SEMINAR xác định hàm lượng vitamin b2 trong thực phẩm bằng phương pháp HPLC (dược PHÂN TÍCH SLIDE)

Chuyên đề: Xác định hàm lượng vitamin B2 thực phẩm phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao năng( HPLC) NỘI DUNG I Đặt vấn đề II Đối tượng nghiên cứu phương pháp nghiên cứu Tính chất hóa lý vitamin B2 Ảnh hưởng vitamin B2 sức khỏe người Chuẩn bị dụng cụ, thiết bị hóa chất 3.1 Chuẩn bị dụng cụ thiết bị 3.2 Chuẩn bị hóa chất Điều kiện quy trình trình thực 4.1 Điều kiện quy trình 4.2 Quá trình thực Tiến hành phân tích máy III Tính tốn kết IV Kết luận I ĐẶT VẤN ĐỀ - Có vai trò quan trọng sức khỏe người Vitamin Theo FAO/OMS : 1000 B2 có nhiều trong: ngũkcal cần có 0,55mg vitamin B2 cốc, rau xanh, đậu loại, thịt, - Giá trị vit B2( mg) trung bình phần Việt Nam : trứng, sữa, tim, thận, gan, lách 0,45 ( 1985), 0,36 ± 0,07( 1990), 0,53 ± 0,30( 2000), 0,72 ± 0,38( 2010) => Nếu chế độ ăn không cân đối dẫn đến thiếu, thừa Để nhiều ngăn ngừa trạng thừa dược vit B2phẩm tốt sung chọn thực => ngườitình chọn cáchthiếu sữ dụng để bổ phẩm phù hợp Phân tích để đáp ứng nhu cầu bảo vệ sức khỏe người II ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Tính chất hóa lý Vitamin B2( Riboflavin), CT: C17H20N4O6 - M=374,4 tinh thể nhỏ, hình kim, màu vàng da cam, t◦nc = 292◦C - Vị đắng, tan tốt rượu nước không tan dung môi hữu cơ: benzen, ete… - Bền với nhiệt, dung dịch acid chất chống oxy hóa - Trong thể người dể bị photphoryl hóa - Kém bền môi trường kềm ánh sáng=> phân tích cần làm điều kiện bóng tối or ánh sáng đỏ 2 Ảnh hưởng đến sức khỏe người Khi Thiếu: - Toàn thân mệt mỏi, trẻ chậm lớn, tiêu hóa có vấn đề, nứt mơi, viêm niêm mạc miệng lưỡi, sưng đau cổ họng - Mắt xuất ngứa, rát bỏng, sợ ánh sáng, chảy nước mắt Khi thừa: - Dùng liều gây chuột rút, ảnh hưởng đến thai nhi - Thải qua đường nước tiểu, (1 thải qua phân)=> sai lệch xét nghiệm nước tiểu Dụng cụ, thiết bị, hóa chất 3.1 Chuẩn bị dụng cụ, thiết bị: - Hệ thống sắc ký lỏng cao áp với detector huỳnh quang FL detector PDA - Cân phân tích độ xác 0,0001g - Cân kỹ thuật độ xác 0,01g - Bếp đun cách thuỷ - Máy đo pH - Bình nón 250 ml - Phễu lọc - Bình định mức 100, 200 ml - Lọ thuỷ tinh nâu nút nhám loại 50ml, 100 - Bình định mức cỡ - Pipet cỡ 10,20 ml 3.2 Chuẩn bị hóa chất:  Hoá chất thuốc thử sử dụng loại tinh khiết PA - Dung  Cândịch 0,0250g HCl 1N chuẩn vitaminB2 dạng riboflavin cho vào bình định mức 250ml, hồ tan pha lỗng tới vạch mức -Dung nước.mơi Methanol (Merck) Dung 0,05M Dung dịch dịch CH3COONa chuẩn làm việc vitamin B2 nồng độ 50, 25, 10, pha khi(Prolabo) dùng -5 ppm Men amilase - Acid acetic (Merck) - Dung dịch vitamin B2 chuẩn gốc 100ppm: Điều kiện quy trình trình thực 4.1 Điều kiện quy trình Đựng mẫu bình thủy tinh màu nâu Điều kiện chạy sắc ký: - Chạy sắc ký với detector FL bước sóng kích thích 422 bước sóng phát xạ 522nm - Dung mơi pha động Pha động: CH3COONa 0,05M : MeOH = 