Chế tạo và tính chất của vật liệu dây nano (Eu, Tb) PO4.H2O nhằm ứng dụng trong y sinh : Luận văn ThS. Vật liệu và linh kiện Nanô

1 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC CƠNG NGHỆ PHẠM THỊ LIÊN CHẾ TẠO VÀ TÍNH CHẤT CỦA VẬT LIỆU DÂY NANO (Eu,Tb)PO4.H2O NHẰM ỨNG DỤNG TRONG Y SINH LUẬN VĂN THẠC SĨ VẬT LIỆU VÀ LINH KIỆN NANÔ Hà Nội – 2012 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ PHẠM THỊ LIÊN CHẾ TẠO VÀ TÍNH CHẤT CỦA VẬT LIỆU DÂY NANO (Eu,Tb)PO4.H2O NHẰM ỨNG DỤNG TRONG Y SINH Chuyên ngành : Vật liệu linh kiện Nanô Mã số : Chuyên ngành đào tạo thí điểm LUẬN VĂN THẠC SĨ VẬT LIỆU VÀ LINH KIỆN NANÔ NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC TS Nguyễn Thanh Hường Hà Nội - 2012 54 MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƢƠNG : TỔNG QUAN 1.1 Vật liệu phát quang 1.2 Vật liệu nano phát quang 1.2.1 Vật liệu phát quang cấu trúc nano 1.2.2 Vật liệu nano phát quang chứa đất 10 1.3 Phƣơng pháp chế tạo vật liệu 19 1.3.1 Phương pháp thủy nhiệt 19 1.3.2 Phương pháp đồng kết tủa từ dung dịch 20 1.3.3 Phương pháp sol – gel 21 1.3.4 Phương pháp Vi sóng (Microwave) 21 Chƣơng 2: THỰC NGHIỆM 24 2.1 Giai đoạn 1: Tổng hợp TbPO4.H2O, EuPO4.H2O 24 2.1.1 Hóa chất 24 2.1.2 Bảng thí nghiệm 25 2.1.3 Dụng cụ thí nghiệm 25 2.1.4 Pha hóa chất 25 2.1.5 Tiến hành thí nghiệm 26 2.2 Giai đoạn Hoạt hóa bề mặt dây nano (Tb/Eu)PO4.H2O 28 2.2.1 Bọc vỏ dây Tb/EuPO4.H2O Silica (SiO2) 28 2.2.2 Bọc Tb/EuPO4.H2O@SiO2 –NH2 29 2.2.3 Hoạt hóa Glutaraldehyde (GDA) – IgG (Immunoglobulin G) 29 2.3 Các phƣơng pháp nghiên cứu hình thái học, cấu trúc tính chất vật liệu (Tb,Eu)PO4 H2O 29 2.3.1 Phương pháp đo phổ huỳnh quang 29 2.3.2 Phương pháp nghiên cứu cấu trúc nhiễu xạ tia X 32 2.3.3 Kính hiển vi điện tử truyền qua (TEM) 33 2.3.4 Kính hiển vi điện tử quét (SEM) 34 Chƣơng 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 37 3.1 Kết đo SEM 37 3.2 Kết đo TEM 37 3.3 Kết đo X-ray 38 3.4 Kết đo phổ huỳnh quang 39 3.5 Ứng dụng y sinh 41 3.5.1 Cơ sở phương pháp phân tích miễn dịch huỳnh quang (MDHQ) 42 3.5.2 Điều kiện quy định tiến hành thử nghiệm công cụ đánh dấu y sinh nhận dạng virút/vắc-xin 43 3.5.3 Kết xây dựng quy trình phân tích HQMD 43 3.5.4 Kết phân tích nhận dạng vi hình thái kính hiển vi quang học phân giải cao 44 KẾT LUẬN 47 55 HƢỚNG PHÁT TRIỂN ĐỀ TÀI 48 TÀI LIỆU THAM KHẢO 49 56 BẢNG KÍ HIỆU, VIẾT TẮT TRONG LUẬN VĂN Transmission Electron Microscope Kính hiển vi điện tử truyền qua Field Emission Scanning Electron Microscope Kính hiển vi điện tử quét phát xạ trường Scanning Electron Microscope Kính hiển vi điện tử quét X-ray diffraction Nhiễu xạ tia X TEM FESEM SEM XRD ETOH IgG GDA APTMS Microwave Phương pháp vi sóng 10 TEOS TetraEthylOrthoSilica 11 PBS 12 EDTA Ethylendiamintetraaceticacide 13 MEM Minimum Essential Medium Eagle Ethanol Immunoglobulin G Glutaraldehyde 3-Aminopropyl – trimethoxysilar Phosphate Buffered Saline 57 DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH Hình 1 Ion huỳnh quang A mạng HEAT: trở khơng xạ tới trạng thái Hình Sơ đồ mức lượng ion huỳnh quang A hình 1.1 Hình Quá trình truyền lượng từ S tới A Dịch chuyển S→S* hấp thụ, A2*→A phát xạ Mức A1* tích lũy nhờ truyền lượng, tắt dần không phát xạ tới mức A2* Điều ngăn cản mức chuyển đổi ngược…………… Hình Hàm phân bố điện tử nguyên tố Ce 12 Hình Sự thay đổi bán kính nguyên tử nguyên tố Lantan theo điện tích hạt nhân nguyên tử [5] 13 Hình Sự thay đổi bán kính ion Ln3+ theo điện tích hạt nhân [5] 14 Hình Các q trình phát quang có vật liệu kích thích 15 Hình Sơ đồ mơ tả q trình truyền lượng cộng hưởng Jablonski 17 Hình Sơ đồ mức lượng Eu3+ Tb3+ [3, 37, 43] 18 Hình 10: Giản đồ mức lượng ion RE3+- Giản đồ Dieke 18 Hình Ảnh thiết bị tổng hợp vi sóng 26 Hình 2 Sơ đồ thí nghiệm tổng hợp Dây (Eu,Tb)PO4.H2O 27 Hình Sơ đồ chuyển dời mức lượng điện tử 30 Hình Sơ đồ hệ đo phổ huỳnh quang 31 Hình Hệ đo quang huỳnh quang iHR550 Viện Khoa học Vật liệu 31 Hình Sơ đồ nhiễu xạ tia X từ số hữu hạn mặt phẳng 32 Hình Thiết bị nhiễu xạ tia X D5000 hãng SIEMENS 33 Hình Sơ đồ cấu tạo máy TEM 34 Hình Kính hiển vi điện tử truyền qua (JEM1010-JEOL) 34 Hình 10 Sơ đồ cấu tạo máy SEM 36 Hình 11 Ảnh kính hiển vi điện tử quét Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ương (Hitachi S - 4800) 36 Hình