Đánh giá hiệu quả của dung dịch acit formic - formalin (AFF) trong xử lý mô tủy xương sinh thiết

Mục tiêu nghiên cứu nhằm đánh giá hiệu quả của dung dịch AFF so với dung dịch acit nitric trong quá trình xử lý mô tủy xương sinh thiết trên tiêu bản nhuộm H&E và nhuộm HMMD. Nghiên cứu thực hiện thống kê mô tả 56 mẫu tủy xương sinh thiết được gửi về khoa giải phẫu bệnh - bệnh viện Truyền Máu Huyết Học.

Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Số 5 * 2013  Nghiên cứu Y học ĐÁNH GIÁ HIỆU QUẢ CỦA DUNG DỊCH ACIT FORMIC – FORMALIN   (AFF) TRONG XỬ LÝ MƠ TỦY XƯƠNG SINH THIẾT  Lê Văn Hùng*, Phan Đặng Anh Thư**, Chu Lê Ngọc Hiếu*, Võ Thị Thúy Qun*, Lê Thanh Tú*  TĨM TẮT  Mục tiêu nghiên cứu: Đánh giá hiệu quả của dung dịch AFF so với dung dịch acit Nitric trong q trình  xử lý mơ tủy xương sinh thiết trên  tiêu bản nhuộm H&E và nhuộm HMMD.  Đối tượng và phương pháp nghiên cứu: nghiên cứu thống kê mơ tả 56 mẫu tủy xương sinh thiết được  gửi về Khoa Giải phẫu bệnh – BV. Truyền Máu Huyết Học.  Kết  quả:  thời  gian  trả  kết  quả  được  rút  ngắn  0,92  ngày  (khi  nhuộm  H&E),  0,7  ngày  (Nhuộm  H&E  +  HMMD), 0,6 ngày (nhuộm H&E + Reticulin, hóa tế bào). Tiêu bản nhuộm H&E sử dụng AFF đạt trung bình  8,53 điểm (phương sai 0.14) so với acit Nitric 7,42 điểm (Phương sai 1.2). Hai dung dịch có tác động như nhau  khi nhuộm HMMD trên các marker trên màng, ngun sinh chất tế bào. Acit Nitric làm giảm độ nhạy (16,7%),  âm tính giả (32,3%) đối với các marker trong nhân tế bào.  Kết luận: Khử Canxi mơ tủy xương sinh thiết bằng dung dịch AFF cho chất lượng tiêu bản nhuộm H&E  tốt hơn so với dung dịch acit Nitric 5%.  AFF rút ngắn thời gian trả kết quả với các xét nghiệm tủy xương sinh  thiết. Acit Nitric 5% có tác động làm biến đổi các kháng ngun trên nhân tế bào có thể gây âm tính giả làm sai  lệch kết quả giải phẫu bệnh. Thay thế dung dịch acit Nitric 5% bằng dung dịch AFF trong q trình khử canxi  tại Khoa Giải phẫu bệnh.   Từ khóa: Khử canxi mơ tủy xương sinh thiết, Phương pháp khử canxi,   ABSTRACT  TO COMPARE THE VALUE OF FORMIC ACID – FORMALIN  (AFF) AND NITRIC ACID IN THE  PROCESS OF BONE MARROW BIOPSY  Le Van Hung, Phan Đang Anh Thu, Chu Le Ngoc Hieu, Vo Thi Thuy Quyen, Le Thanh Tu   * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 17 ‐ No 5 ‐ 2013: 119 ‐ 125  Objectives: to compare the value of AFF and nitric acid in the process of bone marrow biopsy through H&E  staining and immunohistochemistry section.  Materials and Methods: A descriptive study of 56  bone marrow biopsy at Blood transfution hematology  Hospital ‐ Ho Chi Minh city  Results: Timing of interpretation was earlier 0.92 day (for H&E staining), 0.7 day (for H&E staining and  immunohistochemistry),  0.6  day  (for  H&E  staining,  reticulin  staining  and  other  special  stains).  H&E  section  (using AFF) gets 8.53 scores (variance 0.14); H&E section (using Nitric acid) gets 7.42 scores (variance 1.2).   Two kinds of decalcification methods have no effect on membrane receptor. Nitric acid reduces sensitivity (16.7%)  and ratio of false negative  (32.3%) for nucleus receptor   Conclusion:  AFF  is a decalcification method which produces better quality on H&E staining than Nitric  acid 5%. Using AFF, we have earlier timing of interpretation. Nitric acid may change the nucleus receptor which  * Khoa Giải phẫu bệnh, Bệnh viện Truyền Máu ‐ Huyết học Tp Hồ Chí Minh  ** Bộ mơn Giải phẫu bệnh, Đại học Y Dược TP. Hồ Chí Minh  Tác giả liên lạc: BS.CKI. Lê Thanh Tú. ĐT: 091�ch tiêu bản GPB.  sinh chất (MPO, CD03, CD20, Bcl2, CD45, CD68,  Với  8,53  điểm  (>  7,42)  chúng  tôi  nhận  thấy  …).  tiêu bản H&E khi thay thế dung dịch khử canxi  Các  tế  bào  dương  tính  bắt  màu  rõ  ràng,  dễ  đã cải thiện được chất lượng. Với phương sai chỉ  dàng  phân  biệt  tế  bào  dương  và  tế  bào  khơng  còn 0.14 chúng tơi nhận thấy cả tác dụng chuẩn  dương, hiệu ứng nền khơng đáng kể.  hóa chất lượng tiêu bản nhuộm.  Tỷ lệ tế bào dương tính/tế bào bình thường ở  Chúng  tơi  có  thể  nhận  định  sử  dụng  dung  các mơ có cùng mã số tương đương nhau.  dịch AFF để thay thế cho dung dịch acit Nitric là  Sự khác biệt của các tiêu bản khơng đáng kể,  cải  thiện,  chuẩn  hóa  chất  lượng  tiêu  bản  H&E,  Chuyên Đề Truyền Máu Huyết Học  123 Nghiên cứu Y học  không  ảnh  hưởng  tới  chất  lượng  tiêu  bản  HMMD.  Chúng  tôi  nhận  định,  trong  phương  pháp nhuộm HMMD các dấu ấn kháng nguyên  trên  màng,  trong  nguyên  sinh  chất  của  tế  bào  phương  pháp  khử  canxi  bằng  acit  Nitric  hay  dung dịch AFF có tác động tương tự nhau.  Với các Dấu ấn trong nhân tế bào (Ki67, Tdt,  Bcl6, cyclin D1, …).  Khi  sử  dụng  dung  dịch  AFF  các  tế  bào  dương tính bắt màu rõ ràng, dễ phân biệt tế bào  dương và tế bào khơng dương.   Với các mẫu sử dụng dung dịch acit Nitric  5%, khơng có hiệu ứng nền, các tế bào dương  tính  vẫn  có  thể  phân  biệt  được  với  tế  bào  âm  tính.   Với sự hiện diện của mẫu chứng âm, chứng  dương chúng tơi có thể kết luận được các tế bào  dương tính ở đây là các tế bào có mang dấu ấn  kháng nguyên đã nhuộm.  Căn  cứ  trên  sự  biểu  hiện  của  mẫu  chứng  chúng  tơi  có  thể  kết  luận  hóa  chất,  quy  trình  nhuộm  khơng  có  vấn  đề.  Nhưng  nếu  so  sánh  từng  cặp  riêng  biệt  từ  cùng  một  bệnh  nhân,  nhuộm  cùng  một  dấu  ấn  kháng  nguyên  thì  rõ  ràng  các  mẫu  được  khử  canxi  bằng  dung  dịch  acit nitric 5% có  tỷ  lệ  tế  bào  dương  tính  trên  tế  bào âm tính giảm rõ rệt so với các mẫu sử dụng  dung dịch AFF.  Sử dụng dung dịch acit nitric 5% trong khử  canxi  mơ  tủy  xương  sinh  thiết  làm  biến  đổi  số  lượng  kháng  ngun  dẫn  tới  sai  lệch  kết  quả  nhuộm  Hóa  mơ  miễn  dịch,  có  thể  gây  sai  lệch  kết  quả  giải  phẫu  bệnh.  Kết  luận  này  cũng  rất  tương đồng với các nghiên cứu  của  Kremer  M,  Quintanilla và cộng sự(4), Machado‐Silveiro  LH  và cộng sự(5).  Thời gian trả kết quả  Qúa trình thực hiện xét nghiệm dù đơn giản,  hay  phức  tạp  đều  cần  chính  xác  với  thời  gian  ngắn nhất có thể. Việc rút ngắn thời gian trả kết  quả nhưng vẫn đảm bảo mức độ chính xác của  xét nghiệm ln được đánh giá cao.  124 Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Số 5 * 2013 Trong  thực  tế  khi  thực  hiện  thay  thế  dung  dịch  acit  nitric  bằng  dung  dịch  AFF  chúng  tôi  nhận  thấy  rõ  sự  rút  ngắn  thời  gian  trả  kết  quả  xét nghiệm Giải phẫu  bệnh.  Sử  dụng  acit  nitric  thời gian khử canxi nhanh hơn. Nhưng trước đó  mẫu  tủy  xương  phải  được  cố  định  trong  formalin  tối  thiểu  8  giờ,  còn  dung  dịch  AFF  có  tác  dụng  cố  định  mơ  nên  mẫu  tủy  xương  sẽ  được khử canxi ngay sau khi nhận mẫu.  Với những mẫu thường quy thời gian trả kết  quả được rút ngắn trung bình 0,96 ngày làm việc  chỉ còn trung bình 2,31 ngày (tiệm cận với  thời  gian trả kết quả các mơ mềm khơng khử canxi ở  Việt Nam cũng như trên thế giới(9)). Với các mẫu  có  thực  hiện  nhuộm  thêm  các  phương  pháp  nhuộm khác thời gian trả kết quả cũng được rút  ngắn 0.6, 0.7 ngày làm việc.  Tóm  lại,  thay  thế  dung  dịch  AFF  cho  dung  dịch acit Nitric rút ngắn thời gian trả kết quả giải  phẫu bệnh với mô tủy xương sinh thiết .  KẾT LUẬN  Khử  Canxi  mô  tủy  xương  sinh  thiết  bằng  dung dịch AFF cho chất lượng tiêu bản nhuộm  H&E tốt hơn so với dung dịch acit Nitric 5%:  Dung  dịch  AFF  rút  ngắn  thời  gian  trả  kết  quả với các xét nghiệm tủy xương sinh thiết.  Khử  canxi  mô  tủy  xương  sinh  thiết  bằng  dung  dịch  acit  Nitric  5%  có  tác  động  làm  biến  đổi  các  kháng  nguyên  trên  nhân  tế  bào  có  thể  gây  âm  tính  giả  làm  sai  lệch  kết  quả  giải  phẫu  bệnh.  Thay thế dung dịch acit Nitric 5% bằng dung  dịch  AFF  trong  quá  trình  khử  canxi  tại  Khoa  Giải phẫu bệnh.   TÀI LIỆU THAM KHẢO  Brown  RS,  Edwards  J,  Bartlett  JW et  al  (2002). Routine  acid  decalcification  of  bone  marrow  samples  can  preserve  DNA  for  FISH  and  CGH  studies  in  metastatic  prostate  cancer. J  Histochem Cytochem. 50(1):113‐5.  Fend F, Bock O, Kremer M  et al. (2005) Ancillary techniques  in  bone  marrow  pathology:  molecular  diagnostics  on  bone  marrow trephine biopsies. Virchows Arch.447(6):909‐19.  Gala JL, Chenut F, Hong KB et al (1997). A panel of antibodies  for  the  immunostaining  of  Bouinʹs  fixed  bone  marrow  trephine biopsies. J Clin Pathol. 50521–50524.  Chuyên Đề Truyền Máu Huyết Học   Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Số 5 * 2013  Kremer  M,  Quintanilla,  Martinez  L,  Nahrig  J. et  al  (2005)  Immunohistochemistry in bone marrow pathology: a  useful  adjunct  for  morphologic  diagnosis. Virchows  Arch. 447(6):920‐937.   Machado‐Silveiro    LH,  Gonzalez‐Lopez  S,  Gonzalez  ‐  Rodriguez MP (2004). Decalcification of  root canal dentin by  citric acid,  EDTA  and  sodium  citrate.  Int Endod J. 37(6):365‐ 369.  Mawhinney  WH,  Richardson  E,  Malcolm  AJ  (1984).  Control  of rapid nitric acid decalcification. J Clin Patholl. 37:1409‐1413.   McCluggage  WG,  Roddy  S,  Whiteside  C   et  al  (1995). Immunohistochemical  staining  of  plastic  embedded  bone  marrow  trephine  biopsy  specimens  after  microwave  heating. J Clin Pathol. 48(9):840‐4.  Milan  L,  Trachtenberg  MC  (1981).  Ultrasonic  decalcification  of bone. Am J Surg Pathol. 5(6):573‐579.  Nghiên cứu Y học 10 11 Naresh  KN,   Lampert  I,   Hasserjian  R. et  al  (2006).   Optimal  processing  of  bone  marrow  trephine  biopsy:  the  Hammersmith Protocol. J Clin Pathol. 59(9):903‐11.  Torlakovic  EE,  Naresh  KN,  Brunning  RD  (2008).  Bone  Marrow  Immunohistochemistry.  American  Society  for  Clinical pathology.  Zappa  J,  Cieslik‐Bielecka  A,  Adwent  M,  Cieslik  T,  Sabat  D  (2005).  Comparison  of  different  decalcification  methods  to  hard  teeth  tissues  morphological  analysis.  Dent  Med  Probl  ;  42:21‐26.    Ngày nhận bài báo: Ngày 15 tháng 8 năm 2013  Ngày phản biện: ngày 29 tháng 8 năm 2013  Ngày bài báo được đăng:       Chuyên Đề Truyền Máu Huyết Học  125 ... Canxi  mô tủy xương sinh thiết bằng  dung dịch AFF cho chất lượng tiêu bản nhuộm  H&E tốt hơn so với dung dịch acit Nitric 5%:  Dung dịch AFF  rút  ngắn  thời  gian  trả  kết  quả với các xét nghiệm tủy xương sinh thiết.  ... nhuộm khác thời gian trả kết quả cũng được rút  ngắn 0.6, 0.7 ngày làm việc.  Tóm  lại,  thay  thế  dung dịch AFF  cho  dung dịch acit Nitric rút ngắn thời gian trả kết quả giải  phẫu bệnh với mô tủy xương sinh thiết . ... rút  ngắn  thời  gian  trả  kết  quả với các xét nghiệm tủy xương sinh thiết.   Khử  canxi  mô tủy xương sinh thiết bằng  dung dịch acit Nitric  5%  có  tác  động  làm  biến  đổi  các  kháng