Góp phần nghiên cứu tác dụng dược lý của thuốc xổ microlax bk từ quả bồ kết ( fructus gleditschiae ) việt nam

ĐẶT • VẤN ĐỂ.Nghiên cứu các dạng thuốc dùng theo đường trực tràng ĐTT đã được con người chú ý từ lâu, nhưng mãi đến những năm 1930 do thấy được những ưu điểm và triển vọng của con đường

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI

<&• <໫é>

NGUYỄN ĐỨC TÀI

THUỐC XỔ MICROLAX BK TỪ QUẢ B ồ KÊT

(FRUCTUS GLEDITSCHIAE)

VIỆT NAM

( KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Dược s ĩ KHOÁ 1998 - 2003 )

Giáo viên hướng dẫn : DSCKI Nguyễn Duy Thiệp

Nơi thực hiện : - Bộ môn Hoá Sinh

V

Trường đại học Dược Hà Nội

Thời gian thực hiện : Tháng 3 - 5 / 2003

lờ l CẦM ƠN

r ĩâ i XÙI cdtùn th à n h q u ì lồ i eảttt ỚỈI tớ i :

DSCK1 Nguyễn Duy Thiệp

r Jif) mòn lt(ìú iỉttlt rJi'ttdfiti <ĩ)ại Jõạtí ^Oủổe 'Jôà Q(ỉ}ì • • • t •

PGS, TS Mai Tất Tố

r3 ô m òn rDtíỢe lự e CJnuhtq rí) ạ i 'dỗ ọ í' ^Dtỉẹe Tỉôà Q lộ i

Q llịĩù K Ị íM Ịtiỉíi rjlttiif (tã ln ìổ titị d ẫ n , QÌÚQL (Tổ tô i trtìtHỊ q u á fi'ìftỉ/ th iio

h iền lilitìá luận, nàụI.

$jồi sd*i eíiâtt thành eảtn đtt tớ i: PŨ S, TS l\ígu yên X uân Thõng

@hủ nhiêm r JỈỘ 'JôoA Sinh đủ giúp đõ ÚỈI itộtííị lìiêit lòi vất nhiều h'Otttj quá ft'itt/t tIt lie Itièn đỀ tài.

rĩêỉ 1 ‘ũtKị * ò t cUăn thành cún tín eáe eô* : Pham Thì Phương, Phạm “ Bích Du, Nguyên Thuý Hanh (Đã ợiúệt tài nít nhiều úề etí iẦ ú út ehut oà

hưởng, thẫn, ('ác Uĩf thuật tvtìtHỊ txiệe nghiên eứtí il'if ii khai ĩte tài.

^tìồtHị tíiòi nhăn difi í ấp Uèt fit áo Uhúá húe tồi x ú t /)«(/ tó Làng, hiêt (in tồi ờ tí ừ CJluh, @ ô qiáo cùng, túíín thê- eán bề , eỗtKỊ nhàn úi ỉn (‘hức cú a

theo đường trực tràng.

2.1 Các yếu tố sinh lý 3 2.2 Các yếu tố dược học 4

3.1 Các thuốc có nguồn gốc hoá dược 8 3.2 Các thuốc có nguồn gốc dược liệu 10 3.3 Cây Bồ Kết Việt Nam 12

2.1 Nghiên cứu chiết xuất Saponin từ quả Bồ Kết Việt Nam 16

2.2 Nghiên cứu xây dựng công thức, tiêu chuẩn kiểm nghiệm,

qui trình sản xuất và độ ổn định của chế phẩm Microlax.BK 21

2.2.3 Kiểm nghiệm chế phẩm Microlax.BK theo

2.3 Nghiên cứu tác dụng thụt tháo của Microlax.BK trên thỏ

thực nghiệm (in vivo và in vitro) 32

ĐẶT • VẤN ĐỂ.

