Đang tải... (xem toàn văn)
Trắc nghiệm, bài giảng pptx các môn chuyên ngành Y dược hay nhất có tại “tài liệu ngành Y dược hay nhất”; https://123doc.net/users/home/user_home.php?use_id=7046916. Slide kiểm nghiệm seminar về sắc ký hiện đại ppt dành cho sinh viên ngành Y dược. Trong bộ sưu tập có trắc nghiệm kèm đáp án chi tiết các môn, giúp sinh viên tự ôn tập và học tập tốt môn kiểm nghiệm seminar về sắc ký hiện đại bậc cao đẳng đại học ngành Y dược và các ngành khác
ĐỊNH TÍNH VÀ ĐỊNH LƯỢNG PHENOLICS TRONG CÁC CÂY LAMIACEAE BẰNG KỸ THUẬT UPLC – DAD – ESI – MS/MS ỨNG DỤNG SẮC KÝ LỎNG HIỆN ĐẠI NỘI DUNG TỔNG QUAN GIỚI THIỆU HÓA CHẤT PHƯƠNG PHÁP TRANG THIẾT BỊ NGHIÊN CỨU KẾT QUẢ BÀN LUẬN TỔNG QUAN Kinh giới Bạc hà băng Oải hương Origanum Majorana L Mentha pulegium L Lavandula officinalis Kỹ thuật chiết xuất có hỗ trợ vi sóng UPLC-DAD-ESI-MS/MS 12 phút Phenolics GIỚI THIỆU Chống lại nhiều bệnh mãn tính: ung thư, lão hóa, tiểu đường bệnh thối hóa HỢP CHẤT PHENOLIC (flavonoid, tannin, acid phenolic…) Chống oxy hóa cách quét gốc tự do, tạo chelat ion kim loại xúc tác GIỚI THIỆU acid ferulic acid rosmarinic acid caffeic acid gallic p-coumaric acid acid vanillic HÓA CHẤT VÀ TRANG THIẾT BỊ Công ty Công ty Sigma (St Louis, MO Aldrich Chemicals Co (Steinheim,Đức) Fluka (Buchs, Thụy Sĩ) Merck (Darmstadt, Đức) Hóa chất Độ tinh khiết apigenin ≥95% naringenin ≥95% morin ≥85% quercetin ≥98% axit caffeic ≥98% rutin ≥94% kaempferol ≥90% axit gallic ≥98% neocuproine Nc metanol ≥99,9% axit formic 98-100% DPPH thuốc thử Folinedom Ciocalteau axit p-coumaric ≥98% axit vanillic ≥97% axit ferulic ≥99% rosmarinic axit ≥96% axit protocatechuic ≥97% sinapic axit ≥98% fisetin ≥99% catechin ≥98% Clorua đồng (II) ≥99,8% ethanol ≥99,8% amoni axetat ≥96% axit syringic ≥96% natri kali tartarate 99% đồng (II) sulfate ≥98% natri cacbonat ≥99% HÓA CHẤT VÀ TRANG THIẾT BỊ TRANG THIẾT BỊ CÔNG TY Máy quang phổ kế Perkin Elmer Lambda 35 UV-Vis Shelton, CT, USA Hệ thống SKL siêu cao áp Milford, MA, USA ETHOS-One Milestone , Shelton, CT, Hoa Kỳ DƯỢC LIỆU Kinh giới Bạc hà băng Oải hương Origanum Majorana L Mentha pulegium L Lavandula officinalis Thành phố Antalya Thành phố Sanlıurfa, Thành phố Isparta Thổ Nhĩ Kỳ Thổ Nhĩ Kỳ Thổ Nhĩ Kỳ Thu hái tháng tháng năm Thu hái giai đoạn trước hoa tháng Tư Thu hái giai đoạn trước hoa tháng Tư 2013 tháng Sáu, 2013 tháng Sáu, 2013 Các mẫu xay nghiền sấy khô nhiệt độ môi trường ( ∼25 ° C) CHUẨN BỊ MẪU MẪU THỬ Mẫu thực vật khô (1,0 g) 15 ml methanol Dịch huyền phù Làm nóng đến 80 ° C: phút Để yên 80 ° C: phút Làm mát: phút Dịch sau chiếu xạ vi sóng Lọc 0,45μm Dịch chiết MẪU CHUẨN o Dung dịch chuẩn polyphenol pha nồng độ 10 mM methanol, giữ -20 C KẾT QUẢ SỰ PHÂN MẢNH PHÂN MẢNH LOẠI NHÓM ACID CARBOXYLIC CỦA ACID PHENOLIC SỰ PHÂN MẢNH K Ế PHÂN MẢNH LOẠI NHÓM METHYL CỦA T ACID PHENOLIC Q U Ả SỰ PHÂN MẢNH PHÂN MẢNH LOẠI RUTINOSE K Ế T Q U Ả PHÂN MẢNH LOẠI GLYCOSIDE SỰ PHÂN MẢNH K Ế T Q U Ả ACID ROSMARINIC https://chemistry.stackexchange.com/questions/66349/what-is-the-molecular-structure-of-the-fragment-ion-m-z-161-of-rosmarinic-acid SỰ PHÂN MẢNH K Ế T Q U Ả Negative ion ESI-MS