Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và tác dụng kháng khuẩn của cây muồng lùn (cassia pumila lamk )

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐỖ MẠNH TRUNG NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT, THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ TÁC DỤNG KHÁNG KHUẨN CỦA CÂY MUỒNG LÙN (Cassia pumila Lamk.) LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC HÀ NỘI 2017 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐỖ MẠNH TRUNG NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT, THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ TÁC DỤNG KHÁNG KHUẨN CỦA CÂY MUỒNG LÙN (Cassia pumila Lamk.) LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: DƯỢC HỌC CỔ TRUYỀN MÃ SỐ: 60720406 Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Nguyễn Mạnh Tuyển Ths Vũ Thanh Bình HÀ NỘI 2017 LỜI CÁM ƠN Trong trình thực luận văn, nhận ủng hộ tạo điều kiện Trường Đại học Dược Hà Nội Bộ môn Dược học cổ truyền nơi học tập, nghiên cứu Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Nguyễn Mạnh Tuyển người Thầy hướng dẫn truyền đạt nhiều kinh nghiệm quý báu nghiên cứu khoa học cho Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới người bạn, người thân gia đình bố, mẹ, kịp thời động viên tạo điều kiện thuận lợi để hoàn thành luận án Xin trân trọng cảm ơn tất giúp đỡ quý báu Đỗ Mạnh Trung MỤC LỤC NHỮNG CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ ĐẶT VẤN ĐỀ .1 PHẦN : TỔNG QUAN .3 1.1 ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT 1.1.1 Họ Đậu (Fabaceae) phân họ Vang (Caesalpinioideae) 1.1.2 Chi Cassia 1.1.3 Đặc điểm thực vật loài muồng lùn (Cassia pumila Lamk.) .6 1.2 THÀNH PHẦN HÓA HỌC 1.2.1 Thành phần hóa học số loài thuộc chi Cassia 1.2.2 Các nghiên cứu thành phần hóa học loài muồng lùn Cassia pumila Lamk 1.3 TÁC DỤNG SINH HỌC VÀ CÔNG DỤNG 12 1.3.1 Tác dụng sinh học công dụng theo YHCT loài Cassia 12 1.3.2 Tác dụng sinh học công dụng muồng lùn (Cassia pumila) 17 PHẦN ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .19 2.1 NGUYÊN VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU 19 2.1.1 Nguyên liệu .19 2.1.2 Hóa chất, dụng cụ thiết bị 19 2.1.3 Địa điểm nghiên cứu 20 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.2.1 Mô tả thực vật 20 2.2.2 Nghiên cứu thành phần hóa học 20 2.2.3 Phương pháp thử tác dụng kháng khuẩn 22 PHẦN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 25 3.1 MÔ TẢ THỰC VẬT 25 3.1.1 Mô tả đặc điểm hình thái thực vật giám định tên khoa học Muồng lùn 25 3.1.2 Đặc điểm vi học cấu tạo giải phẫu .28 3.2 NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC 35 3.2.1 Chiết xuất phân lập chất 35 3.2.2 Nhận dạng chất phân lập 37 3.3 ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG KHÁNG KHUẨN CỦA CAO CHIẾT CÂY MUỒNG LÙN 43 BÀN LUẬN 45 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 49 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC NHỮNG CHỮ VIẾT TẮT H NMR : Phổ cộng hưởng từ proton (Proton Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy) 13 C NMR: Phổ cộng hưởng từ C-13 (Carbon-13 Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy) AST : Enzym glutamat oxaloacetat transaminase ALT : Enzym glutamat pyruvat transaminase ALP : Enzym alkalin phosphatase C : Cassia DMSO : Dimethyl sulfoxide EtOH : Ethanol HE : n-hexan : ethyl acetat IR : Phổ hồng ngoại (Infrared Spectroscopy) MC : Mẫu kháng sinh chuẩn MIC : Nồng độ ức chế tối thiểu (Minimum Inhibitory Concentration) MS : Phổ khối (Mass spectrometry) MTT : 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide SKLM : Sắc ký lớp mỏng DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Hàm lượng chất chuyển hóa loài Cassia pumila Bảng 1.2 Định tính số hợp chất phân đoạn khác Cassia pumila Lamk Bảng 3.1 Bảng liệu phổ H-NMR 13C-NMR CP8 Physcion đo CDCl3 (δ:ppm; J: Hz) Bảng 3.2 Bảng liệu phổ H-NMR 13 C-NMR CP10 β- sitosterol đo CDCl3 (δ:ppm; J: Hz) Bảng 3.3 Bảng liệu phổ H-NMR 13 C-NMR CP11 chrysophanol đo CDCl3 (δ:ppm; J: Hz) Bảng 3.4 Kết thử nghiệm hoạt tính kháng khuẩn DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ Hình 3.1: Cơ quan sinh dưỡng Muồng lùn - Chamaecrista pumila (Lam.) K.Larsen Hình 3.2: Cơ quan sinh sản Muồng lùn - Chamaecrista pumila (Lam.) K.Larsen Hình 3.3: Vi phẫu thân muồng lùn Hình 3.4: Vi phẫu Hình 3.5: Bột thân Hình 3.6: Bột ĐẶT VẤN ĐỀ Cây muồng lùn biết đến với tên me đất, muồng đất Cây thuộc chi muồng (Cassia), chi có nhiều loài sử dụng làm thuốc chữa bệnh Cây gặp phổ biến vùng thấp lên đến độ cao 600m trải rộng nước Hà Nội, Ninh Bình, Thanh Hóa, Đăk Lăk, Khánh Hòa, Bình Thuận, thành phố Hồ Chí Minh Trong dân gian, dùng làm thuốc chữa bệnh lỵ, hạt muồng lùn sử dụng làm thuốc xổ Ở Hòa Bình, đồng bào dùng phần mặt đất thuốc chữa bệnh gan, Quảng Ninh thầy thuốc dùng muồng lùn chữa chứng bệnh đau xương khớp Trên giới, nghiên cứu cụ thể loài chưa nhiều, đặc biệt chưa tìm thấy nhiều nghiên cứu thành phần hóa học tác dụng sinh học muồng lùn Việt Nam Do việc tiến hành nghiên cứu muồng lùn mang tính thời cần thiết Để góp phần chứng minh kinh nghiệm sử dụng muồng lùn dân gian, hướng đến việc tìm kiếm hợp chất có hoạt tính sinh học có dược liệu nâng cao giá trị tiềm muồng lùn kho tàng thuốc Việt Nam, tiến hành đề tài “Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học tác dụng kháng khuẩn muồng lùn Cassia pumila Lamk.” với mục tiêu sau: Mô tả đặc điểm thực vật, đặc điểm vi học loài muồng lùn thu hái Hòa Bình Nghiên cứu thành phần hóa học muồng lùn Đánh giá tác dụng kháng khuẩn cao chiết ethanol muồng lùn Để đạt mục tiêu đề ra, luận văn tiến hành với nội dung sau: Về thực vật: - Mô tả đặc điểm hình thái thực vật loài muồng lùn thu hái Hòa Bình, giám định tên khoa học - Mô tả đặc điểm vi phẫu thân, đặc điểm vi học bột thân, muồng lùn Về hóa học: - Phân lập nhận dạng 2-3 hợp chất từ muồng lùn Về tác dụng sinh học: - Đánh giá tác dụng kháng khuẩn cao chiết ethanol phần mặt đất muồng lùn PH L C MSD Trap Report v (A4-Opt2) Analysis Name: CP8.d Cot150x3mm.m Method: Sample Name: CP8 Analysis Info: Page of Instrument: LC-MSD-Trap-SL 2195410AE0000514 Operator: Display Report - Selected Window Selected Analysis Print Date: 3/27/2017 3:36:05 PM Acq Date: 3/27/2017 3:33:43 PM PH L C 13 12 12.310 12.113 1.00 1.02 11 10 7.633 7.631 7.377 7.372 7.259 7.088 7.086 7.085 7.083 6.694 6.689 1.07 1.06 1.07 1.05 3.939 3.36 2.452 3.31 CP8-CDCl3-1H -0.000 ppm F2 - Processing parameters SI 65536 SF 500.2000133 MHz WDW EM SSB LB 0.30 Hz GB PC 1.00 ======== CHANNEL f1 ======== SFO1 500.2030889 MHz NUC1 1H P1 10.00 usec PLW1 22.00000000 W F2 - Acquisition Parameters Date_ 20170323 Time 11.01 INSTRUM spect PROBHD mm PABBO BB/ PULPROG zg30 TD 65536 SOLVENT CDCl3 NS 16 DS SWH 10000.000 Hz FIDRES 0.152588 Hz AQ 3.2767999 sec RG 198.57 DW 50.000 usec DE 6.50 usec TE 303.1 K D1 1.00000000 sec TD0 Current Data Parameters NAME 13TAI_CP8 EXPNO PROCNO PH L C 1.543 7.7 1.07 7.633 7.631 7.6 7.5 7.377 7.372 7.4 1.06 7.3 7.2 7.1 7.088 7.086 7.085 7.083 1.07 7.0 6.9 6.8 6.7 6.694 6.689 1.05 7.259 CP8-CDCl3-1H ppm F2 - Processing parameters SI 65536 SF 500.2000133 MHz WDW EM SSB LB 0.30 Hz GB PC 1.00 ======== CHANNEL f1 ======== SFO1 500.2030889 MHz NUC1 1H P1 10.00 usec PLW1 22.00000000 W F2 - Acquisition Parameters Date_ 20170323 Time 11.01 INSTRUM spect PROBHD mm PABBO BB/ PULPROG zg30 TD 65536 SOLVENT CDCl3 NS 16 DS SWH 10000.000 Hz FIDRES 0.152588 Hz AQ 3.2767999 sec RG 198.57 DW 50.000 usec DE 6.50 usec TE 303.1 K D1 1.00000000 sec TD0 Current Data Parameters NAME 13TAI_CP8 EXPNO PROCNO PH L C 200 182.07 180 166.60 165.24 162.55 160 135.32 133.28 140 124.53 121.31 120 113.73 108.24 106.82 100 80 77.27 77.02 76.76 148.47 190.86 CP8-CDCl3-C13CPD 56.09 60 40 22.16 20 -0.00 ppm F2 - Processing parameters SI 32768 SF 125.7753883 MHz WDW EM SSB LB 1.00 Hz GB PC 1.00 ======== CHANNEL f2 ======== SFO2 500.2020008 MHz NUC2 1H CPDPRG[2 waltz16 PCPD2 80.00 usec PLW2 22.00000000 W PLW12 0.34375000 W PLW13 0.22000000 W ======== CHANNEL f1 ======== SFO1 125.7879670 MHz NUC1 13C P1 10.00 usec PLW1 88.00000000 W F2 - Acquisition Parameters Date_ 20170323 Time 14.54 INSTRUM spect PROBHD mm PABBO BB/ PULPROG zgpg30 TD 65536 SOLVENT CDCl3 NS 1024 DS SWH 29761.904 Hz FIDRES 0.454131 Hz AQ 1.1010048 sec RG 198.57 DW 16.800 usec DE 6.50 usec TE 303.2 K D1 2.00000000 sec D11 0.03000000 sec TD0 Current Data Parameters NAME 13TAI_CP8 EXPNO PROCNO PH L C 200 190 190.86 180 182.07 170 160 166.60 165.24 162.55 150 140 130 120 110 CP8-CDCl3-C13CPD 148.47 135.32 133.28 124.53 121.31 113.73 108.24 106.82 100 90 80 77.27 77.02 76.76 70 60 56.09 50 40 30 ppm 22.16 PH L C 1.03 1.04 2.35 3.22 1.07 4.12 3.14 2.14 2.52 3.43 3.55 5.44 4.70 9.03 3.22 1.04 1.00 ppm 7.261 5.357 1.862 1.855 1.842 1.835 1.561 1.544 1.534 1.521 1.517 1.507 1.503 1.499 1.491 1.484 1.471 1.466 1.461 1.449 1.440 1.255 1.178 1.162 1.152 1.115 1.108 1.103 1.083 1.077 1.057 1.029 1.010 0.999 0.984 