Nghiên cứu định lượng levetiracetam trong huyết tương người bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao

BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI HÀ THỊ LIÊN Mã sinh viên: 1101288 NGHIÊN CỨU ĐỊNH LƢỢNG LEVETIRACETAM TRONG HUYẾT TƢƠNG NGƢỜI BẰNG PHƢƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ HÀ NỘI – 2016 BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI HÀ THỊ LIÊN Mã sinh viên: 1101288 NGHIÊN CỨU ĐỊNH LƢỢNG LEVETIRACETAM TRONG HUYẾT TƢƠNG NGƢỜI BẰNG PHƢƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ Người hướng dẫn: PGS.TS Nguyễn Tƣờng Vy ThS Tạ Mạnh Hùng Nơi thực hiện: Trung tâm đánh giá tƣơng đƣơng sinh học - Viện kiểm nghiệm thuốc TW HÀ NỘI - 2016 www.twitter.com/daykemquynhon https://plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com LỜI CẢM ƠN Ơ nhà trường thầy, cô giáo trường Đại học Dược Hà Nội tận tình giảng dạy N Để hoàn thành khóa luận tốt nghiệp dược sĩ đại học Ban giám hiệu H giúp đỡ suốt trình học tập trường Sau thời gian thực đề tài U Y N với nhiều nỗ lực cố gắng, khóa luận hoàn thành lúc xin TP giúp đỡ suốt thời gian thực khóa luận ẠO Trước tiên, với lòng kính trọng biết ơn sâu sắc, xin trân trọng gửi lời cảm Đ www.daykemquynhon.ucoz.com MailBox : nguyenthanhtuteacher@hotmail.com ơn tới PGS.TS Nguyễn Tƣờng Vy Ths Tạ Mạnh Hùng- Giám đốc Trung tâm N G Đánh giá Tương đương sinh học - Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương, H Ư người dành nhiều thời gian tâm huyết hướng dẫn, giúp đỡ suốt TR ẦN trình thực đề tài Tôi chân thành cảm ơn Ban Giám đốc - Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ƣơng B Trung tâm Đánh giá Tƣơng đƣơng sinh học - Viện Kiểm nghiệm thuốc 10 00 Trung ƣơng tạo điều kiện cho thực đề tài Tôi xin tỏ lòng A biết ơn đến toàn thể anh, chị Trung tâm Đánh giá Tương đương sinh học Ó tạo điều kiện giúp đỡ, tận tình giải đáp thắc mắc công việc Í- H hết lòng giúp đỡ suốt trình thực hoàn thành luận văn -L Tôi xin gửi lời cảm ơn tới người thân gia đình tôi, toàn thể bạn ÁN bè, người sát cánh, chia sẻ, động viên giúp đỡ trình học Một lần xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 10 tháng năm 2016 Sinh viên D IỄ N Đ ÀN TO tập nghiên cứu Diễn đàn hỗ trợ giáo dục : Đ/C 1000B Trần Hưng Đạo Tp Quy Nhơn Người sáng lập : Nguyễn Thanh Tuấn - Chủ quản tài nguyên : Nguyễn Thanh Tú Q bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới người quan tâm, hướng dẫn Hà Thị Liên Đóng góp PDF GV Nguyễn Thanh Tú www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial www.twitter.com/daykemquynhon https://plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com Ơ N MỤC LỤC U Y ĐẶT VẤN ĐỀ 1.1.LEVETIRACETAM …………………………………………………… 1.1.1 Công thức cấu tạo tính chất lý hóa………………………………… 1.1.2 Tác dụng dƣợc lý dƣợc động học………………………………… 1.1.3 Chỉ định - chống định……………………………………………… 1.1.4 Một số chế phẩm thị trƣờng……………………………………… 1.1.5 Các phƣơng pháp định lƣợng Levetiracetam………………………… 1.2 SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO…………………………………… 1.2.1 Khái niệm……………………………………………………………… ẠO TP Q CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN ………………………………………………… 10 00 B TR ẦN H Ư N G Đ www.daykemquynhon.ucoz.com MailBox : nguyenthanhtuteacher@hotmail.com 1.2.3 Một số thông số trình sắc ký………………………… A 1.2.2 Nguyên tắc cấu tạo hệ thống HPLC…………………………………… H Ó 1.2.4 Cơ sở lý thuyết việc lựa chọn điều kiện sắc ký…………………… 11 14 1.3 THẨM ĐỊNH PHƢƠNG PHÁP PHÂN TÍCH TRONG DỊCH SINH HỌC 15 1.3.1 Khái niệm……………………………………………………………… 15 1.3.2 Các tiêu thẩm định………………………………………………… 15 TO ÁN -L Í- 1.2.5 Phƣơng pháp định lƣợng HPLC……………………………… ÀN CHƢƠNG 2: NGUYÊN VẬT LIỆU, THIẾT BỊ - NỘI DUNG VÀ 19 D IỄ N Đ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Diễn đàn hỗ trợ giáo dục : Đ/C 1000B Trần Hưng Đạo Tp Quy Nhơn Người sáng lập : Nguyễn Thanh Tuấn - Chủ quản tài nguyên : Nguyễn Thanh Tú N H Trang Đóng góp PDF GV Nguyễn Thanh Tú www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial www.twitter.com/daykemquynhon https://plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com 19 2.1.1 Nguyên liệu, hóa chất, dung môi……………………………………… 19 2.1.2 Dụng cụ, máy móc, thiết bị…………………………………………… 20 Ơ 20 20 2.2.2 Thẩm định phƣơng pháp phân tích…………………………………… 21 2.3 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU……………………………………… 21 2.3.1 Chuẩn bị mẫu huyết tƣơng tự tạo chứa LEVET…………………… 21 2.3.2 Xây dựng phƣơng pháp phân tích…………………………………… 22 N G Đ www.daykemquynhon.ucoz.com MailBox : nguyenthanhtuteacher@hotmail.com ẠO TP Q tƣơng………………………………………………………………………… 23 CHƢƠNG 3: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 28 3.1 XÂY DỰNG PHƢƠNG PHÁP ĐỊNH LƢỢNG LEVET TRONG HT 28 3.1.1 Khảo sát lựa chọn điều kiện sắc ký