Nghiên cứu được thực hiện với mục tiêu nhằm mô phỏng mô hình gây suy giảm bạch cầu bằng rRibavirin và interferon trên chuột nhắt để làm công cụ sàng lọc và đánh giá khả năng khôi phục bạch cầu của các thuốc thử nghiệm, đặc biệt là các thuốc có nguồn gốc từ dược liệu.
Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 MƠ PHỎNG MƠ HÌNH GÂY GIẢM BẠCH CẦU THỰC NGHIỆM BẰNG RIBAVIRIN VÀ INTERFERON TRÊN CHUỘT NHẮT Trần Mạnh Hùng*, Ngơ Thị Kim Phúc* TĨM TẮT Mục tiêu: “Mơ mơ hình gây suy giảm bạch cầu Ribavirin Interferon chuột nhắt” để làm công cụ sàng lọc đánh giá khả khôi phục bạch cầu thuốc thử nghiệm, đặc biệt thuốc có nguồn gốc từ dược liệu Phương pháp: Suy giảm bạch cầu tiến hành cách tiêm phúc mạc Interferon cho uống Ribavirin liều lượng khác Sử dụng buồng đếm Neubauer xét nghiệm công thức máu để xác định mơ hình phù hợp Kết quả: Interferon alfa-2b liều 200.000 UI/kg tiêm phúc mạc lần/tuần phối hợp với Ribavirin liều 300 mg/kg uống hàng ngày cho kết gây suy giảm bạch cầu rõ rệt, có ý nghĩa mặt bệnh lý thực nghiệm Kết luận: Về mặt thực nghiệm, thiết kế chủng thú vật thí nghiệm, liều lượng, thời gian đường sử dụng thích hợp cho điều kiện phòng thí nghiệm để tiến hành nghiên cứu Từ khóa: Interferon alfa-2b, Ribavirin, Suy giảm bạch cầu, Mơ hình thực nghiệm ABSTRACT DEVELOPMENT OF A MOUSE MODEL FOR INTERFERON AND RIBAVIRIN INDUCED NEUTROPENIA Tran Manh Hung, Ngo Thi Kim Phuc * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 15 - Supplement of No - 2011: 38 - 44 Objective: A mouse model for Interferon and Ribavirin-induced neutropenia was developed to provide a tool for screening agents that exert protective effect on anticancer drug-induced neutropenia Methods: Neutropenia was induced by intraperitoneal injections of Interferon and oral administration of Ribavirin at different doses Neubauer cell counter and white blood cell count were applied to determine grade of neutropenia Results: Interferon alfa-2b at a dose of 200.000 UI/kg, ip, times/week combined with oral Ribavirin at a dose of 300 mg/kg/day x 14 days induced pathologically neutropenia Conclusion: This mouse model can be applied for screening agents that exert protective effect on Carboplatin-induced neutropenia Key words: Interferon alfa-2b, Ribavirin, Neutropenia, Mouse model nguyên nhân chủ yếu gây tử vong cho ĐẶT VẤN ĐỀ người bệnh Thuốc điều trị thường ngun Bạch cầu có vai trò quan trọng nhân gây giảm bạch cầu qua nhiều chế việc bảo vệ thể chống lại xâm nhập khác nhau; thuốc kháng ung thư, mầm bệnh từ bên vi khuẩn, nấm, kháng virus nhóm thuốc có virus… Giảm số lượng bạch cầu làm tăng nguy cao gây bạch cầu nguy mắc bệnh nhiễm trùng hội, Ribavirin chất tổng hợp có cấu trúc tương *Khoa Dược, ĐH Y Dược TP Hồ Chí Minh Tác giả liên lạc: PGS.TS Trần Mạnh Hùng ĐT: 093.7746.596 38 Email: manhung1969@yahoo.com Chuyên Đề Dược Khoa Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 tự nucleosid guanosin, ức chế phiên virus Ribavirin định phối hợp với interferon alfa-2b tái tổ hợp điều trị viêm gan C mạn tính bệnh nhân từ tuổi trở lên mà trước chưa điều trị với interferon alfa bệnh nhân 18 tuổi trở lên bị tái phát sau điều trị interferon alfa