Nghiên cứu ứng dụng đệm sinh học trong phân hủy hóa chất bảo vệ thực vật (2,4d và cartap)

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - ĐÀM THỊ TRUNG HIẾU NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG ĐỆM SINH HỌC TRONG PHÂN HỦY HÓA CHẤT BẢO VỆ THỰC VẬT (2,4D VÀ CARTAP) LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội – 2019 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - ĐÀM THỊ TRUNG HIẾU NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG ĐỆM SINH HỌC TRONG PHÂN HỦY HÓA CHẤT BẢO VỆ THỰC VẬT (2,4D VÀ CARTAP) Chuyên ngành: Kỹ thuật Môi trường Mã số: 8520320.01 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS NGÔ THỊ TƯỜNG CHÂU PGS.TS LÊ VĂN THIỆN Hà Nội – 2019 LỜI CẢM ƠN Với lòng kính trọng biết ơn sâu sắc, em xin gửi lời cảm ơn đến PGS.TS Ngô Thị Tường Châu PGS.TS Lê Văn Thiện – giảng viên Khoa Môi trường – Trường Đại học Khoa học Tự nhiên trực tiếp giao đề tài dành nhiều thời gian, tâm huyết hướng dẫn em tận tình, ln động viên em giữ vững tinh thần, tạo điều kiện thuận lợi cho em suốt trình em thực luận văn Qua em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới toàn thể thầy cô giáo Khoa Môi trường – Trường Đại học Khoa học Tự nhiên tận tâm dạy dỗ, truyền đạt cho chúng em học quý giá, điều cốt lõi khoa học thực tiễn, ln nhiệt tình bảo, giải đáp vướng mắc, giúp đỡ em suốt thời gian em học tập trường Kết nghiên cứu luận văn phần kết nghiên cứu đề tài “Nghiên cứu đặc tính khả phân hủy Chlopyrifos hỗn hợp sinh học hệ thống đệm sinh học” PGS.TS Ngơ Thị Tường Châu chủ trì đề tài “Ảnh hưởng việc bổ sung nấm mốc phân hủy lignin đến đặc tính khả phân hủy Cartap hỗn hợp sinh học” PGS.TS Lê Văn Thiện PGS.TS Ngô Thị Tường Châu chủ trì Chủ trì đề tài cho phép tác giả sử dụng phần kết nghiên cứu để viết luận văn Tác giả xin cảm ơn chị Vũ Thị Thu - học viên cao học Môi trường_K23, bạn Phùng Thị Ngọc Mai, Lê Thị Thắm Hồng sinh viên lớp Khoa học môi trường_K59 - ĐHKHTH, cộng tác với tác giả triển khai thực bước nghiên cứu luận văn Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, tháng năm 2019 Học viên Đàm Thị Trung Hiếu i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan luận văn cơng trình khoa học thực theo hướng nghiên cứu PGS.TS Ngô Thị Tường Châu PGS.TS Lê Văn Thiện chương trình đào tạo trường Đại học Khoa học Tự nhiên – Đại học Quốc gia Hà Nội Kết nghiên cứu phần đề tài nghiên cứu “Ảnh hưởng việc bổ sung nấm mốc phân hủy lignin đến đặc tính khả phân hủy Cartap hỗn hợp sinh học” mà tham gia Các số liệu kết luận văn trung thực chưa công bố Tôi hoàn toàn chịu trách nhiệm nội dung luận văn Hà Nội, tháng năm 2019 Người thực luận văn Đàm Thị Trung Hiếu ii BẢNG KÝ HIỆU CÁC CHỮ VIẾT TẮT ABTS 2,2-azino-bis (3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) Biobed Hệ thống đệm sinh học Biomix Hỗn hợp sinh học BLAST Basic Local Alignment Search Tool BVTV Bảo vệ thực vật ChE DMAB HBT HCBVTV HPLC IUPAC Cholinesterase (Là loại enzyme) 3-(dimethylamino) benzoic acid 1-hydroxybenzotriazol (Là chất trung gian nhân tạo) Hóa chất bảo vệ thực vật High Performance Liquid Chromatography) (Phương pháp sắc khí lỏng