Nghiên cứu các dạng thuốc dùng theo đường trực tràng (ĐTT) đã được con người chú ý từ lâu, nhưng mãi đến những năm 1930 do thấy được những ưu

điểm và triển vọng của con đường đưa thuốc này, ở các nước châu Âu, châu

Mỹ người ta đã chú ý nhiều hơn đến việc sử dụng các thuốc dùng theo ĐTT thay thế các dạng thuốc uống trong các trường hợp đường uống tỏ ra không phù hợp, đó là các trường hợp đường uống dễ gây nôn mửa, dược chất kích ứng mạnh hoặc dược chất bị phá huỷ bởi dịch vị dạ dày hay dược chất bị chuyển hoá nhanh ở gan

Cho đến nay ở các nước châu Âu, các dạng thuốc dùng qua ĐTT chiếm

khoảng 2 -3 % trong tổng số các thuốc đang được lưu hành trên thị trường và

xu thế ngày càng tăng Ở Mỹ dạng thuốc này cũng chiếm khoảng 1% các dạng thuốc lưu hành Tại Việt Nam, việc nghiên cứu và đưa vào sản xuất các dạng thuốc dùng qua ĐTT cũng còn ít được quan tâm Hầu hết các thuốc dùng qua ĐTT trong nước hiện nay đều phải nhập từ nước ngoài, chỉ tính riêng tại bệnh viện hữu nghị Việt - Đức thì dạng thuốc xổ Microlax được dùng thụt tháo cho bệnh nhân trước mổ, nội soi trực tràng, bí đại tiện, trung tiện, tắc ruột cũng lên tới gần 20 000 liều/năm

Xuất phát từ tình hình thực tiễn và nhu cầu cấp thiết nói trên chúng tôi triển khai thực hiện đề tài “ Góp phần nghiên cứu tác dụng dược lý của thuốc

xổ Microlax.BK từ quả Bồ Kết Việt Nam (BKVN)” với 3 mục tiêu sau :

1 Nghiên cứu chiết xuất Saponin tinh khiết từ quả BKVN

2 Nghiên cứu xây dựng công thức, tiêu chuẩn kiểm nghiệm, qui trình sản xuất và độ ổn định của chế phẩm Microlax.BK

3 Bước đầu nghiên cứu tác dụng của thuốc xổ Microlax.BK về khả năng thụt tháo trên thỏ thực nghiệm (in vivo và in vitro) Nhằm góp phần sớm đưachế phẩm vào sản xuất phục vụ cho sự nghiệp bảo vệ sức khoẻ nhân dân

PHẢN I : TONG QUAN.

I.Trực tràng - Một con đường đưa thuốc vào cơ thể.

Trực tràng là phần cuối cùng của đường tiêu hoá, có chiều dài từ 150 - 200mm, thành của trực tràng có hệ thống tĩnh mạch dày đặc được chia làm 3 vùng : tĩnh mạch trực tràng dưới, tĩnh mạch trực tràng giữa, tĩnh mạch trực tràng trên, bề mặt của trực tràng được cấu tạo bởi một lớp tế bào biểu mô phẳng, không có nhung mao, được bao phủ bởi một màng nhầy liên tục và chứa khoảng 3ml nước gọi là dịch tràng Vì không có nhung mao nên sự hấp thu dược chất qua niêm mạc xảy ra theo cơ chế khuy ếch tán thụ động

Nhiều công trình nghiên cứu về tác dụng của các dạng thuốc dùng theo ĐTT đã chứng minh rằng sau khi được giải phóng ra khỏi tá dược chuyển sang niêm dịch thì dược chất sẽ được hấp thu và tác động vào cơ thể theo những con đường sa u :

+ Con đường thứ hai:

mạch trực tràng giữa (2) qua tĩnh mạch chủ dưới (5) vào hệ tuần hoàn chung không phải qua gan

Theo tĩnh mạch trực tràng trên (3) vào tĩnh mạch cửa (4) qua gan trước khi vào hệ tuần hoàn chung

Hình í: Sơ đổ tĩnh mạch ỉuấn hoàn vùng

ỉrưr trànọ

2- Các yếu tô' ânh hưởng tới tác dụng của thuốc dùng theo đường trực tràng.

Sự phát huy tác dụng của thuốc dùng theo ĐTT là một quá trình hết sức phức tạp, phụ thuộc vào nhiều yếu tố, các yếu tố sinh lý liên quan tới cấu tạo Trực tràng và các yếu tố dược học liên quan đến cấu tạo, tính chất lý, hoá học của dược chất và tá dược

2.1- Các yếu tố sinh lý.

