chế sự co bóp của ruột thỏ[13],[19]

- Tác dụng ức chế aldose reductase [19], [29]

- Tác dụng kháng khuẩn: nước sắc hoàng kỳ 100% có tác dụng kháng các chủng vi

khuẩn lỵ Shigella, tụ cầu vàng, trực khuẩn mủ xanh, thương hàn,liên cầu khuẩn

dung huyết, phế cầu[6], [13],[19], [29]

- Độc tính: Hoàng kỳ có độc tính thấp Cho chuột nhắt trắng uống liều 100g/kg, là liều gấp 500 lần liều thường dùng cho người, không thấy có chuột chết, không có

biểu hiện tác dụng phụ có hại [19]

- Được dùng sống để chữa đái tháo đường, đái đục, đái buốt, phù thũng, viêm thận mạn, albumin niệu, lở loét, phong thấp, đau xương [6], [12], [19]

- Tẩm mật chữa suy nhược lâu ngày, ra nhiều mồ hôi[6], [19]

1.2.2.6 Vừng đen

Vị thuốc là hạt phơi khô của cây vừng đen (Sesamum indicum L.) thuộc họ Vừng

(Pedaliaceae) [14]

Trồng ở vùng nhiệt đới châu Á, tại các tỉnh phía nam Trung Quốc, Ấn Độ,

b) Thành phần hóa học

- Dầu vừng: 40-55%, màu vàng, gồm acid oleic, acid linoleic, acid myristic, acid palmatic, acid stearic, acid arachidic, acid haxexadeconoic, sesamin sesamol Trong dầu vừng có chứa chất sesamin 0.25- 1% và sesamol khoảng 0.1%[6], [13], [20], [31]

- Protein: 20- 22%, gồm α-globulin và β-globulin [6], [13], [20]

- Carbohydrat: glucose, sucrose, galactose, planteose, raffinose, pentosan, tinh bột [6], [20], [31]

- Các lignan glycoside: matairesinol [6], [20]

- Các hợp chất triterpen: 28-oic acid, 3β-(trans-p-coumaroyloxy)-2α-23-dihydroxyl-urs-12-en-28-oic acid[6], [20], [31]

3β-(cis-p-coumaroyloxy)-2α-23-dihydroxyl-urs-12-en Thành phần vô cơ: Cu, Zn, Fe, Mn, Ca, Mg, Se, Mo [6], [20]

c) Tác dụng dược lý

- Chống tăng huyết áp do tác dụng của sesamin trong mô hình gây tăng huyết áp

do bọc ép thận và chống sự giãn nở to của tim[20]

- Tác dụng kháng khuẩn: Dầu vừng có tác dụng ức chế nhiều vi khuẩn như

Streptococcus mutans,Lactobacilli acidophilus,Proteus vulgaris, Bacillus subtillis

MIC khoảng 350- 500µl/ml Riêng với Salmonella typhi, dầu vừng cho tác dụng

kháng khuẩn tốt nhất, MIC là 10µl/ml [38], [29]

- Tác dụng ức chế mạnh sự peroxid hóa lipid do sesaminol [20]

- Tác dụng hạ đường huyết trên chuột cống trắng[20], [37]

- Tác dụng chống ung thư do Glycosid của vừng đã được chứng minh [20]

- Tác dụng làm giảm kích thích, chống viêm khi bôi lên niêm mạch[20]

- Dầu vừng có tác dụng nhuận tràng[13], [20],[29]

- Bổ sung dinh dưỡng cho cơ thể [20]

- Giảm cholesterol máu, phòng trị xơ vữa động mạch [20], [25]

- Tác dụng chống ung thư: Thử nghiệm in vivo cho thấy dịch chiết cồn của vừng đen nồng độ 1000µg/ml có thểgây độc các tế bào ung thư dòng He-2, AMN-3sau 72 giờ[39]

- Táo bón, đặc biệt là táo bón sau sinh [14], [21]

- Thiếu máu, chức năng can thận yếu, huyết hư, tóc bạc sớm [13], [14]

- Xuất huyết do giảm tiểu cầu[14]