0.958 0.929 0.916 0.905 0.862 0.859 0.853 0.847 0.844 0.830 0.822 0.808 0.797 0.791 0.783 0.780 0.770 0.767 0.699 0.681 -0.000 CP10-CDCl3-1H F2 - Processing parameters SI 65536 SF 500.2000131 MHz WDW EM SSB LB 0.30 Hz GB PC 1.00 ======== CHANNEL f1 ======== SFO1 500.2030889 MHz NUC1 1H P1 10.00 usec PLW1 22.00000000 W F2 - Acquisition Parameters Date_ 20170331 Time 16.10 INSTRUM spect PROBHD mm PABBO BB/ PULPROG zg30 TD 65536 SOLVENT CDCl3 NS 16 DS SWH 10000.000 Hz FIDRES 0.152588 Hz AQ 3.2767999 sec RG 175.34 DW 50.000 usec DE 6.50 usec TE 300.5 K D1 1.00000000 sec TD0 Current Data Parameters NAME 13TAI_CP10 EXPNO PROCNO PH L C 1.7 1.07 1.6 1.5 4.12 3.14 1.4 1.3 1.2 CP10-CDCl3-1H 2.14 2.52 3.43 1.1 3.55 1.0 5.44 4.70 0.9 0.8 9.03 0.7 3.22 ppm 1.670 1.660 1.657 1.647 1.643 1.633 1.589 1.561 1.544 1.534 1.521 1.517 1.507 1.503 1.499 1.491 1.484 1.471 1.466 1.461 1.449 1.440 1.374 1.365 1.354 1.347 1.338 1.282 1.255 1.235 1.189 1.178 1.162 1.152 1.138 1.115 1.108 1.103 1.092 1.083 1.077 1.068 1.057 1.034 1.029 1.010 0.999 0.984 0.958 0.947 0.929 0.916 0.905 0.862 0.859 0.853 0.847 0.844 0.830 0.822 0.808 0.797 0.791 0.783 0.780 0.770 0.767 0.699 0.681 PH L C 5.5 5.4 1.00 5.3 5.357 5.353 5.347 5.299 5.2 5.1 2.3 1.03 5.0 2.2 4.9 1.04 4.8 4.7 2.1 4.6 4.5 2.0 2.35 4.4 CP10-CDCl3-1H 2.316 2.312 2.306 2.302 2.290 2.286 2.280 2.276 2.259 2.254 2.249 2.236 2.232 2.211 2.206 2.032 2.025 2.018 2.006 1.999 1.994 1.980 1.970 1.965 1.960 1.955 1.951 1.869 1.862 1.855 1.849 1.842 1.835 1.823 4.3 1.9 4.2 3.22 4.1 1.8 4.0 3.9 1.7 3.8 1.674 1.670 1.660 1.657 1.647 1.643 1.633 1.07 3.7 ppm 3.6 3.5 1.04 3.546 3.534 3.524 3.515 3.502 ppm PH L C 200 180 160 140.79 140 121.73 120 100 80 60 40 20 ppm 77.27 77.02 76.76 71.84 56.80 56.14 56.09 50.17 45.87 42.35 42.34 39.80 38.87 37.28 36.53 36.16 35.89 33.98 33.73 32.44 31.94 31.70 30.30 29.19 28.26 26.13 24.32 23.10 21.11 20.21 CP10-CDCl3-C13CPD F2 - Processing parameters SI 32768 SF 125.7753893 MHz WDW EM SSB LB 1.00 Hz GB PC 1.40 ======== CHANNEL f2 ======== SFO2 500.2020008 MHz NUC2 1H CPDPRG[2 waltz16 PCPD2 80.00 usec PLW2 22.00000000 W PLW12 0.34375000 W PLW13 0.22000000 W ======== CHANNEL f1 ======== SFO1 125.7879670 MHz NUC1 13C P1 10.00 usec PLW1 88.00000000 W F2 - Acquisition Parameters Date_ 20170401 Time 12.06 INSTRUM spect PROBHD mm PABBO BB/ PULPROG zgpg30 TD 65536 SOLVENT CDCl3 NS 2048 DS SWH 29761.904 Hz FIDRES 0.454131 Hz AQ 1.1010048 sec RG 198.57 DW 16.800 usec DE 6.50 usec TE 301.8 K D1 2.00000000 sec D11 0.03000000 sec TD0 Current Data Parameters NAME 13TAI_CP10 EXPNO PROCNO PH L C 71.84 70 65 60 55 50 45 40 CP10-CDCl3-C13CPD 56.80 56.14 56.09 50.17 45.87 42.35 42.34 35 30 39.80 38.87 37.28 36.53 36.16 35.89 33.98 33.73 32.44 31.94 31.70 30.30 29.19 28.26 26.13 25 20 15 24.32 23.10 21.11 20.21 19.83 19.41 19.05 18.80 18.72 18.27 15.39 12.00 11.88 ppm PH L C 13 12 12.115 12.009 1.00 1.01 11 10 7.833 7.830 7.818 7.815 7.684 7.668 7.658 7.656 7.652 7.300 7.297 7.283 