- Hệ tĩnh mạch trực tràng dày đặc với lưu lượng máu tuần hoàn khoảng 30ml/phút là rất có ý nghĩa với tác dụng của thuốc dùng theo ĐTT Đặc biệt là tĩnh mạch trực tràng dưới và tĩnh mạch trực tràng giữa đi thẳng vào hệ tuần hoàn chung, không phải qua gan đã làm cho ĐTT ưu điểm hơn hẳn đường uống , vì theo đường này có khoảng 50-70% dược chất được đi vào hệ tuần hoàn chung không bị chuyển hoá ở gan Hơn nữa nếu cố định được vị trí của thuốc ở vùng tĩnh mạch trực tràng dưới thì có thể tránh được đường qua gan điều đó sẽ làm tăng sinh khả dụng của thuốc

- Dịch tràng:

Lượng dịch tràng có khoảng 3ml đóng vai trò quan trọng đối với tác dụng của thuốc đặt theo ĐTT, vì chỉ dưới dạng hoà tan trong niêm dịch, dược chất mới được hấp thụ qua niêm mạc, 3ml là lượng nước tối thiểu cần cho sự hoà tan dược chất bởi lẽ đó, trường hợp có thể bị mất nước do ỉa chảy, táo bón đều làm giảm tác dụng của thuốc, trường hợp trực tràng được thụt, rửa trước khi đặt thuốc, sự hấp thu dược chất được cải thiện đáng kể.

- PH của dịch tràng:

Dịch tràng có PH=7,4 và không có khả năng đệm, vì vậy những dược chất được giải phóng từ thuốc đặt hoà tan trong niêm dịch sẽ quyết định PH của dịch tràng, Schanker đã chứng minh rằng: Những dược chất có tính acid hoặc bazơ yếu, ít phân ly thì được hấp thu nhanh hơn qua niêm mạc trực tràng so với các dược chất có tính acid hoặc bazơ mạnh Trên thực tế cũng thấy rằng trực tràng cũng dành ưu tiên cho sự thấm và hấp thu các phân tử dược chất không phân ly Người ta đã sử dụng các muối đệm yếu để tạo cho dịch tràng

có PH từ 6,8 - 7,4 và các hệ đệm mạnh hơn để đưa PH của dịch tràng đến một giá trị thích hợp mà ở đó tỷ lệ không phân ly của dược chất là lớn nhất

- Lớp chất nhầy:

Bề mặt trực tràng được phủ bởi một lớp chất nhầy liên tục vì thế để hấp thu qua niêm mạc trực tràng, các phân tử dược chất trước tiên phải rời khỏi tá dược đã chảy lỏng, hoà tan trong niêm dịch khuyếch tán qua màng nhầy rồi thấm và hấp thu qua niêm mạc theo một quá trình khuy ếch tán thụ động Lớp chất nhầy phủ trên bề mặt trực tràng sẽ ngăn cản và làm chậm quá trình khuyếch tán dược chất đến nơi hấp thu, dẫn đến làm giảm tốc độ và mức độ hấp thu dược chất từ dạng thuốc theo ĐTT Một số công trình nghiên cứu thực nghiệm cho thấy, nếu làm sạch màng nhầy hoặc làm giảm sức căng bề mặt của nó thì sự hấp thu dược chất qua đó được tăng lên

2.2 Các yếu tố dược học

2.2.1- Ảnh hưởng của dược chất:

- Độ tan:

Khả năng hoà tan của dược chất trong niêm dịch ảnh hưởng nhiều đến tốc

độ giải phóng hoạt chất khỏi tá dược thuốc đặt theo ĐTT và sự hấp thu quaniêm mạc trực tràng, vì như đã nói ở trên để hấp thu qua niêm mạc trực tràng,dược chất phải được giải phóng khỏi tá dược, hoà tan trong niêm dịch, có sự tiếp xúc tối đa với bề mặt nơi hấp thu

- Dạng hoá học khác nhau của dược chất:

Các dạng hoá học khác nhau của cùng một dược chất cũng được hấp thu ở các mức độ khác nhau qua niêm mạc trực tràng

VD: Hydrocortison được hấp thu khoảng 30%

Acetylhydrocortison được hấp thu khoảng 60%

- Mức độ ion hoá:

Dược chất sau khi được giải phóng ra khỏi tá dược của thuốc đặt qua ĐTT

sẽ tiếp xúc với bề mặt của nơi hấp thu, tốc độ thấm và hấp thu qua niêm mạc còn phụ thuộc vào mức độ ion hoá của dược chất đó Nhiều công trình nghiên cứu thực nghiệm cũng đã chứng minh rằng: Những dược chất ở trạng thái ít phân ly vừa có khả năng hoà tan trong nước, vừa có khả năng tan được trong lipid sẽ được hấp thu nhanh qua niêm mạc trực tràng

