Trắc nghiệm, bài giảng pptx các môn chuyên ngành Y dược hay nhất có tại “tài liệu ngành Y dược hay nhất”; https://123doc.net/users/home/user_home.php?use_id=7046916. Slide kiểm nghiệm seminar về sắc ký hiện đại ppt dành cho sinh viên ngành Y dược. Trong bộ sưu tập có trắc nghiệm kèm đáp án chi tiết các môn, giúp sinh viên tự ôn tập và học tập tốt môn kiểm nghiệm seminar về sắc ký hiện đại bậc cao đẳng đại học ngành Y dược và các ngành khác
ỨNG DỤNG SẮC KÝ LỎNG HIỆN ĐẠI XÁC ĐỊNH CÁC CHẤT CHUYỂN HÓA BẰNG KỸ THUẬT UPLC/QTOF-MS TRONG ĐÁNH GIÁ CHẤT LƯỢNG SẢN PHẨM CHẾ BIẾN TỪ NHÂN SÂM ĐẶT VẤN ĐỀ Việc đánh giá chất lượng sâm chế biến có vai trị quan trọng (thực phẩm dược phẩm) Kỹ thuật đánh giá: UPLC/Đầu dò khối phổ (MS/MS) (UPLC-QTOF/MS) Phương pháp xác định chất chuyển hóa Phương pháp phân tích - PCA (Phân tích thành phần chính) - S-plot Đối tượng: - Hồng sâm - Bạch sâm - Hắc sâm - Sâm Taegeuk 01 Tổng quan 02 Trang thiết bị phương pháp 03 Kết 04 Bàn luận 05 Kết luận TỔNG QUAN Các phương pháp chế biến sâm 01 02 03 Bạch sâm Phơi nhân sâm tươi ánh sáng mặt trời Sâm Taegeuk Đun nóng sâm tươi nhiệt độ 80-95 oC 20−25 phút trước sấy khô 03 04 Hồng sâm Hấp 95−100 oC 2−3 h, sau loại nước Hắc sâm Hấp WG chín chu kỳ 95−100 oC, 2−3 h TỔNG QUAN Các phương pháp chế biến sâm TỔNG QUAN Sau chế biến, thành phần chất chuyển hóa có thay đổi Định tính, định lượng: Có khác Tác động dược lý: Khác (BG > WG RG) Do đó, điều quan trọng cần phải đánh giá mức độ Ginsenosid để kiểm soát chất lượng TỔNG QUAN Các phương pháp áp dụng phân tích Đầu dị UV Phổ cộng hưởng từ hạt nhân NMR HPLC Đầu dò tán xạ bay (ELSD) Khối phổ (MS) Hiện nay, UPLC/QTOF-MS: Chế độ qt tồn => Hiệu để tìm kiếm hồ sơ hóa Ginsenosid, chất chuyển hóa khác hỗn hợp phức tạp TỔNG QUAN Các phân tích đa biến sử dụng PCA Cho biết khác biệt tồn mẫu OPLS-DA Xác định hợp chất chuyển hóa Cách tiếp cận chất chuyển hóa xây dựng tốt kết hợp với phân tích đa biến hữu ích cho việc đánh giá chất lượng chế phẩm nhân sâm khác, chẳng hạn TG BG (trước nghiên cứu) 2.TRANG THIẾT BỊ VÀ PHƯƠNG PHÁP Dung mơi hóa chất Các chất chuẩn Dùng cho HPLC Ginsenosid Nước Acetonitril Methanol Acid Formic Tự phân lập Chế phẩm nhân sâm WG RG TG BG 10 2.TRANG THIẾT BỊ VÀ PHƯƠNG PHÁP Chuẩn bị mẫu: Rễ rễ bên có đường kính tương đồng trung bình 2,1- 2,5 cm và 0,6 -1,1 cm Rễ loại bỏ Lọc (0,22 µm) Rễ xử lý Nghiền mẫu < 0,5 mm Ly MeOH 70% (200mg/ 2ml) Máy trộn Đồng hóa mẫu Easy to change colors, photos and Text You can simply tâm(13500 rpm) impress your audience and add a unique zing and appeal to your Presentations Siêu âm 30 phút (50 oC) 11 2.TRANG THIẾT BỊ VÀ PHƯƠNG PHÁP Chương trình rửa giải Gradient Thời gian (phút) Dung mơi A (%) Dung môi B (%) 0-0,5 85 15 80 20 80 20 13 70 30 23 65 35 24 62 38 27 40 60 31 10 90 32 85 15 35 85 15 13 2.TRANG THIẾT BỊ VÀ PHƯƠNG PHÁP Mẫu sau phân tách UPLC dẫn qua đầu dò quang phổ khối Waters Xevo G2-S QTOF MS (Waters Corp, Milford, MA, USA) Dữ liệu MS có độ xác cao thu thập từ m/z 100-2500 Da chế độ ion âm Độ xác LC / MS xác định hệ số biến thiên (CV) cho RT (0,1%) cường độ peak (7,9%) 14 2.TRANG THIẾT BỊ VÀ PHƯƠNG PHÁP UNify 1.8 (Waters Corp Milford, MA, USA) Cường độ ion chuẩn hóa giá trị RT, m/z diện tích pic, phần tích điện, adduct ion mảnh vỡ tự động chỉnh nhóm lại Dữ liệu tập trung vào trung bình áp vào biểu đồ Pareto trước PCA, OPLS-DA Dữ liệu ba chiều, bao gồm số cực đại (cặp RT-m / z), diện tích pic chuẩn hóa tên mẫu, sau xuất sang phần mềm EZinfo 3.0.3 (UMETRICS) để phân tích đa biến PCA OPLS-DA 15 KẾT QUẢ Hồ sơ hóa chất chuyển hóa sản phẩm nhân sâm chế biến UPLC-QTOF / MS WG,TG, RG,BG Methanol 70% Dịch chiết chứa Ginsenosid UPLC-QTOF/MS Chế độ: Quét ion âm UPLC tách hiệu chất chuyển hóa khác 30 phút Các cường độ số đỉnh khác tùy thuộc vào mẫu riêng biệt 16 KẾT QUẢ Hồ sơ hóa chất chuyển hóa sản phẩm nhân sâm chế biến UPLC-QTOF / MS Sắc kí đồ thể Cường độ đỉnh (BPI) sắc ký chất chuyển hóa khác (A) bạch sâm, (B) sâm Tae-geuk, (C) hồng sâm (D) hắc sâm 17 KẾT QUẢ Phân tích đa biến để phân biệt chế phẩm nhân sâm UPLC-QTOF/MS Mỗi tập liệu xử lý với phần mềm UNIFY Hồ sơ chuyển hóa WG (n = 10) TG (n = 10) RG (n = 10) BG (n = 10) PCA Trực quan hóa xu hướng phân cụm bốn sản phẩm 18 KẾT QUẢ Phân tích đa biến để phân biệt bốn chế phẩm nhân sâm Biểu đồ điểm phân tích thành phần (PCA) (B) biểu đồ tải tập liệu chuyển hóa chế phẩm từ nhâm sâm Trong sơ đồ tải PCA, điểm xác định sau: ginsenosid (a) Rg3, (b) Rg5, (c) Rk1, (d) Rd, (e) RC, (f) Rb2, (g) Rb1, (h) Rg1, (i) Re, (j) M-RC, (k) M-Rb2, (l) M-Rb1 R2X [1] = 0,9443 R2X [2] = 0,02803 19 KẾT QUẢ Phân tích đa biến để phân biệt bốn chế phẩm nhân sâm OPLS-DA thực để phân biệt TG với RG, TG với BG RG với BG, theo thứ tự Phân tích S-plot thực để chọn biến quan trọng góp phần phân biệt chúng Trong S-plot, điểm cho thấy cặp m/z-RT phân tử 20 KẾT QUẢ Phân tích đa biến để phân biệt bốn chế phẩm nhân sâm S-plot (A) bạch sâm (WG) với sâm Tae-geuk (TG) (R2:96%, Q2:92%) (B) WG với hồng sâm (RG) (R2:95%, Q2:92%) (C) WG với hắc sâm (BG) (R2:94%, Q2:91%) 21 KẾT QUẢ Định lượng Ginsenosid khác từ chế phẩm nhân sâm Hàm lượng 39 ginsenosid từ sản phẩm chế biến từ P ginseng: bạch sâm, sâm Tae-geuk, hồng sâm, hắc sâm Đơn vị mg/g 22 BÀN LUẬN PP sử dụng: pp chuyển hóa (metabolomics) dựa UPLC-QTOF/MS Phân tích liệu: PCA OPLS-DA PCA: dùng để tách nhóm (vd tách mẫu khác hồn tồn mẫu cịn lại), mẫu có thành phần chất chuyển hóa tương tự phân tán gần nhau, mẫu có chất chuyển hóa khác tách OPLS-DA: khơng tách mẫu PCA được, so sánh mẫu không khác biệt Trong S-plot, điểm chất chuyển hóa đóng góp lớn đến phương sai nhóm, vẽ xa dọc theo trục x trục y 23 4.BÀN LUẬN Nghiên cứu chứng minh được: Thành phần hàm lượng chất chuyển hóa loại nhân sâm khác trình chế biến Dựa vào S-plot, xác định thành phần đặc trưng, thường có mặt bốn sản phẩm nhân sâm, sau: WG (M-Rb1, M-Rb2, M-Rc, Re, Rg1), TG (Rb2, Rc, Rd, Re,Rg1, hợp chất chưa biết), RG (Rb1, Rb2, Rc, Rd, Re, Rg1) BG (Rd, Rk1, Rg5, Rg3) 24 KẾT LUẬN Nghiên cứu chứng minh tiện ích phương pháp chuyển hóa cho đánh giá chất lượng kiểm soát sản phẩm nhân sâm chế biến Trong tương lai, phương pháp dùng để đánh giá sản phẩm nhân sâm chế biến sản xuất khơng từ rễ, mà cịn phận khác chẳng hạn lá, thân 25 TÀI LIỆU THAM KHẢO • Lee, J.W.; Ji, S.-H.; Choi, B.-R.; Choi, D.J.; Lee, Y.-G.; Kim, H.-G.; Kim, G.-S.; Kim, K.; Lee, Y.-H.; Baek, N.-I.; Lee, D.Y (2018), “UPLC-QTOF/MS-Based Metabolomics Applied for the Quality Evaluation of Four Processed Panax ginseng Products”, Molecules, 23, 2062 • Wiklund, S (2008), “Multivariate Data Analysis for Omics” • Moco, S., Bino, R J., Vos, R C H De, & Vervoort, J (2007), “Metabolomics technologies and metabolite identification”, TrAC Trends in Analytical Chemistry, 26(9) 26 Cảm ơn ý lắng nghe! 27 ... VẤN ĐỀ Việc đánh giá chất lượng sâm chế biến có vai trị quan trọng (thực phẩm dược phẩm) Kỹ thuật đánh giá: UPLC/Đầu dò khối phổ (MS/ MS) (UPLC-QTOF /MS) Phương pháp xác định chất chuyển hóa Phương... QUẢ Hồ sơ hóa chất chuyển hóa sản phẩm nhân sâm chế biến UPLC-QTOF / MS Sắc kí đồ thể Cường độ đỉnh (BPI) sắc ký chất chuyển hóa khác (A) bạch sâm, (B) sâm Tae-geuk, (C) hồng sâm (D) hắc sâm 17... QUẢ Định lượng Ginsenosid khác từ chế phẩm nhân sâm Hàm lượng 39 ginsenosid từ sản phẩm chế biến từ P ginseng: bạch sâm, sâm Tae-geuk, hồng sâm, hắc sâm Đơn vị mg/g 22 BÀN LUẬN PP sử dụng: pp chuyển