đây là bài báo cáo thực hành môn dược liệu 1 bài dược liệu chứa coumarin. Bài sử dụng các hình ảnh được thí nghiệm trực tiếp tại phòng thực hành và được chứng minh giải thích rõ ràng cụ thể. Các bước tiến hành rõ ràng, hình ảnh minh họa cụ thể.
TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÂY ĐÔ KHOA DƯỢC – ĐIỀU DƯỠNG BÁO CÁO THỰC HÀNH MÔN DƯỢC LIỆU LỚP: ĐH DƯỢC 11C GVHD: Ths Huỳnh Anh Duy Nhóm – Tiểu Nhóm 1: Ngơ Thị Cẩm Thi Phù Thanh Thúy Vy Nguyễn Thị Tường Vy Lê Đặng Quế Trân Trần Thị Kiều Trang Huỳnh Hữu Thước BÀI 8: DƯỢC LIỆU CHỨA COURMARIN I CƠ SỞ LÝ THUYẾT COUMARIN hợp chất thuộc nhóm phenylpropanoid với khung benzo-a-pyron, với số tính chất sau: • Thường tồn tai dạng aglycon, dể kết tinh khơng màu,có mùi thơm, đa số dể thăng hoa • Ở dạng glycosid tan nước, dạng aglycon dể tan dung mơi phân cực • Phát huỳnh quang UV 365 nm • Do có vòng lacton nen coumarin dể bị mở vòng kềm tạo thành muối tan nước, acid hóa thường có đóng vòng trở lại • Sau mở vòng lacton dung dịch kiềm, coumarin đơn giản tạo thành dẩn chất hydroxyl cinnamic dang cis ,có huỳnh quang yếu UV 365 nm.Dưới tác dụng củ tia UV365 nm,chất chuyển thành dạng trans, có huỳnh quang mạnh • Một số dược liệu chứa coumarin: Bạch chỉ, tiển hồ, ba dót, sài đất Bạch Chỉ Tiền Hồ Ba Dót II TIẾN HÀNH THÍ NGHIỆM DƯỢC LIỆU a Bạch (Radix Angelica dahurica ): dùng rễ b Tiền hồ (Radix Peucedani): dùng rễ Chiết xuất dược liệu: áp dụng phương pháp • • • Lấy 1g bột dược liệu (bạch chỉ, tiền hồ) cho vào bình nón 100ml, thêm 20ml cồn 96% Đun cách thủy 5p Lọc qua (trên phễu lọc), thu dịch lọc để làm phản ứng • • Định tính coumarin phương pháp hóa học Phản ứng với FeCl3 Lấy ống nghiệm, dược liệu ống nghiệm, đánh số ống nghiệm: + Ống 1: cho 1ml dịch lọc + Ống 2: cho 1ml dịch lọc 1-2 giọt dung dịch FeCl3 So sánh màu ống nghiệm nhận xét Bạch Tiền hồ Nhận xét: ống dược liệu (ống thêm vài giọt FeCl 3) chuyển sang màu xanh, chứng tỏ phản ứng dương tính có coumarin dược liệu Ở Tiền Hồ, có màu xanh đậm chứng tỏ Tiền Hồ có nhiều -OH phenol Bạch Chỉ Phản ứng đóng mở vòng lacton • Lấy ống nghiệm, dược liệu ống nghiệm, đánh số ống nghiệm 1, + Ống 1: 2ml dịch lọc 4ml nước cất, dung dịch trở nên đục + Ống 2: 2ml dịch lọc 0,5ml dung dịch NaOH 10% Đun cách thủy – phút sau thêm nước cất thể tích ống Bạch Chỉ Tiền Hồ Quan sát: Ở dược liệu, ống cho nước vào dung dịch trở nên đục, ống cho NaOH 10% đun cách thủy cho dung dịch ống Nếu tiếp tục acid hóa ống HCl đđ thấy ống có độ đục gần Thí nghiệm chứng tỏ dược liệu có coumarin Giải thích: lí ống ống coumarin chất phân cực nên thêm nước vào