nội chuẩn………………… 28 B TR ẦN H Ư 2.3.3 Thẩm định phƣơng pháp phân tích………………………………… 32 3.1.3 Quy trình phân tích Levetiracetam huyết tƣơng……………… 33 A 10 00 3.1.2 Khảo sát lựa chọn điều kiện tách chiết Levetiracetam H Ó 3.2 THẨM ĐỊNH PHƢƠNG PHÁP PHÂN TÍCH 34 3.2.2 Đƣờng chuẩn khoảng tuyến tính 36 3.2.3 Giới hạn định lƣợng dƣới (LLOQ) 36 3.2.4 Độ - Độ xác………………………………………………… 37 3.2.5 Tỷ lệ thu hồi 38 3.2.6 Độ ổn định hoạt chất HT…………………………………… 39 CHƢƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 44 4.1 KẾT LUẬN 44 4.2 KIẾN NGHỊ …………………………………………………………… 45 ÀN TO ÁN -L Í- 3.2.1 Tính chọn lọc - đặc hiệu Đ IỄ N D 34 Diễn đàn hỗ trợ giáo dục : Đ/C 1000B Trần Hưng Đạo Tp Quy Nhơn Người sáng lập : Nguyễn Thanh Tuấn - Chủ quản tài nguyên : Nguyễn Thanh Tú U Y 2.2.1 Xây dựng phƣơng pháp HPLC định lƣợng LEVET huyết N H 2.2 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU…………………………………………… N 2.1 NGUYÊN VẬT LIỆU, THIẾT BỊ DÙNG TRONG NGHIÊN CỨU TÀI LIỆU THAM KHẢO Đóng góp PDF GV Nguyễn Thanh Tú www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial www.twitter.com/daykemquynhon https://plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com Hệ số biến thiên (Coefficient of Variation) DĐH Dược động học ĐVTN Động vật thí nghiệm HPLC Sắc ký lỏng hiệu cao Ơ CV (High Performance Liquid Chromatography) Mẫu kiểm soát chất lượng nồng độ cao HQC ẠO www.daykemquynhon.ucoz.com MailBox : nguyenthanhtuteacher@hotmail.com G Đ (High Quality ControlSample) HT Huyết tương IS Nội chuẩn (Internal Standard) LCMS Sắc ký lỏng khối phổ TR ẦN H Ư N (Liquid Chromatography Mass Spectrometry) LLOQ Giới hạn định lượng (Lower Limit of Quantification) 10 LQC Mẫu kiểm soát chất lượng nồng độ thấp 10 00 B (Lower Quality Control sample) A Mẫu kiểm soát chất lượng nồng độ trung bình MQC 12 NTN 13 PA 14 QC Mẫu kiểm soát chất lượng (Quality Control sample) Ó 11 SKĐ Sắc ký đồ 16 SPE Chiết pha rắn (Solid-Phase Extration) 17 TKTW Thần kinh trung ương 18 TĐSH Tương đương sinh học 19 US-FDA Cục quản lý thuốc thực phẩm Mỹ Đ ÀN TO 15 D IỄ N Tinh khiết phân tích (Pure Analysis) ÁN -L Í- H Người tình nguyện Diễn đàn hỗ trợ giáo dục : Đ/C 1000B Trần Hưng Đạo Tp Quy Nhơn Người sáng lập : Nguyễn Thanh Tuấn - Chủ quản tài nguyên : Nguyễn Thanh Tú TP Q U Y N H N DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu, STT Ý nghĩa chữ viết tắt (The United States Food and Drug Administration) 20 UV-VIS Tử ngoại - khả kiến (Ultraviolet - Visible) Đóng góp PDF GV Nguyễn Thanh Tú www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial www.twitter.com/daykemquynhon https://plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com DANH MỤC CÁC BẢNG 1.1 Một số nghiên cứu định lượng LEVET HT 2.1 Các chất chuẩn dùng nghiên cứu 2.2 Các hóa chất dùng nghiên cứu 2.3 Các mẫu HT trắng dùng nghiên cứu 2.4 Các thiết bị dùng nghiên cứu 2.5 Thiết bị HPLC 2.6 Cách chuẩn bị mẫu đường chuẩn HT 2.7 Cách chuẩn bị mẫu QC HT 2.8 Chuẩn bị mẫu QC xác định độ 3.1 Độ mẫu thuộc đường chuẩn 3.2 Kết xác định giá trị LLOQ 37 3.3 Kết thẩm định độ đúng, độ lặp lại ngày 37 3.4 Kết thẩm định độ đúng, độ lặp lại khác ngày 38 3.5 Kết khảo sát tỷ lệ thu hồi LEVET 38 3.6 Kết khảo sát tỷ lệ thu hồi IS 39 3.7 Kết độ ổn định dung dịch IS làm việc thời gian ngắn 39 3.8 Kết độ ổn định dung dịch chuẩn gốc thời gian ngắn 40 3.9 Kết độ ổn định dung dịch chuẩn gốc nhiệt độ 2ºC - 8ºC 40 Ơ 19 20 20 22 22 24 36 41 3.11 Kết độ ổn định mẫu huyết tương thời gian dài 42 3.12 Kết độ ổn định mẫu huyết tương sau xử lý (trong 43 TO ÀN autosampler) D IỄ N Đ 19 Diễn đàn hỗ trợ giáo dục : Đ/C 1000B Trần Hưng Đạo Tp Quy Nhơn Người sáng lập : Nguyễn Thanh Tuấn - Chủ quản tài nguyên : Nguyễn Thanh Tú Í- H Ó A 10 00 B TR ẦN H Ư N G Đ ẠO TP Q U Y N H 19 Kết độ ổn định mẫu huyết tương sau chu kỳ đông - rã 3.10 N Trang -L Nội dung ÁN www.daykemquynhon.ucoz.com MailBox : nguyenthanhtuteacher@hotmail.com Bảng Đóng góp PDF GV Nguyễn Thanh Tú www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial www.twitter.com/daykemquynhon https://plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ Nội dung Trang Công thức cấu tạo levetiracetam 3.1 Phổ hấp thụ UV-VIS LEVET 28 3.2 SKĐ LEVET nội chuẩn amoxicillin 3.3 SKĐ LEVET nội chuẩn atenolol 3.4 SKĐ LEVET nội chuẩn paracetamol 3.5 SKĐ phân tích mẫu chuẩn LEVET với pha động: acetonitril : dung 29 30 Đ 31 SKĐ phân tích mẫu chuẩn LEVET với pha động: acetonitril : dung 31 SKĐ phân tích mẫu chuẩn LEVET với pha động: acetonitril : dung TR ẦN 3.7 H Ư dịch đệm phosphat pH 6,8 tỷ lệ : 94 (tt/tt) 32 SKĐ mẫu HT sau tủa protein ACN 32 3.9 SKĐ mẫu HT sau tủa protein acid HClO4 33 3.10 SKĐ mẫu HT sau chiết lỏng – lỏng với cloroform 33 3.11 SKĐ mẫu HT trắng 34 3.12 SKĐ mẫu HT trắng có chuẩn nội