Nhận xét và giải thích : + ống 1 : sau khi thêm 4ml nước cất dung dịch trở nên đục vì coumarin trong dung dịch phần lớn tồn tại ở dạng aglycon ( dễ tan trong dung môi kém phân cực ) mà nước là dung môi phân cực => dung dịch không tan trong nước. + ống 2 : Sau khi thêm dd NaOH 10%, ống nghiệm 2 tăng màu hơn so với dịch chiết ban đầu là do coumarin khi tác dụng với NaOH tạo gốc OH ( có tác dụng tăng màu ).Phản ứng hóa học : Sau khi thêm nước vừa bằng thể tích ống 1, quan sát ống 2 thấy dung dịch trong hơn so với ống 1 do ống 2 chứa NaOH có phản ứng mở vòng ( tạo thành muối tan) với coumarin => dung dịch trong hơn. Thêm dung dịch HCl đậm đặc thì 2 ống có độ đục như nhau là do khi cho vào ống 2, HCl phản ứng hết với NaOH đồng thời tham gia phản ứng đóng vòng trở lại nên tạo dung dịch đục ( như trường hợp của ống 1 với nước).Phản ứng hóa học :
BÁO CÁO THỰC TẬP DƯỢC LIỆU BÀI: DƯỢC LỆU CHỨA COUMARIN I CƠ SỞ LÝ THUYẾT Coumarin hợp chất thuộc nhóm phenylpropanoid (C6-C3) với khung benzo-α-pyron, với số tính chất sau: - Thường tồn dạng aglycon, dễ kết tinh, khơng màu, có mùi thơm đa số dễ thăng hoa - Ở dạng glycosid tan nước, dạng aglycon dễ tan dung mơi phân cực - Phát huỳnh quang UV 365nm, cường độ huỳnh quang phụ thuộc vào nhóm oxy phân tử coumarin pH dung dịch, mạnh coumarin có nhóm –OH C7 (nhiều coumarin có -OH vị trí này) - Do có vòng lacton (ester nội) nên coumarin dễ bị mở vòng kiềm tạo thành muối tan nước, acid hóa thường có đóng vòng trở lại - Sau mở vòng lacton dung dịch kiềm, coumarin đơn giản tạo thành dẫn chất hydroxy cinnamic dạng cis (muối acid coumarinic), có huỳnh quang yếu UV 365nm Dưới tác dụng tia UV 365nm, chất chuyển thành dạng trans (muối acid coumaric), có huỳnh quang mạnh II DƯỢC LIỆU THÍ NGHỆM - Bạch chỉ: rễ củ bạch - Rễ tranh: thân ngầm cỏ tranh III Tiến hành: CỎ TRANH Chiết xuất Cho bột cỏ tranh vào erlen, thêm cồn 96% Giã nhỏ cỏ tranh thành bột Đun sôi cách thủy phút Lọc qua thu dịch lọc Giải thích: Chiết xuất cỏ tranh cồn cao độ hoạt chất mong muốn thu coumarin, mà coumarin phân cực.Nếu dùng cồn thấp độ tỉ lệ nước/cồn cao→mơi trường dung mơi phân cực hơn→hiệu suất chiết xuất thấp Định tính coumarin phản ứng hóa học Nhỏ vào tâm vòng tròn 1-2 giọt dung dịch FeCl3 1% cho màu xanh 2.1 Phản ứng với dung dịch FeCl3 Nhỏ vài giọt dịch lọc lên tờ giấy lọc thành vòng tròn, chờ khơ dung mơi Giải thích: Hợp chất coumarin có nhóm –OH phenol tự nên tác dụng với FeCl3 tạo nên phức có màu xanh 2.2 Phản ứng đóng mở vòng lacton Cho vào ống nghiệm 2ml dịch lọc Ống 1: Thêm 4ml nước cất Dd trở nên đục Ống 2: Thêm 0,5ml NaOH 10% Dd tăng màu vàng Đun cách thủy ống 2-3 phút Thêm nước ống Ống ống Acid hóa ống HCl đậm đặc ống có độ đục *Giải thích: - Do cỏ tranh có coumarin có vòng lacton (ester nội) nên coumarin dễ bị mở vòng kiềm tạo thành muối tan nước, acid hóa có đóng vòng trở lại 2.3 Sự tăng huỳnh quang môi trường kiềm dứơi tác dụng tia UV Nhỏ giọt dịch chiết lên tờ giấy lọc, chờ khô dung môi lặp lại lần Nhỏ chồng lên giọt dung dịch NaOH 5%, sấy thật khơ Che vết dịch chiết miếng kim loại đem soi đèn UV 356nm 1-2 phút Lấy miếng kim loại ta thấy không bị che phát sáng giống bị che Kết luận : Dưới tác dụng tia UV hai vết chiết phát sáng nên cỏ tranh khơng có chứa Coumarin 2.4 Thử nghiệm vi thăng hoa Nghiền nhỏ dược liệu thô Cho vào chén đun nhỏ, đun trân lưới amiang , đảo cho bay hết nước đậy chén phiến kính có đặt miếng bơng bơng gòn thấm nước lạnh, tiếp tục đun khoảng 510 phút (thỉnh thoảng thay lạnh) Cho vào chén đun nhỏ, đun