analysis of natural yellow dye flavonoids-An isotopic labelling study, International Journal of Mass Spectrometry,2008 SỰ PHÂN MẢNH Negative ion ESI-MS analysis of natural yellow dye flavonoids-An isotopic labelling study, International Journal of Mass Spectrometry,2008 Bảng 1: Điều kiện tối ưu để tạo ion sản phẩm hợp chất phenolic Hợp chất K Ế T Q U Ả tR (min) MRM (m/z) Mảnh Thời gian dừng Thế cone (V) Năng lượng va đập (V) Acid gallic 1.04 ± 0.01 168.96 > 124.95 0.02 36 14 Protocatechuic acid 1.79 ± 0.02 152.95 > 108.94 0.02 35 14 Catechin 2.92 ± 0.04 289.06 > 245.09 203.09 (44) 0.02 38 14 Vanillic acid 3.68 ± 0.03 166.99 > 107.98 0.02 32 18 Caffeic acid 3.75 ± 0.03 178.97 > 135.00 0.02 32 18 Syringic acid 4.19 ± 0.02 197.03 > 181.99 122.94 (78) 0.02 30 16 p-Coumaric acid 4.84 ± 0.02 162.97 > 119.49 0.02 25 16 Ferulic acid 5.24 ± 0.02 193.03 > 134.01 178.05 (52) 0.02 32 15 Sinapic acid 5.35 ± 0.02 223.00 > 208.03 163.99 (61) 0.02 34 14 Rutin 6.27 ± 0.02 609.27 > 300.19 271.06 (42) 0.02 65 38 Hesperidin 6.68 ± 0.02 609.28 > 301.10 164.02 (12) 0.02 56 26 Rosmarinic acid 6.93 ± 0.02 359.09 > 160.97 197.00 (59) 0.02 46 22 108.96 (59) 135.00 (21) Fisetin 7.10 ± 0.02 285.08 > 134.98 0.02 52 22 Morin 7.39 ± 0.02 301.06 > 150.98 124.98 (70) 0.02 42 20 Quercetin 8.12 ± 0.01 301.23 > 150.95 0.02 30 26 Naringenin 8.36 ± 0.02 271.05 > 150.98 0.02 54 16 Kaempferol 9.09 ± 0.01 285.04 > 92.90 150.96 (58) 0.02 48 19 Apigenin 9.22 ± 0.01 269.07 > 116.99 150.98 (35) 0.02 54 35 Bảng 2: Kết tính tuyến tính, LOD, LOQ, độ độ xác phương pháp phân tích Hợp chất K Ế T Q U Ả LOD LOQ (ng/mL) (ng/mL) Khoảng tuyến tính (ng/mL) Phương trình tuyến tính Hệ số tương quan (r) RSD% (độ lập lại) RSD% (độ xác REC% trung gian) Acid gallic 1.00 3.30 9.4–1,880 y = 9.90x – 22 0.9997 1.10 2.29 102.9 Protocatechuic acid 0.20 0.66 1.5–1,540 y = 12.09x + 0.9992 1.20 3.22 97.4 Catechin 1.60 5.30 14.5–2,900 y = 3.35x + 12 0.9998 1.02 3.58 109.0 Vanillic acid 1.73 5.71 8.4–1,680 y = 1.04x – 0.9988 0.54 4.02 96.3 Caffeic acid 0.61 2.02 9–1,800 y = 17.65x + 24 0.9998 1.24 1.93 107.0 Syringic acid 0.47 1.54 2–2,000 y = 1.93x + 0.9994 1.37 3.00 99.0 p-Coumaric acid 1.96 6.47 16.4–1,640 y = 2.46x + 11 0.9999 1.17 3.83 96.3 Ferulic acid 0.25 0.83 1.9–1,940 y = 7.20x + 0.9999 0.81 4.10 98.1 Sinapic acid 0.07 0.22 2.2–2,240 y = 6.62x + 0.9999 0.92 2.26 100.9 Rutin 0.50 1.66 6.1–6,100 y = 11.66x + 13 0.9999 0.82 1.93 99.0 Hesperidin 1.17 3.86 30–6,100 y = 10.76x – 28 0.9999 0.78 3.31 92.0 Rosmarinic acid 1.43 4.73 7.2–3,600 y = 3.14x – 10 0.9993 1.98 3.87 99.0 Fisetin 0.02 0.06 2.9–2,800 y = 5.39x + 0.9989 1.30 4.14 97.1 Morin 1.42 4.68 15.1–3,000 y = 2.22x – 0.9996 1.00 2.59 106.0 Quercetin 0.08 0.25 3.4–3,300 y = 5.88x + 0.9990 1.80 3.00 104.5 Naringenin 1.07 3.54 13–2,720 y = 20.14x + 48 0.9990 2.29 2.65 101.5 Kaempferol 2.15 7.10 14.5–2,860 y = 2.09x + 10 0.9993 2.72 4.64 101.0 Apigenin 5.52 18.20 27–2,700 y = 6.77x – 83 0.9989 0.68 1.71 100.5 Bảng 3: Phân tích định lượng hợp chất phenolic dịch chiết thực vật thảo dược (mg / 100 g dw) K Ế T Q U Ả Hợp chất Phenolic Origanum majorana L (mg/100 g) Mentha pulegium L (mg/100 g) Lavandula officinalis (mg/100 g) Gallic acid 0.34 ± 0.08 0.83 ± 0.02 0.30 ± 0.03 Protocatechuic acid 4.56 ± 0.04 5.36 ± 0.03 0.99 ± 0.03 Catechin Không phát Không phát Không phát Vanillic acid 1.37 ± 0.06 1.54 ± 0.02 0.47 ± 0.04 Caffeic acid 24.8 ± 0.3 16.6 ± 0.2 4.05 ± 0.05 Syringic acid 3.12 ± 0.09 5.64 ± 0.13 0.64 ± 0.04 p-Coumaric acid Không phát 1.51 ± 0.28 0.35 ± 0.02 Ferulic acid 0.97 ± 0.05 0.51 ± 0.01 0.36 ± 0.01 Sinapic acid Không phát Không phát Không phát Rutin 10.5 ± 0.2 1.80 ± 0.02 0.66 ± 0.05 Hesperidin Không phát 73.0 ± 0.16 Không phát Rosmarinic acid 1,034 ± 26 791 ± 20 473 ± Fisetin Không phát Không phát Không phát Morin Không phát Không phát Không phát Quercetin 3.81 ± 0.16 0.38 ± 0.02 Không phát Naringenin 5.43 ± 0.10 0.58 ± 0.04 0.36 ± 0.01 Kaempferol Không phát Không phát Không phát Apigenin 31.9 ± 0.7 2.92 ± 0.03 5.35 ± 0.30 TAC, TPC IC50 Các thử nghiệm cho thấy TAC, TPC, IC50 có mối tương quan với Origanum majorana L có khả chống OXH tồn phần cao tổng hàm lượng phenol cao TAC theo loại dung môi chiết BÀN LUẬN Xây dựng phương pháp định tính, định lượng phenol ⇒ ESI quét âm cho thấy nhạy với hợp chất phenol UPLC-DAD-ESI-MS/MS Tổng thời gian 12 phút khả phục hồi tốt, Giới hạn phát polyphenol : 0,02 ng / mL ⇒ Giới hạn phát định lượng thấp dao động từ 92% đến 109% với độ tuyến tính cao (r ≥ 0,9988) ⇒ Cải thiện tổng thời gian phân tích so với nghiên cứu khác BÀN LUẬN BÀN LUẬN al (4) Mentha pulegium # HPLC-UV Proestos et Đều phát lượng lớn rosmarinic acid, apigenin, caffeic acid Lavandua officinalis caffeic acid ferulic acid dịch chiết methanol (6,15) Đều phát lượng lớn apigenin, naringenin, So sánh với nghiên cứu khác ≠ Nghiên cứu Proestos et al (4) Taamalli et al.(14) định Kovatcheva-Apostolova et al (43) Không định lượng catechin # nghiên cứu lượng catechin dược liệu khảo sát Chỉ tìm thấy lượng nhỏ benzoic acid, cinnamic acid (6,15) 6.Areias, F.M., Valentão, P., Andrade, P.B., Moreira, M.M., Amaral, J., Seabra, R.M.; HPLC/DAD analysis of phenolic compounds from lavender and its application to quality control; Journal Of Liquid Chromatography & Related Technologies, (2000); 23: 2563–2572 15.Proestos, C., Sereli, D., Komaitis, M.; Determination of phenolic com- pounds in aromatic plants by RP-HPLC and GC-MS; Food Chemistry, (2006); 95: 44–52 KẾT LUẬ N Cả khảo sát giàu hợp chất phenol có tính chống oxh Những thuộc họ Lamiaceae thành phần giúp bảo vệ tế bào khỏi tổn thương oxy hóa gây gốc tự THANK YOU ... PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU UPLC- DAD- ESI- MS/MS HỆ THỐNG SẮC KÝ Hệ thống Acquity UPLC đầu dò diode array (DAD) kết hợp với quang phổ khối Xevo TQD (phân tích tứ cực kép) trang bị nguồn ESI phun kiểu Z quét... theo loại dung môi chiết BÀN LUẬN Xây dựng phương pháp định tính, định lượng phenol ⇒ ESI quét âm cho thấy nhạy với hợp chất phenol UPLC- DAD- ESI- MS/MS Tổng thời gian 12 phút khả phục hồi tốt, Giới... Mentha pulegium L Lavandula officinalis Kỹ thuật chiết xuất có hỗ trợ vi sóng UPLC- DAD- ESI- MS/MS 12 phút Phenolics GIỚI THIỆU Chống lại nhiều bệnh mãn tính: ung thư, lão hóa, tiểu đường bệnh