7.281 7.260 7.106 7.104 7.103 7.101 1.14 2.24 1.16 1.10 2.468 3.68 CP11-CDCl3-1H -0.000 ppm F2 - Processing parameters SI 65536 SF 500.2000134 MHz WDW EM SSB LB 0.30 Hz GB PC 1.00 ======== CHANNEL f1 ======== SFO1 500.2030889 MHz NUC1 1H P1 10.00 usec PLW1 22.00000000 W F2 - Acquisition Parameters Date_ 20170330 Time 17.15 INSTRUM spect PROBHD mm PABBO BB/ PULPROG zg30 TD 65536 SOLVENT CDCl3 NS 16 DS SWH 10000.000 Hz FIDRES 0.152588 Hz AQ 3.2767999 sec RG 198.57 DW 50.000 usec DE 6.50 usec TE 303.1 K D1 1.00000000 sec TD0 Current Data Parameters NAME 13TAI_CP11 EXPNO PROCNO PH L C 1.549 7.9 7.8 7.833 7.830 7.818 7.815 1.14 7.7 7.684 7.668 7.658 7.656 7.652 2.24 7.6 7.5 7.4 7.3 7.300 7.297 7.283 7.281 7.260 1.16 7.2 7.1 7.106 7.104 7.103 7.101 1.10 CP11-CDCl3-1H ppm F2 - Processing parameters SI 65536 SF 500.2000134 MHz WDW EM SSB LB 0.30 Hz GB PC 1.00 ======== CHANNEL f1 ======== SFO1 500.2030889 MHz NUC1 1H P1 10.00 usec PLW1 22.00000000 W F2 - Acquisition Parameters Date_ 20170330 Time 17.15 INSTRUM spect PROBHD mm PABBO BB/ PULPROG zg30 TD 65536 SOLVENT CDCl3 NS 16 DS SWH 10000.000 Hz FIDRES 0.152588 Hz AQ 3.2767999 sec RG 198.57 DW 50.000 usec DE 6.50 usec TE 303.1 K D1 1.00000000 sec TD0 Current Data Parameters NAME 13TAI_CP11 EXPNO PROCNO PH L C 200 182.03 180 162.76 162.46 160 120 136.97 133.70 133.33 124.58 124.39 121.38 119.95 115.92 113.78 140 100 80 77.27 77.02 76.77 149.37 192.59 CP11-CDCl3-C13CPD 60 40 22.27 20 -0.00 ppm F2 - Processing parameters SI 32768 SF 125.7753892 MHz WDW EM SSB LB 1.00 Hz GB PC 1.40 ======== CHANNEL f2 ======== SFO2 500.2020008 MHz NUC2 1H CPDPRG[2 waltz16 PCPD2 80.00 usec PLW2 22.00000000 W PLW12 0.34375000 W PLW13 0.22000000 W ======== CHANNEL f1 ======== SFO1 125.7879670 MHz NUC1 13C P1 10.00 usec PLW1 88.00000000 W F2 - Acquisition Parameters Date_ 20170401 Time 14.27 INSTRUM spect PROBHD mm PABBO BB/ PULPROG zgpg30 TD 65536 SOLVENT CDCl3 NS 2048 DS SWH 29761.904 Hz FIDRES 0.454131 Hz AQ 1.1010048 sec RG 198.57 DW 16.800 usec DE 6.50 usec TE 301.9 K D1 2.00000000 sec D11 0.03000000 sec TD0 Current Data Parameters NAME 13TAI_CP11 EXPNO PROCNO PH L C 195 192.59 190 185 182.03 180 175 170 165 160 155 CP11-CDCl3-C13CPD 162.76 162.46 150 149.37 145 140 136.97 135 133.70 133.33 130 125 124.58 124.39 120 121.38 119.95 115 ppm 115.92 113.78 PH L C ...BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐỖ MẠNH TRUNG NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT, THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ TÁC DỤNG KHÁNG KHUẨN CỦA CÂY MUỒNG LÙN (Cassia pumila Lamk. ) LUẬN VĂN... tiềm muồng lùn kho tàng thuốc Việt Nam, tiến hành đề tài Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học tác dụng kháng khuẩn muồng lùn Cassia pumila Lamk. ” với mục tiêu sau: Mô tả đặc điểm thực. .. pumila Lamk. ) .6 1.2 THÀNH PHẦN HÓA HỌC 1.2.1 Thành phần hóa học số loài thuộc chi Cassia 1.2.2 Các nghiên cứu thành phần hóa học loài muồng lùn Cassia pumila Lamk 1.3 TÁC