70:30 (V/V) - Cột sắc ký pha ngược C18 - Tốc độ dòng 1ml/phút - Nhiệt độ phòng - Điều kiện chạy sắc ký với detector PDA bước sóng 254nm - Dung môi Pha động H2O: MeOH: aceic acid tỷ lệ 45: 65: 0,1(V/V/ - Tốc độ dòng 0,8 ml/ phút - Cột RP 18 4.2 Quá trình thực hiện: * Chiết vitamin B2 từ thực phẩm * Xử lý mẫu * Tiến hành - Cân xác khoảng 0,1- 10g mẫu cho vào bình nón 250 ml - Thêm vào bình 10 ml HCl 1N 90 ml nước - Thuỷ phân nồi cách thuỷ 1000C - Chỉnh pH dịch thuỷ phân đến pH=4,5 dung dịch natri acetat 2,5M - Thêm vào bình 0,1g me Amilasen - Đặt bình vào tủ ấm ủ 370C 18 - Định mức dung dịch đến 200ml 250 ml nước cất lọc - Dịch lọc ẫu chuẩn bơm vào HPLCm Tiến hành phân tích máy Giới hạn phát hiện: 0.02 ng Nhận biết cách so sánh thời gian lưu pic sắc phổ thu dung dịch mẫu thử dung dịch chuẩn III TÍNH TỐN KẾT QUẢ Xây dựng đường chuẩn Sắc kí đồ Cần phải xây dựng qua điểm X: => cần tính điểm chuẩn nằm khoảng tuyến Y: độ hấp thụ tính 1: 6,380 vitamin B2 Nồng độ dung dịch chuẩn: 0,5, 1, 5, 10, 20…mcg/ml => Máy lập đường chuẩn Hàm lượng vitaminB2: X(mcg/g)= 200 x Cm / m Trong : 200 thể tích bình định mức dịch sau thuỷ phân (ml) Hoặc dụng: Cm: nồng độ sử mẫu phân tích tính theo đường chuẩn (mcg/ml) A s  V VE mE E hay nồng độ dung dịch chuẩn w 100  A ST ms VA 1000 ms m: Khối lượng mẫu lấy phân tích (g) 2 Độ xác ( độ lặp lại) Chênh lệch tuyệt đối kết không % trường hợp lớn giới hạn lặp lại r Sữa = 14,54 mg/100g r = 1,3048 mg/100g Gan lợn = 105,46 mg/100g r = 5,1104 mg/100g Độ (độ tái lập) Chênh lệch tuyệt đối hai kết không % trường hợp lớn giới hạn tái lập R Sữa bột = 14,54 mg/100g R = 3,0078 mg/100g Gan lợn = 105,46 mg/100g R = 23,5342 mg/100g Đảm bảo chất lượng Sai lệch hai lần thử song song điều kiện so với giá trị trung bình khơng chênh lệch 15% IV KẾT QUẢ Phân tích HPLC thành lập phương pháp lựa chọn để xác định riboflavin thực phẩm Phạm vi phân tích xác định quy trình sử dụng Tài liệu tham khảo TCVN 8975-2011 - Thực Phẩm - Xác Định Vitamin B2 Bằng Sắc Ký Lỏng Hiệu Năng Cao (HPLC) HPLC Determination of Riboflavin in fortified food Roland Bitsch, Irmgard Bitsch https://www.researchgate.net/publication/230547667 http://news.foodnk.com/load/thu_vien_tai_lieu_chuyen_ng anh/xac_dinh_ham_luong_vitamin_b2_trong_thuc_pham_ bang_sac_ky_long/1-1-0-23 THE END ... riboflavin thực phẩm Phạm vi phân tích xác định quy trình sử dụng Tài liệu tham khảo TCVN 8975-2011 - Thực Phẩm - Xác Định Vitamin B2 Bằng Sắc Ký Lỏng Hiệu Năng Cao (HPLC) HPLC Determination of Riboflavin... chất lượng Sai lệch hai lần thử song song điều kiện so với giá trị trung bình khơng chênh lệch 15% IV KẾT QUẢ Phân tích HPLC thành lập phương pháp lựa chọn để xác định riboflavin thực phẩm Phạm... 1: 6,380 vitamin B2 Nồng độ dung dịch chuẩn: 0,5, 1, 5, 10, 20…mcg/ml => Máy lập đường chuẩn Hàm lượng vitaminB2: X(mcg/g)= 200 x Cm / m Trong : 200 thể tích bình định mức dịch sau thuỷ phân (ml)