Ribavirin định điều trị nhiễm virus herpes, cúm A, cúm B bệnh nhiễm virus khác: sởi, quai bị, thủy đậu, virus hợp bào đường hô hấp(1,2) Interferon alfa-2b có đặc tính chống ung thư, chống tăng sản, điều hòa miễn dịch chống siêu vi Interferon alfa gắn vào receptor bề mặt tế bào khởi tạo những thay đổi phức tạp bên tế bào, bao gồm: giảm tổng hợp số enzym, kiềm hãm tăng sản tế bào, hoạt động điều hòa miễn dịch làm tăng hoạt tính thực bào đại thực bào tăng tính gây độc tế bào đặc thù lympho bào tế bào đích, ức chế chép virus tế bào nhiễm siêu vi(3) Trước đây, tình trạng giảm bạch cầu thuốc kháng virus gây buộc phải giảm ngừng liệu pháp trị liệu, nay, khó khăn khắc phục nhờ việc sử dụng yếu tố kích thích hệ tạo máu G-CSF (Granulocyte Colony Stimulating Factor: yếu tố kích thích dòng bạch cầu hạt), GM-CSF (Granulocyte macrophage – Conoly Stimulating Factor: yếu tố kích thích dòng bạch cầu hạt - đại thực bào Ngoài yếu tố trên, việc phát triển thuốc kích thích hệ tạo máu cơng nghệ sinh học, thuốc thuốc có nguồn gốc dược liệu đẩy mạnh Vì việc xây dựng mơ hình dược lý phù hợp để phục vụ cho nghiên cứu cần thiết Với mục đích trên, chúng tơi đặt mục tiêu mơ mơ hình gây suy giảm bạch cầu chuột nhắt thuốc kháng virus ribavirin interferon Chuyên Đề Dược Khoa Nghiên cứu Y học VẬTLIỆU – PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Thú vật thử nghiệm Chuột nhắt trắng chủng ddY, khỏe mạnh, khơng dị tật, khơng có biểu bất thường, viện Vắcxin Sinh phẩm Y tế Nha Trang cung cấp Chuột thí nghiệm chuột đực có trọng lượng khoảng 20 ± gam lúc bắt đầu tiến hành thí nghiệm; hàng ngày chuột cung cấp đủ thức ăn nước uống Chuột thí nghiệm phân thành lô thử nghiệm sau: - Lô chứng - Lô gây giảm bạch cầu interferon alfa-2b - Lô gây giảm bạch cầu interferon alfa2b ribavirin Hóa chất thuốc thử nghiệm: - Uniferon (interferon alfa-2b 5MIU): công ty Getz Pharma sản xuất, số ĐK: QLSP0267-09, hạn sử dụng: 03/2011, dạng bào chế: thuốc bột pha tiêm - Ribazole (Ribavirin 500 mg): công ty Getz Pharma sản xuất, số ĐK: VN-1841-06, hạn sử dụng: 05/2012, dạng bào chế: viên nén Phương pháp thử nghiệm Thăm dò tác dụng gây giảm tổng lượng bạch cầu buồng đếm Neubauer: Thí nghiệm nhằm dò tìm liều lượng thích hợp thuốc thử nghiệm (interferon, ribavirin) thời gian gây giảm bạch cầu, để từ chọn thơng số cho thí nghiệm xác định nhằm xây dựng mơ hình gây giảm bạch cầu Trong thí nghiệm này, số lượng chuột sử dụng hạn chế (từ 4-6 cho thí nghiệm) Xác định số huyết học mơ hình máy xét nghiệm huyết học Các mẫu máu lấy từ tim chuột sau gây mê đá C02 chứa ống chứa mẫu có chất chống đông EDTA (do Bệnh viện ĐH Y Dược sở cung cấp) Mẫu máu xét nghiệm máy EXCELL-2208, Bệnh viện ĐH Y Dược sở 4): 39 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Các thông số số lượng bạch cầu trung tính, bạch cầu lympho, bạch cầu đơn nhân, bạch cầu ưa bazơ, bạch cầu ưa acid, hồng cầu, tiểu cầu ghi nhận đưa vào kết thực nghiệm Phân tích kết thống kê: Các số liệu trình bày giá trị trung bình ± Sai số chuẩn giá trị trung bình (Mean ± SEM) Việc thống kê số liệu áp dụng dựa phần mềm thống kê Minitab, sử dụng phép kiểm t-test để so sánh khác biệt lơ Sự khác xem có ý nghĩa giá trị p