ống dung dịch không tan dẫn đến dung dịch đục, ống cho NaOH vào NaOH tạo muối với coumarin (mở vòng lacton) nên dễ tan nước dẫn đến dung dịch Phản ứng với thuốc thử diazo • Lấy ống nghiệm, dược liệu ống • Cho vào ống nghiệm 2ml dịch lọc, thêm 1ml dung dịch NaOH 5% • Đun cách thủy 2p, làm lạnh nhanh vòi nước • Thêm từ từ giọt thuốc thử diazo xuất màu đỏ đỏ cam • Quan sát kết Bạch Chỉ Tiền Hồ Nhận xét: Cả dược liệu xuất màu đỏ cam chứng tỏ dược liệu chứa coumarin Nhưng Tiền Hồ màu đỏ cam đậm chứng tỏ Tiền Hồ có nhiều -OH phenol Bạch Chỉ Phản ứng huỳnh quang • Lấy tờ giấy lọc cắt làm đôi, dược liệu dùng nửa tờ • Trên nửa tờ giấy lọc kẻ vòng tròn (dùng đầu ống nghiệm để vẽ) • Lấy 3ml dịch lọc, thêm giọt dung dịch NaOH 5% đun cách thủy 3p nhỏ dịch lọc lên vòng tròn nửa tờ giấy lọc, vòng lại nhỏ vào dịch lọc (ban đầu chiết cồn) • Chờ cho dung mơi khơ lặp lại lần nữa, để khơ • Che vết dịch chiết vòng tròn miếng kim loại đem soi đèn UV 365nm 1- phút • Lấy miếng kim loại thấy không bị che phát quang sáng bị che • Nếu tiếp tục chiếu UV sau vài phút cường độ phát quang Thử nghiệm vi thăng hoa • Cho – 2g dược liệu (Tiền Hồ) vào chén nung nhỏ • Đun cách cát, đảo đầu cho bay hết nước đậy chén phiến kính có sẵn miếng bơng gòn lạnh • Tiếp tục đun khoảng 30p, để nguội • Quan sát kính hiển vi 10x, thấy nhiều tinh thể hình kim khơng màu • Nhỏ vài giọt cồn 96% lên lame để hòa tan tinh thể Chuyển dịch cồn vào ống nghiệm làm phản ứng với thuốc thử diazo phần phản ứng với thuốc thử diazo Kết quả: dung dịch có màu đỏ cam chứng tỏ dược liệu có coumarin • • Định tính coumarin sắc kí lớp mỏng Dịch chấm sắc ký: Dịch chiết cồn dược liệu: Tiền hồ, Bạch Chỉ bốc bếp cách thủy đến cắn Hòa tan cắn với CHCl3, dùng dịch làm dịch chấm sắc ký • Chuẩn bị mỏng: Lấy mỏng silica gel tráng sẳn với kích thước 2,5 x 10cm • Dung mơi sắc ký: Hệ dung môi: S1 = n-hexan : EtOAc (9:2) Cho dung mơi vào bình sắc ký (đã lót giấy lọc) cho lớp dung mơi bình cao khoảng 0,5cm, đậy kính nắp bình sắc ký • Khai triển: Dùng mao quản hút dịch chiết, chấm lên mỏng thành vạch 1-3mm cách mép 1,5cm o Đặt mỏng vào bình sắc ký tư nghiêng 45 đậy nắp bình Khi dung mơi cách mép 0.5cm lấy mỏng để bay dung mơi nhiệt độ phòng • Phát vết: Quan sát mỏng đèn UV 365nm, UV 254nm • UV 254nm UV 365nm Với thuốc thử Diazo (KOH) Nhúng mỏng vào dung dịch KOH 5%, sấy nhẹ cho khô mỏng Nhúng tiếp mỏng vào thuốc thử diazo (các dẫn chất coumarin cho vết có màu cam đến đỏ), sấy khô dán mỏng lại keo dán Kết quả: vết rõ cho mảu đỏ cam với thuốc thử diazo (KOH), chứng tỏ có coumarin dược liệu Bạch Chỉ Tiền Hồ