Xây dựng phương pháp định lượng pantoprazol trong huyết tương bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI TRẦN THỊ THÚY DIỆU MSV: 1101077 XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG PANTOPRAZOL TRONG HUYẾT TƯƠNG BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI - 2016 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI TRẦN THỊ THÚY DIỆU XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG PANTOPRAZOL TRONG HUYẾT TƯƠNG BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: Th.S Trần Thị Lan Hương Th.S Tạ Mạnh Hùng Nơi thực hiện: Bộ môn Hóa dược- ĐH Dược HN Trung tâm đánh giá TĐSH - VKN thuốc TW HÀ NỘI – 2016 www.twitter.com/daykemquynhon https://plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com LỜI CẢM ƠN Ơ N Lời đầu tiên, em xin chân thành bày tỏ lòng kính trọng biết ơn sâu sắc đến N H Th.S Trần Thị Lan Hương - Giảng viên môn Hóa Dược - Trường Đại học Dược U Y Hà Nội Th.S Tạ Mạnh Hùng - Giám đốc Trung tâm Tương đương sinh học - TP dẫn em thực khóa luận ẠO Em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới Bộ môn Hóa Dược - Trường Đại học Dược Đ www.daykemquynhon.ucoz.com MailBox : nguyenthanhtuteacher@hotmail.com Hà Nội, Trung tâm Tương đương sinh học - Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung Ương, G thầy cô anh, chị tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ em suốt thời H Ư N gian thực khóa luận Em xin bày tỏ lòng biết ơn đến thầy cô, cán Trường Đại học Dược TR ẦN Hà Nội, người trang bị cho em nhiều kiến thức suốt trình học tập để em có thành ngày hôm 10 00 B Xin bày tỏ lòng biết ơn tới gia đình, bạn bè - người bên động viên, cổ vũ giúp đỡ em sống Hà Nội, tháng năm 2016 Sinh viên Trần Thị Thúy Diệu D IỄ N Đ ÀN TO ÁN -L Í- H Ó A Em xin chân thành cảm ơn! Diễn đàn hỗ trợ giáo dục : Đ/C 1000B Trần Hưng Đạo Tp Quy Nhơn Người sáng lập : Nguyễn Thanh Tuấn - Chủ quản tài nguyên : Nguyễn Thanh Tú Q Phó Viện trưởng Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung Ương tận tình bảo, hướng Đóng góp PDF GV Nguyễn Thanh Tú www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial www.twitter.com/daykemquynhon https://plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com Ơ ĐẶT VẤN ĐỀ N MỤC LỤC H CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN .2 U Y N 1.1 Tổng quan Pantoprazol TP 1.1.2 Tính chất hóa lý ẠO 1.1.3 Cơ chế tác dụng, dược động học, định PAN Đ www.daykemquynhon.ucoz.com MailBox : nguyenthanhtuteacher@hotmail.com 1.1.4 Một số chế phẩm thị trường .3 N G 1.1.5 Một số phương pháp định lượng PAN dịch sinh học H Ư 1.2 Tổng quan HPLC thẩm định phương pháp định lượng thuốc TR ẦN dịch sinh học 1.2.1 Tổng quan HPLC B 1.2.2 Thẩm định phương pháp định lượng thuốc dịch sinh học .9 10 00 CHƯƠNG 2: ĐIỀU KIỆN THỰC NGHIỆM, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 11 Ó A 2.1 Điều kiện thực nghiệm .11 H 2.2 Nội dung nghiên cứu 13 -L Í- 2.3 Phương