Đang tải... (xem toàn văn)
TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÂY ĐÔKHOA DƯỢC – ĐIỀU DƯỠNGBÁO CÁO THỰC HÀNHBỘ MÔN DƯỢC LIỆU 2NĂM 2020Bài 2KIỂM NGHIỆM DƯỢC LIỆU CHỨA ALKALOIDA. CƠ SỞ LÝ THUYẾT1. Khái niệm Các alkaloid (alcaloid) là những base hữu cơ thường dễ tan trong các dung môi hữu cơ (như ether, benzen, cloroform, aceton, methanol và ethanol) Đa số các alkaloid base thự tế không tan trong nước Một vài alkaloid có cấu trúc amonium bậc IV tan được trong nước và kém tan trong dung môi hữu cơ. Một số alkaloid không có oxy tồn tại duới trạng thái lỏng có thể tan ít trong nước. Một số alkaloid dạng lỏng có thể bay hơi và lôi cuốn dược theo hơi nước. Một số alkaloid không có oxy ở dạng rắn có thể thăng hoa được ở áp suất thường. Một số alkaloid có OH phenol có thể tan một phần trong dung dịch kiềm mạnh. Dưới dạng muối, các alkoaloid thường tan dược trong nước, cồn (ethanol, methanol). hay hỗn hợp cồn nước: chúng không tan hoặc rất kém tan trong các dung môi hữu cơ kém phân cực (ether, benzen. cloroform).2. Tính chất Alkaloid thường là những base yếu, tan trong các dung môi hữu cơ. Không tan trong nước. Khi cho alkaloid tác dụng với acid sẽ thu dược alkaloid dạng muối. Các muối của alkaloid thường dễ tan trong nước. Các muối này dễ bị các chất kiềm vô cơ (NH4OH. NaOH) thậm chí cả các muối khác (Na2CO3, đôi khi cả NaHCO3) đẩy ra khỏi muối cho lại các alkaloid base ban đầu. Alkaloid phản ứng với các thuốc thử chung (thuốc thử tạo tủa) tạo thành các muối khó tan (dạng kết tinh hay dạng vô định hình) được ứng dụng trong định tính alkaloid. Một số alkaloid hay nhóm alkaloid có thể cho màu sắc đặc trưng với một số thuốc thử gọi là thuốc thứ đặc hiệu của alkaloid (thuốc thử tạo màu) ứng dụng trong định tính hoặc làm thuốc thử phát hiện trong sắc ký.3. Các phương pháp chiết xuất Trong cây, các alkaloid thường tồn tại dưới dạng muối hòa tan với acid hữu cơ hoặc vô cơ hay dạng kết hợp với tanin. Người ta có thể chiết alkaloid ra khỏi nguyên liệu thực vật bằng nhiều cách nhưng nhìn chung có thể quy về 2 cách chính là: + Chiết alkaloid ra khỏi dược liệu dưới dạng alkaloid base bằng dung môi hữu cơ. + Chiết alkaloid ra khỏi dược liệu dưới dạng muối bằng dung môi phân cực (nước, cồn, hỗn hợp cồn nước đã bị acid hóa). Với một vài alkaloid đặc biệt, người ta có thể chiết bằng: + Phương pháp cất kéo lôi cuốn theo hơi nước (chiêt xuất nicotin từ Thuốc lá). + Phương pháp thăng hoa (chiết xuất cfein từ Trà). Dựa vào tính tan khác nhau của dạng base và dạng muối alkaloid trong các dung môi, người ta có thể loại phần nào tạp chất ra khỏi dịch chiết trước khi định tính, định lượng hay phân lập các alkaloid tinh khiết.Các quy trình dưới đây thường được sử dụng trong chiết xuất alkaloid từ nguyên liệu thực vật dùng cho định tính alkaloid.Chú ý:Thế tích dung môi chiết, thời gian chiết trong các phương pháp trên có thể thay đổi tùy thuộc vào dược liệu và phương tiện sử dụng.B. THỰC HÀNH 1. Chiết xuất