paracetamol 35 3.13 SKĐ mẫu chuẩn LEVET nồng độ 0,25 µg/mL có IS 35 D IỄ N Đ ÀN TO ÁN -L Í- H Ó A 10 00 3.8 B dịch đệm phosphat pH 6,8 tỷ lệ : 96 (tt/tt) Diễn đàn hỗ trợ giáo dục : Đ/C 1000B Trần Hưng Đạo Tp Quy Nhơn Người sáng lập : Nguyễn Thanh Tuấn - Chủ quản tài nguyên : Nguyễn Thanh Tú 29 N 3.6 G www.daykemquynhon.ucoz.com MailBox : nguyenthanhtuteacher@hotmail.com dịch đệm phosphat pH 6,8 tỷ lệ 15 : 85 (tt/tt) ẠO TP Q U Y N H Ơ 1.1 N Hình Đóng góp PDF GV Nguyễn Thanh Tú www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial www.twitter.com/daykemquynhon https://plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com Ơ Động kinh tình trạng bệnh lý não nhiều nguyên nhân khác N ĐẶT VẤN ĐỀ N H gây với bệnh cảnh phức tạp đa dạng Bệnh gặp tuổi, Q kinh giới khoảng 0,5% dân số, thay đổi tùy theo quốc gia, vùng, TP dân tộc Tại Việt Nam khoảng 2% dân số mắc bệnh có đến 60% số ẠO bệnh nhân trẻ em [8] [9] [12] [17] Tổ chức Y tế giới WHO Liên đoàn Đ www.daykemquynhon.ucoz.com MailBox : nguyenthanhtuteacher@hotmail.com Quốc tế chống động kinh ILAE (International League Against Epilepsy) xác định: N G “Động kinh tình trạng tái diễn hai động kinh trở lên cách 24 H Ư giờ, sốt cao nguyên nhân cấp tính khác rối loạn TR ẦN chuyển hóa, ngừng thuốc hay rượu đột ngột gây nên” [17] [23].Bệnh động kinh xem vấn đề thời với chuyên ngành tâm thần thần kinh Mặc dù B nhóm bệnh lý nặng hệ thần kinh nói chung, não nói riêng, nhiên 10 00 điều trị sớm phù hợp, số trường hợp khỏi bệnh chiếm tỷ lệ cao [1] [4] [8] Trên giới, động kinh điều trị bằng thuốc kháng động kinh Ó A phẫu thuật số cá thể [12] Tại Việt Nam số lượng bệnh nhân động kinh H điều trị thành công phương pháp phẫu thuật ít, hầu hết phải dùng -L Í- thuốc kháng động kinh kéo dài Levetiracetam (C8H14N2O2, M =171,19 g/mol) dẫn chất pyrolidin, dùng để ÁN điều trị bệnh động kinh có hiệu Cơ quan quản lý Thuốc thực TO phẩm Mỹ (US-FDA) cấp phép đăng ký lưu hành năm 2008 Levetiracetam Diễn đàn hỗ trợ giáo dục : Đ/C 1000B Trần Hưng Đạo Tp Quy Nhơn Người sáng lập : Nguyễn Thanh Tuấn - Chủ quản tài nguyên : Nguyễn Thanh Tú U Y giới Theo thống kê Tổ chức Y tế Thế giới (WHO), tỷ lệ người mắc bệnh động D IỄ N Đ ÀN (LEVET) có cấu trúc hóa học không giống với thuốc điều trị động kinh khác có thuốc chống co giật thị trường Dược phẩm Việt Nam phí điều trị tương đối cao Để giảm gánh nặng điều trị cho bệnh nhân cộng đồng, số doanh nghiệp dược nước nghiên cứu sản xuất thuốc generic chứa dược chất LEVET Vì vậy, nhu cầu nghiên cứu sinh khả dụng tương đương sinh học thuốc cần thiết để chứng minh thuốc Đóng góp PDF GV Nguyễn Thanh Tú www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial www.twitter.com/daykemquynhon https://plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com generic có hiệu điều trị tương đương với thuốc biệt dược gốc Dựa điều kiện trang thiết bị có tham khảo tài liệu [13] [14] [16] [22], tiến H Ơ phương pháp sắc kỷ lỏng hiệu cao” với mục tiêu xây dựng phương N hành đề tài: “Nghiên cứu định lượng Levetiracetam huyết tương người N pháp phân tích LEVET huyết tương có đủ độ nhạy, độ xác phù hợp TP Q (TĐSH) thuốc chứa hoạt chất levetiracetam Để đạt mục tiêu này, đề tài thực nội dung: ẠO www.daykemquynhon.ucoz.com MailBox : nguyenthanhtuteacher@hotmail.com Khảo sát, xây dựng phương pháp định lượng levetiracetam huyết tương G Đ phương pháp HPLC D IỄ N Đ ÀN TO ÁN -L Í- H Ó A 10 00 B TR ẦN H Ư N Thẩm định phương pháp xây dựng theo quy định US-FDA Diễn đàn hỗ trợ giáo dục : Đ/C 1000B Trần Hưng Đạo Tp Quy Nhơn Người sáng lập : Nguyễn Thanh Tuấn - Chủ quản tài nguyên : Nguyễn Thanh Tú U Y cho nghiên cứu đánh giá sinh khả dụng (SKD) tương đương sinh học Đóng góp PDF GV Nguyễn Thanh Tú www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial www.twitter.com/daykemquynhon https://plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com 34 Lắc xoáy Thêm mL cloroform Lắc học phút Ly tâm 3000 vòng/phút phút Hút mL lớp dung môi phía Bay dung môi dòng khí N2 N 40ºC thu lấy cắn Hòa tan cắn 0,5 mL pha động Tiêm sắc ký H Ơ * Điều kiện sắc ký: N + Cột Phenomenex, C18; 250 x 4,6 mm; µm Nhiệt độ cột 40oC TP Q + Tốc độ dòng: 1,5 mL/phút ẠO + Bước sóng phát hiện: 210 nm G 3.2 THẨM ĐỊNH PHƢƠNG PHÁP PHÂN TÍCH Đ www.daykemquynhon.ucoz.com MailBox : nguyenthanhtuteacher@hotmail.com + Thể tích tiêm mẫu: 50 µL H Ư N 3.2.1 Tính chọn lọc - đặc hiệu Tiến hành phân tích mẫu HT trắng, mẫu HT có chuẩn nội mẫu HT TR ẦN chứa chuẩn LEVET phương pháp HPLC xây dựng theo nội dung phương pháp nghiên cứu trình bày mục 2.3.3.1 Hình 3.11: SKĐ mẫu HT trắng D IỄ N Đ ÀN TO ÁN -L Í- H Ó A 10 00 B Kết thu được sau: Diễn đàn hỗ trợ giáo dục : Đ/C 1000B Trần Hưng Đạo Tp Quy Nhơn Người sáng lập : Nguyễn Thanh Tuấn - Chủ quản tài