Bài viết Mô phỏng mô hình gây suy giảm bạch cầu bằng cyclophosphamid và doxorubicin trên chuột nhắt” để làm công cụ sàng lọc và đánh giá khả năng khôi phục bạch cầu của các thuốc thử nghiệm, đặc biệt là các thuốc có nguồn gốc từ dược liệu bằng suy giảm bạch cầu được tiến hành bằng cách tiêm phúc mạc cyclophosphamid và doxorubicin ở các liều lượng khác nhau. Sử dụng buồng đếm neubauer và xét nghiệm công thức máu để xác định mô hình phù hợp.
Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ Số * 2013 MƠ PHỎNG MƠ HÌNH GÂY SUY GIẢM BẠCH CẦU THỰC NGHIỆM TRÊN CHUỘT NHẮT BẰNG PHỐI HỢP DOXORUBICIN VÀ CYCLOPHOSPHAMID Lê Phan Thu Giang*, Hà Đức Cường**, Nguyễn Đăng Thoại**, Trần Mạnh Hùng* TĨM TẮT Mục tiêu: “Mơ mơ hình gây suy giảm bạch cầu cyclophosphamid doxorubicin chuột nhắt” để làm công cụ sàng lọc đánh giá khả khôi phục bạch cầu thuốc thử nghiệm, đặc biệt thuốc có nguồn gốc từ dược liệu Phương pháp: Suy giảm bạch cầu tiến hành cách tiêm phúc mạc cyclophosphamid doxorubicin liều lượng khác Sử dụng buồng đếm Neubauer xét nghiệm công thức máu để xác định mơ hình phù hợp Kết quả: cyclophosphamid (150 mg/kg) kết hợp với doxorubicin (5 mg/kg) tiêm phúc mạc với liều gây giảm bạch cầu mạnh thời điểm ngày sau Tác động làm giảm số lượng loại bạch cầu thể rõ rệt, bạch cầu đa nhân trung tính bạch cầu lympho Tổng lượng bạch cầu phục hồi tự nhiên trở bình thường sau đợt khảo sát (14 ngày sau tiêm cyclophosphamid doxorubicin) Vì thế, mơ hình có giá trị áp dụng vào ngày thứ Kết luận: Mơ hình áp dụng làm cơng cụ sàng lọc thuốc có tác dụng phòng ngừa suy giảm bạch cầu thuốc hóa trị ung thư gây Từ khóa: Cyclophosphamid, Doxorubicin, Suy giảm bạch cầu, Mơ hình thực nghiệm ABTRACT DEVELOPMENT OF A MOUSE MODEL OF NEUTROPENIA INDUCED BY CYCLOPHOSPHAMID AND DOXORUBICIN Le Phan Thu Giang, Ha Duc Cuong, Nguyen Dang Thoai, Tran Manh Hung * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 17 - Supplement of No - 2013: 440 - 445 Objective: A mouse model of neutropenia induced by cyclophosphamide and doxorubicin was developed to provide a tool for screening bone-marrow protecting agents Methods: Neutropenia was induced by a single intraperitoneal injection of cyclophosphamid and doxorubicin Neubauer cell counter and white blood cell count were applied to determine grade of neutropenia Results: Cyclophosphamide (150 mg/kg, ip.) and doxorubicin (5 mg/kg, ip.) induced significant neutropenia after days of injection However, total white blood cell count returned to baseline 14 days thereafter, thus this model could be of value when evaluating at day Conclusion: This mouse model can be applied for screening agents that exert protective effect on cyclophosphamid and doxorunicin-induced neutropenia Key words: Cyclophosphamid, doxorubicin, Neutropenia, Mouse model * Khoa Dược, ĐH Y Dược TP Hồ Chí Minh ** Cơng ty Cổ phần Dược Phẩm OPC Tác giả liên lạc: PGS.TS Trần Mạnh Hùng ĐT: 0937746596 Email: tranmanhhung@uphcm.edu.vn 440 Chuyên Đề Dược Học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ Số * 2013 Nghiên cứu Y học ĐẶT VẤN ĐỀ VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNGPHÁP NGHIÊNCỨU Ung thư bệnh