Bước đầu nghiên cứu thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của cây hoàng liên ô rô mọc ở cao bằng

Bước đầu nghiên cứu thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của cây hoàng liên ô rô mọc ở cao bằng Bước đầu nghiên cứu thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của cây hoàng liên ô rô mọc ở cao bằng Bước đầu nghiên cứu thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của cây hoàng liên ô rô mọc ở cao bằng Bước đầu nghiên cứu thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của cây hoàng liên ô rô mọc ở cao bằng Bước đầu nghiên cứu thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của cây hoàng liên ô rô mọc ở cao bằng Bước đầu nghiên cứu thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của cây hoàng liên ô rô mọc ở cao bằng Bước đầu nghiên cứu thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của cây hoàng liên ô rô mọc ở cao bằng Bước đầu nghiên cứu thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của cây hoàng liên ô rô mọc ở cao bằng Bước đầu nghiên cứu thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của cây hoàng liên ô rô mọc ở cao bằng Bước đầu nghiên cứu thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của cây hoàng liên ô rô mọc ở cao bằng Bước đầu nghiên cứu thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của cây hoàng liên ô rô mọc ở cao bằng Bước đầu nghiên cứu thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của cây hoàng liên ô rô mọc ở cao bằng Bước đầu nghiên cứu thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của cây hoàng liên ô rô mọc ở cao bằng Bước đầu nghiên cứu thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của cây hoàng liên ô rô mọc ở cao bằng Bước đầu nghiên cứu thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của cây hoàng liên ô rô mọc ở cao bằng

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI NGUYỄN THỊ THU HẰNG BƯỚC ĐẦU NGHIÊN c ứ u THÀNH PHẦN HOÁ HỌC YÀ TÁC DỤNG KHÁNG KHUAN c ủ a c â y HOÀNG LIÊN Ô RÔ MỌC Ở CAO BẰNG (KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP Dược s ĩ KHOÁ 1996-2001) Người hướng dẫn : TS. PHÙNG HOÀ BÌNH TS. CHU THỊ LỘC Nơi thực hiện : BỘ MÔN DƯỢC HỌC cổ TRUYỀN BỘ MÔN VI SINH HỌC Thời gian thực hiện : 5/3/2001 - 22/5/2001 L C i U f O Hà Nội, tháng 5 năm 2001 LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành công trình tốt nghiệp này, tôi đã nhận được sự giúp đỡ tận tình của các thầy cô và các bạn đồng nghiệp. Nhân dịp này, cho phép tôi được chân thành cảm ơn thầy,cô: TS. PHỪNG HOÀ BÌNH TS. CHƯ THỊ LỘC đã trực tiếp hướng dẫn, giúp đỡ tôi thực hiện đề tài. Tôi cũng xin trân trọng cảm ơn các thầy, các cô ở Bộ môn Dược học cổ truyền, Bộ môn Vi sinh học, Phòng nghiên cứu trung tâm, và các Phòng chức năng trong trường đã giúp đỡ tôi trong quá trình thực hiện công trình tốt nghiệp này, Hà nội, ngày 20 tháng 5 năm 2001 ' Sinh viên Nguyễn Thị Thu Hằng MỤC LỤC t • Trang Phần I: Đặt vấn đề 1 Phần II: Tổng quan 2 1. Đặc điểm thực vật 2 2. Phân bố 2 3. Một số loài thuộc chi Mahonia ở Việt Nam 3 4. Thành phần hoá học 3 5. Tác dụng sinh học 6 6. Công dụng . 