Bước đầu nghiên cứu thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của cây hoàng liên ô rô mọc ở cao bằng

Bước đầu nghiên cứu thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của cây hoàng liên ô rô mọc ở cao bằng Bước đầu nghiên cứu thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của cây hoàng liên ô rô mọc ở cao bằng Bước đầu nghiên cứu thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của cây hoàng liên ô rô mọc ở cao bằng Bước đầu nghiên cứu thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của cây hoàng liên ô rô mọc ở cao bằng Bước đầu nghiên cứu thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của cây hoàng liên ô rô mọc ở cao bằng Bước đầu nghiên cứu thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của cây hoàng liên ô rô mọc ở cao bằng Bước đầu nghiên cứu thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của cây hoàng liên ô rô mọc ở cao bằng Bước đầu nghiên cứu thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của cây hoàng liên ô rô mọc ở cao bằng Bước đầu nghiên cứu thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của cây hoàng liên ô rô mọc ở cao bằng Bước đầu nghiên cứu thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của cây hoàng liên ô rô mọc ở cao bằng Bước đầu nghiên cứu thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của cây hoàng liên ô rô mọc ở cao bằng Bước đầu nghiên cứu thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của cây hoàng liên ô rô mọc ở cao bằng Bước đầu nghiên cứu thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của cây hoàng liên ô rô mọc ở cao bằng Bước đầu nghiên cứu thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của cây hoàng liên ô rô mọc ở cao bằng Bước đầu nghiên cứu thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của cây hoàng liên ô rô mọc ở cao bằng

HOÀNG LIÊN Ô RÔ MỌC Ở CAO BẰNG

(KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP Dược s ĩ KHOÁ 1996-2001)

Người hướng dẫn : TS PHÙNG HOÀ BÌNH

LỜI CẢM ƠN

Để hoàn thành công trình tốt nghiệp này, tôi đã nhận được sự giúp đỡ tận tình của các thầy cô và các bạn đồng nghiệp Nhân dịp này, cho phép tôi được chân thành cảm ơn thầy,cô:

TS PHỪNG HOÀ BÌNH

TS CHƯ THỊ LỘC

đã trực tiếp hướng dẫn, giúp đỡ tôi thực hiện đề tài

Tôi cũng xin trân trọng cảm ơn các thầy, các cô ở Bộ môn Dược học cổ truyền, Bộ môn Vi sinh học, Phòng nghiên cứu trung tâm, và các Phòng chức năng trong trường đã giúp đỡ tôi trong quá trình thực hiện công trình tốt nghiệp này,

Hà nội, ngày 20 tháng 5 năm 2001

Nguyễn Thị Thu Hằng

MỤC LỤC t •

Trang

Phần I: Đặt vấn đề 1

Phần II: Tổng quan 2

1 Đặc điểm thực vật 2

2 Phân bố 2

3 Một số loài thuộc chi Mahonia ở Việt N am 3

4 Thành phần hoá học 3

5 Tác dụng sinh học 6

6 Công dụng 7

Phần III: Thực nghiệm và kết quả 9

1 Nguyên vật liệu và phương pháp thực nghiệm 9

1.1 Nguyên liệu 9

1.2 Phương tiện 9

1.3 Phương pháp nghiên c ứ u 10

2 Kết quả thực nghiệm 12

2.1 Đặc điểm thực v ậ t 12

2.2 Nghiên cứu về hoá học 13

' 2.2.1 Định tính các nhóm thành phần hoá học trong lá, thân và rễ cây Hoàng liên ô r ô 13

2.2.2 Nghiên cứu saponin 21

2.2.3 Nghiên cứu alcaloiđ 24

2.3 Thử tác dụng kháng khuẩn - kháng n ấ m 31

2.3.1 Chuẩn bị nguyên liệu và môi trường 31

2.3.2 Tiến hành 33

2.3.3 Kết quả 33

3 Bàn luận 36

Phần IV: Kết luận và đề xuất 37

1 Kết luận 37

1.1 Thực vật 37

1.2 Hoáhọc 37

1.3 Tác dụng kháng khuẩn - kháng nấm 38

2 Đề xuất 38

I

vi sinh vật

Phần I:

ĐẶT VÂN ĐỂ.