nguyên : Nguyễn Thanh Tú U Y + Pha động: acetonitril – dung dịch đệm phosphat pH 6,8 tỷ lệ 6:94 (tt/tt) Đóng góp PDF GV Nguyễn Thanh Tú www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial www.twitter.com/daykemquynhon https://plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com -L Í- H Ó A 10 00 B TR ẦN H Ư N G Hình 3.12: SKĐ mẫu HT trắng có chuẩn nội paracetamol ÁN Hình 3.13: SKĐ mẫu chuẩn LEVET nồng độ 0,25 µg/mL có IS TO Nhận xét: D IỄ N Đ ÀN - Hình 3.11: Trên SKĐ, khoảng thời gian từ - 10 phút mẫu HT trắng Diễn đàn hỗ trợ giáo dục : Đ/C 1000B Trần Hưng Đạo Tp Quy Nhơn Người sáng lập : Nguyễn Thanh Tuấn - Chủ quản tài nguyên : Nguyễn Thanh Tú Đ www.daykemquynhon.ucoz.com MailBox : nguyenthanhtuteacher@hotmail.com ẠO TP Q U Y N H Ơ N 35 không xuất píc - Hình 3.12: Trên SKĐ xuất píc chuẩn nội có tR khoảng 7,6 phút - Hình 3.13: Trên SKĐ mẫu chuẩn LEVET chuẩn nồng độ 0,25 µg/mL khoảng thời gian từ - 10 phút xuất píc có thời gian lưu khoảng 7,6 phút (tương ứng với píc IS) píc có tR khoảng 9,1 phút Kết phân tích cho thấy, píc LEVET cân đối, rõ nét tách hoàn toàn với Đóng góp PDF GV Nguyễn Thanh Tú www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial www.twitter.com/daykemquynhon https://plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com 36 píc IS, píc tạp Không có đáp ứng píc tạp mẫu trắng thời điểm trùng với thời gian lưu LEVET (9,1 phút) IS (7,6 phút) Do vậy, N phương pháp đặc hiệu chọn lọc LEVET Đƣờng Đƣờng (µg/mL) chuẩn chuẩn chuẩn S1 0,25 98,4 100,7 S2 0,5 103,4 98,4 S3 1,0 98,4 101,5 S4 2,5 101,7 S5 5,0 103,8 S6 10,0 99,3 S7 17,5 S8 25,0 chuẩn 102,3 102,0 98,3 95,0 97,3 102,5 100,6 98,3 101,8 96,6 101,7 97,3 102,3 100,3 96,8 101,2 98,3 102,1 96,9 97,1 96,8 96,4 100,1 103,4 101,5 98,0 100,3 103,2 105,4 102,1 Đ G N TR ẦN B 10 00 Ó ẠO chuẩn 98,6 A = 0,1292 A = 0,1342 A = 0,1301 A = 0,1316 A = 0,1300 Í- -L (y = Ax + B) ÁN Đƣờng H www.daykemquynhon.ucoz.com MailBox : nguyenthanhtuteacher@hotmail.com hồi quy Đƣờng H Ư Đƣờng A đô Phƣơng trình TP Độ (%) Nồ ng̣ Mẫu Q Bảng 3.1.Độ mẫu thuộc đường chuẩn B = 0,0010 B= -0,0038 B = 0,0043 B = 0,0024 B = 0,0022 r = 0,9995 r = 0,9998 r = 0,9993 r = 0,9994 r = 0,9996 TO Kết thẩm định cho thấy khoảng nồng độ từ 0,25 đến 25,0 µg/mL có Diễn đàn hỗ trợ giáo dục : Đ/C 1000B Trần Hưng Đạo Tp Quy Nhơn Người sáng lập : Nguyễn Thanh Tuấn - Chủ quản tài nguyên : Nguyễn Thanh Tú U Y xây dựng mục 3.1.3, thu kết sau: N Tiến hành phân tích theo mục 2.3.3.2, xử lý mẫu theo quy trình xử lý mẫu H Ơ 3.2.2 Đƣờng chuẩn khoảng tuyến tính D IỄ N Đ ÀN tương quan tuyến tính nồng độ LEVET tỷ lệ diện tích píc LEVET/IS với hệ số tương quan xấp xỉ Nồng độ LEVET xác định từ đường chuẩn so với giá trị lý thuyết nằm giới hạn cho phép (85,0% - 115,0%) theo qui định phương pháp phân tích thuốc dịch sinh học 3.2.3 Giới hạn định lƣợng dƣới (LLOQ) Tiến hành phân tích theo mục 2.3.3.3, kết thu được trình bày bảng 3.2 Đóng góp PDF GV Nguyễn Thanh Tú www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial www.twitter.com/daykemquynhon https://plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com 37 Độ so với nồng độ thực (%) 92,5 0,032 0,239 95,0 0,037 0,282 112,1 0,037 0,277 110,2 0,035 0,263 0,036 0,267 H N 106,4 ẠO Đ CV (%) 103,5 7,8 N G Kết thẩm định cho thấy giá trị nồng độ LEVET xác định từ đường chuẩn so H Ư với nồng độ thực có mẫu nằm khoảng từ 80 - 120% CV < 20% đáp TR ẦN ứng yêu cầu giới hạn định lượng phương pháp phân tích thuốc dịch sinh học Như mẫu chuẩn chứa LEVET có nồng độ 0,25 µg/mL đáp ứng yêu cầu 10 00 B LLOQ độ đúng, độ xác phương pháp phân tích dịch sinh học 3.2.4 Độ - Độ xác A Tiến hành phân tích theo mục 2.3.3.4, kết thu sau: H Ó Bảng 3.3 Kết thẩm định độ đúng, độ lặp lại ngày MQC ( 12,5 µg/mL) HQC ( 20,0 µg/mL) -L Í- LQC ( 0,75µg/mL) 0,091 0,091 0,752 0,744 100,6 99,6 1,549 1,642 12,943 103,9 13,722 110,1 2,361 2,430 19,741 99,0 20,319 101,9 0,090 0,088 0,742 0,722 99,3 96,6 1,572 1,440 13,134 105,4 12,031 96,6 2,436 2,342 20,363 102,2 19,582 98,2 0,093 Trung bình 0,764 0,747 102,2 99,9 1,567 13,095 105,1 13,049 104,7 2,283 19,082 19,827 95,7 99,5 1,9 1,9 2,4 2,4 D IỄ N Đ ÀN TO ÁN STT LEVET/ Nồng độ Độ LEVET/ Nồng độ Độ LEVET Nồng độ Độ đúng IS (µg/mL) IS (µg/mL) /IS (µg/mL) (%) (%) (%) 0,092 0,755 101,0 1,599 13,367 107,3 2,377 19,874 99,7 CV (%) Đóng góp PDF GV Nguyễn Thanh Tú 4,3 4,3 Diễn đàn hỗ trợ giáo dục : Đ/C 1000B Trần Hưng Đạo Tp Quy Nhơn Người sáng lập : Nguyễn Thanh Tuấn - Chủ quản tài nguyên : Nguyễn Thanh Tú U Y TP 104,9 Trung bình (%) www.daykemquynhon.ucoz.com MailBox : nguyenthanhtuteacher@hotmail.com N Nồng độ xác định từ đƣờng chuẩn (µg/mL) 0,232 STT Ơ Tỷ lệ diện tích píc LEVET/IS 0,031 Q Bảng 3.2 Kết xác định giá trị LLOQ www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial www.twitter.com/daykemquynhon https://plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com 38 Độ lặp lại Độ (%) (CV%) (%) (CV%) (%) 96,4 3,7 96,4 7,3 97,5 Ơ Độ lặp lại (CV%) 2,6 Đ www.daykemquynhon.ucoz.com MailBox : nguyenthanhtuteacher@hotmail.com G (1,9% - 7,3%) Như vậy, phương pháp định lượng đáp ứng yêu cầu độ H Ư N độ xác phương pháp phân tích thuốc dịch sinh học ngày TR ẦN khác ngày 3.2.5 Tỷ lệ thu hồi Tiến hành phân tích theo mục 2.3.3.5, kết thu sau: 10 00 B Bảng 3.5: Kết khảo sát tỷ lệ thu hồi LEVET LQC (0,75 µg/mL) STT A 20020 Mẫu DM 27937 325934 463683 528470 763246 27985 335104 462522 458520 763918 19771 28545 340850 464772 518652 763454 17922 28683 329801 464434 523040 762903 18665 29055 328657 462007 534157 766737 19360 28672 320428 459651 525389 760931 Trung bình 19169 28480 330129 462845 514705 763532 CV (%) 4,0 1,5 2,2 0,4 5,4 0,2 TO ÁN -L Í- H Ó 19273 ÀN Đ HQC (20,0 µg/mL) Mẫu HT Mẫu DM Mẫu HT Mẫu DM Mẫu HT IỄ N MQC (12,5 µg/mL) Tỷ lệ thu hồi 53,4% 56,6% Diễn đàn hỗ trợ giáo dục : Đ/C 1000B Trần Hưng Đạo Tp Quy Nhơn Người sáng lập : Nguyễn Thanh Tuấn - Chủ quản tài nguyên : Nguyễn Thanh Tú Độ H Độ lặp lại Các mẫu QC có độ nằm giới hạn 85% - 115% CV (%) < 15% D Độ ẠO (n = 3) µg/mL) Q Khác ngày µg/mL) TP Độ lặp lại µg/mL) Mẫu HQC(20,0 N Độ đúng, Mẫu MQC(12,5 U Y Mẫu LQC(0,75 N Bảng 3.4.Kết thẩm định độ đúng, độ lặp lại khác ngày 53,5% Kết thẩm định cho thấy, nồng độ tỷ lệ thu hồi LEVET tương đối cao từ 53,4 - 56,6 % có độ lặp lại tốt, giá trị CV < 15 % (0,2 % - 5,4 %) Đóng góp PDF GV Nguyễn Thanh Tú www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial www.twitter.com/daykemquynhon https://plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com 39 Bảng 3.6 Kết khảo sát tỷ lệ thu hồi IS 218815 3029922 218289 2919341 198338 2888753 212205 2879483 208349 Trung bình 210973 N 1,86 12,0% H Ư N Tỷ lệ thu hồi Kết thực nghiệm cho thấy, tỷ lệ thu hồi IS thấp, 12,0 % nhiên TR ẦN hiệu suất chiết lặp lại (CV < 5%), đồng thời tỷ số diện tích pic LEVET/IS lặp lại, độ – độ xác phương pháp đạt yêu cầu (mục 3.2.4) Do vậy, B phương pháp xử lý mẫu đáp ứng yêu cầu chiết tách LEVET IS HT 10 00 3.2.6 Độ ổn định hoạt chất HT 3.2.6.1 Độ ổn định dung dịch IS làm việc thời gian ngắn Ó A Tiến hành phân tích theo mục 2.3.3.6, thu đượckết sau: -L Í- H Bảng 3.7 Kết độ ổn định dung dịch IS làm việc thời gian ngắn Diện tích píc ban đầu (mAu.s) Diện tích píc sau (mAu.s) 2765312 2769663 2766447 2766072 2766280 2768165 Trung bình 2766013 2767967 0,02 0,07 TO ÀN Đ IỄ N Độ ổn định IS làm việc thời gian ngắn ÁN Mẫu CV (%) Độ lệch (%) Diễn đàn hỗ trợ giáo dục : Đ/C 1000B Trần Hưng Đạo Tp Quy Nhơn Người sáng lập : Nguyễn Thanh Tuấn - Chủ quản tài nguyên : Nguyễn Thanh Tú U Y Q TP ẠO 2935621 3,57 D 2956859 G CV (%) Ơ H Trong dung môi 2939368 Đ www.daykemquynhon.ucoz.com MailBox : nguyenthanhtuteacher@hotmail.com Trong huyết tƣơng 209840 N Diện tích píc IS (mAu.s) STT 0,1 Kết nồng độ LEVET sau bảo quản nhiệt độ phòng có độ lệch 0,1% so với ban đầu, giá trị CV = 0,1% đáp ứng yêu cầu độ lệch 2% CV Đóng góp PDF GV Nguyễn Thanh Tú www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial www.twitter.com/daykemquynhon https://plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com 40 không 2% Mẫu chuẩn nội ổn định bảo quản nhiệt độ phòng 3.2.6.2 Độ ổn định dung dịch chuẩn gốc thời gian ngắn N Tiến hành phân tích theo mục 2.3.3.6, thu kết sau: Diện tích píc ban đầu H 1059836 1068545 1060875 1065794 Trung bình 1066321 TP Q 1064623 ẠO 1061663 Đ 1060791 G 0,2 Độ lệch (%) 0,1 H Ư N - 0,5 Kết sau bảo quản nhiệt độ phòng nồng độ LEVET mẫu có độ TR ẦN lệch -0,5% so với ban đầu, giá trị CV = 0,1% đáp ứng yêu cầu độ lệch ≤ 2% CV ≤ 2% Mẫu chuẩn gốc ổn định vòng bảo quản nhiệt độ phòng 10 00 B 3.2.6.3 Độ ổn định dung dịch chuẩn gốc thời gian dài Tiến hành phân tích theo mục 2.3.3.6, thu kết sau: Ó A Bảng 3.9 Kết độ ổn định dung dịch chuẩn gốc nhiệt độ 2ºC -8ºC Í- H Mẫu Đ ÀN TO ÁN -L Trung bình CV (%) Độ lệch (%) Ban đầu 499,5 499,8 499,8 499,7 0,03 Nồng độ LEVET (µg/mL) Sau ngày Sau 17 ngày 492,2 491,7 492,4 491,7 492,0 492,0 492,2 491,8 0,04 0,04 -1,5 -1,6 Diễn đàn hỗ trợ giáo dục : Đ/C 1000B Trần Hưng Đạo Tp Quy Nhơn Người sáng lập : Nguyễn Thanh Tuấn - Chủ quản tài nguyên : Nguyễn Thanh Tú U Y Diện tích píc sau CV (%) IỄ N D N Độ ổn định LEVET gốc thời gian ngắn Mẫu www.daykemquynhon.ucoz.com MailBox : nguyenthanhtuteacher@hotmail.com Ơ Bảng 3.8 Kết độ ổn định dung dịch chuẩn gốc thời gian ngắn Kết độ ổn định dung dịch chuẩn gốc nhiệt độ 2ºC - 8ºC có độ lệch so với nồng độ ban đầu -1,5% sau ngày -1,6% sau 17 ngày đáp ứng yêu cầu độ lệch ≤ 2% CV ≤ 2% Mẫu chuẩn gốc ổn định sau 17 ngày bảo quản nhiệt