- Phụ nữ sau đẻ ít sữa hoặc không có sữa[14], [20]

- Tăng cường dinh dưỡng, đầu váng mắt hoa, trị bỏng, rắn cắn, loét, nứt nẻ da, viêm thận, bàng quang [6], [13], [20]

g) Liều dùng

Ngày dùng 12- 60 g [14]

CHƯƠNG II ĐỐI TƯỢNG VÀPHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 Nguyên vật liệu, phương tiện

2.1.1 Nguyên liệu

- Chế phẩm Tọa An (Tham khảo hình ảnh ở phụ lục 6)

- Các vị thuốc: Là nguyên liệu để sản xuất chế phẩm Tọa An

Đơn vị cung cấp: Công ty TNHH Giai Cảnh

Địa chỉ: Số 295 Nguyễn Trãi, phường 7, quận 5, Thành phố Hồ Chí Minh

2.1.2 Phương tiện

2.1.2.1 Thiết bị

- Kính hiển vi LABOMED,Labo America Inc (USA)

- Hệ thống HPTLC CAMAG, Serial No 181045 (Switzerland)

- Hệ thống HPLC SHIMADZU LC Solution detector DAD,Serial No L20435002331 (Japan)

- Đèn tử ngoại Vilber Lourmat, Serial No.12 101537 (France)

- Đèn tử ngoại CAMAG, Serial No 1812 (Switzerland)

- Máy li tâm Universal, Gemmy Industrial Corp, Serial No 717902 (Taiwan)

- Bếp Wisd Therm, DAIHAN Scientific Co, Ltd., Serial No 0406452128002 (Korea)

- Cân phân tích Sartorius BP 221S, Serial No 23808521 (Germany)

- Cân kĩ thuật Precisa – XB320C, Precissa Instruments Ltd.(Switzerland)

- Cân điện tử Shimadzu (Japan)

- Cân xác định độ ẩm Pressica, Precissa Instruments Ltd.(Switzerland)

- Máy cất quay thu hồi dung môi Buchi Rotavapor R- 200, BUCHI Labortechnik

AG (Switzerland)

- Bếp đun cách thủy BATH (China)

- Bộ dụng cụ Soxhlet

- Tủ sấy Memmert, Shellab

- Máy đo độ phù chân chuột 7140 Plethysmometer (UGO BASILE)

Và các thiết bị, dụng cụ khác

2.1.2.2 Hóa chất

- Bản mỏng Silicagel60 GF 254 Merck (Germany)

- Dung môi phân tích, dung môi HPTLC, dung môi HPLC Merck (Germany)

- Chất đối chiếu: Rutin,quercetin, astragalosid IV, indomethacin do Viện kiểm nghiệm cung cấp.

2.1.2.3 Động vật thí nghiệm

Chuột cống trắng khỏe mạnh chủng Wistar, cả hai giống, trọng lượng 140 – 160g,

do Học viện Quân y cung cấp

Chuột sau khi mua về, được nuôi ổn định trong điều kiện phòng thí nghiệm Bộ môn Dược lý, Trường ĐH Dược Hà Nội 5 ngày trước khi thực hiện nghiên cứu, được nuôi dưỡng bằng thức ăn tiêu chuẩn do Viện Vệ sinh dịch tễ TW cung cấp, uống nước tự do

2.2 Nội dung nghiên cứu

2.2.1 Xác định tính đúng của các dược liệu

- Mô tả hình thái dược liệu

- Mô tả đặc điểm bột

- Định tính bằng phản ứng hóa học

2.2.2 Nghiên cứu thành phần hóa học chế phẩm Tọa An

- Định tính bằng phản ứng hóa học và SKLM

- Định lượng chất chiết được phân đoạn EtOAc

- Định lượng rutin, quercetin trong chế phẩm bằng HPTLC

2.2.3 Thử tác dụng dược lý

- Thử tác dụng cầm máu

- Thử tác dụng chống viêm

2.3 Phương pháp nghiên cứu

2.3.1 Xác định tính đúng của các dược liệu

- Mô tả hình thái dược liệu: Quan sát, mô tả đặc điểm bên ngoài, mùi, vị dược liệu, đối chiếu với tiêu chuẩn DĐVN IV