Kết đo SEM mẫu (Eu,Tb)PO4.H2O với tỷ lệ nồng độ Eu3+:Tb3+ a)1:0,b) 1:2, c)1:8 37 Hình Kết đo TEM mẫu (Eu,Tb)PO4.H2O với tỷ lệ nồng độ Eu3+:Tb3+ = 1:8 38 Hình 3 Giản đồ nhiễu xạ tia X mẫu TbPO4.H2O, EuPO4.H2O, (Tb,Eu)PO4.H2O 38 Hình Phổ huỳnh quang mẫu (Eu,Tb)PO4.H2O với tỷ lệ nồng độ Eu3+:Tb3+thay đổi từ 1/1 đến 1/16 39 58 Hình Phổ huỳnh quang mẫu EuPO4.H2O (Eu,Tb)PO4.H2O với tỷ lệ nồng độ Eu3+:Tb3+là 1/2 đến 1/8 40 Hình Phổ huỳnh quang mẫu tỷ lệ Eu/Tb = 1/8 bọc chức hóa…………………………………………………………………………… 40 Hình Mơ hình virút cowpea, sởi Rota 41 Hình Sơ đồ nguyên lý phương pháp phân tích đánh dấu huỳnh quang miễn dịch……………………………………………………………………….42 Hình Kính hiển vi huỳnh quang BX 40- Olympus 45 Hình 10 (a) Vi ảnh tế bào vero nhiễm virút sởi sử dụng công cụ đánh dấu MP (USA); (b Vi ảnh tế bào vero nhiễm virút sởi,công cụ đánh dấu MP (USA) (c) Vi ảnh tế bào vero nhiễm virút sởi sử dụng công cụ đánh dấu )(Eu,Tb)PO4.H2O-GDA-IgG 46 59 DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU Bảng 1 Mối quan hệ kích thước số nguyên tử bề mặt Bảng Các ion nguyên tố đất hóa trị [5] 11 Bảng Bảng thí nghiệm (Tb,Eu)PO4 25 Bảng 2 Các thơng số thí nghiệm 28 MỞ ĐẦU Công nghệ nano công nghệ chủ chốt với nhiều ứng dụng quan trọng nghiên cứu y sinh [13,15, 27, 36] Trong năm gần đây, huỳnh quang phức lantanit tập trung nghiên cứu ngày nhiều tính chất quang vật lý hấp dẫn chúng [8, 10, 27, 28, 32, 33, 40, 43] Ưu điểm phức lantanit có đặc trưng như: thời gian sống huỳnh quang dài, độ dịch chuyển Stock lớn, độ rộng phổ hẹp hữu ích cho việc đánh dấu huỳnh quang, làm đầu dò, làm cảm biến cho việc xét nghiệm, siêu âm phịng thí nghiệm chụp ảnh thể người [6,15, 35] Các lantanit kích thước nano có độ ổn định cao, dễ chế tạo dễ chức hóa [22, 23] Một vật liệu huỳnh quang lantanit vật liệu nano dạng chứa ion Tb3+ Eu3+ có triển vọng lớn ứng dụng y sinh học [31, 36, 39, 40, 44] Vật liệu nano có khả ứng dụng sinh học kích thước chúng so sánh với kích thước tế bào (1 - 100 nm), virus (20 - 450 nm), protein (5 - 50 nm), DNA (2 nm rộng 10 - 100 nm chiều dài) Với kích thước nhỏ bé, cộng với việc “ngụy trang” giống thực thể sinh học khác thâm nhập vào tế bào virus [1] Ứng dụng vật liệu nano sinh học rộng rãi phân tách tế bào, nhiệt trị, tăng độ sắc nét hình ảnh cộng hưởng từ hạt nhân, ứng dụng hóa học xanh (phân tích tổng hợp vật liệu) [40] Trong phân tích y sinh, vật liệu nano có nhiều ưu điểm giảm kích thước, khối lượng mẫu phân tích, làm tăng độ nhạy, độ chọn lọc, giảm thiểu lượng hóa chất phân tích, dẫn truyền thuốc Trên giới nghiên cứu khoa học thuộc lĩnh vực vật liệu nanô công nghệ nanô bắt đầu đạt số kết có tính đột phá khơng nghiên cứu q trình sinh học mà cịn góp phần quan trọng cơng tác khám chữa bệnh, nâng cao sức khoẻ cho cộng đồng [32] Trong đó, đáng kể cảm biến quang sinh y sở vật liệu nanô phát huỳnh quang Cảm biến quang sinh y ngày trở thành công cụ quan trọng để phát thành phần quan trọng thể sống phân tử protein, polipeptid, axit nucleic, hay tổ chức sống vi mô tế bào virus Trong y tế chúng góp phần xác định sớm rõ ràng ngun bệnh để có biện pháp phịng chống, chữa trị thích hợp hiệu Phương pháp đánh dấu sinh học đồng vị xạ ngắn ngày Yalow Berson phát minh từ 1959 ứng dụng từ lâu có độ nhậy cao (10-9 - 10-11), tính nguy hiểm chu kì bán huỷ phóng xạ ngắn ngày, nên việc phổ cập hạn chế Bên cạnh phương pháp đánh dấu (label) nhuộm mầu (staining) vật liệu phát quang ngày phát triển, đến trở thành công nghệ cảm biến sinh học quan trọng lĩnh vực xét nghiệm sinh học, y tế [16, 38] Các vật liệu phát quang thường dùng lĩnh vực đánh dấu huỳnh quang y sinh chia làm loại: chất mầu hữu cơ, vật liệu nano kiểu quantum dot bán dẫn, vật liệu huỳnh quang chứa ion đất Các chất mầu hữu cơ, Fluorescence hay Rodamine, vật liệu truyền thống, dùng Tuy nhiên, không bền môi trường sinh học nên việc sử dụng chúng có phần bị hạn chế độ nhạy, độ ổn định tính chọn lọc [16, 18, 35] Gần vật liệu nano kiểu quantum dot bán dẫn loại ZnS hay CdSe, tính chất huỳnh quang đặc biệt trội, lại bền tan tốt nước tập trung phát triển thành công nghệ đánh dấu huỳnh quang sinh học có triển vọng [18, 21] Tuy nhiên, vật liệu nguồn ZnS hay CdSe lại có nhược điểm tính độc hại cao nên việc ứng dụng chúng thực tế gặp nhiều khó khăn Chính