Mô phỏng mô hình gây viêm khớp cấp và mạn tính bằng carrageenan trên chuột nhắt

Bài viết Mô phỏng mô hình gây viêm khớp cấp và mạn tính bằng carrageenan trên chuột nhắt báo cáo về nghiên cứu được tiến hành trên chuột nhắt trắng chủng swiss albino với tác nhân gây viêm là carrageenan; mô hình mô phỏng là mô hình viêm khớp gối cấp và mạn tính.

Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ Số * 2013 MƠ PHỎNG MƠ HÌNH GÂY VIÊM KHỚP CẤP VÀ MẠN TÍNH BẰNG CARRAGEENAN TRÊN CHUỘT NHẮT Trần Như Quỳnh*, Đỗ Thị Hồng Tươi*, Trần Mạnh Hùng* TÓM TẮT Đặt vấn đề: Với tỷ lệ mắc bệnh xương khớp ngày trở nên phổ biến Việt Nam, việc phát triển mơ hình sàng lọc thuốc có nguồn gốc tự nhiên để hỗ trợ điều trị, giảm tần suất sử dụng hạn chế tác dụng phụ thuốc loại NSAID cần thiết Đối tượng phương pháp nghiên cứu: Nghiên cứu tiến hành chuột nhắt trắng chủng Swiss albino với tác nhân gây viêm carrageenan; mơ hình mơ mơ hình viêm khớp gối cấp mạn tính Kết quả: Mơ hình gây viêm khớp cấp: tiêm vào khớp gối chân phải sau liều µL hỗn dịch carrageenan 2% gây viêm khớp cấp thời điểm sau tiêm, tăng cao vào thời điểm 27 trì 75 Mơ hình đáp ứng với thuốc đối chứng ketoprofen Mơ hình gây viêm khớp mạn: tiêm vào khớp gối chân phải sau µL hỗn dịch carrageenan 2% cách ngày, liều (từ ngày đến ngày 19) gây viêm khớp gối kéo dài trì tuần Mơ hình đáp ứng với thuốc đối chứng ketoprofen giai đoạn điều trị (từ ngày 21-27) Kết luận: Mơ hình gây viêm khớp gối cấp mạn tính ứng dụng để sàng lọc thuốc Từ khóa: Carrageenan, Viêm khớp, Mơ hình chuột nhắt ABTRACT DEVELOPING MOUSE MODELS OF ACUTE AND CHRONIC ARTHRITIS Tran Nhu Quynh, Do Thi Hong Tuoi, Tran Manh Hung * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 17 - Supplement of No - 2013: 446 - 451 Introduction: With the increasing incidence of arthritis in Vietnamese population, available animal models for screening anti-arthritis agents are needed Materials and Methods: This study was done in Swiss albino mouse with carrageenan as an inflammatory-inducing agent to imitate mouse models of acute and chronic arthritis Results: Mouse model of acute arthritis: intra-articular injection of µL of carrageenan 2% suspension induced acute arthritis Inflammation was manifested rapidly after injection of carrageenan and this response reached maximum effect after 27 hours Ketoprofen showed positive response when applied locally to inflammatory area Mouse model of chronic arthritis: intra-articular injection of µL of carrageenan 2% suspension every days, times (from day to day 19) induced chronic arthritis and lasted for more than days (from day 21 to day 27) Ketoprofen showed positive response during treatment period (from day 21 to day 27) when applied locally to inflammatory area Conclusions: These mouse models of acute and chronic arthritis could be applied for screening antiinflammatory agents Key words: Carrageenan, Arthritis, Mouse model * Khoa Dược, ĐH Y Dược TP Hồ Chí Minh Tác giả liên lạc: PGS.TS Trần Mạnh Hùng ĐT: 0937746596 Email: tranmanhhung@uphcm.edu.vn 446 Chuyên Đề Dược Học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ Số * 2013 Nghiên cứu Y học ĐẶT VẤN ĐỀ Phương pháp thử nghiệm Hiện bệnh xương khớp thấp khớp, viêm khớp cấp, mạn, thối hóa khớp, gai cột sống, viêm đa khớp ngày trở nên phổ biến nước khí hậu nhiệt đới Việt Nam Triệu chứng toàn phát thường khớp bị viêm sưng, đau, đặc biệt đau nhiều đêm, cứng khớp buổi sáng dẫn đến hạn chế vận động Việc dùng thuốc hóa dược để điều trị bệnh tồn số nhược điểm định vấn đề chi phí tác dụng phụ thuốc dày, ruột… Chính thế, người ta có xu hướng dùng lại phương pháp thời xưa, gần gũi với thiên nhiên để hỗ trợ điều trị, giảm số lượng sử dụng, hạn chế tác dụng phụ thuốc hóa dược, đặc biệt thuốc kháng viêm nhóm NSAID Mơ mơ hình gây viêm khớp cấp tính carrageenan chuột nhắt(1) Chuột gây viêm khớp cấp cách tiêm vào khớp gối chân phải sau liều µL