độ 2ºC - 8ºC Đóng góp PDF GV Nguyễn Thanh Tú www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial www.twitter.com/daykemquynhon https://plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com 41 3.2.6.4 Độ ổn định mẫu huyết tương sau chu kỳ đông - rã Tiến hành phân tích theo mục 2.3.3.6, thu kết sau: N Bảng 3.10 Kết độ ổn định mẫu huyết tương sau chu kỳ đông - rã 22198 228395 0,097 0,719 585512 21768 211880 0,103 0,760 580,805 210225 20895 216523 0,097 0,714 591059 22297 224055 0,100 0,736 571065 22435 221877 0,101 0,748 573349 20931 Trung bình 209522 0,100 0,739 0,736 CV (%) 2,4 H 2,733 20,409 2,763 20,634 213441 2,769 20,682 213937 2,669 19,935 212556 2,697 20,145 589287 218816 Trung bình 2,693 20,113 20,319 H Ư N G Đ ẠO 214265 LEVET Nồng độ /IS (µg/mL) CV (%) 1,5 B Sau ba chu kỳ đông rã 10 00 Mẫu LQC (≈ 0,75 µg/mL) Số 23646 22325 203092 22484 H Ó IS A LEVET Nồng độ LEVET Nồng độ LEVET IS /IS (µg/mL) /IS (µg/mL) 211643 0,112 0,702 591181 197998 2,986 19,127 TT LEVET 0,690 612944 207162 2,959 18,954 199644 0,113 0,707 585454 202485 2,891 18,522 22938 209281 0,110 0,688 604216 205370 2,942 18,847 20878 Trung bình 186423 0,112 0,703 0,698 584436 196683 Trung bình 2,971 19,035 18,897 TO ÁN -L Í- 0,110 ÀN Đ IỄ N Mẫu HQC (≈ 20,0 µg/mL) Độ lệch so với ban đầu 1,2 -5,1% CV (%) Độ lệch so với ban đầu Diễn đàn hỗ trợ giáo dục : Đ/C 1000B Trần Hưng Đạo Tp Quy Nhơn Người sáng lập : Nguyễn Thanh Tuấn - Chủ quản tài nguyên : Nguyễn Thanh Tú CV (%) D IS U Y IS Q LEVET Nồng độ LEVET /IS (µg/mL) LEVET TR ẦN www.daykemquynhon.ucoz.com MailBox : nguyenthanhtuteacher@hotmail.com TT Mẫu HQC (≈ 20,0 µg/mL) N Mẫu LQC (≈ 0,75 µg/mL) TP Số Ơ Ban đầu 1,2 -7,0% Kết sau chu kỳ đông - rã đông, nồng độ LEVET mẫu LQC, HQC có độ lệch so với nồng độ ban đầu -5,1% (CV = 1,2%) -7,0 % (CV = 1,2%), đáp ứng yêu cầu độ lệch ≤ 15% CV ≤ 15% Mẫu HT ổn định sau chu kỳ đông - rã đông Đóng góp PDF GV Nguyễn Thanh Tú www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial www.twitter.com/daykemquynhon https://plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com 42 3.2.6.5 Độ ổn định mẫu huyết tương thời gian dài Tiến hành phân tích theo mục 2.3.3.6, thu kết bảng sau: N Bảng 3.11 Kết độ ổn định mẫu huyết tương thời gian dài H LEVET /IS Nồng độ (µg/mL) 2,733 20,409 2,763 20,634 22198 228395 0,097 0,719 585512 214265 21768 211880 0,103 0,760 580805 210225 20895 216523 0,097 0,714 591059 213441 2,769 20,682 22297 224055 0,100 0,736 571065 213937 Đ 2,669 19,935 22435 221877 0,101 0,748 573349 212556 2,697 20,145 20931 209522 Trung bình 0,100 0,739 0,736 589287 218816 Trung bình 2,693 20,113 20,319 CV (%) 2,4 H Ư N G ẠO TP CV (%) 1,5 Sau 62 ngày Số B 21274 185716 0,115 0,701 548511 174814 3,138 19,785 Í- 10 00 LEVET Nồng độ LEVET IS /IS (µg/mL) 20439 173761 0,118 0,720 570072 183642 22155 185616 0,119 0,731 580840 183778 3,161 19,929 21127 178172 0,119 0,726 582881 186846 3,120 19,671 21517 177583 0,121 0,743 581375 184749 3,147 19,843 22017 185259 Trung bình 0,119 0,728 0,725 582680 186715 Trung bình 3,121 19,678 19,747 IS ÀN TO ÁN H Ó A LEVET Đ IỄ N Mẫu HQC (≈ 20,0 µg/mL) -L TT Mẫu LQC (≈ 0,75 µg/mL) CV (%) D IS Độ lệch so với ban đầu 1,9 -1,5% LEVET /IS 3,104 Nồng độ (µg/mL) 19,574 CV (%) Độ lệch so với ban đầu (%) Diễn đàn hỗ trợ giáo dục : Đ/C 1000B Trần Hưng Đạo Tp Quy Nhơn Người sáng lập : Nguyễn Thanh Tuấn - Chủ quản tài nguyên : Nguyễn Thanh Tú LEVET Nồng độ LEVET /IS (µg/mL) IS TR ẦN www.daykemquynhon.ucoz.com MailBox : nguyenthanhtuteacher@hotmail.com LEVET N TT Mẫu HQC (≈ 20,0 µg/mL) U Y Mẫu LQC (≈ 0,75 µg/mL) Q Số Ơ Ban đầu 0,7 -2,8% Kết sau bảo quản nhiệt độ -35 ± 5oC, nồng độ LEVET mẫu LQC, HQC có độ lệch so với nồng độ ban đầu -1,5 % (CV = 1,9%) -2,8 % (CV = 0,7%), đáp ứng yêu cầu độ lệch ≤ 15% CV ≤ 15% Mẫu HT ổn định sau 62 ngày bảo quản nhiệt độ -35 ± 5oC Đóng góp PDF GV Nguyễn Thanh Tú www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial www.twitter.com/daykemquynhon https://plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com 43 3.2.6.6 Độ ổn định mẫu HT sau xử lý (trong Autosampler) Tiến hành phân tích theo mục 2.3.3.6, thu kết sau: N Bảng 3.12 Kết độ ổn định mẫu huyết tương sau xử lý 0,760 580805 210,25 2,763 20,634 20,895 216523 0,097 0,714 591059 213441 2,769 20,682 22297 224055 0,100 0,736 571065 213937 2,669 19,935 22435 221877 0,101 0,748 573349 212556 2,697 20,145 20931 209522 TB 0,100 0,739 0,736 589287 218816 TB 2,693 20,113 20,319 CV (%) G N H Ư 2,4 CV (%) 1,5 Sau 32 giờ/ nhiệt độ phòng B Mẫu LQC (≈ 0,75 µg/mL) STT Nồng độ (µg/mL) LEVET IS 0,097 0,753 584146 214100 2,728 20,489 216070 0,102 0,791 578168 207554 2,786 20,918 218740 0,095 0,739 588199 213208 2,759 20,717 229753 0,099 0,768 562661 211291 