hiệu cao) International Union of Pure and Applied Chemistry (Liên minh Quốc tế Hóa học túy Hóa học ứng dụng) LC50 Lethal Concentration (Nồng độ gây chết 50% số cá thể thí nghiệm) LD50 Lethal Dose (Liều lượng gây chết 50% số cá thể dùng thử nghiệm) LiP Lignin Peroxidase MBTH 3-methyl-2-benzothiazolinone hydrazone MnP Manganese Peroxidase PCR Thermal Cycler Bio-Rad PTN Phòng thí nghiệm SSP Soil: Straw: Peat (Đất: Rơm: Than bùn) SSS Soil: Straw: Spent mushroom substrate (Đất: Rơm: Bã thải nấm sò) SSSM VSV Soil: Straw: Spent mushroom substrate: Selected Mold strain (Đất: Rơm: Bã thải nấm sò: Chủng nấm mốc tuyển chọn) Vi sinh vật iii DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1: Phân loại HCBVTV theo độ độc Bảng 1.2: Phân loại nhóm độc theo WHO (LD50 mg/kg chuột) Bảng 1.3: Phân loại HCBVTV theo công dụng Bảng 1.4: Phân loại HCBVTV theo thời gian phân hủy 10 Bảng 3.1: Hoạt độ enzyme phân hủy lignin chủng nấm mốc nghiên cứu 43 Bảng 3.2: Đặc tính lí hóa Biomix 45 Bảng 3.3: Hoạt độ enzyme phân hủy lignin thời gian ủ ban đầu khác Biomix (Đơn vị: đơn vị/kg) 47 Bảng 3.4: Mật độ nhóm VSV Biomix hỗn hợp 15 ngày ủ .48 Bảng 3.5: Mật độ quần thể VSV phân hủy cellulose, hemicellulose lignin (Đơn vị: CFU/1 g chất tươi) 51 Bảng 3.6: Hô hấp VSV Biomix 15 ngày ủ 52 Bảng 3.7: Nồng độ dư lượng 2,4D lại Biomix sau 15 ngày ủ (Đơn vị: ppm) 54 Bảng 3.8: Hiệu phân hủy 2,4D Biomix sau 15 ngày ủ độ ẩm nhiệt độ khác 54 Bảng 3.9: Nồng độ dư lượng 2,4D lại Biomix sau 30 ngày ủ (Đơn vị: ppm) 55 Bảng 3.10: Hiệu phân hủy 2,4D Biomix sau 30 ngày ủ độ ẩm nhiệt độ khác 55 iv Bảng 3.11: Nồng độ dư lượng Cartap lại Biomix sau 15 ngày ủ .56 Bảng 3.12: Hiệu phân hủy Cartap Biomix sau 15 ngày ủ độ ẩm nhiệt độ khác 57 Bảng 3.13: Nồng độ dư lượng Cartap lại Biomix sau 30 ngày ủ .57 Bảng 3.14: Hiệu phân hủy Cartap Biomix sau 30 ngày ủ độ ẩm nhiệt độ khác 57 Bảng 3.15: Sự biến động hiệu phân hủy 2,4D Cartap Biomix Biobed 62 Bảng P1: Sự biến động nhiệt độ Biomix Biobed 74 Bảng P2: Sự biến động pH Biomix Biobed 75 Bảng P3: Sự biến động độ ẩm Biomix Biobed .75 v DANH MỤC HÌNH Hình 1.1: Cơng thức cấu tạo phân tử 2,4D 12 Hình 1.2: Cơng thức phân tử cấu tạo Cartap .13 Hình 1.3: Hệ thống đệm sinh học điển hình 17 Hình 1.4: Đệm sinh học khơng lót 18 Hình 1.5: Đệm sinh học có lót .18 Hình 1.6: Số lượng Biobed sử dụng quốc gia EU đến năm 2016 20 Hình 1.7: Tình hình ứng dụng Biobed giới khơng kể nước châu Âu đến năm 2016 .21 Hình 1.8: Cấu trúc phân tử lignin (p-coumaryl alcohol, coniferyl alcohol, sinapyl alcohol) .27 Hình 2.1: Ống nghiệm chứa chủng nấm mốc tập hợp giống sẵn có 31 Hình 2.2: Các thành phần nguyên liệu Biomix 33 Hình 2.3: Các thùng chứa hỗn hợp Biomix hồn chỉnh vừa tạo .35 Hình 3.1: Đặc điểm hình thái chủng nấm mốc N2 44 Hình 3.2: Trình tự nucleotide mã hóa cho đoạn gen 28S rRNA chủng N2 .44 Hình 3.3: Hoạt độ enzyme phân hủy lignin thời gian ủ ban đầu khác Biomix SSSM, SSS SSP 47 Hình 3.4: Mật độ vi khuẩn hỗn hợp 15 ngày ủ Biomix SSSM, SSS SSP 49 vi Hình 3.5: Mật độ xạ khuẩn hỗn hợp 15 ngày ủ Biomix SSSM, SSS SSP 49 Hình 3.6: Mật độ nấm mốc hỗn hợp 15 ngày ủ Biomix SSSM, SSS SSP 50 Hình 