Báo cáo thực hành dược liệu chứa COUMARIN

Nhận xét và giải thích : + ống 1 : sau khi thêm 4ml nước cất dung dịch trở nên đục vì coumarin trong dung dịch phần lớn tồn tại ở dạng aglycon ( dễ tan trong dung môi kém phân cực ) mà nước là dung môi phân cực => dung dịch không tan trong nước. + ống 2 : Sau khi thêm dd NaOH 10%, ống nghiệm 2 tăng màu hơn so với dịch chiết ban đầu là do coumarin khi tác dụng với NaOH tạo gốc OH ( có tác dụng tăng màu ).Phản ứng hóa học : Sau khi thêm nước vừa bằng thể tích ống 1, quan sát ống 2 thấy dung dịch trong hơn so với ống 1 do ống 2 chứa NaOH có phản ứng mở vòng ( tạo thành muối tan) với coumarin => dung dịch trong hơn. Thêm dung dịch HCl đậm đặc thì 2 ống có độ đục như nhau là do khi cho vào ống 2, HCl phản ứng hết với NaOH đồng thời tham gia phản ứng đóng vòng trở lại nên tạo dung dịch đục ( như trường hợp của ống 1 với nước).Phản ứng hóa học :

BÁO CÁO THỰC TẬP DƯỢC LIỆU BÀI: DƯỢC LỆU CHỨA COUMARIN

I CƠ SỞ LÝ THUYẾT

Coumarin là các hợp chất thuộc nhóm phenylpropanoid (C6-C3) với khung cơ bản

là benzo-α-pyron, với một số tính chất sau:

- Thường tồn tại dưới dạng aglycon, dễ kết tinh, không màu, có mùi thơm và đa số

dễ thăng hoa

- Ở dạng glycosid thì có thể tan trong nước, ở dạng aglycon thì dễ tan trong dung môi kém phân cực

- Phát huỳnh quang dưới UV 365nm, cường độ huỳnh quang phụ thuộc vào nhóm oxy của phân tử coumarin cũng như pH của dung dịch, mạnh nhất đối với

coumarin có nhóm –OH ở C7 (nhiều coumarin có -OH ở vị trí này)

- Do có vòng lacton (ester nội) nên coumarin dễ bị mở vòng bởi kiềm tạo thành muối tan trong nước, nếu acid hóa thì thường sẽ có sự đóng vòng trở lại

- Sau khi mở vòng lacton bằng dung dịch kiềm, các coumarin đơn giản sẽ tạo thành

dẫn chất hydroxy cinnamic ở dạng cis (muối của acid coumarinic), có huỳnh quang

yếu trong UV 365nm Dưới tác dụng của tia UV 365nm, chất này sẽ chuyển thành

dạng trans (muối của acid coumaric), có huỳnh quang mạnh hơn.

II DƯỢC LIỆU THÍ NGHỆM

- Bạch chỉ: rễ củ cây bạch chỉ

- Rễ tranh: thân ngầm của cây cỏ tranh

III Tiến hành: CỎ TRANH

1 Chiết xuất

Cho bột cỏ tranh vào erlen, thêm cồn 96% Giã nhỏ cỏ tranh thành bột

Đun sôi trên cách thủy 5 phút Lọc qua bông và thu dịch lọc

Giải thích:

Chiết xuất cỏ tranh bằng cồn cao độ vì hoạt chất mong muốn thu được là coumarin, mà coumarin kém phân cực.Nếu dùng cồn thấp

độ thì tỉ lệ nước/cồn cao→môi trường dung môi phân cực hơn→hiệu suất chiết xuất thấp

2 Định tính coumarin bằng phản ứng hóa học

2.1 Phản ứng với dung dịch FeCl3

Giải thích : Hợp chất coumarin có nhóm –OH phenol tự do nên khi tác dụng với FeCl3 sẽ tạo nên phức có màu xanh

2.2 Phản ứng đóng mở vòng lacton

Nhỏ vào tâm vòng tròn 1-2 giọt dung dịch FeCl3 1% sẽ cho 1 màu xanh

Nhỏ vài giọt dịch lọc lên 1 tờ

giấy lọc thành 1 vòng tròn,

chờ khô dung môi

Ống 1: Thêm 4ml nước cất

Cho vào 2 ống

nghiệm 2ml dịch lọc

Ống 2: Thêm 0,5ml NaOH 10%

màu vàng

Đun cách thủy ống 2

2-3 phút

*Giải thích:

- Do trong cỏ tranh có coumarin có vòng lacton (ester nội) nên coumarin dễ bị

mở vòng bởi kiềm tạo thành muối tan trong nước, nếu acid hóa thì sẽ có sự đóng vòng trở lại

2.3 Sự tăng huỳnh quang trong môi trường kiềm dứơi tác dụng của tia UV

Thêm nước bằng ống 1

Ống 2 trong hơn ống 1

Acid hóa ống 2 bằng

đục như nhau

Nhỏ một giọt dịch chiết lên 1 tờ giấy lọc, chờ khô dung môi và lặp

lại như trên 4 lần nữa

Kết luận : Dưới tác dụng của tia UV hai nữa vết chiết phát sáng như nhau nên trong cỏ tranh không có chứa Coumarin.

