SEMINAR định lượng quercetin bằng phương pháp HPLC (dược PHÂN TÍCH SLIDE)

ĐỀ TÀI Định lượng Quercetin phương pháp HPLC BỐ CỤC ĐẶT VẤN ĐỀ TỔNG QUAN PHƯƠNG PHÁP THỰC NGHIỆM NỘI DUNG THỰC NGHIỆM KẾT LUẬN & ĐỀ XUẤT ĐẶT VẤN ĐỀ Flavonoid nhóm hợp chất lớn thường gặp thực vật Được khám phá nhà sinh hóa tiếng Albert Szent – Gyorgyi Những tác dụng sinh học Flavonoid tìm hiểu đưa vào sử dụng để phòng chữa bệnh cho người cách rộng rãi Quercetin Flavonoid, nghiên cứu có khả làm giảm nguy mắc bệnh tim mạch, ngăn chặn phát triển bệnh ung thư, chống dị ứng giảm đau cho bệnh gout… ĐẶT VẤN ĐỀ Việc xác định hàm lượng Quercetin nguyên liệu thực phẩm chức cần thiết Tuy nhiên, nước ta chưa có phương pháp định lượng Quercetin thức tiêu chuẩn ngành quốc gia Mục tiêu: Xây dựng qui trình kỹ thuật định lượng Quercetin nguyên liệu phương pháp HPLC Đánh giá phương pháp xây dựng theo tiêu phương pháp đinh lượng TỔNG QUAN ĐỊNH NGHĨA TÍNH CHẤT LÝ HĨA  Bột mịn, màu vàng chói  Tan nước dung môi hữu phân cực Công thức Quercetin Tên khoa học: 3, 3’ ,4’ ,5, – penta hydroxy flavon Tên khác: 3’, 4’, 5, – tetra hydro flavon – 3- ol  Nhiệt độ nóng chảy: 314 C TỔNG QUAN NGUỒN GỐC & ĐIỀU CHẾ  Nguồn gốc:  Cách điều chế Quercetin bán tổng hợp:  Tự nhiên: Quercetin có táo, hành tây, tỏi, rượu vang đỏ, cải hoa, súp lơ, cải bắp,…  Bán tổng hợp: Quercetin bán tổng hợp cách thủy phân Rutin  Tổng hợp cách đun hồi lưu với dung dịch HCl 5%  Thủy phân dung dịch H2SO4 2% PHƯƠNG PHÁP THỰC NGHIỆM NGUYÊN LIỆU PHƯƠNG PHÁP THỰC NGHIỆM THIẾT BỊ - DỤNG CỤ           Máy quang phổ UV – VIS lamda EZ 210 Máy siêu âm Sonorex Máy đo pH Meter 3305 – Jenway Máy lọc chân khơng Satorius Cần phân tích metler AB 204 có độ xác 0.1 mg Bình định mức loại: 10ml, 20ml, 100ml Cốc có mơ loại 100ml, 200ml, 500ml Pipet xác loại, đũa thủy tinh, màng lọc 0.45μm Bơm tiêm, lọ đựng mẫu Tủ sấy PHƯƠNG PHÁP THỰC NGHIỆM THIẾT BỊ - DỤNG CỤ 1: Bình chứa pha động 2: Bộ phận khử khí 3: Bơm cao áp 4: Bộ phận tiêm mẫu 5: Cộ sắc ký (pha tĩnh) 6: Đầu dò  7: Hệ thống máy tính có phần mềm ghi nhận tín hiệu, xử lý liệu điều khiển hệ thống 8: In liệu.  Hệ thống sắc kí lỏng hiệu cao (HPLC) PHƯƠNG PHÁP THỰC NGHIỆM HÓA CHẤT Quercetin: chất chuẩn – hàm lượng 98.0%, Rutin chuẩn – hàm lượng 98.2% Viện đo lường chất lượng sản xuất Acid phosphoric đặc (H3PO4) (PA) Muối Kali dihdrophosphat (KH2PO4) (PA) Methanol, acetonitril dùng cho HPLC (hãng Merk/ Prolabor) Nước cất lần dùng cho HPLC PHƯƠNG PHÁP THỰC NGHIỆM PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Tham khảo phương pháp định lượng Quercetin công bố Tham khảo phương pháp định lượng Quercetin HPLC Dựa vào công thức cấu tạo, tính chất hóa lý Quercetin điều kiện thực nghiệm nước ta để xây dựng quy trình kỹ thuật định lượng Quercetin phương pháp HPLC Bằng thực nghiệm nghiên cứu điều kiện tiến hành để xây dựng phương pháp tiến hành NỘI DUNG THỰC NGHIỆM NGUYÊN TẮC LỰA CHỌN Chọn phương pháp sắc ký: Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao pha đảo Chọn cột sắc ký: Sử dụng cột Nucleosil (250 x 4mm, 5μm) Chọn pha động: Pha động thông dụng acetonitril, methanol, nước + acid phosphoric (H3PO4) Chọn bước sóng: Quercetin có khả hấp phụ quang phổ tử ngoại, có đỉnh hấp thụ cực đại vùng 350 – 385 nm (băng I), Quercetin có đỉnh hấp thụ vùng 250 – 280 nm (băng II) NỘI DUNG THỰC NGHIỆM Khảo sát chọn bước sóng thích hợp KHẢO SÁT Khảo sát chọn thành phần pha động tốc độ dòng Phổ hấp thu Quercetin NỘI DUNG THỰC NGHIỆM CÁCH TIẾN HÀNH Chuẩn bị mẫu thử; mẫu chuẩn pha động     Dung dịch thử Dung dịch chuẩn (đối chiếu) Mẫu trắng Pha động Chương trình sắc ký NỘI DUNG THỰC NGHIỆM CÁCH TIẾN HÀNH   Tính kết At Ae : diện tích mẫu thử tương ứng mẫu thử mẫu chuẩn (mAU.min) mt me : hàm lượng tương ứng mẫu thử mẫu chuẩn (mg) p: hàm lượng % ghi nhãn Quercitin chuẩn NỘI DUNG THỰC NGHIỆM ĐÁNH GIÁ PHƯƠNG PHÁP Thử tính thích hợp hệ thống Tính xác Tính tuyến tính Tính Tính đặc hiệu NỘI DUNG THỰC NGHIỆM KẾT QUẢ ĐÁNH GIÁ  Kết thực nghiệm xử lý thống kê cho thấy phương pháp xây dựng đáp ứng đầy đủ tiêu phương pháp định lượng  Hệ thống HPLC mà ta sử dụng phù hợp đảm bảo ổn định cho phép phân tích định lượng Quercetin  Phương pháp định lượng Quercetin nguyên liệu xác có độ xác cao  Giá trị trung bình tỷ lệ thu hồi lại là: 99.44%, độ lệch chuẩn tương đối RSD = 0.174, không mắc sai số tỷ lệ không mắc sai số hệ thống  Tính tuyến tính khảo sát khoảng nồng độ rộng cho thấy có phụ thuộc tuyến tính chặt chẽ nồng độ dung dịch diện tích peak Quercetin KẾT LUẬN & ĐỀ XUẤT KẾT LUẬN  Đã xây dựng chương trình định lượng Quercetin phương pháp HPLC đơn giản, dễ thực hiện,…  Xác định hàm lượng Quercetin nguyên liệu Liên hiệp khoa học sản xuất cơng nghệ sản xuất : mẫu có hàm lượng 98,43%, mẫu có hàm lượng 80,27% (sản phẩm khô) KẾT LUẬN & ĐỀ XUẤT ĐỀ XUẤT Tiến hành nghiên cứu sản xuất xác định hàm lượng Quercetin, xây dựng mẫu chuẩn Quercetin Việt Nam Nghiên cứu áp dụng phương pháp đo quang định lượng Quercetin so sánh với phương pháp định lượng Quercetin phương pháp HPLC dịch… Tiếp tục nghiên cứu khảo sát để định lượng Quercetin chế phẩm chứa Quercetin viên nén, viên nang, dạng dung TÀI LIỆU THAM KHẢO Bộ y tế (2002), Dược điển Việt Nam III, NXB y học Hà Nội Bộ mơn hóa phân tích, Hóa phân tích tập (2006), Trường Đại học Dược Hà Nội, tr.173-209 Bộ môn dược liệu, Bài giảng Dược liệu tập I (2004), Đại học Hà Nội, tr 259-289 Công ty TNHH Dược phẩm Đại y, Tiêu chuẩn sở Cao Bạch Hoàng Thị Kim Dung, Nguyễn Cửu Khoa, Nguyễn Ngọc Hạnh, Nguyễn Thị Thu Hương, Hồ Việt Anh (2006), “So sánh hoạt tính chống oxy hóa số flavonoid ( dạng glucosid genin ) từ hoa hịe vỏ qt”, Tạp chí Dược liệu, Tập 11, số 5, tr.187 Nguyễn Văn Đậu (2001), “Đóng góp vào việc nghiên cứu flavonoid nụ hoa hịe”, Tạp chí Dược học – số 8, tr.13-14 https://en.wikipedia.org/wiki/Quercetin https://vi.wikipedia.org/wiki/Quercetin Thanks for your watching!!! ... thấy phương pháp xây dựng đáp ứng đầy đủ tiêu phương pháp định lượng  Hệ thống HPLC mà ta sử dụng phù hợp đảm bảo ổn định cho phép phân tích định lượng Quercetin  Phương pháp định lượng Quercetin. .. áp dụng phương pháp đo quang định lượng Quercetin so sánh với phương pháp định lượng Quercetin phương pháp HPLC dịch… Tiếp tục nghiên cứu khảo sát để định lượng Quercetin chế phẩm chứa Quercetin. .. cho HPLC (hãng Merk/ Prolabor) Nước cất lần dùng cho HPLC PHƯƠNG PHÁP THỰC NGHIỆM PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Tham khảo phương pháp định lượng Quercetin công bố Tham khảo phương pháp định lượng Quercetin