pháp nghiên cứu 13 ÁN 2.4 Phương pháp xử lí kết 19 TO CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ NHẬN XÉT .20 ÀN 3.1 Kết xây dựng phương pháp định lượng .20 Diễn đàn hỗ trợ giáo dục : Đ/C 1000B Trần Hưng Đạo Tp Quy Nhơn Người sáng lập : Nguyễn Thanh Tuấn - Chủ quản tài nguyên : Nguyễn Thanh Tú Q 1.1.1 Công thức hóa học D IỄ N Đ 3.2 Kết thẩm định phương pháp phân tích 27 3.3 Bàn luận .40 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 41 4.1 Kết luận 41 4.2 Kiến nghị 42 TÀI LIỆU THAM KHẢO Đóng góp PDF GV Nguyễn Thanh Tú www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial www.twitter.com/daykemquynhon https://plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com N : Pantoprazol CV : Hệ số biến thiên (Coefficient of Variation) HPLC : Sắc ký lỏng hiệu cao (High Performance Liquid Chromatography) IS : Chất nội chuẩn (Internal standand ) LLOQ : Nồng độ giới hạn định lượng (Lower Limit of Quantification) ULOQ : Nồng độ giới hạn định lượng (Upper Limit of Quantification) QC : Mẫu kiểm tra chất lượng (Quality Control Samples) LQC : Mẫu kiểm tra nồng độ thấp (Lower Quality Control Samples) MQC : Mẫu kiểm tra nồng độ trung bình (Middle Quality Control Samples) HQC : Mẫu kiểm tra nồng độ cao (High Quality Control Samples) MeCN : Acetonitril MeOH : Methanol SKĐ : Sắc ký đồ Cmax : Nồng độ đỉnh T1/2 : Thời gian bán thải ÁN UV–VIS : Tử ngoại – khả kiến (Ultra violet – Visble) ÀN TO US–FDA : Cục quản lý thực phẩm dược phẩm Hoa Kỳ : Cơ quan quản lý thuốc Châu âu (European Medicine Agency) D IỄ N Đ EMA (United States of American Food and Drug Administration) Diễn đàn hỗ trợ giáo dục : Đ/C 1000B Trần Hưng Đạo Tp Quy Nhơn Người sáng lập : Nguyễn Thanh Tuấn - Chủ quản tài nguyên : Nguyễn Thanh Tú Í- H Ó A 10 00 B TR ẦN H Ư N G Đ ẠO TP Q U Y N H Ơ PAN -L www.daykemquynhon.ucoz.com MailBox : nguyenthanhtuteacher@hotmail.com DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Đóng góp PDF GV Nguyễn Thanh Tú www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial www.twitter.com/daykemquynhon https://plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Ơ N Nội dung Một số chế phẩm pantoprazol thị trường 1.2 Một số nghiên cứu định lượng pantoprazol dịch sinh học 2.1 Các chất chuẩn dùng nghiên cứu 2.2 Các hóa chất dùng nghiên cứu 2.3 Các mẫu huyết tương trắng nghiên cứu 2.4 Các thiết bị dùng nghiên cứu 2.5 Chuẩn bị đường chuẩn 2.6 Chuẩn bị mẫu kiểm tra 3.1 Kết đáp ứng mẫu trắng 3.2 Kết thẩm định đường chuẩn 3.3 Kết thẩm định giới hạn định lượng 30 3.4 Kết thẩm định độ đúng, độ xác ngày 31 3.5 Kết thẩm định độ đúng, độ xác khác ngày 32 3.6 Kết thẩm định tỷ lệ thu hồi nội chuẩn 33 3.7 Kết thẩm định tỷ lệ thu hồi pantoprazol 34 3.8 Độ ổn định dung dịch nội chuẩn thời gian ngắn 35 3.9 Độ ổn định dung dịch chuẩn pantoprazol gốc dài ngày 3.10 Độ ổn định mẫu huyết tương sau chu kỳ đông – rã 3.11 Độ ổn định mẫu huyết tương nhiệt độ phòng thời gian ngắn 37 3.12 Độ ổn định nồng độ 90 ng/mL nhiệt độ phòng thời gian dài 38 Độ ổn định nồng độ 3500 ng/mL nhiệt độ phòng thời gian dài 38 Độ ổn định mẫu auto – sampler 39 ÀN N U Y Q TP ẠO Đ G N H Ư TR ẦN B 10 00 A Ó H Í- -L 11 11 12 12 14 14 28 29 35 36 D IỄ N Đ 3.14 Diễn đàn hỗ trợ giáo dục : Đ/C 1000B Trần Hưng Đạo Tp Quy Nhơn Người sáng lập : Nguyễn Thanh Tuấn - Chủ quản tài nguyên : Nguyễn Thanh Tú TO 3.13 H 1.1 ÁN www.daykemquynhon.ucoz.com MailBox : nguyenthanhtuteacher@hotmail.com Bảng Đóng góp PDF GV Nguyễn Thanh Tú www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial www.twitter.com/daykemquynhon https://plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com Nội dung Trang Ơ Hình N DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ Phổ hấp thụ UV-VIS PAN 20 3.2 SKĐ PAN omeprazol 3.3 SKĐ PAN rabeprazol 3.4 SKĐ PAN lansoprazol 3.5 SKĐ PAN IS với tỷ lệ pha động 30:70 3.6 SKĐ PAN IS với tỷ lệ pha động 36:64 SKĐ PAN IS pha động MeCN: đệm phosphat pH 7,3 (36:64) với tốc độ dòng 1,3 mL 21 21 22 23 23 24 SKĐ PAN IS pha động MeCN: đệm phosphat pH 7,3 (36:64) với tốc độ dòng 1,5 mL 3.9 Quy trình xử lý mẫu 24 10 00 B 3.8 25 A SKĐ mẫu chuẩn PAN (4000 ng/ml) IS với quy trình xử lý mẫu chọn 26 3.11 SKĐ mẫu huyết tương trắng 3.12 SKĐ mẫu huyết tương trắng có chứa nội chuẩn 27 3.13 SKĐ mẫu huyết tương trắng chứa PAN 27 3.14 SKĐ mẫu huyết tương trắng chứa IS PAN nồng độ 30 ng/ml 27 Í- H Ó 3.10 D IỄ N Đ ÀN TO ÁN -L 27 Diễn đàn hỗ trợ giáo dục : Đ/C 1000B Trần Hưng Đạo Tp Quy Nhơn Người sáng lập : Nguyễn Thanh Tuấn - Chủ quản tài nguyên : Nguyễn Thanh Tú U Y Q TP ẠO Đ G N H Ư 3.7 TR ẦN www.daykemquynhon.ucoz.com MailBox : nguyenthanhtuteacher@hotmail.com N H 3.1 Đóng góp PDF GV Nguyễn Thanh Tú www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial www.twitter.com/daykemquynhon https://plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com ĐẶT VẤN ĐỀ Loét dày - tá tràng bệnh phổ biến nước ta giới Hiện H Ơ N nay, bệnh đứng đầu tỉ lệ mắc số bệnh đường tiêu hóa Trên giới, ước tính khoảng 10% dân số mắc bệnh lứa tuổi, không phân U Y N biệt giới tính, tỉ lệ mắc bệnh người lớn cao trẻ em hàng năm tăng khoảng 0,2% [18] Có nhiều nhóm thuốc điều trị loét dày - tá tràng nhóm thuốc ẠO TP nhóm thuốc ức chế bơm proton tác dụng nhanh, hiệu quả, tỷ lệ làm lành vết loét đạt tới 95% sau tám tuần điều trị Thuốc ảnh hưởng đến khối lượng dịch vị, Đ www.daykemquynhon.ucoz.com MailBox : nguyenthanhtuteacher@hotmail.com tiết pepsin, yếu tố nội dày co bóp dày[1] Do đó, nhóm thuốc sử dụng nhiều phác đồ điều trị loét dày - tá tràng H Ư N G Pantoprazol thuốc thuộc nhóm ức chế bơm proton, thuốc dung nạp tốt, để lại tác dụng phụ nên thuốc sử dụng phổ biến TR ẦN Việt Nam Để có liều sử dụng hợp lý cho đối tượng bệnh nhân việc kiểm soát nồng độ hoạt chất huyết tương cần thiết Ngoài ra, việc B giám sát chất lượng thuốc đánh giá tương đương sinh