hỗn dịch carrageenan 2% Chu vi khớp gối đo trước tiêm thời điểm 3-2751-75 sau tiêm carrageenan Lô chứng tiêm dung dịch NaCl 0,9% lô thử đáp ứng mơ hình thoa gel ketoprofen 2,5% (10 mg, lần/ngày), lên khớp gối chân Theo dõi đánh giá mức độ gây viêm khớp carrageenan đáp ứng ketoproten dựa vào mức độ sưng viêm khớp gối, mức độ đau hình ảnh vi thể Để chứng minh hiệu thuốc có nguồn gốc tự nhiên thực nghiệm, điều cần thiết phải mô mô hình gây viêm khớp có khả ứng dụng Từ lý nêu trên, tiến hành đề tài nghiên cứu “Mơ mơ hình viêm khớp cấp tính mạn tính carrageenan chuột nhắt’’ nhằm cung cấp cơng cụ thực nghiệm cho mục đích sàng lọc dược lý thuốc có tiềm điều trị, hỗ trợ điều trị viêm khớp VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNGPHÁP NGHIÊNCỨU Thú vật thử nghiệm Chuột nhắt trắng chủng Swiss albino, giống đực, khỏe mạnh, khơng có biểu bất thường, có trọng lượng khoảng 24 ± gam, Viện Vắcxin Sinh phẩm Y Tế Nha Trang cung cấp Hàng ngày chuột cung cấp đầy đủ thức ăn nước uống Hóa chất thuốc thử nghiệm: Carrageenan cung cấp Sigma Aldrich pha thành hỗn dịch carrageenan 2% Thuốc đối chiếu gel ketoprofen thoa da (Profenid gel 2,5%, Sanofi Aventis), NSAID có tác động kháng viêm, giảm đau, sốt Chuyên Đề Dược Học Mơ mơ hình gây viêm khớp mạn tính(3) Chuột gây viêm khớp mạn tính cách tiêm vào khớp gối chân phải sau µL hỗn dịch carrageenan 2%, liều cách ngày 19 ngày Đánh giá mức độ gây viêm carrageenan (từ ngày đến ngày 19) mức độ trì phản ứng viêm (từ ngày 20 đến ngày 27) dựa sưng viêm, mức độ đau hình ảnh vi thể Mơ hình thử đáp ứng thuốc đối chứng ketoprofen (đánh giá từ ngày 20 đến ngày 27 với liều thoa chổ 10 mg lên khớp gối, ngày lần cách vào thời điểm định ngày) Đánh giá mức độ đau(2) Chuột đặt bocal thủy tinh suốt đường kính 20 cm, cao 30 cm Đặt máy quay phim phía bocal cho bao quát hết đáy bocal Tiến hành quay phim phút chuột hoạt động nhiều Đánh giá độ đau khớp theo thang điểm sau: = lực đặt chân bình thường, trọng lượng đặt chân = lực đặt lên chân nhẹ, bàn chân đặt hồn tồn sàn ngón chân khơng trải = lực đặt lên chân trung bình, bàn chân cong với phần chân chạm nhẹ lên đáy bocal 447 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ Số * 2013 = đau nặng, chân hoàn toàn đưa lên khỏi đáy bocal Điểm 0,5-1,5- 2,5 cho biểu mức mô tả KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Mơ mơ hình gây viêm khớp cấp carrageenan Chuột thí nghiệm chia thành lơ sau: Phân tích mơ học Chuột gây mê đá CO2, cắt lấy phần khớp gối (dài cm), rửa nước muối sinh lý NaCl 0,9% lạnh Thấm khô cố định dung dịch formaldehyd 10% để phân tích mơ học phương pháp nhuộm hematoxylin-eosin Khoa Sinh hóa, Bệnh viện Nhi Đồng 1, Thành phố Hồ Chí Minh Mỗi lơ tiến hành làm vi phẩu mẫu Các mẫu mô tả báo mẫu đại diện lơ mơ hình mạn tính - Lơ ketoprofen: chuột tiêm vào khớp gối chân phải sau liều µL hỗn dịch carrageenan 2% + thoa 10 mg ketoprofen 2,5% dạng gel lên khớp gối chân (2 lần/ngày) Phân tích kết thống kê Kết trình bày dạng giá trị trung bình ± sai số chuẩn giá trị trung bình (Mean ± SEM) đánh giá ý nghĩa thống kê phép kiểm Mann-Whitney Sự thay đổi chu vi khớp gối chân chuột lô chứng, lô bệnh lô đối chứng thời điểm giờ, 27 giờ, 51 giờ, 75 sau tiêm carrageenan nước muối thể hình - Lơ chứng: tiêm vào khớp gối chân phải sau liều µL dung dịch NaCl 0,9% - Lơ gây viêm khớp: tiêm vào khớp gối chân phải sau liều µL hỗn dịch Carrageenan 2% Hình Sự thay đổi chu vi khớp gối trước (0 giờ) sau gây viêm (3-75 giờ) lô thử nghiệm gối chân chuột thể xu hướng giảm sau Sau gây viêm nhận thấy chu vi tiêm carrageenan trở mức bình khớp gối chân chuột lơ gây viêm thường sau 27 Tác động làm giảm sưng carrageenan bắt đầu tăng vào thời điểm viêm ketoprofen khác biệt đạt ý nghĩa thống sau tiêm, tăng tối đa thời điểm 27 giờ, sau kê so với lơ gây viêm có xu hướng giảm xuống, nhiên trì mức độ sưng viêm đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng (P