Trắc nghiệm, bài giảng pptx các môn chuyên ngành Y dược hay nhất có tại “tài liệu ngành Y dược hay nhất”; https://123doc.net/users/home/user_home.php?use_id=7046916. Slide kiểm nghiệm seminar về sắc ký hiện đại ppt dành cho sinh viên ngành Y dược. Trong bộ sưu tập có trắc nghiệm kèm đáp án chi tiết các môn, giúp sinh viên tự ôn tập và học tập tốt môn kiểm nghiệm seminar về sắc ký hiện đại bậc cao đẳng đại học ngành Y dược và các ngành khác
PHÂN TÍCH ĐỊNH LƯỢNG ALKALOID ĐỘC TRONG ACONITUM PENDULUM BẰNG KỸ THUẬT SẮC KÝ HỘI TỤ SIÊU HIỆU NĂNG KẾT HỢP VỚI ĐẦU DÒ KHỐI PHỔ Tác giả: Tang-Juan Zhao Huan-Yang Qi Juan Chen Yan-Ping Shi NỘI DUNG TRÌNH BÀY Đặt vấn đề Phương pháp nghiên cứu Kết bàn luận Phân tích mẫu Kết luận c ĐẶT VẤN ĐỀ ĐẶT VẤN ĐỀ Nữ hoàng độc dược Tẩm độc mũi tên săn sói Chi Ô đầu (Anicotum) Họ Mao lương (Ranunculaceae) Phân bố: ôn đới Bắc bán cầu Tác dụng: Giảm đau, chống thấp khớp, chóng loạn nhịp Thành phần chính: diester diterpenoid alkaloid (DDAs) T J Zhao, H Y Qi, J Chen, Y P Shi, Quantitative analysis of five toxic alkaloids in Aconitum pendulum using ultra-performance convergence chromatography (UPC2) coupled with mass spectrometry, RSC Adv., 2015, 5, 103869-103875 ĐẶT VẤN ĐỀ Phương pháp kiểm soát chất lượng? đánh giá rủi ro độc tính - an tồn dùng Phát triển hệ thống phân tích nhạy đáng tin cậy để định lượng DDAs SẮC KÝ HỘI TỤ SIÊU HIỆU NĂNG (UPCC) KẾT HỢP VỚI KHỐI PHỔ (MS) T J Zhao, H Y Qi, J Chen, Y P Shi, Quantitative analysis of five toxic alkaloids in Aconitum pendulum using ultra-performance convergence chromatography (UPC2) coupled with mass spectrometry, RSC Adv., 2015, 5, 103869-103875.c c PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 HÓA CHẤT – THUỐC THỬ chất chuẩn có độ tinh khiết đạt 98% Methanol Acetonitrile Isopropanol Carbon dioxide (99,999% tinh khiết) Nước siêu tinh khiết Hình 2.1 Cấu trúc hóa học alkaloid A pendulum T J Zhao, H Y Qi, J Chen, Y P Shi, Quantitative analysis of five toxic alkaloids in Aconitum pendulum using ultra-performance convergence chromatography (UPC2) coupled with mass spectrometry, RSC Adv., 2015, 5, 103869-103875.c PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.2 thiết bị điều kiện sắc ký THIẾT BỊ ĐIỀU KIỆN SẮC KÝ UPCC Waters Acquity (Milford, MA, USA) Đầu dò khối phổ SQ tandem Waters (USA) Cột Waters Acquity 2.1 x 150 mm i.d., hạt 1.7 µm UPCC ™ BEH 2-EP C18 Pha động (A) CO2 siêu tới hạn (B) metanol với ammonium acetate 10 mmol/L Tốc độ dịng 0.8 mL/phút Chương trình rửa giải – phút, A 93 - 87%; - phút, A 87- 93% Nhiệt độ buồng, cột đựng mẫu 0 55 C,18 C Áp suất ngược, Thể tích tiêm 2100 psi, V=1 µL Bộ phận tiêm mẫu Van bơm Dung dịch rửa phận tiêm mẫu Methanol methanol / isopropanol Phổ hấp thụ, bước sóng phát 200-400 nm, 225 nm T J Zhao, H Y Qi, J Chen, Y P Shi, Quantitative analysis of five toxic alkaloids in Aconitum pendulum using ultra-performance convergence chromatography (UPC2) coupled with mass spectrometry, RSC Adv., 2015, 5, 103869-103875.c PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.2 thiết bị điều kiện sắc ký Khối phổ THIẾT BỊ Ion hóa phun điện (ESI) ĐIỀU KIỆN SẮC KÝ Ion hóa ion dương, chế độ ghi ion chọn (SIR) Nhiệt độ bay 150 C 350 C Điện áp mao quản 2,3 kV Điện áp cone 70 V Lưu lượng khí bay dung mơi 600 L/h Lưu lượng khí cone (N2) 50 L/h Nhiệt độ nguồn T J Zhao, H Y Qi, J Chen, Y P Shi, Quantitative analysis of five toxic alkaloids in Aconitum pendulum using ultra-performance convergence chromatography (UPC2) coupled with mass spectrometry, RSC Adv., 2015, 5, 103869-103875.c PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.3 Chuẩn bị dung dịch chuẩn Dung dịch chuẩn gốc pha methanol nồng độ 0,5 mg/mL Dung dịch chuẩn hỗn hợp: pha dung dịch chuẩn gốc gộp lại nồng độ 60 µg/mL Dung dịch chuẩn làm viêc: pha loãng nối tiếp dung dịch chuẩn hỗn hợp để thu nồng độ cuối 0,1, 1, 10, 50, 100 150 ng/mL o Tất dung dịch chuẩn chuẩn bị lưu trữ – C trước phân tích T J Zhao, H Y Qi, J Chen, Y P Shi, Quantitative analysis of five toxic alkaloids in Aconitum pendulum using ultra-performance convergence chromatography (UPC2) coupled with mass spectrometry, RSC Adv., 2015, 5, 103869-103875.c 10 KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.2 khảo sát điều kiện phân tích khối phổ Các thử nghiệm cho thấy chế độ ion dương phù hợp với việc phát alkaloid tốt chế độ ion âm + Trong chế độ ion dương, ion [M + H] ion có nhiều Từ ion xác định trọng lượng phân tử alkaloid T J Zhao, H Y Qi, J Chen, Y P Shi, Quantitative analysis of five toxic alkaloids in Aconitum pendulum using ultra-performance convergence chromatography (UPC2) coupled with mass spectrometry, RSC Adv., 2015, 5, 103869-103875.c 20 KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.2 khảo sát điều kiện phân tích khối phổ (a, b) Dung dịch chuẩn (c, d) Dung dịch thật Hình sắc ký đồ (a,c): UPCC 225 nm (b,d) UPCC đầu dị MS với điều kiện tối ưu tìm T J Zhao, H Y Qi, J Chen, Y P Shi, Quantitative analysis of five toxic alkaloids in Aconitum pendulum using ultra-performance convergence chromatography (UPC2) coupled with mass spectrometry, RSC Adv., 2015, 5, 103869-103875.c 21 KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.3 THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP 3.3.1 Biểu đồ hiệu chuẩn, LOD,LOQ Dùng dung dịch chuẩn làm việc nồng độ 0.1, 1, 10, 50, 100 150 ng/mL, đo lặp lại lần nồng độ Bảng 3.3.1 BIỂU ĐỒ HIỆU CHUẨN, LOD,LOQ Chất phân tích Phương trình hồi quy r Khoảng tuyến tính (ng/mL) LOD LOQ (ng/mL) (ng/mL) 3-Acetylaconitine y=52 314x + 13 714 0.9994 0.1 – 150 0.013 0.027 Hypaconitine y=60 021x + 57 111 0.9991 0.1 – 150 0.016 0.044 Deoxyaconitine y=83 512x + 14 836 0.9995 0.1 – 150 0.034 0.051 Mesaconitine y=57 768x + 59 934 0.9997 0.1 – 150 0.011 0.042 Aconitine y= 60 341x + 10 002 0.9997 0.1 – 150 0.029 0.077 y diện tích pic, x nồng độ, LOD= S/N , LOQ= 10 S/N KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.3 THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP 3.3.2 ĐỘ CHÍNH XÁC, ĐỘ ỔN ĐỊNH, ĐỘ LẶP LẠI Độ xác độ ổn định, sử dụng dung dịch thử (S2) nồng độ 2.0, 0.6, 0.9, 4.6 32.1 ng/mL Độ xác: ĐCX ngày: đo lần tiêm ngày ĐCX ngày: đo ngày liên tiếp Độ ổn định, mẫu thử 2h đo lần suốt 12 h bảo quản nhiệt độ phòng ổn định vòng 12 h Độ lặp lại đánh giá dung dịch thử khác chuẩn bị song song với mẫu (S2) có số lô T J Zhao, H Y Qi, J Chen, Y P Shi, Quantitative analysis of five toxic alkaloids in Aconitum pendulum using ultra-performance convergence chromatography (UPC2) coupled with mass spectrometry, RSC Adv., 2015, 5, 103869-103875.c 22 KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.3 THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP 3.3.2 ĐỘ CHÍNH XÁC, ĐỘ ỔN ĐỊNH, ĐỘ LẶP LẠI Bảng 3.3.2 Giá trị %RSD độ xác, độ ổn định, độ lặp lại Chất phân tích Độ xác Độ xác ngày Độ ổn định Độ lặp lại ngày tR S tR S tR S %RSD 3-Acetylaconitine 0.1 1.2 0.4 3.2 0.0 1.9 0.6 Hypaconitine 0.2 1.5 0.2 3.2 0.2 1.7 1.9 Deoxyaconitine 0.2 2.6 0.3 1.7 0.4 0.9 1.4 Mesaconitine 0.2 3.9 0.2 4.7 0.0 1.9 0.7 Aconitine 0.1 4.3 0.1 4.9 0.2 1.4 0.1 T J Zhao, H Y Qi, J Chen, Y P Shi, Quantitative analysis of five toxic alkaloids in Aconitum pendulum using ultra-performance convergence chromatography (UPC2) coupled with mass spectrometry, RSC Adv., 2015, 5, 103869-103875.c 24 KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.3 THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP 3.3.3 Độ Thêm lượng chất chuẩn khác vào ba dung dịch thử có hàm lượng biết, để xác định tỷ lệ phục hồi Tỷ lệ phục hồi Kết quả: Phương pháp đề xuất có độ cao phân tích đồng thời alkaloid T J Zhao, H Y Qi, J Chen, Y P Shi, Quantitative analysis of five toxic alkaloids in Aconitum pendulum using ultra-performance convergence chromatography (UPC2) coupled with mass spectrometry, RSC Adv., 2015, 5, 103869-103875.c 25 KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Alkaloid 3-acetylaconitine Hypaconitine Deoxyaconitine Mesaconitine Aconitine Lượng ban đầu Lượng thêm vào Lượng đo (µm) (µm) (µm) Tỷ lệ phục hồi (%) Tỷ lệ phục hồi trung %RSD bình (%) 10.1200 7.83 17.6838 96.6 10.0110 9.78 19.6639 98.7 98.2 1.4 10.0230 12.30 22.2246 99.2 2.8336 2.32 5.0956 97.5 2.803 2.81 5.5681 98.4 96.9 1.9 2.8064 3.36 5.9917 94.8 4.5540 3.66 8.1042 97.0 4.5050 4.54 8.8816 96.4 95.3 2.6 4.5104 5.42 9.5239 92.5 21.9604 17.40 39.4300 100.4 21.7239 21.82 43.3912 99.3 97.6 4.0 21.7499 26.12 46.0676 93.1 156.2528 123.86 278.2549 98.5 154.5698 154.38 310.8024 101.2 97.3 4.7 154.7551 186.44 326.8392 92.3 KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.4 SO SÁNH CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH (A,C) Sắc ký đồ UPLC bước sóng 225nm (B, D) Sắc ký đồ UPCC-MS với điều kiện tối ưu (A, B): dung dịch chuẩn (C, D): dung dịch mẫu thực 1, 3-acetylaconitine; 2, hypaconitine; 3, deoxyaconitin; 4, mesaconitin; 5, aconitin 27 KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.4 SO SÁNH CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH Ưu điểm: Sử dụng đầu dị MS cho LOD, LOQ thâp sử dụng đầu dò UV Kích thước hạt pha tĩnh nhỏ (