- Soi bột: Xác định đặc điểm bột , đối chiếu với tiêu chuẩn DĐVN IV

- Kiểm tra sự có mặt của dược liệu trong chế phẩm bằng SKLM

 Định lượng cắn phân đoạn EtOAc bằng phương pháp cân

Lấy chính xác một lượng bột thuốc Loại tạp và chiết kiệt với EtOAc Gộp dịch chiết và cô cách thủy tới cắn Sấy khô cắn ở nhiệt độ thấp tới khối lượng không đổi, cân cắn và tính kết quả hàm lượng cắn theo công thức (1)

Trong đó: %H: hàm lượng cắn chiết được phân đoạn EtOAc

mcắn: khối lượng chất chiết được

mb.th: khối lượng bột thuốc

Tiến hành song song 3 mẫu để lấy kết qủa trung bình

 Định lượng rutin, quercetin trong chế phẩm Tọa An bằng HPLC

Tiến hành theo chương trình HPLC định lượng các flavonol trong viên Gingko biloba [27]

Hàm lượng rutin, quercitin tính trên viên tính theo công thức (2):

Trong đó:V là hàm lượng rutin, quercetin trong viên (kl/viên)

mc, mt lần lượt là khối lượng cân của chất đối chiếu và chất thử

St, Sclần lượt là diện tích peak của mẫu thử và mẫu đối chiếu

h là hàm lượng chất đối chiếu

f là tỷ lệ hệ số pha loãng của mẫu đối chiếu và mẫu thử

mtbv : khối lượng trung bình viên thuốc

Hàm lượng phần trăm theo khối lượng rutin, quercetin(X%) trong viên tính theo công thức (3):

2.3.3 Thử tác dụng dược lý

2.3.3.1 Thử tác dụng cầm máu

Chuột nhắt trắng được chia thành 3 lô[3], [22]:

- Lô chứng: uống nước muối sinh lý

- Lô TA1: uống Toạ An mức liều 1.25g/kg chuột

- Lô TA 2: uống Toạ An mức liều 2.50 g/kg chuột

Cho chuột uống nước muối sinh lý hoặc thuốc nghiên cứu trong 5 ngày liên tục.Ngày thứ 5, sau khi uống thuốc 1 giờ, gây mê cho chuột bằng tiêm màng bụng thiopental liều 30mg/kg chuột Khi chuột đã mê, cắt đuôi chuột 2mm tính từ chóp đuôi, nhúng ngay vào nước ấm 37oC, xác định thời gian máu chảy bằng đồng hồ bấm giây

Thông số nghiên cứu:

- Thời gian chảy máu: được tính từ khi máu bắt đầu chảy cho tới khi máu ngừng chảy.

- Mức độ rút ngắn thời gian chảy máu của lô thử so với lô chứng theo công thức (4)

X (%) = × 100 (4) Trong đó: X (%): mức độ rút ngắn thời gian chảy máu của lô thử so với lô chứng

Tc: thời gian chảy máu trung bình của lô chứng

Tt: thời gian chảy máu trung bình của lô thử

2.3.3.2 Thử tác dụng chống viêm cấp

Để đánh giá tác dụng chống viêm cấp của viên nang Toạ an, chúng tôi đã sử dụng mô hình gây phù bằng carrageenan theo Winter và cộng sự[3], [12], [22], [46], [47]

Chuột cống trắng sau khi nuôi ổn định 3 ngày trong điều kiện phòng thí

nghiệm, được chia ngẫu nhiên thành 4 lô, thiết kế như sau:

- Lô chứng: uống nước muối sinh lý 1ml/100g chuột

- Lô indomethacin: uống indomethacin liều10mg/kg chuột

- Lô TA 1: uống cốm ToạAn 1.25g/kg chuột

- Lô TA 2: uống cốm Toạ An 2.5g/kg chuột

Ở tất cả các lô nghiên cứu, chuột được cho uống nước muối sinh lý, thuốc đối chiếu hoặc chế phẩm nghiên cứu với cùng thể tích 1 ml/100g chuột liên tục trong 5 ngày Ngày thứ năm, sau khi chuột uống nước muối sinh lý, thuốc đối chiếu hoặc chế phẩm nghiên cứu, chuột được tiêm 0,05ml carrageenan 1% trong nước muối sinh lý vào gan bàn chân sau phải Sử dụng máy đo độ phù Plethysmometer (UGO BASILE) để đo thể tích bàn chân sau phải của từng chuột tại thời điểm 1 giờ, 3 giờ,