học thuốc chứa pantoprazol vô quan trọng nhằm nâng cao chất lượng thuốc giúp bác sĩ D IỄ N Đ ÀN TO ÁN -L Í- H Ó A 10 00 lựa chọn thuốc an toàn, hiệu quả, kinh tế Tuy vậy, nước ta chưa có quy trình chuẩn, phù hợp với điều kiện phòng thí nghiệm để định lượng pantoprazol huyết tương Xuất phát từ yêu cầu thực tế với mong muốn xây dựng phương pháp xác định nồng độ pantoprazol huyết tương nhằm phục vụ cho công tác điều trị đánh giá tương đương sinh học chế phẩm chứa hoạt chất pantoprazol tiến hành thực đề tài : “Xây dựng phương pháp định lượng Pantoprazol huyết tương phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao” với nội dung chính: Xây dựng phương pháp định lượng pantoprazol huyết tương phương pháp HPLC Thẩm định phương pháp xây dựng, đề quy trình phân tích thường quy để định lượng pantoprazol huyết tương theo tiêu chuẩn US-FDA EMA Diễn đàn hỗ trợ giáo dục : Đ/C 1000B Trần Hưng Đạo Tp Quy Nhơn Người sáng lập : Nguyễn Thanh Tuấn - Chủ quản tài nguyên : Nguyễn Thanh Tú Q kháng acid, nhóm thuốc kháng H2, nhóm thuốc ức chế bơm proton Trong đó, Đóng góp PDF GV Nguyễn Thanh Tú www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial www.twitter.com/daykemquynhon https://plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN VỀ PANTOPRAZOL N H Ơ N 1.1.1 Công thức hóa học - Pantoprazol (PAN) có công thức phân tử : C16H14F2N3O4S - Khối lượng phân tử : 383,37 - Tên khoa học : 5- (Diflomethoxy) – – [( 3, 4- dimethoxypyridin – 2- yl) methanesulfinyl] – 1H- 1,3 – benzodiazole [9,11,12] -L Í- H Ó A 10 00 B 1.1.2 Tính chất hóa lý - Bột kết tinh trắng gần trắng - Khó tan nước, log P = 2,18 - Rất dễ bị phân hủy môi trường acid, thường thấy dạng muối natri ngậm 1,5 phân tử nước - Hấp thu UV có liên kết đôi liên hợp [3,12,14] D IỄ N Đ ÀN TO ÁN 1.1.3 Cơ chế tác dụng, dược động học, định pantoprazol * Cơ chế tác dụng: Sau hấp thu, PAN tích lũy ống tiết acid tế bào thành dày Ở đây, gắn kết với nhóm sulfhydryl hệ enzyme H+/ K+ - ATPase bề mặt tiết gastrin tế bào vách, gây ức chế tiết acid tiết acid kích thích PAN ức chế tiết acid dày mà không kể đến chất kích thích (acetylcholin, histamin, gastrin…) [1,2,20] * Dược động học: - Hấp thu: PAN hấp thu nhanh Nồng độ đỉnh Cmax PAN 2400 Diễn đàn hỗ trợ giáo dục : Đ/C 1000B Trần Hưng Đạo Tp Quy Nhơn Người sáng lập : Nguyễn Thanh Tuấn - Chủ quản tài nguyên : Nguyễn Thanh Tú TR ẦN H Ư N G Đ www.daykemquynhon.ucoz.com MailBox : nguyenthanhtuteacher@hotmail.com ẠO TP Q U Y - Công thức cấu tạo : ng/mL đạt sau khoảng – 2,5 dùng PAN liều 40mg chia liều Đóng góp PDF GV Nguyễn Thanh Tú www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial www.twitter.com/daykemquynhon https://plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com dùng liều Thức ăn làm tăng thời gian hấp thu không làm thay đổi Cmax diện tích đường cong AUC PAN Ơ N - Phân bố: 98% PAN gắn kết với protein huyết tương Thể tích phân bố khoảng 