ác tính với tỷ lệ tử vong cao Hiện nay, với đời nhiều thuốc mới, tác động đến đích, kèm theo kết hợp phương pháp phẫu trị, xạ trị đặc biệt hóa trị góp phần lớn điều trị cải thiện chất lượng sống bệnh nhân Các thuốc hóa trị doxorubicin, cyclophosphamid nhóm thuốc sử dụng phác đồ điều trị ung thư vú(1), u lympho Hodgkin không Hodgkin, ung thư phổi(2) số loại ung thư thường gặp khác với hiệu chứng minh, nhóm gây nhiều tác dụng phụ hệ tạo máu, gây suy giảm bạch cầu, làm hạn chế liều sử dụng lâm sàng Thú vật thử nghiệm Bạch cầu có vai trò quan trọng việc bảo vệ thể chống lại xâm nhập tác nhân gây bệnh Giảm số lượng bạch cầu làm tăng nguy mắc bệnh nhiễm trùng hội q trình hóa trị ung thư gây tử vong cho người bệnh Trước tình trạng giảm bạch cầu khắc phục cách giảm liều, trì hỗn ngưng hóa trị Nhưng khó khăn khắc phục việc sử dụng yếu tố kích thích tạo bạch cầu như: G-CSF (filgrastim/pegfilgrastim, lenograstim); GM-CSF (molgramostim, sargramostim) Bên cạnh đó, sản phẩm có nguồn gốc từ dược liệu tam thất, phụ tử, linh chi, trinh nữ hoàng cung…v,v, nghiên cứu chất hỗ trợ điều trị, giúp hạn chế tác dụng phụ hệ tạo máu thuốc hóa trị Với mục đích xây dựng mơ hình dược lý phù hợp phục vụ cho nghiên cứu sàng lọc thuốc có tác động phòng ngừa độc tính tủy xương, thực đề tài “Mô mơ hình gây suy giảm bạch cầu chuột nhắt phối hợp cyclophosphamid” Chuyên Đề Dược Học doxorubicin Chuột nhắt trắng chủng Swiss albino, giống đực, khỏe mạnh, khơng có biểu bất thường, có trọng lượng khoảng 24 ± gam, Viện Vắc-xin Sinh phẩm Y Tế Nha Trang cung cấp Hàng ngày chuột cung cấp đầy đủ thức ăn nước uống Hóa chất thuốc thử nghiệm - Endoxan® 200 mg (cyclophosphamid 200mg): Baxter Oncology GmbH – Germany - Doxorubin® 25 ml (doxorubicin 50 mg): Pharmachemie BV, Nederland - Neupogen® (filgrastim 30 F.Hopmann – La Roche Ltd, Thụy Sỹ MIU): Phương pháp thử nghiệm Thử nghiệm sơ khởi trên buồng đếm Neubauer Thử nghiệm nhằm khảo sát liều lượng doxorubicin cyclophosphamid mức độ gây suy giảm tổng lượng bạch cầu để từ xác định liều lượng thời gian thích hợp để mơ mơ hình thực nghiệm Cyclophosphamid doxorubicin tiêm phúc mạc, thể tích tiêm 0,1 ml/10 g vào buổi sáng Hằng ngày chuột lấy máu đuôi xác định số lượng bạch cầu buồng đếm Neubauer vào thời điểm trước tiêm liên tục 14 ngày sau tiêm Chuột thử nghiệm liều sau: - Cyclophosphamid 100 mg/kg + doxorubicin mg/kg, ip, liều nhất, ngày - Cyclophosphamid 150 mg/kg + doxorubicin mg/kg, ip, liều nhất, ngày Thử nghiệm xác định máy xét nghiệm huyết học Sau xác định liều lượng thời gian gây suy giảm bạch cầu thuốc doxorubicin cyclophosphamid thử nghiệm sơ khởi, tiến hành thử nghiệm xác định để xây dựng mơ hình Các mẫu máu 441 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ Số * 2013 xét nghiệm máy huyết học CELLDYN 3200 Tổng lượng bạch cầu, số lượng bạch cầu trung tính, bạch cầu lympho, bạch cầu đơn nhân, hồng cầu, tiểu cầu ghi nhận đưa vào kết thực nghiệm Phân tích kết thống kê Số liệu trình bày giá trị trung bình ± Sai số chuẩn giá trị trung bình (Mean ± SEM) Việc thống kê thực phần mềm thống kê Minitab, sử dụng phép kiểm ttest để so sánh khác biệt lô với khác biệt có ý nghĩa giá trị p