5 giờ, 7 giờ sau khi gây viêm.Quy trình tiến hành thí nghiệm được mô tả ở hình 2.1

 Kĩ thuật đo độ phù bàn chân chuột

Dùng bút đánh dấu cố định mặt bên khớp gối chân sau phải của chuột Nhúng bàn chân sau phải vào dung dịch đo đến đúng vị trí đã đánh dấu, đọc kết quả hiển thị trên thiết bị đo Kĩ thuật đo được thực hiện bởi cùng một kĩ thuật viên và là phép đo

Vo, Vt: thể tích bàn chân chuột trước khi gây viêm và thời điểm t

t o o

V



+ Phần trăm ức chế phù của các lô thử so với lô chứng được tính theo công thức (6):

I (%) = × 100 (6)

Trong đó:I (%): phần trăm ức chế phù của lô thử so với lô chứng

ΔVc: độ phù chân chuột trung bình của lô chứng

ΔVt: độ phù chân chuột trung bình của lô thử

Hình 2.1 Qui trình thí nghiệm tác dụng chống viêm cấp trên mô hình gây phù

bàn chân chuột

2.2.3.3 Xử lý số liệu

Các số liệu thử nghiệm dược lý ( 2.2.3.1, 2.2.3.2) đượcbiểu diễn dưới dạng M±SE ( M: là giá trị trung bình, SE: sai số chuẩn) So sánh giá trị trung bình giữa các lô bằng one-way ANOVA, dùng hậu kiểm Dunnett test để so sánh giá trị trung bình của các lô thử so với lô chứng Phân tích thống kê bằng phần mềm SPSS 16.0

Sự khác biệt giữa các lô thử có ý nghĩa thống kê khi p< 0.05

CHƯƠNG III: THỰC NGHIỆM, KẾT QỦA, BÀN LUẬN

3.1 Thực nghiệm, kết q uả

3.1.1 Xác định tính đúng các dược liệu

3.1.1.1 Diếp cá

a) Đặc điểm hình thái

Thân hình trụ tròn hay dẹt, cong, dài 20 –

35cm, đường kính 2 – 3mm Mặt ngoài màu

vàng nâu nhạt, có vân dọc nhỏ và có mấu rõ

Chất giòn, dễ gãy Lá mọc so le, hình tim,

đầu lá nhọn, phiến lá gấp cuộn lại, nhàu nát,

cuống đính ở gốc ládài chừng

2 – 3cm, gốc cuống rộng thành bẹ mỏng

Mùi tanh cá Vị hơi chát, se(Hình 3.1)

Nhận xét: Phù hợp với mô tảdược

liệu diếp cá trong DĐVN IV [10]

Hình 3.1 Ảnh dược liệudiếp cá

b) Đặc điểm bột

Hình 3.2 Ảnh đặc điểm bột diếp cá

Bột màu lục vàng, vị hơi mặn, hơi cay, mùi tanh.Soi trên kính hiển vi thấy: Mảnh biểu bì trên và biểu bì dưới gồm tế bào hình nhiều cạnh thành hơi dày, mang

tế bào tiết (1,2) Biểu bì dưới có lỗ khí, tế bào tiết tròn, chứa tinh dầu màu vàng nhạt hay vàng nâu, bề mặt có vân, xung quanh có 5-6 tế bào xếp toả ra (2) Lỗ khí có 4-5

tế bào kèm nhỏ hơn (2).Lông che chở đa bào(6).Hạt tinh bột hình trứng, hình tròn hay hình chuông(3) Mảnh thân gồm tế bào hình chữ nhật thành mỏng và tế bào tiết(5) Mảnh mạch xoắn (4)(Hình 3.2)