2,663 19,998 22154 222198 0,100 0,774 600396 222857 2,694 20,232 20881 Trung bình 210842 0,099 0,769 0,766 579512 219167 Trung bình 2,644 19,857 20,369 22344 230618 22030 20768 22713 TO ÁN -L Í- H Ó A IS 10 00 LEVET /IS LEVET ÀN Đ Độ lệch so với ban đầu IỄ N Mẫu HQC (≈ 20,0 µg/mL) 2,4 4,1% LEVET Nồng độ /IS (µg/mL) CV (%) Độ lệch so với ban đầu Diễn đàn hỗ trợ giáo dục : Đ/C 1000B Trần Hưng Đạo Tp Quy Nhơn Người sáng lập : Nguyễn Thanh Tuấn - Chủ quản tài nguyên : Nguyễn Thanh Tú CV (%) D H 0,103 Q 211880 22198 IS TP 21768 LEVET U Y 585512 LEVET Nồng độ /IS (µg/mL) 214265 2,733 20,409 ẠO Nồng độ (µg/mL) 0,719 IS Đ 228395 LEVET /IS 0,097 LEVET TR ẦN www.daykemquynhon.ucoz.com MailBox : nguyenthanhtuteacher@hotmail.com Mẫu HQC (≈ 20,0 µg/mL) N Mẫu LQC (≈ 0,75 µg/mL) STT Ơ Ban đầu 2,0 0,2% Nồng độ LEVET sau xử lý bảo quản autosample sau 31 sai khác không 15% (4,1% 0,2%) so với nồng độ định lượng ban đầu giá trị CV nhỏ 15% (2,4% 2,0%) Mẫu HT ổn định sau xử lý bảo quản 31 autosampler Đóng góp PDF GV Nguyễn Thanh Tú www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial www.twitter.com/daykemquynhon https://plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com 44 CHƢƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ H Từ kết nghiên cứu thu được, rút số kết luận: Ơ N 4.1 KẾT LUẬN Q ngƣời với điều kiện nhƣ sau: TP - Quy trình xử lý mẫu: ẠO Mẫu huyết tương để rã đông nhiệt độ phòng Lấy mL HT, thêm 50 µL dung Đ www.daykemquynhon.ucoz.com MailBox : nguyenthanhtuteacher@hotmail.com dịch IS Lắc xoáy Thêm 0,25 mL dung dịch NH4OH 0,1 N Lắc xoáy Thêm mL G cloroform Lắc học phút Ly tâm 3000 vòng/phút phút Hút mL lớp 0,5 mL pha động Tiêm sắc ký TR ẦN - Điều kiện sắc ký: H Ư N dung môi Bốc dung môi dòng khí N2 40ºC thu lấy cắn Hòa tan cắn + Cột Phenomenex, C18; 250 x 4,6 mm; µm Nhiệt độ cột 40 oC B + Pha động: acetonitril – dung dịch đệm phosphat pH 6,8 (6:94) 10 00 + Tốc độ dòng: 1,5 mL/phút A + Thể tích tiêm mẫu: 50 µL Ó Đã tiến hành thẩm định phƣơng pháp định lƣợng LEVET với tiêu: Í- H Độ đặc hiệu - chọn lọc, đường chuẩn, khoảng tuyến tính, giới hạn định lượng -L dưới, độ - độ lặp lại, tỷ lệ thu hồi, độ ổn định kết quả: ÁN - Phương pháp có độ đặc hiệu - chọn lọc với LEVET TO - Có tương quan tuyến tính chặt chẽ đáp ứng phân tích nồng độ D IỄ N Đ ÀN LEVET khoảng nồng độ khảo sát với r > 0,999 Khoảng tuyến tính từ 0,25 Diễn đàn hỗ trợ giáo dục : Đ/C 1000B Trần Hưng Đạo Tp Quy Nhơn Người sáng lập : Nguyễn Thanh Tuấn - Chủ quản tài nguyên : Nguyễn Thanh Tú U Y N Đã xây dựng đƣợc phƣơng pháp phân tích levetiracetam huyết tƣơng - 25,0µg/mL - Giới hạn định lượng dưới: LLOQ = 0,25 µg/mL - Phương pháp có độ tốt (95,7 - 107,3%), độ lặp lại với giá trị CV% ≤ 15% Đáp ứng yêu cầu độ đúng, độ lặp lại ngày khác ngày - Tỷ lệ thu hồi LEVET tương đối cao (53,4 - 56,6 %) Độ lặp lại tốt (CV < 15 %) Phương pháp xử lý mẫu đáp ứng yêu cầu chiết tách LEVET HT Đóng góp PDF GV Nguyễn Thanh Tú www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial www.twitter.com/daykemquynhon https://plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com 45 - Phương pháp đáp ứng yêu cầu độ ổn định hoạt chất huyết tương N Phương pháp đáp ứng yêu cầu phương pháp phân tích chất H Ơ dịch sinh học theo tiêu chuẩn US - FDA N 4.2 KIẾN NGHỊ TP Q - Ứng dụng phương pháp phân tích để định lượng LEVET HT NTN nghiên cứu SKD đánh giá TĐSH chế phẩm chứa LEVET ẠO www.daykemquynhon.ucoz.com MailBox : nguyenthanhtuteacher@hotmail.com thị trường G Đ - Ứng dụng phương pháp phân tích để định lượng LEVET HT bệnh N nhân động kinh sử dụng LEVET kéo dài để điều chỉnh liều hợp lý, đạt hiệu H Ư điều trị tối ưu TR ẦN - Tiến hành nghiên cứu định lượng đồng thời LEVET HT bệnh nhân D IỄ N Đ ÀN TO ÁN -L Í- H Ó A 10 00 B sử dụng thuốc chống động kinh phối hợp Diễn đàn hỗ trợ giáo dục : Đ/C 1000B Trần Hưng Đạo Tp Quy Nhơn Người sáng lập : Nguyễn Thanh Tuấn - Chủ quản tài nguyên : Nguyễn Thanh Tú U Y Sau thực đề tài, có số kiến nghị sau: Đóng góp PDF GV Nguyễn Thanh Tú www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial www.twitter.com/daykemquynhon https://plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com N H Ơ N TÀI LIỆU THAM KHẢO U Y Tiếng Việt: TP học, tr.325 - 329 ẠO Bộ Y tế (2015), Dược thư quốc gia Việt Nam, tr 887 - 888 Đ www.daykemquynhon.ucoz.com MailBox : nguyenthanhtuteacher@hotmail.com Bộ Y tế (2010), Dược điển Việt Nam IV, tr.125 - 126 G Bộ Y tế - Trường Đại học Dược Hà Nội (2007), Dược lý học, tập 1, Nhà H Ư N xuất Y học, tr 117 - 121 Bộ Y tế - Trường Đại học Dược Hà Nội (2007), Hóa phân tích, tập 2, Nhà TR ẦN xuất Y học, tr 123 - 141, tr 168 - 200 Bộ Y tế (2010), Hướng dẫn báo cáo số liệu nghiên cứu sinh khả dụng/ B tương đương sinh học đăng ký thuốc, Thông tư số 08/2010/TT-BYT 10 00 Bộ Y tế (2011), Kiểm nghiệm dược phẩm, Nhà xuất Y học, tr 84 - 104 Í- Tiếng Anh: H Ó A Lê Quang Cường (2005), Động kinh, Nhà xuất Y học, Hà Nội -L Aidan Neligan, Sander J.M (2011), The incidence and prevanlence of ÁN epilepsy - Chapter 1, UCL Institute of Neurology, London D IỄ N Đ ÀN TO 10 Australian Government - Departmant of Health and Ageing, Therapeutic Diễn đàn hỗ trợ giáo dục : Đ/C 1000B Trần Hưng Đạo Tp Quy Nhơn Người sáng lập : Nguyễn Thanh Tuấn - Chủ quản tài nguyên : Nguyễn Thanh Tú Q Bộ Y tế - Trường Đại học Dược Hà Nội (2010), Bệnh học, Nhà xuất Y Goods Admistration (2004): Regulatory Guidelines for Prescription medicines, Appendix 15 - Biopharmaceutic studies 11 Dong M., Ahuja S (2005), Handbook of pharmaceutical analysis by HPLC, United Kingdom, p 19 - 45 12 International League Against Epilepsy (2006), “Guideline for the management of epilepsy in the elderly”, Actaneurol, pp 106-116 Đóng góp PDF GV Nguyễn Thanh Tú www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial www.twitter.com/daykemquynhon https://plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn 13 Jain DS, Subbaiah “Determination of www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com G, Sanyal M, Pal levetiracetam in U, Shrivastav human PS plasma (2006), by liquid N chromatography/electrospray tandem mass spectrometry and its application H Ơ to bioequivalence studies”, Rapid Commun Mass Spectrom 20(17):2539 - N 2547 TP Q of levetiracetam in human plasma with minimal sample pretreatment”, ẠO Journal of Chromatography B, volume 819, issue 1, pages 197 – 200 www.daykemquynhon.ucoz.com MailBox : nguyenthanhtuteacher@hotmail.com 15 Karakevich Y., Lobrutto R (2007), HPLC for Pharmaceutical Scientists, G Đ Wiley & Sons p.139 - p.188, p.75 - p.132 H Ư N 16 Madhira V N S Ramprasad, B SyamaSundar (2004), “Development and validation of high performance liquid chromatographic Method for the TR ẦN Determination of Levetiracetam in Human Plasma by Electospray Ionization - Mass Spectrometry”, International Journal of Scientific & B Engineering Research, Volume 5, Issue 10 00 17 Nation Institute for Health and Clinical Excellence (2012), The epilepsies: the diagnosis and management of the epilepsies in adults and children in Ó A primary and secondary care - NICE clinical guidelices 137 Í- H 18 PDR Netword (2007), Physicians Desk Reference 61st ed., Thomson PDR -L Publisher, Montvale, NJ., p 3314 ÁN 19 Riley C., Rosanske T (1996), Development and Validication of Analytical TO Methods, Elsevier Science Ltd., pp - 99, 249 - 282 D IỄ N Đ ÀN 20 U.S Department of Heath and Human Services, Food and Drug Diễn đàn hỗ trợ giáo dục : Đ/C 1000B Trần Hưng Đạo Tp Quy Nhơn Người sáng lập : Nguyễn Thanh Tuấn - Chủ quản tài nguyên : Nguyễn Thanh Tú U Y 14 Jens Martens-Lobenhoffer, Stefanie M Bode-Böger (2005), “Determination Administrion, Center for Drug evaluation and Research (2001): Guidance for industry - Bioanalytical Method Validation 21 United State Pharmacopeia (2012), USP 35/ NF 30, volume 3, pp 3659 3662 22 Vincenzo Pucci, Francesca Bugamelli, Roberto Mandrioli, Anna Ferranti, Ernst Kenndler, Maria Augusta Ragg (2004), “High-performance liquid Đóng góp PDF GV Nguyễn Thanh Tú www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial www.twitter.com/daykemquynhon https://plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com Chromatographic determination of levetiracetam in human plasma: Comparison of Different sample clean-up Procedures”, Biomedical N Chromatography 18: 37-44 Website: TP Q 24 http://vinapharm.com.vn ẠO 25 http://www.ema.europa.eu/docs/enGB/document_library/Scientificguidelin D IỄ N Đ ÀN TO ÁN -L Í- H Ó A 10 00 B TR ẦN H Ư N G Đ www.daykemquynhon.ucoz.com MailBox : nguyenthanhtuteacher@hotmail.com e/2011/08/WC500109686.pdf Diễn đàn hỗ trợ giáo dục : Đ/C 1000B Trần Hưng Đạo Tp Quy Nhơn Người sáng lập : Nguyễn Thanh Tuấn - Chủ quản tài nguyên : Nguyễn Thanh Tú U Y N H Ơ 23 World Health Organization(2001), Epilepsy, 165 (168), pp 3-79 Đóng góp PDF GV Nguyễn Thanh Tú www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial ... cao diện tích píc -L Í- Có phương pháp định lượng hay sử dụng sắc ký: Phương pháp ÁN chuẩn ngoại, phương pháp chuẩn nội, phương pháp thêm chuẩn, phương pháp TO chuẩn hóa diện tích Hiện nay, phương. .. THỊ LIÊN Mã sinh viên: 1101288 NGHIÊN CỨU ĐỊNH LƢỢNG LEVETIRACETAM TRONG HUYẾT TƢƠNG NGƢỜI BẰNG PHƢƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ Người hướng dẫn: PGS.TS Nguyễn... vậy, định lượng LEVET huyết tương phương pháp HPLC với detector phổ dụng UV huỳnh quang gặp nhiều khó khăn Hiện nay, để định lượng LEVET dịch sinh học đa số tác giả sử dụng phương pháp sắc ký lỏng