3.7: Mật độ quần thể VSV phân hủy cellulose, hemicellulose .51 Hình 3.8: Hơ hấp VSV Biomix 15 ngày ủ Biomix SSSM, SSS SSP 53 Hình 3.9: Sự biến động nhiệt độ Biomix Biobed 59 Hình 3.10: Sự biến động pH Biomix Biobed 60 Hình 3.11: Sự biến động độ ẩm Biomix Biobed 61 Hình P1: Phiếu kết xét nghiệm định danh chủng nấm mốc N2 .69 Hình P2: Kết giải trình tự trình tự chi tiết mẫu thử .70 Hình P3: Kết tra cứu Blast Search (NCBI) .72 Hình P4: Kết tra cứu Blast Search (NCBI) .73 Hình P5: Các túi zip chứa mẫu Biomix 2,4D Cartap điều kiện nhiệt độ, độ ẩm, thời gian ủ khác để mang phân tích 74 vii MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i LỜI CAM ĐOAN ii BẢNG KÝ HIỆU CÁC CHỮ VIẾT TẮT iii DANH MỤC BẢNG iv DANH MỤC HÌNH vi MỤC LỤC MỞ ĐẦU Chương – TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan HCBVTV 1.1.1 Khái niệm HCBVTV 1.1.2 Phân loại hóa chất bảo vệ thực vật 1.1.3 Tình hình sử dụng HCBVTV thực trạng nhiễm HCBVTV nước ta… 14 1.2 Tổng quan Đệm sinh học 17 1.2.1 Đệm sinh học gì? 17 1.2.2 Phân loại đệm sinh học 18 1.2.3 Cấu trúc đệm sinh học 19 1.2.4 Tổng quan tình hình nghiên cứu ứng dụng hệ thống đệm sinh học nước giới Việt Nam 20 1.3 Tổng quan VSV phân hủy lignin khả phân hủy HCBVTV 26 Chương – ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .30 2.1 Đối tượng nghiên cứu 30 2.2 Phương pháp nghiên cứu .30 2.2.1 Phương pháp tổng quan nghiên cứu tài liệu 30 2.2.2 Phương pháp tuyển chọn chủng nấm có hoạt tính phân huỷ lignin cao 30 2.2.3 Phương pháp chuẩn bị Biomix 32 được, sau 15 ngày ủ ban đầu, độ ẩm Biomix tăng đến 72% Sự tăng độ ẩm Biomix trường hợp nước hình thành phản ứng oxy hố chất hữu VSV hiếu khí đống ủ Sau 2,4D Cartap phun vào Biobed, độ ẩm Biomix Biobed trở lại 60% sau 15 ngày (Hình 3.11) Độ ẩm nói chung thuận lợi cho hoạt động VSV nói chung VSV phân huỷ 2,4D Cartap nói riêng Sau độ ẩm dao động khoảng từ 68 đến 72% Độ ẩm 65% cho làm chậm phân huỷ chất hữu cơ, sinh mùi hốc kị khí thấm lọc chất dinh dưỡng 80 70 Độ ẩm (%) 60 50 SSSM 40 SSS SSP 30 20 10 0 10 15 20 25 30 35 Hình 3.11: Sự biến động độ ẩm Biomix Biobed 3.5.5 Sự biến động hiệu phân hủy 2,4D Cartap Biomix trong Biobed Sự biến động hiệu phân huỷ 2,4D Cartap Biomix Biobed với nồng độ ban đầu loại HCBVTV 10 ppm đánh giá thời gian 61 sau 15 ngày ủ 30 ngày ủ điều kiện tối ưu nhiệt độ 37°C độ ẩm 60% Kết trình bày Bảng 3.15 Bảng 3.15: Sự biến động hiệu phân hủy 2,4D Cartap Biomix Biobed Biomix 15 ngày 30 ngày 2,4D Cartap 2,4D Cartap SSSM 95,13% 95,29% 98,82% 98,27% SSS 93,46% 93,02% 97,15% 96,19% SSP 68,25% 67,55% 91,34% 90,73% Qua bảng 3.15, cho thấy: Sau 15 ngày phân huỷ, hiệu phân hủy 2,4D Biomix SSSM, SSS SSP hệ thống Biobed tương ứng đạt 95,13%, 93,46% 68,25% Hiệu phân hủy Cartap Biomix SSSM, SSS SSP hệ thống Biobed tương ứng đạt 95,29%, 93,02% 67,55% Sau 30 ngày phân huỷ, hiệu phân hủy 2,4D Biomix SSSM, SSS SSP hệ thống Biobed tương ứng đạt 98,82%, 97,15%, 91,34% Hiệu phân hủy Cartap Biomix SSSM, SSS SSP hệ thống Biobed tương ứng đạt 98,27%, 96,19% 90,73% Trong nghiên cứu này, hiệu phân huỷ 2,4D Cartap Biomix SSSM, SSS SSP hệ thống Biobed tương ứng thấp so với điều kiện tối