Nhận xét: Phù hợp với mô tả bột diếp cá trong DĐVN IV [10]

Kết quả: Bột ướt có màu hồng (phản ứng dương tính)

- Lấy 1g bột dược liệu, thêm 10ml EtOH, đun hồi lưu trên cách thuỷ 10 phút, lọc

Lấy 2ml dịch lọc, thêm ít bột Magnesi và 3 giọt HCl, đun nóng trên cách thuỷ

Kết quả: Xuất hiện màu đỏ (phản ứng dương tính)

Nhận xét: Các hiện tượng phù hợp với mô tả trong DĐVN IV[10]

3.1.1.2 Trắc bách diệp

a)Đặc điểm hình thái

Dược liệu phân thành nhiều nhánh,

các cành nhỏ dẹt, phẳng Các lá hình

vẩy nhỏ, xếp đối chéo chữ thập, dính

sát vào cành, màu xanh lục thẫm

hoặc xanh lục hơi vàng Chất giòn,

dễ gãy Có mùi thơm nhẹ, vị đắng,

chát và hơi cay (Hình 3.3)

Hình 3.3 Ảnh dược liệu trắc bách diệp

Nhận xét: Phù hợp với mô tả dược liệu trắc bách diệp trong DĐVN IV [10]

b) Đặc điểm bột

Bột màu xanh lục hơi vàng Soi dưới kính hiển vi thấy: Các tế bào biểu bì trên của

lá hình chữ nhật, thành hơi dày lên (1,2).Tế bào biểu bì dưới hình gần vuông, có nhiều lỗ khí(4) Các tế bào mô mềm chứa các giọt dầu nhỏ (5) Nhiều bó sợi (3) (Hình 3.4)

Hình 3.4 Ảnh đặc điểm bột trắc bách diệp Nhận xét: Phù hợp với mô tả bột trắc bách diệp trong DĐVN IV [10]

3.1.1.3 Thăng ma

a) Đặc điểm hình thái

Vị thuốc là thân rễ, kích thước

không đều Mặt ngoài màu nâu

đen, thô Chất nhẹ, cứng, giòn

Mặt bẻ gãy không phẳng, có xơ,

màu trắng đục Mùi hắc nhẹ, vị

hơi đắng (Hình 3.5)

Nhận xét: Không phù hợp

với mô tả dược liệu thăng ma

trong DĐVN IV [10] Hình 3.5 Ảnh dược liệu thăng ma

b) Đặc điểm bột

Bột màu vàng nhạt Soi dưới kính hiển vi thấy: Khối tinh bột bị hồ hóa(1) Mảnh mạch (2,3) Hạt tinh bột hình đa giác, hình tròn, có rốn hạt, đứng riêng lẻ hay tụ lại thành đám (4,5) Sợi thành dày (6) ( Hình 3.6)

Hình 3.6 Ảnh đặc điểm bột thăng ma Nhận xét: Không phù hợp với mô tả bột thăng ma do có các khối tinh bột bị hồ hóa, tinh bột có rốn hạt [10]

c) Định tính

 Alcaloid [3]

Cân 5g dược liệu, cho vào bình nón dung tích 100ml Thêm 15ml dd H2SO4 1N Đun đến sôi, để nguội, lọc Kiềm hóa dịch lọc bằng dd NH3 6N đến pH= 8 - 9 Cho dịch lọc vào bình gạn Lắc, chiết với CHCl3 3 lần, mỗi lần 10ml Gộp các dịch chiết CHCl3, loại nước bằng Na2SO4 khan Lắc, chiết với H2SO4 1N 3 lần, mỗi lần 10ml Chia dịch chiết vào 3 ống nghiệm, mỗi ống 1ml

- Ống 1: Thêm 2 – 3 giọt thuốc thử Mayer

Kết quả: Không thấy tủa (phản ứng âm tính)

- Ống 2: Thêm 2 -3 giọt thuốc thử Bouchardat

Kết quả: Không thấy tủa(phản ứng âm tính)

- Ống 3: Thêm 2 -3 giọt thuốc thử Dragendorff