' Hoàng liên ô rô là tên gọi của nhiều loài thuộc chi Mahonia - một loại cây mọc hoang dại, phân bố rộng ở nhiều vùng núi nước ta: Hà Giang, Lai Châu, Lào Cai, Lâm Đồng [ 7, 8, 12, 13, 14]

Nhân dân địa phương không chỉ dùng làm thuốc trị một số bệnh đường tiêu hoá như kiết lỵ, viêm ruột, tiêu chảy, viêm gan, vàng da [7, 12, 13] mà còn dùng dưới dạng nước hãm uống thay chè

Theo tài liệu [6], có nhiều loài thuộc chi Mahonia cho hàm lượng berberine cao (9 - 12%) là nguồn nguyên liệu để chiết xuất berberine Ở nước

ta hiện nay, Viện Dược liệu (Bộ Y tế) đã sưu tầm được 3 loài thuộc chi Mahonia nhưng chưa nghiên cứu về thành phần hoá học và tác dụng sinh học của nó

Để góp phần tìm hiểu cây Hoàng liên ô rô mọc ở Cao Bằng, chúng tôi thực hiện đề tài với những mục tiêu sau:

+ Sơ bộ xác định tên khoa học của mẫu nghiên cứu thu hái ở Cao Bằng.

+ Bước đầu nghiên cứu thành phần hoá học

+ Nghiên cứu tác dụng kháng khuẩn - kháng nấm trên một số chủng vi sinh vật

Phần I I :

TỔNG QUAN

Cây Hoàng liên ô rô là một trong số những loài thuộc chi Mahonia, họ Berberidaceae Chi Mahonia gồm có rất nhiều loài, phân bố ở nhiều nơi trên thế giới và được mô tả với những đặc điểm chung như sau:

Cụm hoa tận cùng mọc thành bông phân nhánh ở gốc [7, 12, 13], nhiều

hoa, hoa có mầu vàng nhạt [8, 7, 12]

Mùa ra hoa là mùa xuân (tháng 1 - 3), mùa quả vào tháng 4 - 5 Quả mọng màu xanh thẫm, hình cầu, trong quả chín chứa 2 - 5 hạt [7, 12]

2 PHÂN BỐ:

Các loài thuộc chi Mahonia có ở rất nhiều nơi trên thế giới.

Mahonia aquifolium Push; Mahonia repen (Lindl) G.Don có nhiều ở vùng tây bắc Mỹ, Canada [17]

M.bealei (Fort) Carr ; M.nepalensis D.C; M.fortunei (Fort) Carr có ởnhiều nước như Trung Quốc, Lào, Thái Lan, Ấn Độ, Việt Nam [6, 7, 12, 13]

3 MỘT SỌ LOÀI THUỘC CHI MAHONIA Ở VIỆT NAM:

Ở nước ta, các loài thuộc chi Mahonia được đặt tên là Hoàng liên ô rô vì

lá của chúng giống lá cây ô rô, lại có công dụng gần như vị Hoàng liên 112] Nhân dân ta còn gọi là Hoàng bá gai, Thích Hoàng liên, Tồng phềnh (H.mông) [13]

Họ Hoàng liên gai (Berberidaceae)

Hiện nay đã phát hiện được 3 loài Mahonia mọc hoang ở các vùng núi cao, lạnh, trên các núi đá vôi cao

Viện Dược liệu (Bộ Y tế) đã lấy và lưu các mẫu về 3 loài Mahonia này:

- Mahonia bealei (Fort) Carr ( N°1541C) ngày 12/11/1969 ở Hà Giang đỉnh núi cao 1400m

- Mahonia japonica (Thunb) D.c (N° 2021A) ngày 26/10/1973 ở Sìn

Theo các tài liệu tham khảo [6, 10, 22], chúng tôi đã tổng kết được thành phần hoá học của một số loài Mahonia, trình bày ở bảng 1

í

Bảng 1: Thành phần hoá học của một số loài Mahonia.

3

M.aquifolium

Push

palmatine, berbamine, oxyacanthine, jatrorrhizine, birvulcine, magnoflorine, columbamine

4 M.bealei(Fort)Carr 0,35-2,5 berbamine, jatrorrhizine, magnoflorine,

11 M.manipurensis

Takeda

jatrorrhizine, neprotine, oxyacanthine

12

isotetrandrine,magnoflorine,oxyberberine, shobakunine

13 M.philipinensisTakeda

Jatrorrhizine, shobakunine, berbamine, oxyacanthine, isotetrandrine

Cấu tạo của một sốalcaloid cố khung protoberberine:

Protoberberine hay berbine alcaloid đều có khung dibenzo-quinolizine

Chúng có nhóm thế ở vị trí 2, 3, 9, 10 hoặc 2, 3, 10, 11 Riêng các alcaloid có cấu tạo kiểu corydalin còn có thêm nhóm thế methyl ở C|3 Căn cứ vào sự bão

hoà hydro ở nhân, người ta còn chia alcaloid thuộc khung này ra hai loại:

- Loại 1: có một nhân trong khung quinolizine được bão hoà hydro gọi là protoberberin Alcaloid thuộc loại này thường có mầu (vàng - đỏ)

- Loại 2: có 2 nhân trong khung quinolizine được bão hoà hydro, gọi là tetrahydro protoberberine Các alcaloid loại này thường không mầu

Protoberberine Tetrahydroprotoberberin

Sự khác nhau giữa các nhóm thế trên khung protoberberine tạo thấnh

các chất khác nhau Một số alcaloid protoberberine được trình bày ở bảng 2.

Bảng 2: Cấu tạo alcaloidprotoberberine.

- Tác dụn% kháng khuẩn: Đã có nhiều tác giả nghiên cứu và chứng minh

berberine là một alcaloid có tác dụng kháng khuẩn mạnh, ức chế được sự sinh trưởng của nhiều loài vi khuẩn như: Staphylococcus aureus, Streptococcus hemolytycus, Shigella dysenteriae, Shigella paradysenteriae, Neiseria gonorrhoeae, Mycobacterium tuberculosis, Diplococcus pneumoniae, Salmonella typhosa, Escherichia coli, Bacillus subtilis, Bacillus anthracis, Pasteurella multicoda Tác dụng kháng khuẩn của berberine tương đương với sulfathiazole, sulfamerazine, sulfamethyldiazine, sulfapyridine, sulfaguanidine [1]

Palmatine hydroclorid có tác dụng ức chế đối với tụ cầu khuẩn (Staphylococcus) và liên cầu khuẩn (Streptococcus) còn đối với các loại vi khuẩn khác (lỵ, thương hàn) thì không thấy có kết quả rõ rệt Tác dụng ức chế

vi khuẩn của Palmatine hydroclorid kém các loại kháng sinh thông thường

- Tấc dụng kháng nâht gây bệnh: Dịch chiết từ cây Mahonia aquifolium có tác

dụng ức chế sự phát triển của một số nấm gây bệnh ngoài da [19]

- Tác dụng chống oxy hoá: Dịch chiết từ M.aquifolium và các alcaloid chính

có trong cây (berberine, berbamine, oxyacanthine) có tác dụng chống oxy hoá [21,22]

- Tác dụng đối với đơn bào: Berberine trên ống kính với nồng độ 1:5000 và

trên chuột nhắt trắng đã được gây nhiễm amip, với liều lượng 50 mg/kg thể trọng bằng đường uống có tác dụng ức chế sự sinh trưởng của amip [14]

- Tác dụng với tiêu hoá: Chất berberine gây tăng tạm thời trương lực và sự co

bóp của ruột [12]

- Đối với hô hấp: Hoạt chất berberine với liều lượng nhỏ kích thích sự hô hấp

Với liều lượng lớn ức chế hô hấp làm tê liệt trung khu hô hấp trong khi tim vẫn còn đập [14]

- Tác dụng đối với tim và tuần hoàn: Hoạt chất berberine với liều lượng nhỏ

có tác dụng kích thích tim, làm giãn động mạch vành Với liều lượng lớn thì gây hạ huyết áp

Sản phẩm hydro hoá của berberine là tetrahydro berberine, chất này có tác dụng ức chế hệ thống thần kinh trung ương và có tác dụng an thần [14]

V

- Độc tính: Berberine ít độc Trên chuột nhắt trắng, bằng đường tiêm phúc mạc

có LD50 = 24.3 mg/kg thể trọng Trên thỏ bằng phương pháp tiêm truyền nhỏ giọt tĩnh mạch berberine sulfat vói liều 20 mg/kg thể trọng không thấy xuất hiện phản ứng ngộ độc nào đáng kể, nhưng với liều lượng lớn hơn thì gây hạ huyết áp và ức chế hô hấp Trên người uống một lần 2g chưa phát hiện có triệu chứng ngộ độc' [14]

- Dược liệu nấu nước đặc còn dùng để rửa, chữa viêm da dị ứng, ngứa lở [7, 12, 13]

- Ngoài ra còn được dùng để chữa đau mắt [7, 12, 13], cảm lạnh, đau họng, đau răng [23]

Trong số các loài thuộc chi Mahonia, loài M.aquifolium rất được thế giới quan tâm và có nhiều nghiên cứu rất có giá trị

Nhân dân vùng Bắc Mỹ dùng M.aquifolium để chữa rất nhiều bệnh như sốt, ăn không tiêu, tiêu chảy, viêm khớp, các bệnh thận và bệnh gan nhưng nổi bật nhất là hiệu quả của nó trong chữa trị các bệnh về da, bệnh vẩy nến, eczema, trứng cá, bệnh da khô [17]

Rất nhiều nhà khoa học trên thế giới đã đi sâu nghiên cứu về M.aquifolium và đã đưa ra những kết quả:

- Gieler (1995) trong một công bố, thử nghiệm trong 89 khoa da liễu tại Đức trên 433 bệnh nhân bị bệnh vảy nến được chữa trị bằng M.aquifolium Sau một thời gian điều trị (12 tuần), triệu chứng của bệnh đã giảm hoặc không còn xuất hiện trên 81,1% số bệnh nhân thử nghiệm [16] Trong 31,1% bệnh nhân

có triệu chứng xấu thì sau 12 tuần giảm xuống chỉ còn 5,6%

- Mc Cutcheon (1994) nghiên cứu về M.aquifolium đã khẳng định rễ của M.aquifolium có khả năng chữa trị rất tốt đối với bệnh nấm [19]

V

- Menet-Voneiff (1995) báo cáo rằng, cồn M.aquifolium 1% có hiệu quả trong

điều trị mụn trứng cá Trong khoa kiểm tra lâm sàng tại trường Đại học Basel

15 bệnh nhân bị mụn trứng cá sau một thời gian sử dụng cồn M.aquifolium 1% đã giảm bót được chất nhờn trong da và có một kết quả rất khả quan [20]

- Augustin (1996) báo cáo rằng, 80% bệnh nhân sử dụng M.aquifolium không

có tác dụng phụ [15]

- Quả của một số loài M.aquifolium, M.repen còn được dùng chế rượu, chế mứt, chế nước giải khát [18]

b: hàm ẩm của dược liệu (%).

- Định lượng saponin toàn phần bằng phương pháp cân:

+ Nguyên tắc:

Chiết kiệt hoạt chất trong dược liệu bằng methanol, dịch chiết methanol thu hồi còn cắn, thêm một lượng nước, đem lắc với n-butanol Dịch n-butanol

cô đến cắn Thu được saponin toàn phần

Kết quả được tính theo công thức (A)

- Phân lập alcaloid:

+ Nguyên tắc:

Dùng phương pháp ngâm lạnh với cồn cao độ, chiết kiệt hoạt chất có trong dược liệu, sau đó kết tinh bằng dd acid H ơ loãng và NaCl bão hoà Tinh chế bằng than hoạt Kiểm tra độ tinh khiết của chất chiết được (chất B) bằng SKLM Nhận dạng chất B bằng SKLM (đối chiếu với chất chuẩn), phổ hồng ngoại, tử ngoại, đo nhiệt độ nóng chảy

So sánh với các mẫu số

N°2021A, N°2709, N°1541C lưu

tại Viện Dược liệu Mẫu nghiên

cứu của chúng tôi giống mẫu số

Do òhưa lấy được mẫu hoa, quả nên chúng tôi chưa phân tích được các đặc điểm về hoa và quả

2.2 Nghiên cứu về hoá học:

2.2.1 Định tính các nhóm thành phần hoá học trong lá, thân và rễ cây Hoàng liên ô rô:

2.2.1.ỉ Định tính alcaloid:

Lấy 5g bột dược liệu cho vào bình nón dung tích 200 - 250 ml Thêm

50 ml dd H2S04 i n , đun đến sôi, để nguội, lọc dịch lọc vào bình gạn dung tích 100 ml Kiềm hoá dịch lọc bằng amoniac 6N đến phản ứng kiềm (với giấy quỳ) Lắc với cloroform 3 lần, mỗi lần với 10ml, gộp dịch chiết cloroform cho vào bình gạn lắc vói dd H2S04 IN hai lần, mỗi lần 5 ml, gộp các dịch chiết acid, chia đểu vào 3 ống nghiệm, nhỏ vào từng ống nghiệm mỗi ống 1 - 2 giọt thuốc thử

Ống 1: TT Mayer - Phản ứng dương tính khi xuất hiện tủa trắng

Ống 2: TT Bouchardat - Phản ứng dương tính khi xuất hiện tủa nâu

Ông 3: TT Dragendorff - Phản ứng dương tính khi xuất hiện tủa đỏ gạch

* Phản ứng xác định alcaloid thuộc nhân benzyltetrahydroisoquinoleine:

- 1 ml dịch chiết, thêm 0,5 ml H2S 04 đặc, thêm dần vào thành ống 1 ml nước Brôm Phản ứng dương tính khi giữa hai lớp tiếp xúc xuất hiện vòng đỏ

- 1 ml dịch chiết, thêm 1 ml H2S04 đặc, thêm dần vào thành ống 1 ml NH4OH 20%, Phản ứng dương tính khi lớp tiếp xúc ở giữa acid H2S04 và NH4OH có vòng đỏ

* Phản ứng kết tinh muối alcaloid bằng acid HCl và acid H N 0 3:

- 1 giọt dịch chiết bốc hơi trên phiến kính, thêm 1 giọt HC1 đặc, để yên trong 30 phút Phản ứng dương tính khi soi kính hiển vi thấy từng bó kết tinh hình kim màu vàng

- 1 giọt dịch chiết bốc hơi trên phiến kính, thêm 1 giọt acid HNO3 đặc, để yên trong 30 phút Phản ứng dương tính khi soi kính hiển vi thấy tinh thể hình chấm vàng

100 ml Chiết hỗn hợp glycosid tim bằng 25 ml cloroform (chia làm 3 lần: 10

ml, 10 ml và 5 ml) Lắc đều, gạn lấy lớp cloroform

Gộp dịch chiết vào trong cốc có mỏ Sau đó lọc qua bông thấm nước Chia đều dịch chiết vào 4 ống nghiệm đã được sấy khô bốc hơi cách thuỷ tới khô Cắn còn lại được đem tiến hành làm các phản ứng

+ Phản ứng Libermann: cho vào ống nghiệm chứa cắn trên 0,5 ml

anhydridacetic Lắc đều đến khi thuốc thử hoà tan hết cắn Đặt n ghiêng ống nghiệm 45° Cho thêm đồng lượng acid sulfuric đặc (0,5 ml) theo thành ống nghiệm, để dịch lỏng trong ống nghiệm được chia làm 2 lớp Phản ứng dương tính khi bề mặt tiếp xúc giữa hai lớp chất lỏng xuất hiện một vòng tím đỏ

+ Phản ứng Baljet: Cho vào ống nghiệm có chứa cắn 0,5 ml cồn 90° Lắc

cho hoà tan hết cắn, thêm thuốc thử baljet vừa mới chuẩn bị (1 phần dd acid picric 1% và 9 phần dd NaOH 10%) Phản ứng dương tính khi trong ống xuất hiện màu da cam

+ Phản ứng Legal: Cho và ống nghiệm có chứa cắn 0,5 ml ethanol 90°

Lắc cho hoà tan hết cắn, thêm 1 giọt thuốc thử Natri prusiat 0,5% và 2 giọt dd NaOH 10% Phản ứng dương tính khi xuất hiện màu đỏ

+ Phản ứng Keller-Kiliani: Cho vào ống nghiệm có chứa cắn 0,5 ml dd

F e ơ 3 5% trong acid acetic Nghiêng ống nghiệm và cho từ từ 0,5 ml H2S04

đặc theo thành ống nghiệm Phản ứng dương tính khi có vòng nâu đỏ giữa 2 lớp phân cách

2.2.1.3 Định tính flavonoid, Coumarin:

Cân 10 g bột dược liệu cho vào túi giấy lọc, loại tạp chất bằng ether dầu hoả trong bình Soxhlet đến khi dịch chiết không còn màu Sau đó lấy bã ra, để bay hơi hết ether dầu hoả, cho vào bình nón, thêm 50 ml cồn 90°, đun cách thuỷ 15 phút Lọc nóng, cất thu hồi dung môi dưới áp suất giảm còn khoảng

10 ml Dịch này để làm các phản ứng

* Định tính Flavonoid:

+ Phẩn ứng Cyanidin: Cho 1 ml dịch chiết vào trong 1 ống nghiệm, thêm 1

ít bột magiê kim loại (khoảng 10 mg), cho vào ống nghiệm 2 - 3 giọt HC1 đặc Phản ứng dương tính khi dd có màu đỏ

+ Phản ứng với hơi amoniac đặc: Nhỏ 1 giọt dd chiết lên giấy lọc, để khô

tự nhiên rồi hơ lên miệng lọ amoniac đặc Phản ứng dương tính khi có màu vàng đậm lên

+ Phản ứng với FeCl3: Lấy 1 ml cho vào ống nghiệm, thêm 2 giọt dd FeCl3

5% Phản ứng dương tính khi xuất hiện tủa xanh đen.

* Định tính Coumarin:

+ Phản ứng mở đóng vòng lacton: Cho vào 2 ống nghiệm mõi ống 1 ml

+ Phản ứng diazo hoá: Cho vào ống nghiệm 1 ml dd chiết, thêm vào đó 2

ml dd NaOH 10 % Đun cách thuỷ đến sôi rồi để nguội Thêm vào ống vài

giọt thuốc thử diazo Phản ứng dương tính khi dd xuất hiện màu đỏ tím

+ Phẩn ứng vi thăng hoa: Cho vào trong 1 nắp chai bằng nhôm một ít bột

dược liệu, đun nhẹ để bay hơi hết nước, sau đó đậy nút bằng một phiến kính, trên có một ít bông thấm nước Đun nhẹ trong 5 phút, sau đó lấy phiến kính ra

để nguội Nhỏ 1 giọt KI 10% lên phiến kính Phản ứng dương tính khi soi dưới kính hiển vi thấy có tinh thể màu nâu hoặc tím

2.2.1.4 Định tính Saponin:

- Hiện tượng tạo bọt: Cho vào 2 ống nghiệm 0,lg dược liệu, thêm 5,0 ml nước

Lắc mạnh trong 5 phút, để yên trong 15 phút Phản ứng dương tính khi thấy cột bọt bền vững

- Sơ bộ phân biệt 2 loại saponin steroid và triterpenoid:

Cho vào Ống nghiệm 0,5 g bột dược liệu, thêm 5 ml cồn 90°, đun sôi, lọc dịch lọc tiến hành làm thí nghiệm

Hiên tương tao bot

Cột bọt 2 Ống bằng nhau Saponin triterpenoid

- Thử các phản ứng trong ống nghiệm:

Cân 10 g bột dược liệu, gói vào túi giấy lọc, chiết trong bình Soxhlet bằng ether dầu hoả đến hết màu để loại tạp Lấy bã ra để bay hết ether dầu hoả, cho vào bình nón, thêm 30 ml cồn 90°, đun cách thuỷ trong 15 phút, gạn lọc lấy dịch Thêm vào dịch trên 10 ml dd H2S04 10%, đun cách thuỷ lh Sau

đó lắc vói cloroform, gạn riêng lấy lớp cloroform, chia đều vào 3 ống nghiệm, bốc hơi cách thuỷ tới cạn Các ống này dùng để thử các phản ứng

+ Phản ứng Libermann-Burchard: Lấy ống nghiệm trên hoà tan vào 1 ml

anhydridacetic đã đun cách thuỷ cho nóng Thêm 2 giọt H2S04 đặc Phản ứng dương tính khi dd trong ống có màu xanh lơ hay màu hồng, cam, đỏ

+ Phản ứng Carr-Price: (thuốc thử antimontriclorid SbCl3 bão hoà trong

cloroform): Lấy 1 ml cloroform cho vào ống nghiệm trên, lắc cho tan cắn, thêm 0,5 ml thuốc thử antimontriclorid Phản ứng dương tính khi thấy màu hồng hoặc đỏ

+ Phản ứng Salkoxvski: Lấy 1 ml cloroform hoà tan cắn trong ống nghiệm

trên.Thêm 1 ml H2S04 đậm đặc Phản ứng dương tính khi thấy xuất hiện màu đỏ

2.2.1.5 Định tính Anthraglycosid:

- Phản ứng Borntraeger: Cân 2g dược liệu cho vào bình nón dung tích 50 ml, thêm 15 ml dd H2S04 10%, đun cách thuỷ 15 phút Lọc, để nguội, cho vào