ưu (mục 3.4) PTN Điều điều kiện PTN, điều kiện phân huỷ kiểm soát ổn định, không chịu tác động từ môi trường 62 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Từ tập hợp 06 chủng nấm mốc có hoạt tính phân huỷ lignin, tuyển chọn chủng nấm mốc Penicillium chrysogenum N2 có hoạt tính phân hủy lignin cao với hoạt độ đạt 173,6 đơn vị/kg Từ nguyên liệu ban đầu bao gồm đất, rơm, bã thải trồng nấm sò (hoặc than bùn), chủng nấm mốc phân huỷ lignin cao, chuẩn bị 03 loại Biomix (SSSM, SSS SSP) với đặc điểm lý - hố ban đầu sau: • Đối với SSSM: độ ẩm 60%, pH = 6,85, CHC 27,63%, N tổng số 1,75%, Tỷ lệ C/N 15,79 • Đối với SSS: độ ẩm 60%, pH = 6,85, CHC 26,68%, N tổng số 1,72%, Tỷ lệ C/N 15,751 • Đối với SSP: độ ẩm 60%, pH = 7,85, CHC 20,35%, N tổng số 1,26%, Tỷ lệ C/N 16,15 Nhìn chung thông số môi trường thuận lợi cho sinh trưởng phát triển hệ vi sinh vật nội Biomix Biomix SSSM, SSS SSP có hoạt tính enzyme phân hủy lignin cao sau 15 ngày ủ ban đầu với hoạt độ đạt 645,3, 75,5 83 đơn vị/kg Đã xác định điều kiện tối ưu cho phân huỷ 2,4D Cartap Biomix: • Đối với SSSM: điều kiện tối ưu cho phân huỷ 2,4D Cartap độ ẩm 60%, nhiệt độ 37°C pH 6,5 sau 15 ngày ủ • Đối với SSS: điều kiện tối ưu cho phân huỷ 2,4D Cartap độ ẩm 60%, nhiệt độ 37°C pH 6,65 sau 18 ngày ủ • Đối với SSP: điều kiện tối ưu cho phân huỷ 2,4D Cartap độ ẩm 60%, nhiệt độ 37°C pH 6,7 sau 20 ngày ủ 63 Hiệu phân huỷ 2,4D Cartap Biomix xếp theo thứ tự giảm dần SSSM, SSS SSP Qua cho thấy (i) việc bổ sung chủng nấm mốc có hoạt tính phân huỷ lignin cải thiện khả phân huỷ 2,4D Cartap Biomix; (ii) thay nguyên liệu bã thải trồng nấm sò cho than bùn chuẩn bị Biomix Kiến nghị Với hiệu cao, hệ thống đơn giản giá thành rẻ, hệ thống đệm sinh học giải pháp phù hợp với nước phát triển Việt Nam việc giải nguồn gây ô nhiễm HCBVTV từ việc tráng rửa bình phun Nghiên cứu dừng mức đánh giá hiệu phân hủy HCBVTV Biomix loại thuốc riêng biệt Trong tương lai, nên tiếp tục có nghiên cứu sâu hệ thống đệm sinh học khả phân hủy nhiều loại HCBVTV khác nhau, hay nghiên cứu sử dụng vật liệu có sẵn địa phương xơ dừa, phân compost để thay cho hợp phần đệm sinh học Kết nghiên cứu triển khai thử nghiệm ngồi thực tế đồng rộng, đưa hệ thống đệm sinh học vào bể thu gom vỏ bao bì, chai lọ đựng thuốc bảo vệ thực vật, để xử lý nước rỉ phát sinh Sau lượng chất thải rắn lại thu gom đưa xử lý theo quy trình, quy định Nhà nước, giúp giảm tối đa ảnh hưởng tới mơi trường Hình ảnh bể thu gom, chứa vỏ, bao bì HCBVTV đồng ruộng 64 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Lê Huy Bá, Lâm Minh Triết (2000), Sinh thái môi trường ứng dụng, NXB Khoa Học Kỹ Thuật, Hà Nội Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn (2016), Thông tư số 03/2016/TTBNNPTNT ngày 21/4/2016, Danh mục thuốc bảo vệ thực vật phép sử dụng, cấm sử dụng Việt Nam; công bố mã HS thuốc bảo vệ thực vật phép sử dụng, cấm sử dụng Việt Nam Bộ Tài nguyên Môi trường (2012), TCVN 8726 : 2012 - Kiểm định xây dựng Quốc tế (ICCI) Nguyễn Hữu Hỷ, Nguyễn Duy Trình, Ngơ Thị Bích Ngọc, Nguyễn Thị Mỵ (2009), Thực trạng giải pháp phát triển ngành nấm tỉnh phía Nam, Viện Khoa học Kỹ thuật Nơng nghiệp Việt Nam Tổng cục Môi trường (2015), Hiện trạng ô nhiễm mơi trường hố chất bảo vệ thực vật tồn lưu thuộc nhóm chất hữu khó phân huỷ Việt Nam, Dự án xây dựng lực nhằm loại bỏ hoá chất bảo vệ thực vật POP tồn lưu Việt Nam, Hà Nội Trương Quốc Tùng (2013), “Thực trạng sử dụng thuốc bảo vệ thực vật nông nghiệp Việt Nam”, Liên hiệp Hội Khoa học Kỹ thuật Việt Nam Lê Văn (2014), “Sử dụng thuốc bảo vệ thực vật VN: Nhiều bất cập!”, https://vietnamnet.vn/vn/khoa-hoc/su-dung-thuoc-bao-ve-thuc-vat-tai-vnnhieu-bat-cap-209839.html Tiếng Anh Castillo et al (1994), “Determination of Manganese Peroxidase Activity with 3Methyl-2-benzothiazolinone Hydrazone and 3-(Dimethylamino) benzoic Acid”, Analytical Biochemistry, 218(2):399-404 Castillo, M d P and Stenström J (2008), “Biobeds for Environmental Protection from Pesticide UseA Review”, J Agric Food Chem, 56, pp 6206 – 6218 65 10 Castillo, M d P and Torstensson, L (2007), “Effect of Biobed composition, moisture and temperature on the degradation of pesticides”, J Agric Food Chem, 55, pp 5725-5733 11 Castillo, M d P., Ander, P and Stenström, J (2000), “Lignin and manganese peroxidase activity in extracts from straw solid substrate fermentation”, Biotechnol Tech., 11, pp 701-706 12 Castillo, M d P., Andersson, A., Ander, P., Stenström, J and Torstensson, L (2001), “Establishment of the white rot fungus Phanearochaete chrysosporium on unsterile straw of solid substrate fermentation systems intended for degradation of pesticides”, World J Microbiol Biotechnol., 17, pp 627-633 13 Coppola, L., Castillo, M d P., Monaci, E., Vischetti, C (2007), “Adaption of the Biobed composition for chlorpyrifoos degradation to southern Europe conditions”, J Agric Food Chem., 55, pp 396-401 14 Cruz R C,a S M C Werneck,a C S Oliveira,a P C Santos,a B M Soares,b D A Santos,a and P S Cisalpino (2013), “Influence of Different Media, Incubation Times, and Temperatures for Determining the MICs of Seven Antifungal Agents against Paracoccidioides brasiliensis by Microdilution”, Journal Clin Microbiol, 51(2): 436–443 15 Daljit Singh Arora, Mukesh Chander, Paramjit Kaur Gil (2002), “Involvement of lignin peroxidase, manganese peroxidase and laccase in degradation and selective ligninolysis of wheat straw”, Int Biodeterior Biodegradation, 50:115-120 16 Fernández-Alberti S, O Rubilar, Tortella G.R, Diez M.C (2012), “Chlorpyrifos degradation in a Biomix: Effect of pre-incubation and water holding capacity”, Journal of Soil Science and Plant Nutrition, 12 (4), 785- 799 17 Fogg P, and Alistair B A Boxall (2003), “Degradation of Pesticides in Biobeds:  The Effect of Concentration and Pesticide Mixtures”, J Agric Food Chem., 2003, 51 (18), pp 5344–5349 18 Wenxuan Gao, Junfeng Liang, Letica Pizzul, Xin Mei Feng, Kequiang Zhang 66 and Maria del Pilar Castillo (2014), “Evaluation of spent mushroom substrate as substitute of peat in China Biobeds”, International Biodeterioration & Biodegradation, 98, pp 107 19 Karanasios E, Nikolaos G Tsiropoulos, Dimitrios G Karpouzas, and Constantinos Ehalitois (2010), “Degradation and Adsorption of Pesticides in Compost-Based Biomixtures as Potential Substrates for Biobeds in Southern Europe”, Journal of Agricultural and Food Chemistry, Greece, 58, pp 91479156 20 Karanasios E, Tsiropoulos NG, Karpouzas DG, Menkissoglu-Spiroudi U, “Novel biomixtures based on local Mediterranean lignocellulosic materials: Evaluation for use in biobed systems”, Chemosphere 2010, 80, 914- 921 21 Leonowicz et al (2001), “Fungal Laccase: Properties and Activity on Lignin Article· Literature Review”, Journal of Basic Microbiology 41(3-4):185-227 22 Madad and Abbas (2017), “Lignin Degradation by Fungal Pretreatment: A Review”, J Plant Pathol Microbiol 8: 398 doi: 10.4172/2157-7471.1000398 23 Molecular Breeding of Woody Plants Wout Boerjan, Gilles Pilate (2001), in Progress in Biotechnology 24 Naomi Farragher (2013), “Degradation of Pesticides by the Ligninolytic Enzyme Laccase” Master thesis Environmental Science, Swedish University of Agricultural Sciences, Department of Microbiology: 2013: • ISSN 11018151 25 Pizzul et al (2009), “Degradation of glyphosate and other pesticides by ligninolytic enzymes”, Biodegradation 20(6):751-759 26 Santosh K Jha, Pragya Prakash (2017), in Dietary Fiber for the Prevention of Cardiovascular Disease 27 Thompson, W.H (2002), “Test Methods for the Examination of Composting and Compost”, U.S Composting Council and Department of Agriculture, U.S Government Printing Of ce, Washington, DC 28 Tortella G.R., O Rubilar1, M Cea1, C Wulff1, O Martínez, and M.C Diez 67 (2010), “Biostimulation of agricultural biobeds with npk fertilizer on chlorpyrifos degradation to avoid soil and water contamination”, J Soil Sci Plant Nutr 10 (4): 464 – 475 29 Valli and Gold, (1991), “Degradation of 2,4-dichlorophenol by the lignindegrading fungus Phanerochaete chrysosporium”, Journal of Bacteriology 173(1):345-52 30 Wesenberg et al (2004), “White-rot fungi and their enzymes for the treatment of industrial dye effluents”, Biotechnology Advances, 22(1-2):161-87 Tài liệu từ trang web 31 https://staff.agu.edu.vn/vttdao/files/2013/03/Thực-hành-PTTP.pdf 32 https://www.ebookbkmt.com/2018/02/slide-bai-giang-oc-hoc-hoa-chat-baove.html 33 https://text.123doc.org/document/4834916-tim-hieu-ve-hoa-chat-bao-ve-thucvat.htm 34 https://sprayers101.com/biobeds-for-pesticide-waste-disposal/ 35 https://www.thiennhien.net/2007/08/01/o-nhiem-nguon-nuoc-song-cau-sos/ 68 PHỤ LỤC PHỊNG XÉT NGHIỆM CƠNG TY TNHH DV VÀ TM NAM KHOA 793/58 Trần Xuân Soạn, P Tân Hưng, Q.7, TP Hồ Chí Minh, Việt Nam Phone: (08)37715818; (08)37752252 Fax: (08)37750583; (08)37752250 Email: phhvan.nkbiotek@gmail.com Email: namkhoa.biotek@gmail.com Giấy phép số: 05505/ SYT-GPHĐ Sở Y Tế TP HCM cấp ngày 10/03/2016.| Giấy chứng nhận AN TOÀN SINH HỌC CẤP II số: 178/GCNATSH Sở Y Tế TP HCM cấp ngày 20/04/2016 ISO 9001:2008 ISO 13485 WHO GMP/GLP PHIẾU KẾT QUẢ XÉT NGHIỆM Số HE02363 THÔNG TIN VỀ MẪU THỬ Nơi gởi mẫu: PHÙNG THỊ NGỌC MAI Ngày nhận mẫu 09/05/2018 Tên đĩa: MẪU (NẤM PHÂN GIẢI LIGNIN) Yêu cầu: Định danh phương pháp giải trình tự gen 28s PHƯƠNG PHÁP THỰC HIỆN Tách chiết DNA Thực PCR với mồi đặc hiệu vùng 28s Giải trình tự trực tiếp so sánh trình tự với ngân hàng liệu NCBI, từ xác định mẫu nấm thuộc lồi KẾT LUẬN Penicillium chrysogenum TP Hồ Chí Minh, ngày 15 tháng 05 năm 2018 TRƯỞNG PHÒNG XÉT NGHIỆM TS.BS.Phạm Hùng Vân Giấy phép số: 05505/ SYT-GPHĐ Sở Y Tế TP HCM cấp ngày 10/03/2016 Giấy chứng nhận AN TOÀN SINH HỌC CẤP II số: 178/GCNATSH Sở Y Tế TP HCM cấp ngày 20/04/2016 Hình P1: Phiếu kết xét nghiệm định danh chủng nấm mốc N2 69 HE-02363 KẾT QUẢ GIẢI TRÌNH TỰ SAB TRÌNH TỰ CHI TIẾT MẪU THỬ CCCATACGGGATTCTCACCCTCTATGACGTCCCGTTCCAGGGCACTTAGATGGGGA CCGCTCCCGAAGCATCCTCTACAAATTACAATGCGGACCCCGAAGGAGCCAGCTTT CAAATTTGAGCTCTTGCCGCTTCACTCGCCGTTACTGGGGCAATCCCTGTTGGTTTC TTTTCCTCCGCTTATTGATATGCTTAAGTTCAGCGGGTATCCCTACCTGATCCGAGG TCAACCTGGATAAAAATTTGGGTTGATCGGCAAGCGCCGGCCGGGCCTACAGAGC GGGTGACAAAGCCCCATACGCTCGAGGACCGGACGCGGTGCCGCCGCTGCCTTTC GGGCCCGTCCCCCGGGATCGGAGGACGGGGCCCAACACACAAGCCGTGCTTGAG GGCAGAAATGACGCTCGGACAGGCATGCCCCCCGGAATACCAGGGGGCGCAATGT GCGTTCAAAGACTCGATGATTCACTGAATTTGCAATTCACATTACGTATCGCATTTCG CTGCGTTCTTCATCGATGCCGGAACCAAGAGATCCGTTGTTGAAAGTTTTAAATAAT TTATATTTTCACTCAGACTACAATCTTCAGACAGAGTTCGAGGGTGTCTTCGGCGGG CGCGGGCCCGGGGGCGTAAGCCCCCCGGCGGCCAGTTAAGGCGGGCCCGCCGA AGCAACAAGGTAAAATAAACACGGGTGGGAGGTTGGACCCAGAGGGCCCTCACTC GGTAATGATCCTTCCGCA Giấy phép số: 05505/ SYT-GPHĐ Sở Y Tế TP HCM cấp ngày 10/03/2016 Giấy chứng nhận AN TOÀN SINH HỌC CẤP II số: 178/GCNATSH Sở Y Tế TP HCM cấp ngày 20/04/2016 Hình P2: Kết giải trình tự trình tự chi tiết mẫu thử 70 HE-02363 KẾT QUẢ TRA CỨU TRÊN BLAST SEARCH (NCBI) Penicillium chrysogenum strain IF2SW-F5 small subunit ribosomal RNA gene, partial sequence; internal transcribed spacer 1, 5.8S ribosomal RNA gene, and internal transcribed spacer 2, complete sequence; and large subunit ribosomal RNA gene, partial sequence Sequence ID: KY218670.1Length: 1123Number of Matches: Related Information Range 1: 12 to 754GenBankGraphicsNext MatchPrevious Match Alignment statistics for match #1 Score Expect Identities Gaps 1373 bits(743) 0.0 743/743(100%) 0/743(0%) Strand Plus/Minus Query Sbjct 754 Query 61 Sbjct 694 Query 121 Sbjct 634 Query 181 Sbjct 574 CCCATACGGGATTCTCACCCTCTATGACGTCCCGTTCCAGGGCACTTAGATGGGGACCGC 60 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| CCCATACGGGATTCTCACCCTCTATGACGTCCCGTTCCAGGGCACTTAGATGGGGACCGC 695 TCCCGAAGCATCCTCTACAAATTACAATGCGGACCCCGAAGGAGCCAGCTTTCAAATTTG 120 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| TCCCGAAGCATCCTCTACAAATTACAATGCGGACCCCGAAGGAGCCAGCTTTCAAATTTG 635 71 AGCTCTTGCCGCTTCACTCGCCGTTACTGGGGCAATCCCTGTTGGTTTCTTTTCCTCCGC 180 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| AGCTCTTGCCGCTTCACTCGCCGTTACTGGGGCAATCCCTGTTGGTTTCTTTTCCTCCGC 575 TTATTGATATGCTTAAGTTCAGCGGGTATCCCTACCTGATCCGAGGTCAACCTGGATAAA 240 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| TTATTGATATGCTTAAGTTCAGCGGGTATCCCTACCTGATCCGAGGTCAACCTGGATAAA 515 _ _ Giấy phép số: 05505/ SYT-GPHĐ Sở Y Tế TP HCM cấp ngày 10/03/2016 Giấy chứng nhận AN TOÀN SINH HỌC CẤP II số: 178/GCNATSH Sở Y Tế TP HCM cấp ngày 20/04/2016 Hình P3: Kết tra cứu Blast Search (NCBI) 72 HE-02363 Query 241 Sbjct 514 Query 301 Sbjct 454 Query 361 Sbjct 394 Query 421 Sbjct 334 Query 481 Sbjct 274 Query 541 Sbjct 214 Query 601 Sbjct 154 Query 661 Sbjct 94 Query 721 Sbjct 34 AATTTGGGTTGATCGGCAAGCGCCGGCCGGGCCTACAGAGCGGGTGACAAAGCCCCATAC |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| AATTTGGGTTGATCGGCAAGCGCCGGCCGGGCCTACAGAGCGGGTGACAAAGCCCCATAC 300 455 GCTCGAGGACCGGACGCGGTGCCGCCGCTGCCTTTCGGGCCCGTCCCCCGGGATCGGAGG |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| GCTCGAGGACCGGACGCGGTGCCGCCGCTGCCTTTCGGGCCCGTCCCCCGGGATCGGAGG 360 ACGGGGCCCAACACACAAGCCGTGCTTGAGGGCAGAAATGACGCTCGGACAGGCATGCCC |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| ACGGGGCCCAACACACAAGCCGTGCTTGAGGGCAGAAATGACGCTCGGACAGGCATGCCC 420 CCCGGAATACCAGGGGGCGCAATGTGCGTTCAAAGACTCGATGATTCACTGAATTTGCAA |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| CCCGGAATACCAGGGGGCGCAATGTGCGTTCAAAGACTCGATGATTCACTGAATTTGCAA 480 TTCACATTACGTATCGCATTTCGCTGCGTTCTTCATCGATGCCGGAACCAAGAGATCCGT |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| TTCACATTACGTATCGCATTTCGCTGCGTTCTTCATCGATGCCGGAACCAAGAGATCCGT 540 TGTTGAAAGTTTTAAATAATTTATATTTTCACTCAGACTACAATCTTCAGACAGAGTTCG |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| TGTTGAAAGTTTTAAATAATTTATATTTTCACTCAGACTACAATCTTCAGACAGAGTTCG 600 AGGGTGTCTTcggcgggcgcgggcccgggggcgtaagccccccggcggccagttaaggcg |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| AGGGTGTCTTCGGCGGGCGCGGGCCCGGGGGCGTAAGCCCCCCGGCGGCCAGTTAAGGCG 660 ggcccgccgAAGCAACAAGGTAAAATAAACACGGGTGGGAGGTTGGACCCAGAGGGCCCT |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| GGCCCGCCGAAGCAACAAGGTAAAATAAACACGGGTGGGAGGTTGGACCCAGAGGGCCCT 720 CACTCGGTAATGATCCTTCCGCA ||||||||||||||||||||||| CACTCGGTAATGATCCTTCCGCA 395 335 275 215 155 95 35 743 12 Giấy phép số: 05505/ SYT-GPHĐ Sở Y Tế TP HCM cấp ngày 10/03/2016 Giấy chứng nhận AN TOÀN SINH HỌC CẤP II số: 178/GCNATSH Sở Y Tế TP HCM cấp ngày 20/04/2016 Hình P4: Kết tra cứu Blast Search (NCBI) 73 Hình P5: Các túi zip chứa mẫu Biomix 2,4D Cartap điều kiện nhiệt độ, độ ẩm, thời gian ủ khác để mang phân tích Bảng P1: Sự biến động nhiệt độ Biomix Biobed Nhiệt độ (oC) Thời gian (Ngày) SSSM SSS SSP 25 25 25 28 27 27 10 33 31,5 30 15 37 36,5 36 20 35 36,8 37 25 33 34 35 30 30 32 33 35 30 31 31,5 74 Bảng P2: Sự biến động pH Biomix Biobed pH Thời gian (Ngày) SSSM SSS SSP 6,85 6,85 7,85 6,7 6,75 6,8 10 6,5 6,6 6,65 15 6,5 6,5 6,6 20 6,75 6,65 6,7 25 6,9 6,8 6,8 30 7,1 7,05 6,9 35 7,1 7,1 7,0 Bảng P3: Sự biến động độ ẩm Biomix Biobed Độ ẩm (%) Thời gian (Ngày) SSSM SSS SSP 60 60 60 65 64 62 10 68 67 67 15 72 71 69 20 73 72 72 25 70 71 71 30 68 69 70 35 65 66 68 75 ...ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - ĐÀM THỊ TRUNG HIẾU NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG ĐỆM SINH HỌC TRONG PHÂN HỦY HÓA CHẤT BẢO VỆ THỰC VẬT (2,4D VÀ CARTAP) Chuyên... hoạch để bảo vệ sản phẩm không bị hỏng trình bảo quản vận chuyển” [33] 1.1.2 Phân loại hóa chất bảo vệ thực vật Có nhiều cách phân loại thuốc bảo vệ thực vật như: phân loại theo cơng dụng (đối... 1.2.2 Phân loại đệm sinh học 18 1.2.3 Cấu trúc đệm sinh học 19 1.2.4 Tổng quan tình hình nghiên cứu ứng dụng hệ thống đệm sinh học nước giới Việt Nam 20 1.3 Tổng quan VSV phân