- Kích thước tiểu phân phân tán:

Các dược chất ít tan trong nước phân tán trong tá dược dưới dạng bột mịn thì tốc độ và mức độ hấp thu phụ thuộc vào kích thước tiểu phân phân tán trong tá dược của dược chất, như đã biết sự hấp thu dược chất qua niêm mạc trực tràng xảy ra theo cơ chế khuyếch tán thụ động, chỉ dưới dạng hoà tan trong niêm dịch các dược chất mới được thấm qua niêm mạc do đó kích thước của các tiểu phân phân tán lớn thì quá trình hoà tan sẽ chậm, đặc biệt đối với các dược chất ít tan trong nước và vì thế kích thước tiểu phân lớn sẽ làm chậm quá trình hoà tan dẫn đến giảm tốc độ và mức độ hấp thu qua niêm mạc trực tràng

Nhiều công trình nghiên cứu cho thấy: Tốc độ và mức độ hấp thu dược chất qua niêm mạc trực tràng tỉ lệ nghịch với kích thước tiểu phân phân tán trong tá dược.

2.2.2 - Ảnh hưởng của tá dược

Những tá dược khác nhau thì ảnh hưởng khác nhau đến sự hấp thu dược chất qua niêm mạc trực tràng Heiman và cộng sự cho rằng sự hấp thu phenobarbitan natri từ tá dược béo có nhiệt độ nóng chảy thấp xảy ra với tốc

độ nhanh hơn nhiều so với các tá dược béo có nhiệt độ nóng chảy cao vì rằng

sự hấp thu chỉ xảy ra khi thuốc đã chảy lỏng hoàn toàn

Nhiệt độ trung bình của cơ thể là 37°c, tuy nhiên nhiệt độ của cơ thể người

các tá dược béo chảy ở thân nhiệt để giải phóng hoạt chất người ta khuyên nên

sử dụng thành phần tá dược có nhiệt độ nóng chảy nhỏ hơn hoặc bằng 36°c -V ề ảnh hưởng của tá dược đến sự giải phóng hoạt chất nhiều tác giả cho rằng:

+ Các dược chất ít tan trong nước và không tan trong dầu thì được giải phóng tốt hơn từ các tá dược thân nước

+ Các dược chất dễ tan trong nước thì được giải phóng tốt hơn từ các tá dược thân dầu

+ Đối với các tá dược nhũ tương thì mức độ giải phóng hoạt chất dễ tan trong nước tăng lên cùng với sự tăng của lượng nước có trong thành phần của tá dược và thời gian giải phóng hoạt chất cũng bị kéo dài nếu cho thêm các polymer thân nước vào thành phần tá dược nhũ tương

- Chất diện h o ạt:

Chất diện hoạt có trong thành phần tá dược ảnh hưởng đáng kể tới sự giải phóng và hấp thu dược chất từ các dạng thuốc đặt theo ĐTT, để tăng mức độ giải phóng và hấp thu dược chất người ta sử dụng các chất diện hoạt không ion hoá như : tween, span, misj, brij vì những chất diện hoạt này chịu được

nhiệt độ, bền vững về mặt hoá học và không độc Theo Reigelman chất diện hoạt làm tăng mức độ giải phóng và hấp thu dược chất theo các cơ chế sau :+ Tăng khả năng hoà tan của các dược chất ít tan.

+ Thay đổi hệ số phân bố tá dược trong nước của các dược chất

+ Làm giảm sức căng bề mặt và làm sạch màng nhầy bao phủ niêm mạc trực tràng và như vậy tăng diện tích hấp thu dược chất

+ Tăng khả năng thấm của niêm mạc

Về tỷ lệ của chất diện hoạt: thường được sử dụng với một giới hạn rất rộng,

có khi tới 30% so với tá dược, những công trình nghiên cứu của nhiều tác giả cho thấy nồng độ 5% là thuận lợi nhất đối với sự giải phóng và hấp thu dược chất từ các dạng thuốc đặt theo ĐTT

- Những ưu điểm của ĐTT:

+ Có khoảng 50 - 70% dược chất được hấp thu vào hệ tuần hoàn chung không phải qua gan, chưa bị chuyển hoá ở gan trước khi gây tác dụng

+ ĐTT thích hợp với các dược chất có tính kích ứng mạnh đường tiêu hoá, dược chất có mùi khó chịu, dễ gây nôn mửa khi uống, các dược chất dễ bị phân huỷ bởi dịch vị của dạ dày, các dược chất bị chuyển hoá nhanh khi qua gan