bằng dung môi hữu cơ trong môi trường kiềm (Phương pháp 1): Cân 3g Dược liệu Bình vôi. Kiềm hoá bằng NH4OH đậm đặc (vừa đủ ẩm). Mỗi lần thêm 5 giọt khoảng 35 giọt vừa đủ ẩm. Để yên 10 phút. Chiết bằng 20ml CHCl3 ở nhiệt độ phòng sau đó lọc bông. Thu được dịch chiết CHCl3Tiếp tục cho dịch chiết vào bình lắng gạn thêm vào 10 ml H2SO4 lọc lắng gạng 2 lần. Thu dịch chiết lớp trên. Thu được dịch chiết nước acid 2. Định tính alkaloid bằng thuốc thử chung. Lấy 4 ống nghiệm đánh số 0,1,2,3 thêm vào mỗi ống 2ml dịch chiết nước acid bình vôi. Tiếp tục thêm riêng lẻ 3ml vào ống 1,2,3 lần lượt là Bouchardat, ValseMayer, Dragendorff. Ống 0 dùng để so sánh. Nhận định kết quả: Ống 1: cho kết quả (+) với thuốc thử Bouchardat Ống 2 : cho kết quả (++++) với thuốc thử ValseMayer Ống 3: Cho kết quả (++) với thuốc thử Dragendorff.Một số câu hỏi (?)Khi cho NH4OH pH>10 thì xử lý như thế nào?Thêm H2SO4 2% để trung hoà lại để PH=10Nồng độ CHCl3 là ?Nồng độ từ 2528%Tại sao lọc dịch chiết bột Dược liệu bằng bông?Vì bột Dược liệu hạt to nên có thể chiết bằng bông và tiết kiệm nhiều thời gian hơn thay vì chiết bằng giấy lọc.Khi nào chiết bằng giấy lọc?Khi Dược liêu có hạt nhỏ cần lọc kỹ để loại bỏ các tạp chất để thu dịch tinh khiết.Dược liều bình vôi:Tại sao Phải Kiềm hóa bằng NH4OH đặm đặc (vừa đủ ấm)?Để chuyển alkaloid dưới dạng muối trong cơ thể sinh vật thành dạng base tự do tan trong dung môi hữu cơ người ta thường ngâm tẩm mẫu trong dung dịch kiềm loãng hoặc dung dịch amoniac.Ngoài ra, dược liệu khi được làm ẩm sẽ trương nở , giúp cho dung môi thấm vào tế bào, kéo hoạt chất ra dễ dàng hơn Dược liệu lá sen:Tại sao (khi sử dụng dịch chiết nước acid với NH4OH đđ phải chỉnh đến pH= 10? Vì khi PH=10 NH4OH Kiềm hoá vừa đủ sẽ tách chiết được Dịch chiết aicd thành Dịch chiết CHCl3 và acid . Đã loại bỏ hết tạp chất. Khi PH10 Thì dịch chiết sẽ trung hoà với NH4OH bị kiềm hoá đi.Dược liệu tâm sen:Cách pha chế cồn aicd 5% ?Với cồn 96 độ cần thêm khoảng 4.3ml acid đậm đặc để được cồn aicd 5%Khi nào phải trung hòa dịch chiết cồn acid đến pH=56 ?Khi chiết dịch chiết bằng clorofom Câu hói thảo luận:1. Những điểm chú ý khi tiến hành định tính alkaloid bằng thuốc thử chung ? Khi thực hiện phản ứng với thuốc thử chung phải cho từ từ từng giọt thuốc thử vào ống nghiệm Không nên cho quá nhiều thuốc thử vào ống nghiệm vì một số thuốc thử có tủa và tủa tan trong một lượng thuốc thử thừa.Bài 3ĐỊNH TÍNH ALKALOID TRONG DƯỢC LIỆU BẰNG SẮC KÍ LỚP MỎNGCƠ SỞ LÍ THUYẾTTHỰC HÀNHBước 1. Chuẩn bị Bản mỏng silica gelMẫu thử (10ml dịch chiết Tâm sen, 10ml Lá sen) Dung môi khai triển S2=CHCl3MeOHNH4OH(20 : 3,6 : 0,4) Tiến hành sắc kíKẻ đường thẳng cách mép dưới bản mỏng từ 11,5cm, ghi tên mẫuPhát hiện vếtBước 2. Thực hiệnKiềm hóa dung dịch về pH=10 bằng NH4OHLấy một mảnh giấy quỳ rồi chia đều ra thành từng mảnh nhỏ đặt lên mặt kính đồng hồ để định pH dung dịch.Nhỏ vài giọt NH4OH vào mẫu thử. Dùng đũa thủy tinh chấm vào dung dịch rồi chấm lên những mảnh quỳ tím trên mặt kính đồng hồ, nếu giấy quỳ tím vẫn còn màu đỏ thì tiếp tục nhỏ NH4OH và chấm thử lên quỳ tím cho đến khi giấy quỳ cho màu giống pH=10 (màu xanh đen) trên thang đo pH thì ngừng. Cho mẫu thử vào từng bình lắng gạn cùng với 10ml dd CHCl3, đậy nắp bình lại và đem lắc 3 lần (lưu ý lắc nhẹ nhàng tránh lắc mạnh dễ gây tạo nhũ) sau đó gạn lấy phần dịch trong bên dưới, đem đun cách thủy đến cô lại còn khoảng 12ml. Chấm sắc kí. Phát hiện vết trên bản mỏng bằng máy soi UV: Ánh sáng ở bước sóng 254 nmKết quả: Vết do chuyển cao, thẳng, vết có màu xanh dương đậmCách làm hiện vết bằng thuốc thử DragendorffDùng kẹp gắp bản mỏng nhúng nhanh vào thuốc thử Dragendorff rồi để khô sẽ thấy xuất hiện vết trên bản mỏng. Kết quả RfLá sen: R_f=78,8 Tâm sen: R_f=68,8TRẢ LỜI CÂU HỎINhững điểm cần chú ý khi tiến hành định tính alkaloid bằng thuốc thử chung?Khi thực hiện phản ứng với thuốc thử chung phải cho từ từ từng giọt thuốc thử ống nghiệm.Không nên cho quá nhiều thuốc thử vào ống nghiệm vì một số thuốc thử có tủa và tủa tan lại trong một lượng thuốc thử thừa.Ý nghĩa của việc dùng và NH4OH trong hệ dung môi hay bão hòa bình sắc kí?Khi cho NH4OH vào thì pH của dung dịch lớn hơn pHa+2, các alkaloid chuyển về một dạng nhất định (alkaloid base), các vết sắc kí gọn, đều và đẹp.Khi cho NH4OH thì mẫu ở dạng alkaloid base (kém phân cực) cho Rf cao và làm độ chính xác cao hơn.Nếu các vết có Rf quá thấp trên sắc kí đồ, hướng giải quyết để có sắc kí đồ tốt hơn?Thay thế hệ dung môiChấm dung dịch thử với một lượng vừa đủTrong quá trình khai triển, để dung môi khai triển chạy quãng đường càng dài càng tốt mà gần mép bản mỏng không quá 0,5 cm.Chuyển dạng của alkaloid.Có thể kết luận hai chất nào đó là khác nhau hoặc là đồng nhất bằng sắc ký lớp mỏng?Bằng sắc ký lớp mỏng có thể kết luận sơ bộ hai chất nào đó là khác nhau (hoặc đồng nhất).Làm thế nào để kết luận có một chất X nào đó có trong thành phần của hỗn hợp?Để kết luận một chất X nào đó có trong thành phần của hỗn hợp Y cần làm sắc ký như sắc ký lớp mỏng.Nếu Rf của X bằng độ dài Rf bất kì có trong thành phần của hỗn hợp Y thì có thể kết luận.Để có độ chính xác cao hơn có thể làm với nhiều hệ dung môi khác nhau hoặc xử lý hai chất có cùng Rf sau đó cho chạy với một hệ dung môi khác nếu vẫn cùng Rf thì kết luận là chất X có trong thành phần của hỗn hợp Y.Alkaloid tâm sen và lá sen giống hay khác? Tại sao?Alkaloid toàn phần thu được từ lá sen kiểm tra trên sắc ký bản mỏng với hệ dung môi S2 và thuốc thử Dragendoff thấy có ít nhất 2 vết, trong đó có một vết rất đậm có Rf trùng với nuciferin, allaloid toàn phần thu được từ lá sen bằng phương pháp sắc ký lớp mỏng, trong tâm sen có 3 vết. Thành phần alkaloid của tâm Sen đã được khảo sát bằng sắc ký lớp mỏng. Alkaloid chính trong đó đã được phân lập và xác định cấu trúc là neferin và nuciferin. BÀI 4ĐỊNH TÍNH ALKALOID BẰNG THUỐC THỬ ĐẶC HIỆUCƠ SỞ LÝ THUYẾTTHỰC HÀNHKiểm nghiệm Hạt Mã tiền (Semen Strychnii)Bộ phận dùng là hạt cây Mã tiền (Strychnos nuxmonica L., Loganiaceae)Định tính bằng các phản ứng đặc hiệuChiết xuất: Chiết 3g bột dược liệu theo phương pháp 2 (Chiết bằng nước acid) Cân 3g bột dược liệu cho vào becher, thêm 20ml dung dịch H2SO4 2% Đun BM 15p, lọc nóng qua gòn (2 lần x 20ml) Thu được dịch chiết nước acid, thêm NH4OH đậm đặc, chỉnh pH =10 Thêm CHCl3 10ml x 2 lần. Thêm H2SO4 2% (5ml x 2 lần). Lắc và lọc lấy lớp dung dịch bên dưới. Cho dịch cloroform vào 2 chén sứ, cô cách thủy tới cắn khô.Định tính strychnin: Nhỏ vào chén 1 chừng 4 giọt H2SO4 đậm đặc, khuấy nhẹ cho tan, thả vào chén một vài hạt tinh thể K2Cr2O7 Dùng đũa kéo hạt tinh thể K2Cr2O7 ngang qua dung dịch acid, có vệt tím chuyển sang hồng vàng và biến thành nâu đen.Kết luận: Dương tính. Dược liệu Mã tiền chứ Brucin và Strychnin.Giải thích: Vì strychnin là alkaloid nhân indol, vị trí N số 9 có khả năng tạo muối với H2SO4 và cho phản ứng oxi hóa với kalidicromate. Brucin không cho phản ứng này vì có nhóm –OCH3 khóa phản ứng. Định tính Brucin: Nhỏ một giọt HNO3 đậm đặc vào cắn trên chén 2 sẽ có màu đỏ cam.Kết luận: Dương tính.Giải thích: vì Bruxin có 2 nhóm methoxy ở vòng thơm của nhân indol, acid HNO3 đậm đặc sẽ demethyl hóa –OCH3 > OH. Nhóm –OH bị oxi hoá tạo cetone cho ra vòng quinone có màu đỏ cam.Là phản ứng đặc hiệu để nhận biết strychnin và brucin.Kiểm nghiệm lá Trà Folium Camelliae:Dược liệu là lá của cây Trà (Camellia sinensis (L.) O. Kuntze = Thea chinensis L., Theaceae)Định tính bằng thuốc thử đặc hiệu:Chiết xuất: Cho 5g bột lá Trà vào bình nón 100ml, làm ẩm với dung dịch Na2CO3, để trong 5p. Thêm 50ml nước sôi, lắc trong 10p. Lọc lấy dịch lọc . Để nguội lắc với 20ml DCM (CHCl3), gạn lấy lớp CHCl3 bên dưới, làm khan với một ít Na2SO4 khan. Cho vào một chén sứ nhỏ, bốc hơi trên bếp cách thủy đến cắn khô.Phản ứng murexid: Nhỏ lên cắn 3 giọt HCl đậm đặc và 2 giọt H2O2 đậm đặc. Bốc hơi trên bếp cách thủy đến cắn khô.Thêm vào cắn vài giọt NH4OH đậm đặc, sẽ xuất hiện màu đỏ tím.Kết luận: Dương tính.Giải thích: Do caffein có tính kiềm rất yếu nên phản ứng cần thực hiện trong môi trường khan > dùng Na2SO4 để loại bỏ nước trong dung dịch cloroform, để khi đun nóng bốc hơi cloroform sẽ nhanh hơn do tsôi CHCl3 =61,2°C < tsôi H2O =100°C.H2O2 ddHCldd là tác nhân oxi hóa mạnh, sẽ oxi hóa caffein thành purpuric acid.Sau khi cô cắn để loại bỏ H2O2 ddHCldd cho cắn tác dụng với NH4OH sẽ cho màu đỏ tím do tạo thành muối murexide (muối ammonium purpurate).CÂU HỎI THẢO LUẬNTrong chiết xuất Trà tại sao lại dùng Na2CO3 để làm ẩm dược liệu?Tạo môi trường bazo, giúp dược liệu trương nở, dung môi dễ thấm vào tế bào và chiết được nhiều hoạt chất hơn.Thuốc thử đặc hiệu, thuốc thử chung?Thuốc thử chung là thuốc thử dành cho tất cả các phản ứng.Thuốc thử đặc hiệu chỉ dành cho 1 phản ứng riêng biệt.
TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÂY ĐÔ KHOA DƯỢC – ĐIỀU DƯỠNG BÁO CÁO THỰC HÀNH BỘ MÔN DƯỢC LIỆU NĂM 2020 Bài KIỂM NGHIỆM DƯỢC LIỆU CHỨA ALKALOID A CƠ SỞ LÝ THUYẾT Khái niệm - Các alkaloid (alcaloid) base hữu thường dễ tan dung môi hữu (như ether, benzen, cloroform, aceton, methanol ethanol) - Đa số alkaloid base thự tế khơng tan nước - Một vài alkaloid có cấu trúc amonium bậc IV tan nước tan dung môi hữu - Một số alkaloid khơng có oxy tồn duới trạng thái lỏng tan nước - Một số alkaloid dạng lỏng bay lơi dược theo nước - Một số alkaloid khơng có oxy dạng rắn thăng hoa áp suất thường - Một số alkaloid có OH phenol tan phần dung dịch kiềm mạnh - Dưới dạng muối, alkoaloid thường tan dược nước, cồn (ethanol, methanol) hay hỗn hợp cồn nước: chúng không tan tan dung môi hữu phân cực (ether, benzen cloroform) Tính chất - Alkaloid thường base yếu, tan dung môi hữu Không tan nước Khi cho alkaloid tác dụng với acid thu dược alkaloid dạng muối - Các muối alkaloid thường dễ tan nước Các muối dễ bị chất kiềm vô (NH4OH NaOH) chí muối khác (Na2CO3, NaHCO3) đẩy khỏi muối cho lại alkaloid base ban đầu - Alkaloid phản ứng với thuốc thử chung (thuốc thử tạo tủa) tạo thành muối khó tan (dạng kết tinh hay dạng vơ định hình) ứng dụng định tính alkaloid - Một số alkaloid hay nhóm alkaloid cho màu sắc đặc trưng với số thuốc thử gọi thuốc thứ đặc hiệu alkaloid (thuốc thử tạo màu) ứng dụng định tính làm thuốc thử phát sắc ký Các phương pháp chiết xuất - Trong cây, alkaloid thường tồn dạng muối hịa tan với acid hữu vơ hay dạng kết hợp với tanin Người ta chiết alkaloid khỏi nguyên liệu thực vật nhiều cách nhìn chung quy cách là: + Chiết alkaloid khỏi dược liệu dạng alkaloid base dung môi hữu + Chiết alkaloid khỏi dược liệu dạng muối dung môi phân cực (nước, cồn, hỗn hợp cồn nước bị acid hóa) - Với vài alkaloid đặc biệt, người ta chiết bằng: + Phương pháp cất kéo lôi theo nước (chiêt xuất nicotin từ Thuốc lá) + Phương pháp thăng hoa (chiết xuất cfein từ Trà) - Dựa vào tính tan khác dạng base dạng muối alkaloid dung mơi, người ta loại phần tạp chất khỏi dịch chiết trước định tính, định lượng hay phân lập alkaloid tinh khiết Các quy trình thường sử dụng chiết xuất alkaloid từ nguyên liệu thực vật dùng cho định tính alkaloid Chú ý: Thế tích dung mơi chiết, thời gian chiết phương pháp thay đổi tùy thuộc vào dược liệu phương tiện sử dụng B THỰC HÀNH Chiết xuất dung môi hữu môi trường kiềm (Phương pháp 1): - Cân 3g Dược liệu Bình vơi - Kiềm hố NH4OH đậm đặc (vừa đủ ẩm) Mỗi lần thêm giọt khoảng 35 giọt vừa đủ ẩm Để yên 10 phút - Chiết 20ml CHCl3 nhiệt độ phòng sau lọc bơng Thu dịch chiết CHCl3 - Tiếp tục cho dịch chiết vào bình lắng gạn thêm vào 10 ml H2SO4 lọc lắng gạng lần Thu dịch chiết lớp Thu dịch chiết nước acid Định tính alkaloid thuốc thử chung - Lấy ống nghiệm đánh số 0,1,2,3 thêm vào ống 2ml dịch chiết nước acid bình vơi - Tiếp tục thêm riêng lẻ 3ml vào ống 1,2,3 Bouchardat, Valse-Mayer, Dragendorff Ống dùng để so sánh Nhận định kết quả: - Ống 1: cho kết (+) với thuốc thử Bouchardat - Ống : cho kết (++++) với thuốc thử Valse-Mayer - Ống 3: Cho kết (++) với thuốc thử Dragendorff Một số câu hỏi (?) Khi cho NH4OH pH>10 xử lý nào? - Thêm H2SO4 2% để trung hoà lại để PH=10 Nồng độ CHCl3 ? - Nồng độ từ 25-28% Tại lọc dịch chiết bột Dược liệu bơng? - Vì bột Dược liệu hạt to nên chiết tiết kiệm nhiều thời gian thay chiết giấy lọc Khi chiết giấy lọc? - Khi Dược liêu có hạt nhỏ cần lọc kỹ để loại bỏ tạp chất để thu dịch tinh khiết Dược liều bình vơi: Tại Phải Kiềm hóa NH4OH đặm đặc (vừa đủ ấm)? - Để chuyển alkaloid dạng muối thể sinh vật thành dạng base tự tan dung môi hữu người ta thường ngâm tẩm mẫu dung dịch kiềm loãng dung dịch amoniac - Ngoài ra, dược liệu làm ẩm trương nở , giúp cho dung môi thấm vào tế bào, kéo hoạt chất dễ dàng Dược liệu sen: Tại (khi sử dụng dịch chiết nước acid với NH4OH đđ phải chỉnh đến pH= 10? - Vì PH=10 NH4OH Kiềm hố vừa đủ tách chiết Dịch chiết aicd thành Dịch chiết CHCl3 acid Đã loại bỏ hết tạp chất Khi PH10 Thì dịch chiết trung hồ với NH4OH bị kiềm hố Dược liệu tâm sen: Cách pha chế cồn aicd 5% ? - Với cồn 96 độ cần thêm khoảng 4.3ml acid đậm đặc để cồn aicd 5% Khi phải trung hòa dịch chiết cồn acid đến pH=5-6 ? - Khi chiết dịch chiết clorofom Câu hói thảo luận: Những điểm ý tiến hành định tính alkaloid thuốc thử chung ? - Khi thực phản ứng với thuốc thử chung phải cho từ từ giọt thuốc thử vào ống nghiệm - Không nên cho nhiều thuốc thử vào ống nghiệm số thuốc thử có tủa tủa tan lượng thuốc thử thừa Bài ĐỊNH TÍNH ALKALOID TRONG DƯỢC LIỆU BẰNG SẮC KÍ LỚP MỎNG I II CƠ SỞ LÍ THUYẾT THỰC HÀNH Bước Chuẩn bị Bản mỏng silica gel Mẫu thử (10ml dịch chiết Tâm sen, 10ml Lá sen) Với: n: số ml dung dịch KOH 0,5N mẫu thử n’: số ml dung dịch KOH 0,5N mẫu trắng P: khối lượng tinh dầu sả (g) X: hàm lượng (%) aldehyd tồn phần tính theo citral III CÂU HỎI THẢO LUẬN Nguyên tắc Phát nước: Tinh dầu tan nước, tan tốt cồn dung môi hữu cơ, loại dầu mỡ, tan phần dung dịch kiềm,… Đồng Sulfat gặp nước chuyển sang màu xanh lam Dầu mỡ: Tinh dầu gần không tan nước dễ bay hơi, tinh dầu tan cồn chất béo khơng Tìm alcol: Tinh dầu tan hết alcol Thay thị màu methyl da cam phenolphthatein khơng? Chỉ thị metyl cam có pT = Chỉ thị phenolphthalein có pT thay đổi tùy thuộc vào lượng thị dùng dung dịch chuẩn độ Nếu cho nhiều thị nhận màu hồng (khoảng pH = 8), dùng thị nhận màu hồng trễ (pH gần 9) Khi chuẩn độ bazo mạnh KOH, nồng độ chất cao (0.5N) khoảng bước nhảy pH 4.3 - 9.7 (ứng với độ xác >= 99.9%), cịn dùng nồng độ thấp bước nhảy pH thu hẹp Về mặt thực tế, nạp KOH lên buret, methyl cam chuyển màu từ đỏ sang cam sang vàng, thời điểm kết thúc chuẩn độ nên màu vàng (dư giọt so với màu cam) đạt độ cao Khi dùng phenolphthalein, dùng nhiều thị nhận màu hồng pH gần 8, nên kết thúc chuẩn độ vừa thấy màu hồng nhạt có độ cao (mặc dù bạn mắc sai số thừa) BÀI XÁC ĐỊNH CHỈ SỐ ACID, CHỈ SỐ XÀ PHÒNG VÀ CHỈ SỐ ESTER CỦA CHẤT BÉO I CƠ SỞ LÝ THUYẾT Thành phần chất béo gồm ester acid béo alcol Ngồi ra, cịn có lượng acid béo tự số chất khác (các chất tan chất béo) Các acid béo tự có chất béo thành phần tự nhiên chất béo (có sẵn nguyên liệu) chất thứ cấp tạo trình chế tạo hay bảo quản Do cấu tạo chất béo gồm ester acid béo tự nên chất béo tác dụng với kiềm tạo sản phảm cuối muối kiềm acid béo (xà phòng) Ứng dụng tính chất trên, xác định số acid, số xà phòng số ester chất béo - Chỉ số acid (CSA): số mg KOH cần thiết trung hịa acid tự có 1g dầu mỡ - Chỉ số xà phòng (CSX): số mg KOH cần thiết trung hòa acid tự xà phịng hóa ester có 1g dầu mỡ - Chỉ số ester (CSE): số mg KOH cần thiết trung hịa ester có 1g dầu mỡ Mỗi loại dầu có số giới hạn đặc trưng Việc xác định số giúp việc xác định chất béo mặt định tính chất lượng Thơng thường loại dầu dùng làm dung mơi ngành Dược, ví dụ: dầu lạc, số pH không Nếu số gia tăng nghĩa chất lượng dầu giảm Chỉ số ester chất béo tương đối ổn định Nếu số cao thấp với quy định nghĩ đến giả mạo nhầm lẫn II THỰC HÀNH 1.Nguyên vật liệu thí nghiệm 1.1.Dung mơi hóa chất: Ether ethylic, xylen,cồn 95% HCl 0,5N KOH 0,1N; KOH 0,5N cồn Phenolphtalein 1.2.Dược liệu: Dầu đậu nành tinh luyện 2.Phương pháp 2.1.Chỉ số acid: Bước 1: cân xác khoảng g chất béo bình nón 250ml Bước 2: Cho vào bình 50ml hỗn hợp đồng lượng (cồn 95%-ether ethylic) trung hòa trước KOH 0,1N với chất thị phenolphtalein 14 Lắc đều, sau thêm vào giọt phenolphtalein Bước 3: Chuẩn độ dung dịch KOH 0,1N tới xuất màu hồng bền vững 30s Chỉ acid (CSA) tính theo cơng thức: CSA = 5,61 x Trong đó: a: số ml dung dịch KOH 0,1N dùng b: lượng chất thử tính gam Số ml KOH dùng: Khối lượng: 5,0014 + 5,0030 = 10,0044(g) CSA = 5,61 x = 0,4766 (mg) 2.2.Chỉ số xà phịng: Bước 1: Cân xác khoảng g chất béo vào bình nón 250m số Bước 2: Cho vào bình 25ml dung dịch KOH 0,5N cồn (bằng burette) Bước 3: Lắp sinh hàn hồi lưu, đun cách thủy đến chất béo thủy phân hồn tồn (hỗn hợp khơng bị đục pha loãng với nước).Sau đun cách thủy xong, hỗn hợp suốt Mẫu trắng: thực điều kiện giống mẫu thử khơng có chất béo Bước 4: Thêm vào bình:25ml nước sơi để nguội giọt phenolphtalein Bước 5: chuẩn độ HCl tới dung dịch màu Chỉ số xà phịng (CSX) tính theo cơng thức: CSX = Trong đó: a: số ml dung dịch HCl 0,5N dùng cho mẫu trắng b: số ml dung dịch HCl 0,5N dùng cho mẫu thử c: lượng chất thử tính gam Số ml dung dịch HCl 0,5N dùng cho mẫu trắng: (ml) Số ml dung dịch HCl 0,5N dùng cho mẫu thử : = 17,6 (ml) Khối lượng bình: 2,0012 + 2,0076 = 4,0088 (g) CSX = = 92,26 (mg) 2.3.Chỉ số ester (CSE) xác định từ số xà phòng số acid: CSE = CSX – CSA CSE = 92,26 - 0,4766 = 91,7834 (mg) III.CÂU HỎI THẢO LUẬN Trong việc xác định số acid phải dùng hỗn hợp dung mơi cồn 95% - ether ethylic (1:1)? - Vì KOH tan cồn, dầu béo tan ether Tại phải chuẩn dộ đến có màu hồng bền 30s? - Để ổn định pH bình, tránh sai số kết trung tính ảnh hưởng tới kết số xà phòng Chỉ số xà phòng: Tại lại dùng KOH 0,5N cồn? - Vì cồn phản ứng xảy hồn tồn Xác định lượng acid tự chất béo Tăng khả tạo nhũ tránh tạo bọt Tại phải làm song song với mẫu trắng? - Phản ứng phản ứng trung tính nên thể tích, nồng độ mẫu trắng mẫu thử Hạn chế loại bỏ sai số Trình bày mối liên hệ CSA, CSX, CSE mẫu chất béo q trình bảo quản - CSE số khơng thay đổi nên CSA CSX tỉ lệ nghịch với BUỔI KIỂM NGHIỆM DƯỢC LIỆU THEO TIÊU CHUẨN DĐVN V NGŨ BỘI TỬ Galla chinensis Tổ phơi hay sấy khô ấu trùng sâu Ngũ bội tử[Melaphis chinensis (Bell.) Baker = Schlechtendaliachinensis Bell,], ký sinh Muối, tức Diêmphu mộc (Rhus chinensis Muell.), họ Đào lộn hột(Anacardiaceae) Bột Màu vàng nâu, vị chát Soi kính hiển vi thấy lông che chở cấu tạo đến tế bào, dài 70 μm đến 350 μm.Mảnh mơ mềm chứa hạt tinh bột, đường kính 10 μm.Tinh thể calci oxalat hình cầu gai, đường kính khoảng25 μm; ống nhựa gặp Mảnh mạch xoắn Kiểm nghiệm mẫu dược liệu phương pháp vi học (soi bột) Kiểm nghiệm mẫu dược liệu PP hóa học (định tính) A Lấy khoảng 0,5 g bột dược liệu, thêm ml nước, đun nóng nhẹ, lọc Lấy ml dịch lọc, thêm giọt dung dịch sắt (III) clorid % (TT), có tủa đen lơ B Phương pháp sắc ký lớp mỏng (Phụ lục 5.4) Bản mỏng: Silica gel GF254 Dung môi khai triển: Cloroform – ethyl acetat – acidformic (5: 5: 1) Dung dịch thử: Lấy khoảng 0,5 g bột dược liệu thô, thêm ml methanol (TT), siêu âm 15 phút Lấy dịch lọc làm dung dịch thử Cách tiến hành: Chấm riêng biệt lên mỏng μl dung dịch thử Sau triển khai sắc ký, lấy mỏng ra, để khơ mỏng nhiệt độ phịng Quan sát ánh sáng tử ngoại bước sóng 254 nm Báo cáo kết theo mẫu: Nội dung kiểm TCDĐVN V Kết KN Nhận xét nghiệm Mô tả Soi bột Định tính Bột màu vàng Bột màu vàng nâu, vị chát nâu, vị chát Lông che chở cấu tạo đến tế bào, dài 70 μm đến 350 μm Khối nhựa vàng, Mảnh mô mềm lông che chở đa chứa hạt tinh bột, bào Mảng mạch đường kính 10 vạch, tinh thể μm.Tinh thể calci calci oxalat hình oxalat hình cầu cầu gai, mảnh gai, đường kính mơ mềm khoảng25 μm; ống nhựa gặp Mảnh mạch xoắn Phản ứng dung dịch sắt (III) Đối tượng: clorid % (TT): dịch lọc Đối tượng: Ngũ bội tử dịch lọc Hiện Ngũ bội tử tượng: tủa Hiện đen lơ tượng: tủa đen lơ Phương pháp sắc ký lớp mỏng: Đối tượng: dịch lọc Ngũ bội tử Hiện tượng: sắc ký đồ dung dịch phải có vết giá trị Rf màu sắc với vết sắc ký đồ dung dịch Đối tượng: dịch lọc Ngũ bội tử Hiện tượng: sắc ký đồ dung dịch có vết giống mẫu chuẩn Đúng Đúng Đúng Đúng dược liệu đối chiếu - Kết luận: mẫu kiểm nghiệm, đạt TCDĐVN V đặc điểm cảm quan, vi học, hóa học ... xuất: Chiết 3g bột dược liệu theo phương pháp (Chiết nước acid) - Cân 3g bột dược liệu cho vào becher, thêm 20 ml dung dịch H2SO4 2% - Đun BM 15p, lọc nóng qua gòn (2 lần x 20 ml) - Thu dịch chiết... cho NH4OH pH>10 xử lý nào? - Thêm H2SO4 2% để trung hoà lại để PH=10 Nồng độ CHCl3 ? - Nồng độ từ 25 -28 % Tại lọc dịch chiết bột Dược liệu bơng? - Vì bột Dược liệu hạt to nên chiết bơng tiết... chén vài hạt tinh thể K2Cr2O7 - Dùng đũa kéo hạt tinh thể K2Cr2O7 ngang qua dung dịch acid, có vệt tím chuyển sang hồng vàng biến thành nâu đen Kết luận: Dương tính Dược liệu Mã tiền Brucin Strychnin