2.4 Thử nghiệm vi thăng hoa

Che nữa vết dịch chiết bằng 1 miếng kim loại rồi đem soi đèn UV 356nm trong 1-2 phút

Lấy miếng kim loại ra ta thấy nữa không bị che phát sáng

giống như nữa bị che

Nghiền nhỏ dược liệu thô

Giải thích : Vì Coumarin là những chất dễ kết tinh và dễ thăng hoa.

Cho vào chén đun nhỏ, đun trân lưới amiang , thỉnh thoảng đảo đều cho bay hơi hết hơi nước rồi đậy chén bằng 1 phiến kính trên có đặt một miếng bông bông gòn thấm nước lạnh, tiếp tục đun khoảng 5-10 phút nữa (thỉnh thoảng

thay bông lạnh)

Lấy phiến kính ra , để nguội quan sát dưới kính hiển vi 10x sẽ thấy tinh

thể hình kim không thăng hoa

IV TIẾN HÀNH: BẠCH CHỈ

1 Chiết xuất

2 Định tính coumarin bằng phản ứng hóa học

1(g) bột bạch chỉ cho vào erlen100ml

Thêm 20ml cồn 96% rồi đun sôi cách

thuỷ trong 5’

Lọc qua bông, được dịch lọc

2.1 Phản ưng với dd FeCl3

Giải thích: Trong bạch chỉ có chứa coumarin có nhóm –OH phenol tự do nên khi tác dụng với FeCl3 sẽ tạo nên phức có màu xanh chuối non

2.2 Phản ứng đóng mở vòng lacton

Nhỏ vài giọt dịch lọc bạch

chỉ lên 1 tờ giấy lọc thành 1

vòng tròn, chờ khô dung

môi

Nhỏ vào tâm vòng tròn 1-2 giọt dung dịch FeCl3 1% , sau phản ứng cho màu xanh chuối

non

Cho vào 2 ổng nghiệm giống hệt nhau, mỗi ống 2ml dịch chiết

Ống 1:Thêm 4ml nước

Ống 1

Dung dịch đục hơn

Thêm 0.5ml dd NaOH 10%

(thường tăng màu hơn so nếu có coumarin)

Ống 2

Đun cách thủy trong 2-3 phút, thêm nước đến thể tích bằng ống nghiệm 1

Quan sát thấy ống 2 trong hơn ống 1

Acid hóa bằng HCl đậm đặc

Cả 2 ống có độ đục như nhau

- Nhận xét và giải thích :

+ ống 1 : sau khi thêm 4ml nước cất dung dịch trở nên đục vì coumarin trong dung dịch phần lớn tồn tại ở dạng aglycon ( dễ tan trong dung môi kém phân cực )

mà nước là dung môi phân cực => dung dịch không tan trong nước

+ ống 2 : *Sau khi thêm dd NaOH 10%, ống nghiệm 2 tăng màu hơn so với dịch chiết ban đầu là do coumarin khi tác dụng với NaOH tạo gốc OH ( có tác dụng tăng màu ).Phản ứng hóa học :

*Sau khi thêm nước vừa bằng thể tích ống 1, quan sát ống 2 thấy dung dịch trong hơn so với ống 1 do ống 2 chứa NaOH có phản ứng mở vòng ( tạo thành muối tan) với coumarin => dung dịch trong hơn

*Thêm dung dịch HCl đậm đặc thì 2 ống có độ đục như nhau là do khi cho vào ống 2, HCl phản ứng hết với NaOH đồng thời tham gia phản ứng đóng vòng trở lại nên tạo dung dịch đục ( như trường hợp của ống 1 với nước).Phản ứng hóa học :

- Kết luận : dịch chiết của Bạch Chỉ có thể chứa coumarin

2.3 sự tăng huỳnh quang trong môi trường kiềm dưới tác dụng của tia UV

Nhỏ một giọt dịch chiết lên 1 tờ giấy lọc, chờ khô dung môi và lặp lại như trên 4 lần nữa

Kết luận : Dưới tác dụng của tia UV nửa không bị che phát sáng hơn nửa bị che

do coumarin phản ứng chuyển từ đồng phân cis sang đồng phân trans dưới tác dụng của tia UV

2.4 Thử nghiệm vi thăng hoa

Che nữa vết dịch chiết bằng 1 miếng kim loại rồi đem soi đèn UV 356nm trong 1-2 phút

Lấy miếng kim loại ra ta thấy nửa không bị che phát sáng hơn nửa bị che

Cho vào chén đun nhỏ 1 ít bột bạch chỉ

Giải thích : Vì Coumarin là những chất dễ kết tinh và dễ thăng hoa.

Đun trên lưới amiang , thỉnh thoảng đảo đều cho bay hơi hết hơi nước

rồi đậy chén bằng 1 phiến kính trên có đặt một miếng bông bông gòn

thấm nước lạnh, tiếp tục đun khoảng 5-10 phút nữa (thỉnh thoảng thay

bông lạnh)

Lấy phiến kính ra , để nguội quan sát dưới kính hiển vi 10x sẽ thấy tinh thể hình kim không thăng hoa