vậy, vài năm gần việc tìm kiếm loại vật liệu không độc hại để phát triển công nghệ đánh dấu huỳnh quang nông y sinh ngày trở nên cấp thiết Vì loại vật liệu đáp ứng yêu cầu vật liệu huỳnh quang chứa ion đất [38] Lĩnh vực nghiên cứu chế tạo ứng dụng vật liệu nanô vào lĩnh vực y sinh nước ta, nói có kết bước đầu vật liệu nano từ tính vật liệu nano phát quang Vật liệu nano từ tính chủ yếu ứng dụng oxit sắt nano y sinh tiến hành nhiều viện nghiên cứu điển hình tác giả: PGS Nguyễn Hoàng Hải ĐHTN - ĐHQG Hà Nội, GS Nguyễn Xuân Phúc PGS Lê Văn Hồng viện KHVLVN, PGS Trần Hoàng Hải Tp.HCM Trong lĩnh vực Vật liệu nano phát quang phải kể đến PGS Nguyễn Ngọc Long, GS Nguyễn Hoàng Lương ĐHQG, GS Nguyễn Quang Liêm, PGS Phạm Thu Nga, PGS Nguyễn Xuân Nghĩa chế tạo vật liệu quantum dot bán dẫn đặc tính quang điện tử trội chúng Theo hướng khác, tập thể khoa học PGS Trần Kim Anh GS Lê Quốc Minh kiên trì nghiên cứu phát triển phương pháp tổng hợp vật liệu nanô chứa đất Y, Eu, Tb, Er, Yb, Gd v.v tập trung nâng cao hiệu suất phát quang chúng Hiện tập thể khoa học bắt đầu làm chủ công nghệ chế tạo vật liệu nano phát quang chứa đất hiếm, cụ thể vật liệu chứa nguyên tố Eu, Tb, Y, Er, Gd Yb phát huỳnh quang mạnh Nghiên cứu chế tạo nanô chứa ion đất nghiên cứu vài năm gần nhằm ứng dụng y sinh học mở 39 Kết đo phổ huỳnh quang Để khảo sát cường độ phát quang xác định chuyển dời xạ mức lượng điện tử vật liệu dây nano (Tb,Eu)PO4.H2O tiến hành đo phổ huỳnh quang mẫu chế tạo phòng Cooperman, Viện Khoa học vật liệu thuộc Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam 3.4 30000 EuPO4.H2O exc = 370nm ng độ(a.u) Cườ (Eu,Tb)PO4.H2O;Eu/Tb=1/1 612 25000 (Eu,Tb)PO4.H2O;Eu/Tb=1/2 (Eu,Tb)PO4.H2O;Eu/Tb=1/4 (Eu,Tb)PO4.H2O;Eu/Tb=1/8 20000 (Eu,Tb)PO4.H2O;Eu/Tb=1/16 696 15000 588 10000 702 5000 652 560 580 600 620 640 660 680 700 720 Bướ c só ng(nm) Hình Phổ huỳnh quang mẫu (Eu,Tb)PO4.H2O với tỷ lệ nồng độ Eu3+:Tb3+thay đổi từ 1/1 đến 1/16 Hình 3.4 kết đo phổ huỳnh quang mẫu EuPO4.H2O (Tb,Eu)PO4.H2O kích thích bước sóng 370nm Khi có mặt ion Tb với ion Eu, phổ huỳnh quang thu khơng thay đổi vị trí đỉnh độ bán rộng Các phổ huỳnh quang, xuất đỉnh nhọn liên quan đến tính chất phát xạ ion Eu đỉnh nhỏ liên quan đến ion Tb Kết cho thấy Tb, Eu xảy q trình truyền lượng từ ion Tb sang Eu Đặc biệt so sánh cường độ nhận thấy: cường độ huỳnh quang môi trường nước phụ thuộc mạnh vào tỷ lệ hai nguyên tố Eu Tb Tại tỷ lệ mà hàm lượng Eu Tb nhau, cường độ huỳnh quang lớn có Eu Có thể cho tỷ lệ Eu/Tb = 1/8 ion Tb truyền lượng có hiệu cho ion Eu Nguyên nhân tượng truyền lượng phụ thuộc mạnh vào tỷ lệ ion truyền (Tb) ion tiếp nhận (Eu) cần phải nghiên cứu tiếp tục 40 30000 exc = 370nm 612 25000 EuPO4.H2O (Eu,Tb)PO4.H2O;Eu/Tb=1/2 (Eu,Tb)PO4.H2O;(Eu/Tb=1/8) ng độ(a.u) Cườ 20000 695 15000 588 688 10000 702 5000 650 560 580 600 620 640 660 680 700 720 740 Bướ c só ng(nm) Hình Phổ huỳnh quang mẫu EuPO4.H2O (Eu,Tb)PO4.H2O với tỷ lệ nồng độ Eu3+:Tb3+là 1/2 đến 1/8 Các kết đo huỳnh quang với nguồn kích 370nm cho thấy chuyển dời đặc trưng ion Eu (5D0- 7Fj; j = 1, 2, 3, 4) [13] tương ứng với đỉnh 589, 612, 650 695nm, 702nm Cường độ phát xạ ion Eu3+ đạt giá trị cực đại với tỷ lệ Eu3+/Tb3+ 1/8 đỉnh phát xạ mạnh 612nm Vì chúng tơi lấy mẫu có tỷ lệ Eu/Tb = 1/8 để đem bọc chức hóa bề mặt ứng dụng y sinh 488 8000 7000 398 (Eu,Tb)PO4.H2O (Eu,Tb)PO4.H2O@SiO2 (Eu,Tb)PO4.H2O@SiO2-NH2 (Eu,Tb)PO4.H2O@SiO2-NH2-GDA (Eu,Tb)PO4.H2O@SiO2-NH2-GDA-IgG ng độ(a.u) Cườ 6000 696 5000 588 612 4000 3000 2000 1000 400 450 500 550 600 Bướ c só ng(nm) 650 700 750 Hình Phổ huỳnh quang mẫu tỷ lệ Eu/Tb = 1/8 bọc chức hóa Phổ huỳnh quang mẫu nano Tb/EuPO4.H2O chức hóa phát xạ ánh sáng đỏ với chuyển dời đặc trưng Eu(III): 5D0→7Fn (n = 1, 2, 41 4) ion Eu(III) [13,17] Các bước sóng 588, 612, 652 696 nm ứng với chuyển dời 5D0→7F1, 5D0→7F2, 5D0→7F3 5D4→7F4 Eu(III) [20, 33], vạch phát xạ mạnh 696 nm So với huỳnh quang nano đất Eu(III) nano Eu(III) bọc vỏ chức hóa bề mặt có khả phát quang mạnh, trình bọc vỏ gắn với nhóm chức hữu amin khơng gây ảnh hưởng đến chất đặc trưng phát xạ huỳnh quang vật liệu Khi gắn với GDA vạch phát xạ mạnh 696nm gắn với phần tử sinh học (IgG) vạch phát xạ mạnh 612nm nhiên vùng sóng ngắn từ 400nm đến 500nm xuất đám huỳnh quang rộng cực đại 489nm Nguyên nhân xuất giải phát quang rộng sóng ngắn cịn chưa rõ ràng Vì vậy, cần phải có nghiên cứu tiếp tục Nhưng việc xuất đám phát quang ảnh hưởng tới màu sắc đặc trưng cho công cụ đánh dấu chế tạo dựa vật liệu loại Bên cạnh vạch phổ phát quang đặc trưng cho ion Eu xuất tương tự phát quang vật liệu (Tb,Eu)PO4·H2O chưa vi bọc 3.5 Ứng dụng y sinh Ngày nay, sinh y học có phương pháp phân tích xét nghiệm phổ biển phương pháp ELISA (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay) phương pháp miễn dịch huỳnh quang Trong phương pháp phân tích miễn dịch huỳnh quang dùng phổ biến có độ nhạy cao, xác Hình 3.7 mơ hình virút Cowpea, hay sởi Rota có kích thước 28nm, 120nm 70nm, tương ứng Tất loại virút có kích thước nằm thang nanomet - thực tế chúng hình thành lớp vật liệu nanơ tự nhiên có cấu trúc phức tạp, lại có kích thước đồng vi hình thái thống mà không vật liệu nanô chế tạo từ phịng thí nghiệm so sánh Cowpea mosaic virút, Sởi (Measles) virút, Rota virút, 70nm 28nm 120nm Hình Mơ hình virút cowpea, sởi Rota Hiện quy trình sản xuất vắc-xin thường sử dụng loại tế bào chuẩn - tế bào vero, cho lây nhiễm với virút gây bệnh truyền nhiễm tương ứng Quá 42 trình gây nhiễm sản sinh kháng nguyên, mầm gây bệnh Vì vậy, cơng cụ đánh dấu có thành phần kháng thể tương ứng tiếp xúc với hệ tế bào lây nhiễm xảy phản ứng sinh học đặc hiệu kháng nguyên kháng thể - phản ứng miễn dịch Chúng ta hình dung cụ thể chế phản ứng miễn dịch thông qua hình 3.8 Hình Sơ đồ nguyên lý phương pháp phân tích đánh dấu huỳnh quang miễn dịch Chú thích tiếng Việt tương ứng: antibody: kháng thể; anti-antibody: kháng-kháng thể; labelled anti-antibody: kháng-kháng thể bị gắn kết với vật liệu phát quang; complex between antigen/ antibodies and labelled anti-antibodies: Phức hợp kháng nguyên/kháng thể kháng-kháng thể gắn vật liệu phát quang 3.5.1 Cơ sở phương pháp phân tích miễn dịch huỳnh quang (MDHQ) Trong hình 3.8 phần trên, thấy bên phải hình 3.8 ký hiệu biểu thị: kháng thể (antibody), kháng- kháng thể (anti-antibody) và: kháng-kháng thể gắn kết với vật liệu phát quang (labelled anti-antibody) Thành phần cuối cơng cụ đánh dấu y sinh học Phần hình 3.8 mơ tả cơng cụ đánh dấu tương tác với phức hợp kháng nguyên/kháng thể có bề mặt virút dựa tương tác miễn dịch (complex between antigen/ antibodies and labelled anti-antibodies) Sản phẩm phản ứng miễn dịch liên quan đến virút có kích thước micromet Đơi chúng tạo thành mảng lớn với kích thước micromet Vì vậy, muốn phát cần có kính hiển vi quang học có khả phóng đại khoảng hàng chục ngàn lần Khi phát nhận dạng rõ nét sản phẩm phản ứng miễn dịch Sử dụng kính hiển vi 43 quang học phân giải cao, độ phóng đại hàng chục nghìn lần trở lên (>10.000), dễ dàng phát sản phẩm phản ứng miễn dịch có đính vật liệu phát quang Từ việc phân tích hình dạng, màu sắc cường độ phát quang kết tập người ta đánh giá chất lượng vắc-xin 3.5.2 Điều kiện quy định tiến hành thử nghiệm công cụ đánh dấu y sinh nhận dạng virút/vắc-xin Để thử nghiệm tác dụng công cụ đánh dấu y sinh thực tiễn sản xuất vắc-xin, hợp tác với Trung tâm nghiên cứu sản xuất vắc-xin sinh phẩm y tế Polyvac Phương pháp thử nghiệm dùng đối chứng với sản phẩm chuyên dụng nhập ngoại với quy trình ni cấy chuẩn điều kiện y sinh siêu nhà máy sản xuất vắc – xin Vĩnh Hưng - Địa điểm tiến hành thử nghiệm: Trong khu thí nghiệm sinh học siêu nhà máy Vĩnh Hưng Đo hiển vi huỳnh quang thảo luận đánh giá Trung tâm Polyvac - Phương thức thử nghiệm: Vật liệu đối chứng sản phẩm nhập ngoại Hoa Kỳ Nhật Thiết bị nghiên cứu sản xuất vắc-xin Trung tâm Polyvac Sử dụng quy trình chuẩn bị mẫu quy trình đo đánh giá hiển vi huỳnh quang phân giải cao lắp đặt Trung tâm Polyvac để tiến hành nghiên cứu thử nghiệm cho tất mẫu công cụ đánh dấu đề tài chế tạo - Đối tượng ưu tiên: Sản phẩm vắc-xin sởi dây chuyền công nghệ Nhật chuyển giao sở đầu tư ODA 3.5.3 Kết xây dựng quy trình phân tích HQMD Thử nghiệm đối chứng với công cụ đánh dấu nhập khẩu, cộng điều kiện giữ nguyên quy trình chuẩn bị mẫu phân tích, tiêu chuẩn lựa chọn mẫu thử nghiệm: - Các dịch mẫu phải tương thích với dịch sinh lý vắc-xin sởi - Các mẫu có phát quang màu xanh blue màu xanh vàng, để phù hợp với màu huỳnh quang xanh blue công cụ đánh dấu nhập Các cơng cụ phải có khả phân tán ổn định mơi trường đệm có số pH hợp lý tương thích với mơi trường sinh lý vắc-xin sởi Quy trình chuẩn bị mẫu phân tích miễn dịch huỳnh quang nhận dạng vắcxin Tế bào Vero nuôi từ đến ngày tách khỏi chai Roux bằ ng cách sử du ̣ng dung d ịch axit axetic trypsin- etylenđiamintetraaxetic 44 (ethylendiamintetraacetic acide - EDTA) 0,05%, trì tế bào dạng hỗn dịch với nồng đô ̣ cuối 200.000 tế bào/ml Nhỏ 3ml hỗn dịch tế bào này vào lỡ (có đặt miếng lót nhỏ vào lỗ ) (ở đĩa loại 96 lỗ), ủ điã này 37oC ngày buồ ng ủ có CO 5% Hồi chỉnh bằ ng cách b ổ sung 5,5ml nước cất vào lọ chứa vắc - xin sởi, sau đó trộn Dung dịch vắc - xin pha lỗng 10 lần mơi trường Eagle bản tố i thiể u (Minimum Essential Medium Eagle - MEM) với huyết bò 5%, ủ 0,1ml dung dich ̣ thu đươ ̣c 37oC 60 phút Bổ sung th êm 3ml huyết bò 2% MEM vào từng lỗ ủ điề u kiê ̣n nhiê ̣t đô ̣ 37oC 5% CO2 ngày Lấy miế ng lót kh ỏi lỗ đ ặt nó vào ống thủng đáy, khử hoạt tính tế bào axeton 15 phút, sau rửa lần dung dịch nước muố i đệm phosphat (phosphate buffered saline PBS) Làm khô miế ng lót đ ặt nó lên phiến thủy tinh Nhỏ vâ ̣t liê ̣u nano chứa đấ t hiế m phát quang gắn IgG lên tế bào bề mặt miế ng lót Đậy nắp ủ nhiê ̣t đô ̣ 37oC 60 phút Tiế p theo, xử lý thêm lần bằ ng PBS Làm khô miế ng lót , sau quan sát hình ảnh kính hiển vi huỳnh quang nhằm nhận dạng virút.[34] Quy trình chuẩn bị phù hợp với quy trình chuẩn bị mẫu có sẵn Trung tâm Polyvac dùng công cụ đánh dấu nhập Hoa Kỳ Nhật Bản 3.5.4 Kết phân tích nhận dạng vi hình thái kính hiển vi quang học phân giải cao Mẫu thu sau trình chuẩn bị lớp mỏng bề mặt miếng lót đặc chủng đưa vào gá kính hiển vi quang học BX40, hãng Olympus, Nhật (hình 3.9) Kính hiển vi sử dụng hệ thống quang điện tử để định vị, điều chỉnh chiếu sáng lên bề mặt mẫu, ánh sáng huỳnh quang, độ nét diện tích quan sát Kính hiển vi chưa có option để nối với USB, hay máy tính làm nhiệm vụ lưu giữ vi hình ảnh (microimages) Chính vậy, đề tài thiết kế gá máy ảnh kỹ thuật số loại Nikon D5000, độ phân giải 12.30; tiêu cự f/3.5-5.6 GVR, vào cửa quan sát kính hiển vi để chụp vi hình ảnh huỳnh quang Độ phóng đại kính hiển vi lấy thống 10.000 lần để quan sát tất mẫu thử nghiệm 45 Hình Kính hiển vi huỳnh quang BX 40- Olympus Dưới trình bầy tóm tắt kết thu Sau hàng chục đợt hợp tác tổ chức thử nghiệm theo phương thức đối chứng dần cải tiến kĩ thuật vi bọc, chức hoá, gắn kết với phần tử sinh học đặc hiệu điều kiện ni cấy chuẩn bị mẫu phân tích, kỹ thuật quan sát để thu vi ảnh chất lượng Đã tìm điều kiện kĩ thuật cho quy trình phân tích hai sản phẩm vắc-xin sởi Phân tích vắc-xin sởi Thử nghiệm tiến hành khay 96 giếng Tại hình 3.10 vi ảnh tế bào vero nhiễm virút sởi sử dụng công cụ đánh dấu MP (USA) công cụ đánh dấu Tb1-XEuXPO4.H2O-GDA-IgG Ta thấy sản phẩm phản ứng miễn dịch công cụ đánh dấu virút sởi cụm lại thành vùng có diện tích lớn Các vùng diện tích lớn xuất dời dạc không cụm lại với Độ sáng vùng co cụm phụ thuộc chủ yếu vào nồng đô ̣ tế bào vero dịch bào chế mẫu phân tích (trong quy trình chuẩn bị mẫu phân tích, nồng độ tế bào vero ấn định 200.000 tế bào/ml) Sau nhiều giai đoạn cải tiến tính chất cơng cụ đánh dấu, sở phân tích kỹ điều kiện chuẩn bị mẫu điều kiện thử nghiệm đối chứng qua hàng chục đợt thí nghiệm Trung tâm Polyvac, tiến hành thí nghiệm với nhiều mẫu phân tích Thời gian cho lần thử nghiệm thường kéo dài gần tuần Như kết luận rút đáng tin cậy công cụ đánh dấu thay sản phẩm loại nhập MP (USA) 46 (a) (b) Vi ảnh tế bào vero chưa nhiễm virus sởi, công cụ đánh dấu MP (USA) Vi ảnh tế bào vero nhiễm virút sởi,công cụ đánh dấu MP (USA) (c) Vi ảnh tế bào vero nhiễm virút sởi, cơng cụ đánh dấu )(Eu,Tb)PO4.H2O-GDAIgG Hình 10 (a) Vi ảnh tế bào vero nhiễm virút sởi sử dụng công cụ đánh dấu MP (USA); (b Vi ảnh tế bào vero nhiễm virút sởi,công cụ đánh dấu MP (USA) (c) Vi ảnh tế bào vero nhiễm virút sởi sử dụng công cụ đánh dấu )(Eu,Tb)PO4.H2O-GDA-IgG Nhận xét ban đầu thấy cơng cụ đánh dấu đặc hiệu dựa vật liệu nanô phát quang có độ nhạy tương đương, ổn định sử dụng lưu giữ tạo điều kiện thuận lợi để kết phân tích dễ dàng lặp lại so với sản phẩm nhập ngoại sử dụng Trung tâm Polyvac Ngoài ra, màu sắc cường độ phát quang mẫu thử nghiệm ổn định thời gian vài ba tháng với điều kiện lưu giữ nhiệt độ thấp Các nhận xét rút từ thí nghiệm đánh giá sơ hạn chế thời gian, kinh phí, quy mơ loại vắc-xin tiến hành thử nghiệm Chính vậy, kết cần phải thử nghiệm tiếp tục theo quy trình thử nghiệm nghiêm ngặt với định hướng đưa vào ứng dụng thường xuyên sản xuất vắc-xin Trên sở xác định xác mức độ hồn chỉnh cơng nghệ chế tạo cơng cụ đánh dấu, tiếp đến đánh giá độ nhạy, độ ổn định độ lặp lại quy trình phân tích 47 KẾT LUẬN Trong đề tài „Chế tạo tính chất vật liệu dây nano Eu/TbPO4.H2O nhằm ứng dụng y sinh’’ thu kết sau: Xây dựng quy trình cơng nghệ chế tạo thành công vật liệu nano (Tb,Eu)PO4.H2O dạng dây sử dụng phương pháp micrrowave Khảo sát tỷ lệ nồng độ Eu3+/Tb3+ thay đổi từ 1/1 – 1/16, kết cho thấy với tỷ lệ Eu3+/Tb3+ 1/8, tính chất vật liệu tốt Bằng phép đo hình thái học cấu trúc vật liệu xác định chiều dài dây nano nằm khoảng 150nm - 400nm, chiều rộng khoảng 10-20 nm Cấu trúc vật liệu đơn pha với cấu trúc tetragonal kiểu rhabdophane Các kết đo huỳnh quang cho thấy vật liệu dây nano thu phát quang mạnh vùng đỏ với chuyển dời đặc trưng ion Eu3+ từ mức 5D0→ 7Fn (n=1, 2, 3, 4) kích thích bước sóng 370nm Tương ứng với đỉnh 588, 612, 652 696nm Cường độ phát xạ ion Eu3+ đạt giá trị cực đại với tỷ lệ nồng độ Eu3+/Tb3+ 1/8 đỉnh phát xạ mạnh 612nm Đã tiến hành bọc vỏ dây nano (Tb,Eu)PO4.H2O silica, chức hóa bề mặt nhóm NH2 gắn kết với phần tử mang hoạt tính sinh học IgG thơng qua cầu nối glutaraldehyd Hệ vật liệu (Tb,Eu)PO4.H2O@SiO2NH2-GDA-IgG xem công cụ việc đánh dấu huỳnh quang nhằm nhận dạng virut sởi Thử nghiệm việc sử dụng công cụ đánh dấu huỳnh quang nhận dạng virut sởi Các kết cho thấy hệ vật liệu cho hình ảnh tương đương với việc sử dụng sản phẩm nhập ngoại, vật liệu có độ nhạy tốt ổn định 48 HƢỚNG PHÁT TRIỂN ĐỀ TÀI Do hạn chế dụng cụ thiết bị thời gian kinh phí Vì chúng tơi mong muốn hướng phát triển đề tài là: Thay đổi tỷ lệ NH4H2PO4 /(Tb, Eu)(NO3)3.H2O để thiết lập thêm dạng hạt hệ vật liệu phát quang nano chứa đất hiếm, sau bọc chức hóa bề mặt để so sánh tính chất quang với dạng dây vật liệu phát quang (Tb,Eu)PO4.H2O nghiên cứu nhiều ứng dụng khác Tiếp tục nghiên cứu thêm độ nhạy, ổn định, tiêu sản phẩm để đưa vào ứng dụng thường xuyên sản xuất vắc-xin Trên sở xác định xác mức độ hồn chỉnh cơng nghệ chế tạo cơng cụ đánh dấu, tiếp đến đánh giá độ nhạy, độ ổn định độ lặp lại quy trình phân tích 49 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt [1] Cao Thị Ánh (2008), tổng hợp nghiên cứu tính chất vật liệu dạng hạt có kích thước nanomet phương pháp hóa học, khóa luận tốt nghiệp Vật lý Kỹ thuật [2] Ngyễn Mạnh Hùng (2012), chế tạo tính chất vật liệu nano tích hợp phát quang từ tính chứa dây nano TbPO4.H2O oxit sắt, khóa luận tốt nghiệp Vật lý kỹ thuật cơng nghệ nano, Đại học Công Nghệ, Đại học Quốc gia Hà Nội [3] Lâm Thị Kiều Giang (2011), nghiên cứu chế tạo vật liệu nano thấp chiều Ytri, Ziriconi tính chất quang chúng, luận án tiến sỹ KHVL [4] Cao Văn Vươ ̣ng (2011), khảo sát cấu trúc hạt nano vàng ứng dụng cố định phân tử sinh học, khóa luận tốt nghiệp Vật lý kỹ thuật [5] Nguyễn Thị Thùy Linh (2011), nghiên cứu tính chất huỳnh quang vật liệu nano SnO2 pha tạp Eu3+, luận văn thạc sỹ KHVL [6] Đinh Xuân Lộc, Nguyễn Vũ Trần Kim Anh (2009), “Tổng hợp hạt Nano phát quang CePO4 : Tb dung môi nhiệt độ sôi cao Diethylen glucol”, Hội nghị Vật lý chất rắn Khoa học vật liệu toàn quốc lần thứ (SPMS2009) - Đà Nẵng [7] Đỗ Văn Tuy (2012), chế tạo nghiên cứu tính chất quang vật liệu phát quang chứa ion đất Eu (III), khóa luận tốt nghiệp Vật lý kỹ thuật Tiếng Anh [8] Bing Yan, Jianfeng Gu, Xiuzhen Xiao (2009), “LnPO4:RE3+ (La = La,Gd; RE =Eu,Tb)nanocrystals: solvo-thermal synthesis, microstructure and photoluminescence”, J Nanopart Res [9] Branislav Jovani ´, Marco Bettinelli, Boˇ zidar Radenkovi ´, Marijana Despotovi ´Zraki ´, Zorica Bogdanovi ´ (2012), “Optical spectroscopy of nanocrystalline Gd3Ga5O12 doped with Eu3+ and high pressures” Materials Chemistry and Physics 132, 273–277 [10].C.C Santos, I.Guedes, C.-K.Loong, L.A Boatner (2007), “Low–temperature Raman spectra of YbVO4”, VibrationalSpectroscopy, 45, 95–98 50 [11].Chitta Ranjan Patra, Gabashvili Alexandra, Sujata Patra, David Solomon Jacob, Aharon Gedanken, Asher Landau and Yossi Gofer (2005), “Microwave approach for the synthesis of rhabdophane-type lanthanide orthophosphate (Ln=La, Ce, Nd, Sm, Eu, Gd and Tb) nanorods under solvothermal conditions”, New J.Chem, 29, 733–739 [12].Chitta Ranjan Patra, Resham Bhattacharya, Sujata Patra, Sujit Basu, Priyabrata Mukherjee and Debabrata Mukhopadhyay (2006), “Inorganic phosphate nanorods are a novel fluorescent label in cell biology”, Journal of Nanobiotechnology, 4:11, 1477-3155 [13].Cuicui Yu, Min Yu, Chunxia Li, Xiaoming Liu, Jun Yang, Piaoping Yang, Jun Lin (2009), “Facile sonochemical synthesis and photoluminescent properties of lanthanide orthophosphate nanoparticles”, Journal of Solid State Chemistry, 182, 339–347 [14] Dan Wang, Yuhua Wang (2009), “Optical properties of (Y,Tb)PO4 under VUV excitation”, Materials Chemistry and Physics, 115, 699–702 [15].Feng Wang, Debapriay Banerjee, Yongsheng Liu, Xueyuan Chen and Xiaogang Liu (2010), “Upconversion nanoparticles in biological labeling, imaging, and therapy”, The Royal Society of chemistry, 135, 1839 – 1854 [16].Feng Wang, Wee Beng Tan, Yong Zhang, Xianping Fan and Minquan Wang (2006), “Luminescent nanomaterials for biological labeling”, Nanotechnology 17, R1–R13 [17].Ganngam Phaomei, R.S.Ningthoujam, W.Rameshwor Singh, Naorem Shanta Singh, M.Niraj Luwang, R.Tewari, R.K.Vatsa (2010), “Low temperature synthesis and luminescence properties of re-dispersible Eu3+ doped LaPO4 nanorods by ethylene glycol route‟‟, Optical Materials 32, 616–622 [18].Genevie `ve Mialon, Melanie Poggi, Didier Casanova, Thanh - Liem Nguyen, Silvan Turkcan, Antigoni Alexandrou, Thierry Gacoin, Jean – Pierre Boilot (2009), “Luminescent oxide nanoparticles with enhanced optical properties”, Journal of Luminescence [19].G.Stryganyuk, D.M Trots, A Voloshinovskii, T Shalapska, V Zakordonskiy, V Vistovskyy, M Pidzyrailo, G Zimmerer (2008), “Luminescence of Ce3+ doped LaPO4 nanophosphors upon Ce3+ 4f–5d and band-to-band excitation”, Journal of Luminescence, 128, 355–360 [20].Guoyi Dong, Hengxin Ma, Yufeng Liu, Zhiping Yang, Qingbo Liu (2012), “Synthesis and photoluminescence properties of the high-brightness Eu3+ doped Sr3Bi(PO4)3 phosphors, Optics Communications 285, 4097–4101 51 [21].Hassan M.E Azzazy, Mai M.H Mansour (2009), “In vitro diagnostic prospects of nanoparticles”, Clinica Chimica Acta, 403, 1–8 [22].Hoang Thi Khuyen1, Nguyen Thanh Huong1, Tran Thu Huong1, Nguyen Thanh Binh1, Le Quoc Minh1,2 (2010), “synthesis, characterrization and luminescent properties of Tb(III) doped Eu(III) complex nanoparticles”, The 5th International Workshop on Advanced Materials Science and Nanotechnology (IWAMSN) - Hanoi, Vietnam – November [23].In-Sun Cho, Geun Kyu Choi, Jae-Sul An, Jeong-Ryeol Kim, Kug Sun Hong (2009), “Sintering, microstructure and microwave dielectric properties of rare earth orthophosphates, RePO4 (Re=La, Ce, Nd, Sm, Tb, Dy, Y, Yb)”, Materials Research Bulletin, 44, 173178 [24].Jiantao L ă u ,Ting Fan,Jianing Xie,Guojie Chen (2012), “Tunable luminescence and energy transfer of TbPO4:Eu3+ nanocrystals”, Optics Communications, Volume 286, 221-223 [25].Jinrong Bao, Ranbo Yu, Jiayun Zhang, Xiaodan Yang, Dan Wang, J inxia Deng, Jun Chen, and Xianran Xing (2009), “Controlled Synthesis of Terbium Orthophosphate Spindle-Like Hierarchical Nanostructures with Improved Photoluminescence”, Wiley-VCH Verlag GmbH&Co.KGaA, Weinheim, Issue 16, 2388-2392 [26].J.M.Nedelec, C.Mansuy, R.Mahiou (2003), “Sol – gelderived YPO4 and LuPO4 phosphors, aspectroscopic study”, Journal of Molecular Structure, vol 651, 165–170 [27].Ka-Leung Wong, Ga-Lai Law, Margaret B Murphy, Peter A.Tanner, WingTak Wong, Paul Kwan-Sing Lam, and Michael Hon-Wah Lam (2008), “Functionalized Europium Nanorods for In Vitro Imaging”, Inorganic Chemistry, Vol.47, No.12, 5190-5196 [28].Kunihiko Oka, Hiromi Unoki, Hajime Shibata, Hiroshi Eisaki (2006) “Crystal growth of rare-earth orthovanadate (RVO4) by the floating-zone method” Journal of Crystal Growth, 286, 288–293 [29].K.H Jang, W.K Sung, E.S Kim, L.Shi, J.H Jeong, H.J Seo (2009), “Time resolved luminescence spectroscopy of a YVO4:Eu3+ thin film”, Journal of Luminescence [30].Mathieu L.Viger & Ludovic S Live & Olivier D Therrien & Denis Boudreau (2008), “Reductionof Self-Quenchingin Fluorescent Silica-Coated Silver Nanoparticles”, Plasmonics, 3:33–40 [31].Mei Yang, Hongpeng You, Yanhua Song, Yeju Huang, Guang Jia, Kai Liu, Yuhua Zheng, Lihui Zhang, and Hongjie Zhang (2009), “Synthesis and 52 Luminescence Properties of Sheaflike TbPO4 Hierarchical Architectures with Different phase Structures”, J Phys Chem C, Vol.113, No.47, 113, 20173– 20177 [32].M Dorogova, A Navrotsky, L.A Boatner (2007), “Enthalpies of formation of rare earth orthovanadates, REVO4” Journal of Solid State Chemistry, 180, 847–851 [33].Nguyen Thanh Huong, Nguyen Duc Van, Dinh Manh Tien, Do Khanh Tung, Nguyen Thanh Binh, Tran Kim Anh and Le Quoc Minh, “Structural and luminescent properties of (Eu,Tb)PO4.H2O nanorods/nanowires prepared by microwave technique”, Journal of rare earths, Vol 29, No 12, Dec 2011, P 1170 [34].Paulo C.de Sousa Filho, Osvaldo A.Serra (2009), “Red, green, and blue lanthanum phosphate phosphor sobtained via surfactant-controlled hydrothermal synthesis”, Journal of Luminescence, 129, 1664–1668 [35].Quoc Minh Le, Thu Huong Tran, Thanh Huong Nguyen, Thi Khuyen Hoang, Thanh Binh Nguyen, Khanh Tung Do, Kim Anh Tran, Dang Hien Nguyen, Thi Luan Le, Thi Quy Nguyen, Mai Dung Dang, Nu Anh Thu Nguyen and Van Man Nguyen (2012), “Development of fluorescence label tool based on lanthanides nanophosphors for viral biomedical application” Adv Nat Sci.: Nanosci Nanotechnol 3, 035003 (10pp) doi:10.1088/2043-6262/3/3/035003 [36].Vale ´rie Buissette, Me ´lanie Moreau,Thierry Gacoin, Jean-PierreBoilot, Jean Yves Chane-Ching, and Thierry LeMercier (2004), “Colloidal Synthesis of Luminescent Rhabdophane LaPO4:Ln3+ xH2O (Ln Ce,Tb,Eu; x 0.7) Nanocrystals” Chem Mater, Vol.16, No.19 3767 - 3773 [37].Weihua Di, Marc-Georg Willinger, Rute A.S Ferreira, Xinguang Ren, Shaozhe Lu, and NicolaPinna (2008), “Citric Acid-Assisted Hydrothermal Synthesis of Luminescent TbPO4:Eu Nanocrystals: Controlled Morphology andT unable Emission”, J Phys Chem C, Vol.112, No.48, 18815–18820 [38].Weihua Di, Xiaojun Wang, Peifeng Zhu, Baojiu Chen (2007), “Energy transfer and heat-treatment effect of photoluminescence in Eu3+- doped TbPO4 nanowires”, Journal of Solid State Chemistry, 180, 467–473 [39].Weiliu Fan,WeiZhao, LipingYou ,XinyuSong, WeiminZhang, HaiyunYu, SixiuSun (2004) “A simple method to synthesize single-crystalline lanthanide orthovanadate nanorods”, Journal of SolidState Chemistry 177, 4399–4403 [40].Yang Chen, Xian-Wen Wei, Kong-Lin Wu, Xiao-Wang Liu (2012), “A facile hydrothermal route to flower-like single crystalline EuPO4.H2O”, Materials Letters 89, 108–110 53 [41].Ying-Ling Liu, Yen-Hsing Wu, Ru-Jong Jeng, Shenghong A.Dai (2009), “Functionalization of silica nanoparticles with 4-isocyanato-40-(3, 30 dimethyl-2, 4-dioxo-azetidino) diphenyl methane, surface chemical reactivity and nanohybrid preparation”, Journal of Colloid and Interface Science [42].YU Wenyuan, LI Guanlai, ZHOU Li (2010), “Sonochemical synthesis and photoluminescence properties of rare-earth phosphate core/shell nanorods”, Journal of rare earths, Vol 28, No 2, p 171 [43].Zheng-GuangYan, Ya-WenZhang, Li-PingYou, RuiSi, Chun-HuaYan (2004), “General synthesis and characterization of monocrystalline 1D-nanomaterials of hexagonal and orthorhombic lanthanide orthophosphate hydrate”, Journal of Crystal Growth 262, 408–414 [44].Zhengwen Yang, Xueguang Huang, LiSun, Ji Zhou, Gang Yang, Bo Li, and Cailan Yu (2009), “Energy transfer enhancement in Eu3+ doped TbPO4 inverseopal photonic crystals”, journal of applied physics, 105, 083523 Các nguồn khác [45] http://wikipedia.org [46].http://www.sciencedirect.com/ ... LIÊN CHẾ TẠO VÀ TÍNH CHẤT CỦA VẬT LIỆU D? ?Y NANO (Eu,Tb )PO4.H2O NHẰM ỨNG DỤNG TRONG Y SINH Chuyên ngành : Vật liệu linh kiện Nanơ Mã số : Chun ngành đào tạo thí điểm LUẬN VĂN THẠC SĨ VẬT LIỆU VÀ LINH. .. tháng năm 2012, thực đề tài luận văn ? ?Chế tạo tính chất vật liệu d? ?y nano Eu/TbPO4.H2O nhằm ứng dụng y sinh? ??, phần công việc đề tài tập thể với mục đích: Tổng hợp d? ?y nano chứa ion đất Tb3+, Eu3+... tơi l? ?y mẫu có tỷ lệ Eu/Tb = 1/8 để đem bọc chức hóa bề mặt ứng dụng y sinh 488 8000 7000 398 (Eu,Tb )PO4.H2O (Eu,Tb )PO4.H2O@ SiO2 (Eu,Tb )PO4.H2O@ SiO2-NH2 (Eu,Tb )PO4.H2O@ SiO2-NH2-GDA (Eu,Tb )PO4.H2O@ SiO2-NH2-GDA-IgG