3.Thuôc nhuận tếy:

Thuốc nhuận tẩy bao gồm các hợp chất có tác dụng trên ruột non hay ruột già do đó gây đại tiện nhiều và phân lỏng

Dựa vào nguồn gốc và cơ chế tác dụng người ta chia thuốc nhuận tẩy thành

2 nhóm:

- Thuốc tẩy hữu cơ

Thuốc tẩy hữu cơ bao gồm các dầu thực vật và khoáng vật (dầu thầu dầu, dầu parafin .) các anthraglycosid (rễ cây đại hoàng, lá lô hội

Theo cơ chế tác dụng thuốc tẩy hữu cơ có 2 loại:

+ Loại làm trơn và mềm phân giúp cho việc bài tiết dễ dàng như : dầu parafin, dầu oliu .

+ Loại kích thích nhu động ruột như dầu thầu dầu:

Dầu thầu dầu - ► Glycerin + Acid Rixinoleic

Acid Rixinoleic có tác dụng kích thích thần kinh làm tăng nhu động ruột còn Glycerin có tác dụng làm trơn phân

- Thuốc nhuận tẩy muối

Tác dụng của nhóm này phụ thuộc vào liều dùng : Liều thấp có tác dụng

Cơ chế tác dụng của thuốc tẩy muối là làm giảm tái hấp thu nước ở ruột, tăng tiết dịch ruột và đặc biệt là kích thích nhu động ruột

Khi dùng thuốc tẩy muối có gốc sulfat (S042') bị phân huỷ thì nó sẽ bị khử thành sulíuahyđro (H2S), chính sulíuahyđro cũng có tác dụng làm tăng nhu động ruột

3.1 Các thuốc có nguồn gốc hoá dược.

Hiện nay các thuốc có nguồn gốc hoá dược được sử dụng làm thuốc nhuận tràng, điều trị táo bón, làm thuốc xổ trong chẩn đoán y khoa thường gặp trên thị trường gồm có :

NORGALAX

Công dụng : Điều trị táo bón.Dùng làm thuốc xổ trong soi trực

tràng, chụp X - Quang đường tiêu hoá, điều trị tắc ruột, khó đại tiện

Đường dùng: Trực tràng

(Norgine pharma 29 rue Ethé virton - BP 109 , 28102 Dreux cedex - France)

MICROLISMI

Chamomile Fluid Extract 0,30 g

Công dụng : Điều trị táo bón

Làm thuốc xổ trong chẩn đoán y khoa

Đường dùng: ĐTT

(Nova argentina SRL via G.Pascoli, 1 20064 Gorgonzola- Milano- Italy)

DULCOLAX

Thành phần : 1 viên bọc đường chứa 5,0 mg

1 viên thuốc đạn chứa 10,0 mg

1 viên thuốc đạn cho trẻ em chứa 5,0mg Bisacodyl Công dụng : Điều trị táo bón

Đường dùng : Uống và đặt

(OLIC (Thailand) Limited 166 Bangpa — in industrial estate Udomsoray uth Road, bangkasan,bangpa in, Ayud haya,thailand)

MICROLAX/ MICROLAX BEBE

Thành phần : Mỗi ống gel Microlax chứa

Natri lauryl Sulfo acetat 0,045 g

Trisodium citrat được hydrat hoá 0,45 g Mỗi ống gel Microlax BeBe chứa

Natri lauryl Sulfo acetat 0,027 g

Công dụng : Điều trị các chứng táo bón do nguyên nhân khó

đại tiện, sa trực tràng, đại tràng sigma

Đường dùng : ĐTT

Sanofi winthrop - 94258 Gentilly cedex - Pháp

NORMACOL (cốm bao đường)

Thành phần : Gôm Scutelia

Công dụng : Điều trị táo bón Đường dùng : Uống

David Bromilow (02/96) MIMS Việt Nam trang 21

3.2 Thuốc có nguồn gốc Dược liệu chữa bệnh táo bón.

Việt Nam là một nước nằm trong vùng khí hậu nhiệt đới với nguồn dược liệu rất phong phú và đa dạng, trong tập “Những cây thuốc và vị thuốc Việt Nam” của GS,TS Đỗ Tất Lợi xuất bản năm 1977 đã giới thiệu 22 cây thuốc

và vị thuốc được sử dụng làm thuốc nhuận tràng làm thuốc điều trị táo bón trong đó có rất nhiều các bài thuốc đã được các tác giả giới thiệu:

+ Đại Hoàng Cam Thảo thang :

Thành phần:

sắc còn 100 ml uống lúc đói.

Công dụng : chữa khó đại tiện, nôn mửa, đau bụng

Đỗ Tất Lợi (1977) “Những cây thuốc và vị thuốc Việt Nam ”, nhà xuất bản khoa học và kỹ thuật, trang 471

+ Dầu thầu dầu :

Thành phần:

Công dụng : Thuốc tẩy

Đỗ Tất Lợi (1977) “Những cây thuốc và vị thuốc Việt Nam ”, nhà xuất bản khoa học và kỹ thuật, trang 466

Nguyễn thụy Anh, Nguyễn Đức Đoàn : hướng dẫn chế biến và bào chế thuốc Nam (1972), nhà xuất bản y học trang 58.

+ Quả BK (Fructus gleditschiae) VN chữa bệnh táo bón, tắc ruột

Lấy 1/4 quả BK nướng thật vàng, đừng nướng cháy quá hoặc còn sống, bỏ hạt đi rồi tán thành bột nhỏ Lấy canulơ đầu có vaselin hay dầu chấm vào bột

BK sau đó cho vào hậu môn sâu độ 3 - 4 cm Cứ thế làm 3 - 4 lần cho bột vào trong hậu môn sau 2 - 5 phút bệnh nhân đi ngoài được, có trường hợp hậu phẫu không trung tiện được 2 - 5 ngày Bệnh nhân chướng bụng, bí đại, trung tiện, nôn mửa liên tục có khi nôn ra máu mà làm như trên chỉ 2 phút là trung tiện và đi ngoài được ngay, có trường hợp Bệnh nhân ra tới 500 con giun.( Đỗ Tất Lợi (1977) những cây thuốc và vị thuốc Việt Nam, nhà xuất bản khoa học và kỹ thuật, trang 735)

Từ các công thức nêu trên chúng tôi đặc biệt quan tâm tới bài thuốc và kết quả điều trị của GS,TS Đỗ Tất Lợi đi từ quả BKVN

3.3 Cây Bồ Kết Việt Nam

- Tên khoa học : Gleditschiae australis caesalpiniaceae

- Đặc điểm thực v ậ t

cây to cao chừng 6 - 8 m, trên thân có những tuýp gai phân nhánh dài tới 10-15 cm, lá kép lông chim, cuống chung có lông và rãnh dọc, có 6 - 8 đôi lá chét dài 25 mm Hoa mọc thành chùm màu trắng, quả loại đậu dài 10 - 12cm, cong hoặc thẳng, dẹt phồng lên ở chỗ mang hạt, khi quả chưa khô thì màu xanh, nhưng khi khô thì màu đen, có 10—12 hạt rất rắn Cây được trồng nhiều nơi ở nước ta để lấy quả vào tháng 10 - 11 Phân bố chủ yếu ở miền bắc Việt Nam, riêng ở đảo cát bà có tới 40 000 cây, mỗi năm cho tới 400 tấn quả

- Thành phần hoá học :

+ Saponin

Năm 1961, GS,TS Đỗ Tất Lợi cùng với G Herman và I.Ciulei chiết Saponin với hiệu xuất là 10%, đến năm 1966 các tác giả trên công bố đặc điểm của Saponin trong quả BKVN là :

Chỉ số phá huyết: 33 000

Điểm chảy : 198 - 202°c

Sau khi thuỷ phân thì thu được Aglycon là : acid Oleanonic có phần đường

là glucose, arabinose, xylose Một Aglycon thứ hai là: acid echynocystic.Năm 1973 Ngô Thị Bích Hải tách được một Saponin đặt tên là australosid

có phần aglycon là acid echynocystic còn phần đường có 2 mạch :

- 1 mạch nối vào OH- ở C3- gồm có : D - xylose, L - arabinose và

+ Hỗn hợp Saponin và Flavonoid có tác dụng giảm đau.

+ Hỗn hợp Flavonoid và Flavonoid riêng lẻ là isovitexin có tác dụng kháng

virus

- Theo y học cổ truyền quả BKVN có tác dụng sau:

+ Thông khiếu, làm hắt hơi, chữa trúng phong, cấm khẩu, phong tê

+ Chữa sâu răng, trốc đầu, quai bị

+ Chữa lị, ho, tiêu đờm

+ Chữa bí đại tiện, tắc một do giun sán

Trong phạm vi khoá luận này chúng tôi muốn đi sâu vào tìm hiểu tác dụng

gây xổ, khả năng thụt tháo của Saponin chiết suất từ quả BKVN

- Nước cất (Aqua destilata) đạt TCDĐVNIII

- Dung môi Aceton đạt TCDĐVNIII

- Tá dược Gelatin, CMC, Glycerin, đạt TCDĐVNIII

- Thuốc mẫu Norgalax đạt tiêu chuẩn của nhà sản xuất (NORGIN PHARMA

29, Ethé virton BP 109, 28102 DRREUX cedex France)

1.2 Trang thiết b ị :

+ Cân Sartorius

+ Máy ghi 1 kênh Ugo Basile (Italy)

+ Máy điều nhiệt Clifton

1.3.1 phương pháp chiết xuất Saponin

Dựa vào tính chất của Saponin là một chất tan trong nước và cồn nên chúng tôi sử dụng phương pháp chiết nóng (đun sôi dược liệu trong nước ở 100°C/45 phút), sau đó dùng cồn cao độ để loại tạp và dùng than hoạt để tẩy màu dịch chiết

1.3.2 Phương pháp nghiên cứu công thức bào chế

Dựa vào một số công thức của các chế phẩm đang lưu hành trên thị trường, Chúng tôi sử dụng phương pháp sàng lọc để lựa chọn công thức bào chế hợp với tính chất của Saponin.

1.3.3 Phương pháp nghiên cứu tác dụng sinh học

Nguyên tắc : Bơm thuốc vào hậu môn của thỏ, dựa trên sự đáp ứng của thỏ với thuốc (thuốc có tác dụng thụt tháo), so sánh kết quả giữa mẫu trắng (chỉ có

tá dược) với chế phẩm Microlax.BK và mẫu đối chiếu Norgalax, so sánh thời gian thụt tháo giữa các nồng độ khác nhau của chế phẩm để đưa ra nhận xét

2 thực nghiệm, kết quả và nhận xét

2.1 Nghiên cứu chiết suất Saponin tinh khiết từ quả BKVN.

2.1.1 Chiết xuất Saponin

* Tiến hành :

Để chiết xuất được tối ưu lượng Saponin từ quả BKVN chúng tôi đã tiến hành chiết Saponin tinh khiết theo 2 phương pháp sau:

+ Phương pháp 1: Quả BKVN được sấy khô, bỏ hạt, bẻ nhỏ và được chiết

Saponin tinh khiết theo sơ đồ sau

Loại tạp:

Gộp: Dịch chiết 1 + Dịch chiết 2 + Dịch chiết 3 sau đó đem cô trên bếp cách thuỷ tới dạng cao lỏng 1:1 (thể tích = 100 ml) Loại tạp từ cao lỏng theo sơ đồ:

Tẩy màu

Tiếp tục dùng than hoạt để tẩy màu thêm 5 lần nữa (mỗi lần vẫn dùng 2g than hoạt) thì thu được dung dịch Saponin có màu vàng sáng, trong quá trình tẩy màu liên tục bổ xung Ethanol 90° cho đủ thể tích ban đầu.

Dịch lọc BK 7 có màu vàng sáng được cô trên bếp cách thuỷ để đuổi hết Ethanol, cặn thu được là Saponin

Để xác định được hàm lượng Saponin có trong quả BKVN và để chọn được phương pháp chiết tối ưu nhất chúng tôi đã tiến hành chiết nhiều mẻ và kết quả cho như sau:

Phương pháp 2 tuy có nhanh hơn nhưng cho hiệu xuất thấp, độc hơn, tốn nhiều dung môi và hoá chất hơn, vậy chúng tôi quyết định lựa chọn phương pháp 1 để chiết xuất Saponin từ quả BKVN.

2.1.2 Kiểm nghiệm Saponin chiết xuất từ quả BKVN

- Tiến hành :

+ Khả năng tạo bọt:

Lấy một ống nghiệm cao 15 cm, đường kính 1,5 cm, cho 0,01(g) Saponin

và 10,0 ml nước cất vào, lắc mạnh trong 5 phút, để yên, quan sát cột bọt thấy bền vững sau 15 phút

+ Phản ứng phân biệt Saponin Steroid và Saponin Triterpenoid