Nghiên cứu được tiến hành với mục tiêu nhằm mô phỏng mô hình gây suy giảm bạch cầu bằng carboplatin trên chuột nhắt” để làm công cụ sàng lọc và đánh giá khả năng khôi phục bạch cầu của các thuốc thử nghiệm, đặc biệt là các thuốc có nguồn gốc từ dược liệu.
Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 MƠ PHỎNG MƠ HÌNH GÂY GIẢM BẠCH CẦU THỰC NGHIỆM BẰNG CARBOPLATIN TRÊN CHUỘT NHẮT Trần Mạnh Hùng*, Trương Đình Phước*, Trần Văn Mười*, Huỳnh Thị Ngọc Hạnh* TĨM TẮT Mục tiêu: “Mơ mơ hình gây suy giảm bạch cầu Carboplatin chuột nhắt” để làm công cụ sàng lọc đánh giá khả khôi phục bạch cầu thuốc thử nghiệm, đặc biệt thuốc có nguồn gốc từ dược liệu Phương pháp: Suy giảm bạch cầu tiến hành cách tiêm phúc mạc Carboplatin liều lượng khác Sử dụng buồng đếm Neubauer xét nghiệm công thức máu để xác định mơ hình phù hợp Kết quả: Carboplatin với liều 100 mg/kg, tiêm phúc mô gây giảm bạch cầu mạnh thời điểm ngày sau Tác động làm giảm số lượng loại bạch cầu thể rõ rệt, bạch cầu đa nhân trung tính bạch cầu lympho Tổng lượng bạch cầu phục hồi tự nhiên trở bình thường sau đợt khảo sát (14 ngày sau tiêm carboplatin) Vì thế, mơ hình có giá trị áp dụng vào ngày thứ Kết luận: Mơ hình áp dụng làm cơng cụ sàng lọc thuốc có tác dụng phòng ngừa suy giảm bạch cầu thuốc hóa trị ung thư gây Từ khóa: Carboplatin, Suy giảm bạch cầu, Mơ hình thực nghiệm ABSTRACT DEVELOPMENT OF A MOUSE MODEL FOR CARBOPLATIN-INDUCED NEUTROPENIA Tran Manh Hung, Truong Dinh Phuoc, Tran Van Muoi, Huynh Thi Ngoc Hanh * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 15 - Supplement of No - 2011: 26 - 31 Objective: A mouse model for Carboplatin-induced neutropenia was developed to provide a tool for screening agents that exert protective effect on anticancer drug-induced neutropenia Methods: Neutropenia was induced by intraperitoneal injections of Carboplatin at different doses Neubauer cell counter and white blood cell count were applied to determine grade of neutropenia Results: Carboplatin at a dose of 100 mg/kg, ip, induced significant neutropenia after days of injection However, total white blood cell count returned to baseline 14 days thereafter, thus this model could be of value when evaluating at day Conclusion: This mouse model can be applied for screening agents that exert protective effect on Carboplatin-induced neutropenia Key words: Carboplatin, Neutropenia, Mouse model ĐẶTVẤN ĐỀ Bạch cầu có vai trò quan trọng việc bảo vệ thể chống lại xâm nhập mầm bệnh từ bên vi khuẩn, nấm, virus… Giảm số lượng bạch cầu làm tăng nguy mắc bệnh nhiễm trùng hội, nguyên nhân chủ yếu gây tử vong cho người bệnh Thuốc điều trị thường nguyên nhân gây giảm bạch cầu qua nhiều chế khác nhau; thuốc chống ung thư nhóm thuốc có nguy cao gây bạch cầu *Khoa Dược, ĐH Y Dược TP Hồ Chí Minh Tác giả liên lạc: PGS.TS Trần Mạnh Hùng ĐT: 093.7746.596 26 Email: manhung1969@yahoo.com Chuyên Đề Dược Khoa Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Carboplatin tên khoa học cis-diammine (cyclobutane-1,1-dicarboxylate-O,O') platinum (II), dẫn xuất kim loại nặng platin Carboplatin gắn vào ADN để tạo liên kết chéo bên hai chuỗi ADN, liên kết chéo làm thay đổi cấu trúc ức chế tổng hợp ADN Carboplatin định dùng đơn trị phối hợp thuốc khác chống khối u tân sinh, điều trị loại u ác tính sau: ung thư biểu mơ buồng trứng, ung thư vú tân sinh, ung thư phế quản (tế bào nhỏ không nhỏ), khối u đầu cổ, ung thư bàng quang, ung thư tinh hoàn Trước đây, tình trạng giảm bạch cầu thuốc chống ung thư gây buộc phải giảm ngừng liệu pháp hóa trị, nay, khó khăn khắc phục nhờ việc sử dụng yếu tố kích thích hệ tạo máu G-CSF (Granulocyte - Colony Stimulating Factor: yếu tố kích thích dòng bạch cầu hạt), GM-CSF (Granulocyte macrophage – Conoly Stimulating Factor: yếu tố kích thích dòng bạch cầu hạt - đại thực bào Một biệt dược thông dụng Neupogen với hoạt chất filgrastim Ngoài yếu tố trên, việc phát triển thuốc kích thích hệ tạo máu cơng nghệ sinh học, thuốc thuốc có nguồn gốc dược liệu đẩy mạnh Vì việc xây dựng mơ hình dược lý phù hợp để phục vụ cho nghiên cứu cần thiết Với mục đích trên, chúng tơi đặt mục tiêu mơ mơ hình gây suy giảm bạch cầu chuột nhắt thuốc hóa trị ung thư Carboplatin VẬTLIỆU - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Thú vật thử nghiệm: Chuột nhắt trắng chủng ddY, khỏe mạnh, không dị tật, khơng có biểu bất thường, viện Vacin Sinh phẩm Y tế Nha Trang cung cấp Chuột thí nghiệm chuột đực có trọng lượng khoảng 20 ± gam lúc bắt đầu tiến hành thí nghiệm; hàng ngày chuột cung cấp đủ Chuyên Đề Dược Khoa Nghiên cứu Y học thức ăn nước uống Chuột thí nghiệm phân thành lơ thử nghiệm sau: Lô chứng Lô gây giảm bạch cầu Carboplatin Lô sử dụng filgrastim để đánh giá đáp ứng mơ hình Hóa chất thuốc thử nghiệm: - Carboplatin 150 mg: công ty Ebewe Pharma sản xuất, lô số: VN-4413-10 - Neupogen (filgrastim): F Hoffmann-La Roche sản xuất, số lơ: VN-9562-10 Phương pháp thử nghiệm Thăm dò tác dụng gây giảm tổng lượng bạch cầu buồng đếm Neubauer: Carboplatin pha glucose với liều 200 mg/kg, 150 mg/kg hay 100 mg/kg tiêm phúc mạc liều với thể tích tiêm 0.1 ml/10 g thể trọng vào buổi sáng thực chuột Chuột lấy máu từ đuôi xác định số lượng bạch cầu buồng đếm Neubauer thời điểm trước tiêm liên tục 14 ngày sau tiêm Xác định số huyết học mơ hình máy xét nghiệm huyết học Các mẫu máu lấy từ tim chuột sau gây mê đá C02 chứa ống chứa mẫu có chất chống đơng EDTA (do Bệnh viện ĐH Y Dược sở cung cấp) Mẫu máu xét nghiệm máy EXCELL-2208, Bệnh viện ĐH Y Dược sở 4) Các thông số số lượng bạch cầu trung tính, bạch cầu lympho, bạch cầu đơn nhân, bạch cầu ưa bazơ, bạch cầu ưa acid, hồng cầu, tiểu cầu ghi nhận đưa vào kết thực nghiệm Phân tích kết thống kê: Các số liệu trình bày giá trị trung bình ± Sai số chuẩn giá trị trung bình (Mean ± SEM) Việc thống kê số liệu áp dụng dựa phần mềm thống kê Minitab, sử dụng phép kiểm t-test để so sánh khác biệt 27 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 lô Sự khác xem có ý nghĩa giá trị p