Trắc nghiệm, bài giảng pptx các môn chuyên ngành Y dược hay nhất có tại “tài liệu ngành Y dược hay nhất”; https://123doc.net/users/home/user_home.php?use_id=7046916. Slide kiểm nghiệm seminar về sắc ký hiện đại ppt dành cho sinh viên ngành Y dược. Trong bộ sưu tập có trắc nghiệm kèm đáp án chi tiết các môn, giúp sinh viên tự ôn tập và học tập tốt môn kiểm nghiệm seminar về sắc ký hiện đại bậc cao đẳng đại học ngành Y dược và các ngành khác
PHÂN TÍCH ĐỊNH LƯỢNG ALKALOID ĐỘC TRONG ACONITUM PENDULUM BẰNG KỸ THUẬT SẮC KÝ HỘI TỤ SIÊU HIỆU NĂNG VỚI ĐẦU DÒ KHỐI PHỔ Tang-Juan Zhao, Huan-Yang Qi, Juan Chen and Yan-Ping Shi ĐẶT VẤN ĐỀ PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN KẾT LUẬN ĐẶT VẤN ĐỀ Các nghiên cứu hóa dược cho thấy diterpenoid alkaloid thành phần nhiều lồi Aconitum, chất chịu trách nhiệm cho hoạt tính sinh học độc tính cao Aconitum pendulum Busch Đặc tính giảm đau, kháng viêm, kháng khuẩn, giúp tăng cường lưu thông máu, chống thấp khớp Trong số alkaloid, alkaloid diterpenoid diester (DDAs) đáng ý có độc tính cao phổ hoạt tính sinh học rộng Vài tai nạn chết người nguyên liệu thô ghi nhận lại việc phát triển hệ thống phân tích nhạy đáng tin cậy để định lượng DDAs A pendulum điều cần thiết PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH Sơ đồ khối hệ thống UPCC-PDA-MS http://www.waters.com/waters/en_VN/Beginner%27s-Guide-to-Convergence-Chromatography-3/nav.htm?cid=134941694&locale=en_VN PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH NGUN VẬT LIỆU, HĨA CHẤT, DUNG MƠI ĐẶC TÍNH Chất đối chiếu: Aconitine, 3-Acetylaconitine, Mesaconitine, Hypaconitine Deoxyaconitine Độ tinh khiết 98 % Năm lô A penlunum tỉnh Cam Túc (lô S1, S2, S3) tỉnh Thanh Hải (lô S4, S5) Isopropanol Dùng cho sắc ký Carbon dioxide ; Nước Độ tinh khiết 99,999 %; Siêu tinh khiết THIẾT BỊ VÀ ĐIỀU KIỆN PHÂN TÍCH ĐẶC TÍNH Waters ACQUITY (UPCC) (Milford, MA, USA) Đầu dò phổ khối song song SQ Cột Waters Waters UPCC ™ BEH 2-EP C18 2.1x150 mm id, hạt 1.7 μm Dung môi A B (A) CO2 siêu tới hạn, (B) methanol với 10 mmol/L amoni acetat Tốc độ dịng, chương trình chạy 0.8 ml/phút, gradient dung mơi A B Áp suất ngược; thể tích tiêm 2100 psi; μL Nhiệt độ cột; buồng đựng mẫu 55 oC; 18 oC Phổ khối Được trang bị ESI, chế độ chọn lọc ion dương (SIR) Điện áp mao quản; điện áp hình nón 2,3 kV ; 70 V Phạm vi phổ hấp thụ; bước sóng phát 200-400 nm; 225 nm Nhiệt độ nguồn; nhiệt độ cô lập 150 oC ; 350 oC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH Hình Cấu trúc hóa học alkaloid độc A.pendulum Chuẩn bị dung dịch chuẩn Dung dịch chuẩn gốc pha methanol nồng độ 0,5 mg/mL Dung dịch chuẩn hỗn hợp chuẩn bị cách trộn dung dịch chuẩn gốc - nồng độ 60 μg/mL.Hiệu chuẩn dung dịch chuẩn cách pha loãng nối tiếp dung dịch chuẩn hỗn hợp để thu nồng độ cuối 0,1; 1; 10; 50; 100 150 ng/mL PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH Các bước chuẩn bị dung dịch thử erlen 50 ml có nút đậy Cân xác 0.1g bột rễ A.pendulum siêu âm 30 phút (80Hz), để yên 8h t0 phòng Thêm 2.0 ml NH3 30 ml diethyl ether Thu lấy lớp dịch phía phần cặn + 20ml diethylether siêu âm 30 phút Gộp dịch chiết đến cắn Hịa cắn với 60 ml methanol Lấy lớp dịch phía trên, rửa cặn lần với 30ml diethyl ether Thu dịch lọc, cô 50ml Lọc qua màng 0.2 μm KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Những điều kiện để tối ưu hóa phương pháp UPCC Việc tối ưu hóa thơng số sắc ký thực cách nghiên cứu ảnh hưởng cột sắc ký, pha động, tốc độ dịng, nhiệt độ cột, áp suất ngược thể tích tiêm mẫu Ba cột sử dụng + Waters Acquity UPCC BEH 2-EP C18 (2.1 mm x 150 mm, 1.7 μm), + BEH C18 (3,0 mm x 100 mm, 1.7 μm), + CSH Fluoro-Phenyl (2.1 mm x 150 mm, 1.7 μm) Cột BEH 2-EP C18 cho kết tốt độ phân giải, hình dạng peak với thời gian rửa giải ngắn (trong vòng phút) Cột BEH C18, Aconitine Hypaconitine không tách khỏi đường thời gian rửa giải dài cột khác Cột CSH Fluoro-Phenyl, áp lực hệ thống cao (gần với 6000 psi) KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Những điều kiện để tối ưu hóa phương pháp UPCC Dung môi chất thêm vào Methanol : acetonitril methanol : isopropanol, Deoxyaconitine Mesaconitine, Hypaconitine Deoxyaconitine không tách khỏi đường nền, hợp chất tách sử dụng methanol làm dung môi Ammonium formate thêm vào với methanol, Mesaconitine Hypaconitine không tách Với acid formic 0.1%, peak không rõ ràng Sự phân tách phụ thuộc vào độ pH dung dịch Ammonium acetate 10 mmol/L cho thấy kết tốt thời gian lưu độ phân giải Hỗn hợp CO2/methanol với 10 mmol/L ammonium acetate sử dụng làm pha động cho UPCC KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Những điều kiện để tối ưu hóa phương pháp UPCC Nhiệt độ cột tăng có ảnh hưởng định đến tách chọn lọc cách giảm độ nhớt methanol (tối ưu 55 oC) Hình 2a Ảnh hưởng nhiệt độ cột lên thời gian lưu Ký hiệu: (1) 3acetylaconitine; (2) hypaconitine; (3) deoxyaconitine; (4) mesaconitine; (5) aconitine 10 KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Những điều kiện để tối ưu hóa phương pháp UPCC Áp suất ngược yếu tố quan trọng ảnh hưởng đến tương tác chất phân tích pha động cách thay đổi mật độ CO2 siêu tới hạn UPCC (tối ưu 2100 psi) Hình 2b Ảnh hưởng áp suất ngược lên thời gian lưu Ký hiệu: (1) 3acetylaconitine; (2) hypaconitine; (3) deoxyaconitine; (4) mesaconitine; (5) aconitine 11 KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Phân tích khối phổ alkaloid Aconitum Các thử nghiệm cho thấy chế độ ion dương phù hợp với việc phát alkaloid aconitum tốt chế độ ion âm điện áp nón ảnh hưởng đáng kể đến q trình ion hóa Sắc ký đồ UPCC sắc ký đồ tổng ion hỗn hợp dung dịch chuẩn thể hình 3a 3b Hình 3a Hình 3b (1) 3-acetylaconitine; (2) hypaconitine; (3) deoxyaconitine; (4) mesaconitine; 12 (5) aconitine KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Thẩm định phương pháp Hiệu chuẩn đường nền, LOD LOQ Trong điều kiện tối ưu,hiệu chuẩn thực với dung dịch sáu nồng độ (0,1, 1, 10, 50, 100 150 ng / mL) lặp lại lần cho nồng độ Các phương trình hồi quy, hệ số tương quan (r), khoảng tuyến tính, LOD LOQ liệt kê bảng 13 KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Thẩm định phương pháp Độ xác, độ ổn định độ lặp lại Độ xác đánh giá biến đổi ngày liên ngày cách tiêm liên tục dung dịch mẫu Sự thay đổi ngày ước tính năm lần tiêm liên tiếp ngày thay đổi liên ngày đo năm ngày liên tiếp Dung dịch mẫu coi ổn định vịng 12 giá trị RSD% thời gian lưu diện tích peak