trân lưới amiang , đảo cho bay hết nước đậy chén phiến kính có đặt miếng bơng bơng gòn thấm nước lạnh, tiếp tục đun khoảng 5-10 phút (thỉnh thoảng thay bơng lạnh) Lấy phiến kính , để nguội quan sát kính hiển vi 10x thấy tinh thể hình kim khơng thăng hoa Giải thích: Vì Coumarin chất dễ kết tinh dễ thăng hoa IV TIẾN HÀNH: BẠCH CHỈ Chiết xuất 1(g) bột bạch cho vào erlen100ml Thêm 20ml cồn 96% đun sôi cách thuỷ 5’ Lọc qua bông, dịch lọc Định tính coumarin phản ứng hóa học 2.1 Phản ưng với dd FeCl3 Nhỏ vài giọt dịch lọc bạch lên tờ giấy lọc thành vòng tròn, chờ khơ dung mơi Nhỏ vào tâm vòng tròn 1-2 giọt dung dịch FeCl3 1% , sau phản ứng cho màu xanh chuối non Giải thích: Trong bạch có chứa coumarin có nhóm –OH phenol tự nên tác dụng với FeCl3 tạo nên phức có màu xanh chuối non 2.2 Phản ứng đóng mở vòng lacton Cho vào nghiệm giống hệt nhau, ống 2ml dịch chiết Ống 1:Thêm 4ml nước Dung dịch cất đục Ống Figure Ống Ống 2: Cho vào ống nghiệm 2ml dịch lọc Thêm 0.5ml dd NaOH 10% Dung dịch đục (thường tăng màu so có coumarin) Ống Figure Đun cách thủy 2-3 phút, thêm nước đến thể tích ống nghiệm Quan sát thấy ống ống Acid hóa HCl đậm đặc Cả ống có độ đục - Nhận xét giải thích : + ống : sau thêm 4ml nước cất dung dịch trở nên đục coumarin dung dịch phần lớn tồn dạng aglycon ( dễ tan dung môi phân cực ) mà nước dung môi phân cực => dung dịch không tan nước + ống : *Sau thêm dd NaOH 10%, ống nghiệm tăng màu so với dịch chiết ban đầu coumarin tác dụng với NaOH tạo gốc OH ( có tác dụng tăng màu ).Phản ứng hóa học : *Sau thêm nước vừa thể tích ống 1, quan sát ống thấy dung dịch so với ống ống chứa NaOH có phản ứng mở vòng ( tạo thành muối tan) với coumarin => dung dịch *Thêm dung dịch HCl đậm đặc ống có độ đục cho vào ống 2, HCl phản ứng hết với NaOH đồng thời tham gia phản ứng đóng vòng trở lại nên tạo dung dịch đục ( trường hợp ống với nước).Phản ứng hóa học : - Kết luận : dịch chiết Bạch Chỉ chứa coumarin 2.3 tăng huỳnh quang môi trường kiềm tác dụng tia UV Nhỏ giọt dịch chiết lên tờ giấy lọc, chờ khô dung môi lặp lại lần Nhỏ chồng lên giọt dung dịch NaOH 5%, sấy thật khô Che vết dịch chiết miếng kim loại đem soi đèn UV 356nm 1-2 phút Lấy miếng kim loại ta thấy nửa không bị che phát sáng nửa bị che Kết luận : Dưới tác dụng tia UV nửa không bị che phát sáng nửa bị che coumarin phản ứng chuyển từ đồng phân cis sang đồng phân trans tác dụng tia UV lưới amiang , 2.4 Đun Thửtrên nghiệm vi thăng hoa đảo cho bay hết nước đậy chén phiến kính có đặt miếng bơng bơng gòn thấm nước lạnh, tiếp tục đun khoảng 5-10 phút (thỉnh thoảng thay lạnh) Cho vào chén đun nhỏ bột bạch Đun lưới amiang , đảo cho bay hết nước đậy chén phiến kính có đặt miếng bơng bơng gòn thấm nước lạnh, tiếp tục đun khoảng 5-10 phút (thỉnh thoảng thay bơng lạnh) Lấy phiến kính , để nguội quan sát kính hiển vi 10x thấy tinh thể hình kim khơng thăng hoa Giải thích: Vì Coumarin chất dễ kết tinh dễ thăng hoa ... Dưới tác dụng tia UV hai vết chiết phát sáng nên cỏ tranh khơng có chứa Coumarin 2.4 Thử nghiệm vi thăng hoa Nghiền nhỏ dược liệu thô Cho vào chén đun nhỏ, đun trân lưới amiang , đảo cho bay hết... ống HCl đậm đặc ống có độ đục *Giải thích: - Do cỏ tranh có coumarin có vòng lacton (ester nội) nên coumarin dễ bị mở vòng kiềm tạo thành muối tan nước, acid hóa có đóng vòng trở lại 2.3 Sự tăng... độ hoạt chất mong muốn thu coumarin, mà coumarin phân cực.Nếu dùng cồn thấp độ tỉ lệ nước/cồn cao→mơi trường dung môi phân cực hơn→hiệu suất chiết xuất thấp Định tính coumarin phản ứng hóa học