0,17 l/kg, phân bố chủ yếu dịch ngoại bào TP Q - Thải trừ: Chất chuyển hoá tiết chủ yếu qua nước tiểu (80%), lượng lại thải trừ qua mật phân T1/2 khoảng kéo dài suy gan, bệnh nhân ẠO xơ gan - giờ.Vì vậy, cần xem xét hiệu chỉnh liều cho bệnh nhân suy gan [1,2,14,20] Đ G N H Ư www.daykemquynhon.ucoz.com MailBox : nguyenthanhtuteacher@hotmail.com * Chỉ định - Loét dày - tá tràng - Bệnh trào ngược dày - thực quản TR ẦN - Hội chứng tăng tiết acid (hội chứng Zollinger Ellison) - Dự phòng loét dày - tá tràng dùng thuốc chống viêm không steroid, stress [1,2,20] -L Í- H Ó A 10 00 B 1.1.4 Một số chế phẩm thị trường Các chế phẩm có chứa PAN thị trường chủ yếu dạng: bột pha tiêm truyền tĩnh mạch, viên nang tan ruột hàm lượng 40mg [1] Ngoài số dạng viên nén, viên giải phóng kéo dài đáp ứng nhu cầu đa dạng người sử dụng Một số chế phẩm chứa PAN thị trường trình bày cụ thể bảng 1.1 [19] Dạng bào chế Viên nén bao tan ruột D IỄ N Đ ÀN TO ÁN STT Bảng 1.1: Một số chế phẩm PAN thị trường Bột đông khô pha tiêm Đóng góp PDF GV Nguyễn Thanh Tú Tên biệt dược H/lượng Nhà sản xuất Bio-panto 40mg Biodeal Laboratories Hasanloc 40mg Hasan- Dermapharm Pantoloc 40mg Nycomed Pantostad 40mg STADA- VN J.V SP Extream 40mg Shinpoong Daewoo Sozol 40mg Atlantic Pharma Pantoloc 40mg Nycomed Pantosec 40mg Cipla Diễn đàn hỗ trợ giáo dục : Đ/C 1000B Trần Hưng Đạo Tp Quy Nhơn Người sáng lập : Nguyễn Thanh Tuấn - Chủ quản tài nguyên : Nguyễn Thanh Tú U Y N H - Chuyển hoá: PAN chuyển hoá chủ yếu gan nhờ enzym CYP2C19 cytochrom P450 để thành demethylpantoprazol www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial www.twitter.com/daykemquynhon https://plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com 31 Bảng 3.4: Kết thẩm định độ đúng, độ xác ngày 0,044 89,5 99,4 0,843 1706,8 94,8 1,597 0,048 98,3 109,2 0,851 1722,1 95,6 1,607 0,043 86,7 96,3 0,828 1675,9 93,1 0,044 88,8 98,6 0,852 1724,3 0,043 87,3 97,0 0.851 1722,2 0,040 82,5 91,6 0,845 88,9 98,7 N Độ đúng(b) (%) 92,3 3252,7 92,9 1,586 3211,2 91,7 95,8 1,608 3254,4 92,9 95,6 1,605 3250,2 92,8 1710,7 95,0 1,651 3342,4 95,5 1710,3 95,0 3257,1 93,0 H Ư N Đ ẠO TP 3232,0 10 00 B TB (ng/mL) PAN/IS G PAN/IS đúng(b) (%) Nồng độ(a) diện tích pic CV (%) 5,4 1,0 (a) tính từ phương trình hồi qui, (b) % so với nồng độ thực -L Í- H Ó A Kết cho thấy, phương pháp định lượng có độ nằm khoảng 91,6 – 109,2%, độ lệch nằm giới hạn cho phép ± 15%, độ lặp lại ngày với giá trị CV% nhỏ (1,0 – 5,4%), đáp ứng yêu cầu độ đúng, xác phương pháp phân tích dịch sinh học D IỄ N Đ ÀN TO ÁN 3.2.4.2 Độ đúng, độ xác khác ngày Tiến hành phân tích mẫu LQC, MQC, HQC chuẩn bị tương tự xác định độ đúng, độ lặp lại ngày theo phương pháp xây dựng ngày khác Xác định nồng độ PAN mẫu QC dựa vào đường chuẩn tiến hành song song ngày Kết xác định độ đúng, độ lặp lại khác ngày phương pháp trình bày bảng 3.5 1,3 Diễn đàn hỗ trợ giáo dục : Đ/C 1000B Trần Hưng Đạo Tp