7 Phần III: Thực nghiệm và kết quả 9 1. Nguyên vật liệu và phương pháp thực nghiệm 9 1.1. Nguyên liệu 9 1.2. Phương tiện 9 1.3. Phương pháp nghiên cứu 10 2. Kết quả thực nghiệm 12 2.1. Đặc điểm thực vật 12 2.2. Nghiên cứu về hoá học 13 ' 2.2.1. Định tính các nhóm thành phần hoá học trong lá, thân và rễ cây Hoàng liên ô r ô 13 2.2.2. Nghiên cứu saponin 21 2.2.3. Nghiên cứu alcaloiđ 24 2.3. Thử tác dụng kháng khuẩn - kháng nấm 31 2.3.1. Chuẩn bị nguyên liệu và môi trường 31 2.3.2. Tiến hành 33 2.3.3. Kết quả 33 3. Bàn luận 36 Phần IV: Kết luận và đề xuất 37 1. Kết luận 37 1.1. Thực vật 37 1.2. Hoáhọc . 37 1.3. Tác dụng kháng khuẩn - kháng nấm 38 2. Đề xuất 38 I CÁC CHỮ VIẾT TÁT dd: MeOH: SKLM: TT: VSV: dung dịch Methanol sắc ký lớp mỏng thuốc thử vi sinh vật Phần I: ĐẶT VÂN ĐỂ. ' Hoàng liên ô rô là tên gọi của nhiều loài thuộc chi Mahonia - một loại cây mọc hoang dại, phân bố rộng ở nhiều vùng núi nước ta: Hà Giang, Lai Châu, Lào Cai, Lâm Đồng [ 7, 8, 12, 13, 14] Nhân dân địa phương không chỉ dùng làm thuốc trị một số bệnh đường tiêu hoá như kiết lỵ, viêm ruột, tiêu chảy, viêm gan, vàng da [7, 12, 13] mà còn dùng dưới dạng nước hãm uống thay chè. Theo tài liệu [6], có nhiều loài thuộc chi Mahonia cho hàm lượng berberine cao (9 - 12%) là nguồn nguyên liệu để chiết xuất berberine. Ở nước ta hiện nay, Viện Dược liệu (Bộ Y tế) đã sưu tầm được 3 loài thuộc chi Mahonia nhưng chưa nghiên cứu về thành phần hoá học và tác dụng sinh học của nó. Để góp phần tìm hiểu cây Hoàng liên ô rô mọc ở Cao Bằng, chúng tôi thực hiện đề tài với những mục tiêu sau: + Sơ bộ xác định tên khoa học của mẫu nghiên cứu thu hái ở Cao Bằng. + Bước đầu nghiên cứu thành phần hoá học. + Nghiên cứu tác dụng kháng khuẩn - kháng nấm trên một số chủng vi sinh vật. 1 Phần I I : TỔNG QUAN Cây Hoàng liên ô rô là một trong số những loài thuộc chi Mahonia, họ Berberidaceae. Chi Mahonia gồm có rất nhiều loài, phân bố ở nhiều nơi trên thế giới và được mô tả với những đặc điểm chung như sau: 1. fc>ẶC ĐIỂM THỰC VẬT: Cây bụi hay gỗ nhỏ, cao 2 - 6 m [7, 8, 12, 13], thân cây có ruột màu vàng. Cành không cổ gai. Lá màu xanh, mọc so le, lá kép hình lông chim lẻ, V có từ 3 - 21 lá chét tuỳ từng loài. Lá chét thưòng có hình trứng đầu nhọn sắc, phía cuống tròn, mỗi bên có 3 - 8 răng cưa sắc, ngắn [7, 12, 13]. Cụm hoa tận cùng mọc thành bông phân nhánh ở gốc [7, 12, 13], nhiều hoa, hoa có mầu vàng nhạt [8, 7, 12]. Mùa ra hoa là mùa xuân (tháng 1 - 3), mùa quả vào tháng 4-5. Quả mọng màu xanh thẫm, hình cầu, trong quả chín chứa 2 -5 hạt. [7, 12] 2. PHÂN BỐ: Các loài thuộc chi Mahonia có ở rất nhiều nơi trên thế giới. Mahonia aquifolium Push; Mahonia repen (Lindl) G.Don có nhiều ở vùng tây bắc Mỹ, Canada. [17] M.bealei (Fort) Carr ; M.nepalensis D.C; M.fortunei (Fort) Carr có ở nhiều nước như Trung Quốc, Lào, Thái Lan, Ấn Độ, Việt Nam [6, 7, 12, 13]. 