Quy Nhơn Người sáng lập : Nguyễn Thanh Tuấn - Chủ quản tài nguyên : Nguyễn Thanh Tú (ng/mL) TR ẦN www.daykemquynhon.ucoz.com MailBox : nguyenthanhtuteacher@hotmail.com PAN/IS Nồng độ(a) Ơ đúng(b) (%) (ng/mL) diện tích pic Tỷ số Độ H Nồng độ(a) Tỷ số N diện tích pic Độ HQC (3500,2 ng/mL) U Y Tỷ số MQC (1800,1 ng/mL) Q LQC (90,0 ng/mL) Mẫu Đóng góp PDF GV Nguyễn Thanh Tú www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial www.twitter.com/daykemquynhon https://plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com 32 Nồng độ(a) Độ đúng(b) Nồng độ(a) Độ đúng(b) (ng/mL) (%) (ng/mL) (%) (ng/mL) (%) 89,5 99,4 1706,8 94,8 3232,0 92,3 N 98,3 109,2 1722,1 95,6 3252,7 92,9 86,7 96,4 1675,9 93,1 3211,2 88,8 98,7 1724,3 95,8 3254,4 92,9 87,3 97,0 1722,2 95,6 3250,2 92,8 82,5 91,6 1710,7 95,0 3342,4 95,5 80,2 89,1 1849,2 102,6 3524,3 100,6 84,1 93,4 1818,9 101,0 3573,3 102,0 81,6 90,7 1804,3 100,2 3501,3 100,0 77,2 85,8 1776,3 98,6 3364,2 96,0 83,8 93,1 1835,2 101,9 3516,3 100,4 86,9 96,5 1859,1 103,2 3488,6 99,6 86,1 95,7 1774,8 98,6 3421,7 97,7 95,7 1727,6 96,0 3402,8 97,2 95,7 1760,2 97,8 3434,3 98,1 95,0 1803,0 100,1 3297,4 94,2 87,2 96,9 1752,4 97,3 3483,3 99,5 95,4 1759,0 97,7 3418,2 97,6 H Ó 85,5 A 86,1 -L 85,9 ÁN TB TO CV (%) H U Y Q TP ẠO Đ G N H Ư TR ẦN 91,7 95,3 98,1 96,7 5,0 3,0 3,4 (a) tính từ phương trình hồi qui, (b) % so với nồng độ thực Diễn đàn hỗ trợ giáo dục : Đ/C 1000B Trần Hưng Đạo Tp Quy Nhơn Người sáng lập : Nguyễn Thanh Tuấn - Chủ quản tài nguyên : Nguyễn Thanh Tú 86,1 III B II Ơ Độ đúng(b) I www.daykemquynhon.ucoz.com MailBox : nguyenthanhtuteacher@hotmail.com HQC ( 3500 ng/mL) Nồng độ(a) 10 00 Ngày MQC ( 1800 ng/mL) Í- LQC ( 90 ng/mL) N Bảng 3.5: Kết thẩm định độ đúng, độ xác khác ngày D IỄ N Đ ÀN Kết thực nghiệm cho thấy nồng độ (90, 1800, 3500 ng/mL), phương pháp cho độ khoảng 85% đến 115%, độ lặp lại khác ngày với giá trị CV ≤ 15% (3,0 – 5,0%) chứng tỏ phương pháp nghiên cứu có độ đúng, độ xác cao, đáp ứng yêu cầu phương pháp dùng dịch sinh học Đóng góp PDF GV Nguyễn Thanh Tú www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial www.twitter.com/daykemquynhon https://plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com 33 3.2.5 Tỷ lệ thu hồi phương pháp N 3.2.5.1 Tỷ lệ thu hồi nội chuẩn Xử lý lô mẫu QC theo qui trình lựa chọn Tiến hành phân tích xác định N H Ơ diện tích pic IS huyết tương Song song, xác định diện tích pic IS mẫu chuẩn pha dung môi pha mẫu (không qua xử lý) Kết xác định Đáp ứng IS/pha động (mAU.s) (mAU.s) 215987 221362 225837 225289 228284 138874 222756 142224 221527 139068 226001 10 00 142448 217320 139726 214449 143592 218248 143690 203578 139516 214774 139907 15 219806 139659 16 211146 141115 17 204469 140374 18 219947 139338 TB 218330 140259 CV (%) 3,1 1,3 Í- H 12 TO -L 13 ÀN G N H Ư TR ẦN Ó 11 Đ 138029 B A 10 IỄ N ẠO 219153 Đ 14 D TP Đáp ứng IS/huyết tương ÁN www.daykemquynhon.ucoz.com MailBox : nguyenthanhtuteacher@hotmail.com STT Q Bảng 3.6: Kết thẩm định tỷ lệ thu hồi IS Tỷ lệ thu hồi * 137641 137809 140936 140712 Diễn đàn hỗ trợ giáo dục : Đ/C 1000B Trần Hưng Đạo Tp Quy Nhơn Người sáng lập : Nguyễn Thanh Tuấn - Chủ quản tài nguyên : Nguyễn Thanh Tú U Y tỷ lệ thu hồi IS trình bày bảng 3.6 99,1 (*): Giá trị hiệu chỉnh theo hệ số pha loãng Kết thực nghiệm cho thấy, tỷ lệ thu hồi nội chuẩn đạt 99,1% (thỏa mãn điều kiện nằm khoảng 30 – 110%) CV nồng độ IS ≤ 15% Đóng góp PDF GV Nguyễn Thanh Tú www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial www.twitter.com/daykemquynhon https://plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com 34 (3,1 1,3%) Do qui trình xử lý mẫu huyết tương nghiên cứu phù hợp để chiết tách chất nội chuẩn N H Ơ N 3.2.5.2 Tỷ lệ thu hồi PAN Chuẩn bị lô mẫu QC mục 2.3.1 xử lý mẫu chuẩn PAN pha huyết tương theo phương pháp xây dựng Tiến hành sắc ký, xác định nồng độ TP bảng 3.7 ẠO Bảng 3.7: Kết thẩm định tỷ lệ thu hồi PAN LQC (≈ 90 ng/mL) 6664 10415 6742 9409 9830 9639 Huyết tương Pha động 187772 132853 325013 257581 188414 133227 345086 256564 187056 132899 348659 257966 6848 185064 132993 339432 257805 6665 182395 132449 328273 256979 9224 6787 184390 133243 363146 258886 9689 6749 185849 132944 341602 257630 4,3 1,1 1,2 0,2 4,1 0,3 10 00 H Ó A 6785 -L ÁN TO IỄ N Đ ÀN Tỷ lệ thu hồi * (%) H Ư 9614 CV(%) D Pha động TR ẦN 91,4 Huyết tương B Pha động HQC (≈ 3500 ng/mL) Í- Huyết tương TB MQC (≈ 1800 ng/mL) N STT G Đ www.daykemquynhon.ucoz.com MailBox : nguyenthanhtuteacher@hotmail.com Đáp ứng PAN (mAu.s) 89,0 Diễn đàn hỗ trợ giáo dục : Đ/C 1000B Trần Hưng Đạo Tp Quy Nhơn Người sáng lập : Nguyễn Thanh Tuấn - Chủ quản tài nguyên : Nguyễn Thanh Tú Q U Y PAN có mẫu Song song, định lượng mẫu chuẩn pha dung môi pha mẫu (không qua xử lý) Kết xác định tỷ lệ thu hồi PAN trình bày 84,4 (*): Giá trị hiệu chỉnh theo hệ số pha loãng Kết thực nghiệm cho thấy khoảng nồng độ (90, 1800, 3500 ng/mL), phương pháp cho hiệu suất chiết nằm khoảng 30 – 110% ( 91,4; 89,0; 84,4%), giá trị CV nồng độ PAN ≤ 15% (từ 0,2 – 4,3%) Do phương pháp xử lý mẫu xây dựng phù hợp để chiết tách PAN từ huyết tương Đóng góp PDF GV Nguyễn Thanh Tú www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial www.twitter.com/daykemquynhon https://plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon www.daykemquynhon.blogspot.com 35 3.2.6 Độ ổn định N H Ơ N 3.2.6.1 Độ ổn định dung dịch nội chuẩn làm việc thời gian ngắn nhiệt độ phòng Pha dung dịch nội chuẩn gốc mục 2.3.1 tiến hành mục 2.3.3.7 Kết độ ổn định dung dịch nội chuẩn làm việc thời gian ngắn nhiệt độ phòng U Y trình bày bảng 3.8 743160 738252 740169 738216 TB 740515 CV (%) 0,3 ẠO Đ G N H Ư 750460 750764 746492 1,0 0,8 A 10 00 B Kết cho thấy, nồng độ dung dịch nội chuẩn làm việc thời gian ngắn nhiệt độ phòng lệch so với nồng độ ban đầu 0,8% (< 2%), có CV 0,3%, 1,0 % (