2 3. MỘT SỌ LOÀI THUỘC CHI MAHONIA Ở VIỆT NAM: Ở nước ta, các loài thuộc chi Mahonia được đặt tên là Hoàng liên ô rô vì lá của chúng giống lá cây ô rô, lại có công dụng gần như vị Hoàng liên 112]. Nhân dân ta còn gọi là Hoàng bá gai, Thích Hoàng liên, Tồng phềnh (H.mông) [13]. Họ Hoàng liên gai (Berberidaceae). Hiện nay đã phát hiện được 3 loài Mahonia mọc hoang ở các vùng núi cao, lạnh, trên các núi đá vôi cao. Viện Dược liệu (Bộ Y tế) đã lấy và lưu các mẫu về 3 loài Mahonia này: - Mahonia bealei (Fort). Carr ( N°1541C) ngày 12/11/1969 ở Hà Giang đỉnh núi cao 1400m. - Mahonia japonica (Thunb) D.c. (N° 2021A) ngày 26/10/1973 ở Sìn Hồ - Lai Châu. - Mahonia nepalensis D.c. (N° 2709) ngày 13/5/1980 ở LangBiang - Lạc Dương - Lâm Đồng. 4. THÀNH PHẦN HOÁ HỌC: Trong rễ và thân của các loài Mahonia đều có chứa chủ yếu alcaloid có khung protoberberine như: berberine, palmatine, jatrorrhizine với hàm lượng khác nhau theo từng loài, một số loài còn có cả ở lá. Ngoài ra còn có một số alcaloid khác: oxyacanthine, berbamine, magnoflorine Theo các tài liệu tham khảo [6, 10, 22], chúng tôi đã tổng kết được thành phần hoá học của một số loài Mahonia, trình bày ở bảng 1. í 3 Bảng 1: Thành phần hoá học của một số loài Mahonia. 1 STT Loài Hàm lượng berberine (%) Alcaloid và hợp chất khác Rễ, vỏ rễ Thân, vỏ thân Lá (1) (2) (3) (4) (5) (6) 1 M.acanthifolia Don 0,50 jatroưhizine,oxyacanthine, neprotine, palmatine. 2 M.annamica Gagnep (M.nepalensis DC) corypalmine, neprotine, palmatine, umbellatine, tetrahyđro jatrorrhizine. 3 M.aquifolium Push palmatine, berbamine, oxyacanthine, jatrorrhizine, birvulcine, magnoflorine, columbamine. 4 M.bealei (Fort)Carr 0,35-2,5 berbamine, jatrorrhizine, magnoflorine, oxyacanthine, palmatine. 5 M.borealis Takeda 0,16 oxyacanthine, neprotine (0.31%), palmatine, jatrorrhizine . 6 M.fortunei (Fort)Carr 0,3 berbamine, oxyacanthine, palmatine, jatrorrhizine. 7 M.griffithii Takeda 0,3 berbamine, neprotine, oxyacanthine, palmatine * 8 M.japonica R.Br (Berberis) 0,7 0,035 berbamine, isotetrandrine, tetrahydroberberine, tetrahydro jatrorrhizine, tetrahydro shobakunine • 9 M.leschenaultii Takeda 1,02 jatrorrhizine, neprotine, oxyacanthine, palmatine. 10 M.lomarrifolia 2,9 berbamine, jatrorrhizine, isotetrandrine, oxyberberine, magnoílorine, shobakunine. 11 M.manipurensis Takeda jatrorrhizine, neprotine, oxyacanthine. 12 M.morrisonensis 3,088 berbamine, jatrorrhizine, isotetrandrine, magnoflorine, oxyberberine, shobakunine. 13 M.philipinensis Takeda Jatrorrhizine, shobakunine, berbamine, oxyacanthine, isotetrandrine. I 4 (1) (2) (3) (4) (5) (6) 14 M.repens (Lindl) G.Don Oxyacanthine 15 M.siamensis Ampelopsine, isotetrandrine • 16 M.sikkimensis Takeda 0,46 Jatrorrhizine, neprotine, oxyacanthine . 17 M.simonsii Takeda 0,021 Jatrorrhizine, neprotine (0.27%), palmatine, oxyacanthine • 18 M.swaceyi Buckley 19 M.trifoliolata Moric 1,33 - 3,22 0,45 Cấu tạo của một sốalcaloid cố khung protoberberine: Protoberberine hay berbine alcaloid đều có khung dibenzo-quinolizine. Chúng có nhóm thế ở vị trí 2, 3, 9, 10 hoặc 2, 3, 10, 11. Riêng các alcaloid có cấu tạo kiểu corydalin còn có thêm nhóm thế methyl ở C|3. Căn cứ vào sự bão hoà hydro ở nhân, người ta còn chia alcaloid thuộc khung này ra hai loại: - Loại 1: có một nhân trong khung quinolizine được bão hoà hydro gọi là protoberberin. Alcaloid thuộc loại này thường có mầu (vàng - đỏ) - Loại 2: có 2 nhân trong khung quinolizine được bão hoà hydro, gọi là tetrahydro protoberberine. Các alcaloid loại này thường không mầu. Protoberberine Tetrahydroprotoberberin Sự khác nhau giữa các nhóm thế trên khung protoberberine tạo thấnh các chất khác nhau. Một số alcaloid protoberberine được trình bày ở bảng 2. 5 [...]... Xanh tím Vàng cam 7 0,58 Vàng Vàng cam 8 0,63 Xanh ngọc Vàng cam 9 0,68 Xanh tím Vàng cam 10 0,74 Vàng Vàng cam 11 0,91 Vàng Vàng cam Màu khi phun TT dragendorff Hình 2 26 Bảng 7 : Kết quả phân tích alcaloid bằng SKLM với hệ dung môi 2 1 0,11 Vàng nâu Vàng cam 2 0,21 Vàng nâu Vàng cam ,3 0,36 Xanh tím Vàng cam 4 0,59 Xanh ngọc Vàng cam 5 0,66 Vàng Vàng cam 6 0,77 *7 Xanh tím Vàng cam 7 0,84 Vàng Vàng cam... chét không lông, cứng Mỗi bên mép lá có 3 - 6 răng cưa ngắn, đầu nhọn sắc Mõi lá dài 5 - 13 cm, rộng 2 - 4 cm Do òhưa lấy được mẫu hoa, quả nên chúng tôi chưa phân tích được các đặc điểm về hoa và quả So sánh với các mẫu số N°2021A, N°2709, N°1541C lưu tại Viện Dược liệu Mẫu nghiên cứu của chúng tôi giống mẫu số N°2021A (Ảnh ở phụ lạc 2) Ảnh 1: Cây Hoàng liên ô rô mọc tại Cao Bằng 12 2.2 Nghiên cứu về... Palmatine hydroclorid có tác dụng ức chế đối với tụ cầu khuẩn (Staphylococcus) và liên cầu khuẩn (Streptococcus) còn đối với các loại vi khuẩn khác (lỵ, thương hàn) thì không thấy có kết quả rõ rệt Tác dụng ức chế vi khuẩn của Palmatine hydroclorid kém các loại kháng sinh thông thường - Tấc dụng kháng nâht gây bệnh: Dịch chiết từ cây Mahonia aquifolium có tác dụng ức chế sự phát triển của một số nấm gây... 28°c / 18 24h đối với vi nấm 2.3.3 Kết quả: Sau khi tiến hành thử tác dụng kháng khuẩn - kháng nấm của các dịch chiết cây Hoàng liên ô rô, ở nhiều nồng độ khác nhau, chúng tôi đã chọn ra nồng độ tối thiểu có tác dụng ức chế vi khuẩn - vi nấmcủa alcaloid và saponin Kết quả được ghi trong bảng 9 (Kết quả thử với các nồng độ khác được ghi ở phụ lục 1) 33 ... triệu chứng ngộ độc' [14] 6 CÔNG DỤNG: Theo Y học cổ truyền: Hoàng liên ô rô có vị đắng, tính mát vào phế, v ị , can, thận có tác dụng thanh nhiệt, giải độc, tiêu viêm, làm se [13] - Hoàng liên ô rô được nhân dân dùng chữa lỵ, bệnh ăn uống không tiêu, tiêu chảy, viêm ruột, viêm gan, vàng da [12, 13, 23] 7 - Dược liệu nấu nước đặc còn dùng để rửa, chữa viêm da dị ứng, ngứa lở [7, 12, 13] - Ngoài ra còn... phân cách 2.2.1.11 Định tính acid amin: Cho vào ống nghiệm 2ml dịch chiết nước, thêm 3 giọt thuốc thử Ninhydrin 3% Đun cách thuỷ 5 - 1 0 phút Phản ứng dương tính khi xuất hiện màu xanh tím Kết quả định tính các nhóm thành phần hoá học trong cây Hoàng liên ô rô được tóm tắt trong bảng 3 » 19 Bảng 3 : Kết quả định tính thành phần hoá học của cây Hoàng liền ô rô TT Nhóm chất Kết quả Phản ứng định tính 1... Saponin toàn phần ở thân cây Hoàng liên ô rô được thử ở các nồng độ: 2, 4, 6,8, 10 mg/ml Lấy cắn saponin toàn phần Ihu được ở phần định lượng pha ra các nồng độ cần thử * Chuẩn bị các khoanh giấy thử: - Các khoanh giấy sắc ký có đường kính 7 mm Được sấy tiệt trùng ở 120°c trong 30 phút trước khi dùng - Các mẫu thử được tẩm vào các khoanh giấy đã vô trùng đến bão hoà với một thể tích như nhau Để khô ở nhiệt... các vi sinh vật kiểm định của các dung dịch thử I V 11 2 KẾT QUẢ THỰC NGHIỆM: 2.1 Đặc điểm thực vật: • V * Hoàng liên ô rô (mẫu nghiên cứu) là cây bụi cao 1.5 - 5 m, thân cây có thể có đường kính đến 12 cm, bên ngoài có lớp vỏ mầu xám (lớp gỗ hoá bần có thể dày 0.5 - 2 mm) Tiết diện thân hình bánh xe, phần gỗ của thân có mầu vàng tươi và vị rất đắng Lá kép hình lông chim lẻ, mọc so le, lá gốc mang 3... còn 10 mỉ, thu được dịch sắc 1:1 - Nước hãm 1:1 từ thân và rễ Lấy lOg dược liệu khô hãm trong 30 phút với 200 ml nước đun sôi, lọc, cô cách thuỷ còn 10 ml thu được nước hãm 1:1 - Alcaloid toàn phần ở thân cây Hoàng liên ô rô được thử ở các nồng độ: 0,5 mg/ml; 1 mg/ml; 2 mg/ml; 3 mg/ml; 4 mg/ml; 5 mg/ml Cân lg cắn alcaloid toàn phần thu được ở phần định lượng Pha trong 100 ml cồn 90° được dd có nồng... da [19] 6 - Tác dụng chống oxy hoá: Dịch chiết từ M.aquifolium và các alcaloid chính có trong cây (berberine, berbamine, oxyacanthine) có tác dụng chống oxy hoá [21,22] - Tác dụng đối với đơn bào: Berberine trên ống kính với nồng độ 1:5000 và trên chuột nhắt trắng đã được gây nhiễm amip, với liều lượng 50 mg/kg thể trọng bằng đường uống có tác dụng ức chế sự sinh trưởng của amip [14] - Tác dụng với tiêu . cứu thu hái ở Cao Bằng. + Bước đầu nghiên cứu thành phần hoá học. + Nghiên cứu tác dụng kháng khuẩn - kháng nấm trên một số chủng vi sinh vật. 1 Phần I I : TỔNG QUAN Cây Hoàng liên ô rô là một. học và tác dụng sinh học của nó. Để góp phần tìm hiểu cây Hoàng liên ô rô mọc ở Cao Bằng, chúng tôi thực hiện đề tài với những mục tiêu sau: + Sơ bộ xác định tên khoa học của mẫu nghiên cứu. BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI NGUYỄN THỊ THU HẰNG BƯỚC ĐẦU NGHIÊN c ứ u THÀNH PHẦN HOÁ HỌC YÀ TÁC DỤNG KHÁNG KHUAN c ủ a c â y HOÀNG LIÊN Ô RÔ MỌC Ở CAO BẰNG (KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP