Mục tiêu nghiên cứu nhằm đánh giá hiệu quả của dung dịch AFF so với dung dịch acit nitric trong quá trình xử lý mô tủy xương sinh thiết trên tiêu bản nhuộm H&E và nhuộm HMMD. Nghiên cứu thực hiện thống kê mô tả 56 mẫu tủy xương sinh thiết được gửi về khoa giải phẫu bệnh - bệnh viện Truyền Máu Huyết Học.
Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Số 5 * 2013 Nghiên cứu Y học ĐÁNH GIÁ HIỆU QUẢ CỦA DUNG DỊCH ACIT FORMIC – FORMALIN (AFF) TRONG XỬ LÝ MƠ TỦY XƯƠNG SINH THIẾT Lê Văn Hùng*, Phan Đặng Anh Thư**, Chu Lê Ngọc Hiếu*, Võ Thị Thúy Qun*, Lê Thanh Tú* TĨM TẮT Mục tiêu nghiên cứu: Đánh giá hiệu quả của dung dịch AFF so với dung dịch acit Nitric trong q trình xử lý mơ tủy xương sinh thiết trên tiêu bản nhuộm H&E và nhuộm HMMD. Đối tượng và phương pháp nghiên cứu: nghiên cứu thống kê mơ tả 56 mẫu tủy xương sinh thiết được gửi về Khoa Giải phẫu bệnh – BV. Truyền Máu Huyết Học. Kết quả: thời gian trả kết quả được rút ngắn 0,92 ngày (khi nhuộm H&E), 0,7 ngày (Nhuộm H&E + HMMD), 0,6 ngày (nhuộm H&E + Reticulin, hóa tế bào). Tiêu bản nhuộm H&E sử dụng AFF đạt trung bình 8,53 điểm (phương sai 0.14) so với acit Nitric 7,42 điểm (Phương sai 1.2). Hai dung dịch có tác động như nhau khi nhuộm HMMD trên các marker trên màng, ngun sinh chất tế bào. Acit Nitric làm giảm độ nhạy (16,7%), âm tính giả (32,3%) đối với các marker trong nhân tế bào. Kết luận: Khử Canxi mơ tủy xương sinh thiết bằng dung dịch AFF cho chất lượng tiêu bản nhuộm H&E tốt hơn so với dung dịch acit Nitric 5%. AFF rút ngắn thời gian trả kết quả với các xét nghiệm tủy xương sinh thiết. Acit Nitric 5% có tác động làm biến đổi các kháng ngun trên nhân tế bào có thể gây âm tính giả làm sai lệch kết quả giải phẫu bệnh. Thay thế dung dịch acit Nitric 5% bằng dung dịch AFF trong q trình khử canxi tại Khoa Giải phẫu bệnh. Từ khóa: Khử canxi mơ tủy xương sinh thiết, Phương pháp khử canxi, ABSTRACT TO COMPARE THE VALUE OF FORMIC ACID – FORMALIN (AFF) AND NITRIC ACID IN THE PROCESS OF BONE MARROW BIOPSY Le Van Hung, Phan Đang Anh Thu, Chu Le Ngoc Hieu, Vo Thi Thuy Quyen, Le Thanh Tu * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 17 ‐ No 5 ‐ 2013: 119 ‐ 125 Objectives: to compare the value of AFF and nitric acid in the process of bone marrow biopsy through H&E staining and immunohistochemistry section. Materials and Methods: A descriptive study of 56 bone marrow biopsy at Blood transfution hematology Hospital ‐ Ho Chi Minh city Results: Timing of interpretation was earlier 0.92 day (for H&E staining), 0.7 day (for H&E staining and immunohistochemistry), 0.6 day (for H&E staining, reticulin staining and other special stains). H&E section (using AFF) gets 8.53 scores (variance 0.14); H&E section (using Nitric acid) gets 7.42 scores (variance 1.2). Two kinds of decalcification methods have no effect on membrane receptor. Nitric acid reduces sensitivity (16.7%) and ratio of false negative (32.3%) for nucleus receptor Conclusion: AFF is a decalcification method which produces better quality on H&E staining than Nitric acid 5%. Using AFF, we have earlier timing of interpretation. Nitric acid may change the nucleus receptor which * Khoa Giải phẫu bệnh, Bệnh viện Truyền Máu ‐ Huyết học Tp Hồ Chí Minh ** Bộ mơn Giải phẫu bệnh, Đại học Y Dược TP. Hồ Chí Minh Tác giả liên lạc: BS.CKI. Lê Thanh Tú. ĐT: 091ch tiêu bản GPB. sinh chất (MPO, CD03, CD20, Bcl2, CD45, CD68, Với 8,53 điểm (> 7,42) chúng tôi nhận thấy …). tiêu bản H&E khi thay thế dung dịch khử canxi Các tế bào dương tính bắt màu rõ ràng, dễ đã cải thiện được chất lượng. Với phương sai chỉ dàng phân biệt tế bào dương và tế bào khơng còn 0.14 chúng tơi nhận thấy cả tác dụng chuẩn dương, hiệu ứng nền khơng đáng kể. hóa chất lượng tiêu bản nhuộm. Tỷ lệ tế bào dương tính/tế bào bình thường ở Chúng tơi có thể nhận định sử dụng dung các mơ có cùng mã số tương đương nhau. dịch AFF để thay thế cho dung dịch acit Nitric là Sự khác biệt của các tiêu bản khơng đáng kể, cải thiện, chuẩn hóa chất lượng tiêu bản H&E, Chuyên Đề Truyền Máu Huyết Học 123 Nghiên cứu Y học không ảnh hưởng tới chất lượng tiêu bản HMMD. Chúng tôi nhận định, trong phương pháp nhuộm HMMD các dấu ấn kháng nguyên trên màng, trong nguyên sinh chất của tế bào phương pháp khử canxi bằng acit Nitric hay dung dịch AFF có tác động tương tự nhau. Với các Dấu ấn trong nhân tế bào (Ki67, Tdt, Bcl6, cyclin D1, …). Khi sử dụng dung dịch AFF các tế bào dương tính bắt màu rõ ràng, dễ phân biệt tế bào dương và tế bào khơng dương. Với các mẫu sử dụng dung dịch acit Nitric 5%, khơng có hiệu ứng nền, các tế bào dương tính vẫn có thể phân biệt được với tế bào âm tính. Với sự hiện diện của mẫu chứng âm, chứng dương chúng tơi có thể kết luận được các tế bào dương tính ở đây là các tế bào có mang dấu ấn kháng nguyên đã nhuộm. Căn cứ trên sự biểu hiện của mẫu chứng chúng tơi có thể kết luận hóa chất, quy trình nhuộm khơng có vấn đề. Nhưng nếu so sánh từng cặp riêng biệt từ cùng một bệnh nhân, nhuộm cùng một dấu ấn kháng nguyên thì rõ ràng các mẫu được khử canxi bằng dung dịch acit nitric 5% có tỷ lệ tế bào dương tính trên tế bào âm tính giảm rõ rệt so với các mẫu sử dụng dung dịch AFF. Sử dụng dung dịch acit nitric 5% trong khử canxi mơ tủy xương sinh thiết làm biến đổi số lượng kháng ngun dẫn tới sai lệch kết quả nhuộm Hóa mơ miễn dịch, có thể gây sai lệch kết quả giải phẫu bệnh. Kết luận này cũng rất tương đồng với các nghiên cứu của Kremer M, Quintanilla và cộng sự(4), Machado‐Silveiro LH và cộng sự(5). Thời gian trả kết quả Qúa trình thực hiện xét nghiệm dù đơn giản, hay phức tạp đều cần chính xác với thời gian ngắn nhất có thể. Việc rút ngắn thời gian trả kết quả nhưng vẫn đảm bảo mức độ chính xác của xét nghiệm ln được đánh giá cao. 124 Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Số 5 * 2013 Trong thực tế khi thực hiện thay thế dung dịch acit nitric bằng dung dịch AFF chúng tôi nhận thấy rõ sự rút ngắn thời gian trả kết quả xét nghiệm Giải phẫu bệnh. Sử dụng acit nitric thời gian khử canxi nhanh hơn. Nhưng trước đó mẫu tủy xương phải được cố định trong formalin tối thiểu 8 giờ, còn dung dịch AFF có tác dụng cố định mơ nên mẫu tủy xương sẽ được khử canxi ngay sau khi nhận mẫu. Với những mẫu thường quy thời gian trả kết quả được rút ngắn trung bình 0,96 ngày làm việc chỉ còn trung bình 2,31 ngày (tiệm cận với thời gian trả kết quả các mơ mềm khơng khử canxi ở Việt Nam cũng như trên thế giới(9)). Với các mẫu có thực hiện nhuộm thêm các phương pháp nhuộm khác thời gian trả kết quả cũng được rút ngắn 0.6, 0.7 ngày làm việc. Tóm lại, thay thế dung dịch AFF cho dung dịch acit Nitric rút ngắn thời gian trả kết quả giải phẫu bệnh với mô tủy xương sinh thiết . KẾT LUẬN Khử Canxi mô tủy xương sinh thiết bằng dung dịch AFF cho chất lượng tiêu bản nhuộm H&E tốt hơn so với dung dịch acit Nitric 5%: Dung dịch AFF rút ngắn thời gian trả kết quả với các xét nghiệm tủy xương sinh thiết. Khử canxi mô tủy xương sinh thiết bằng dung dịch acit Nitric 5% có tác động làm biến đổi các kháng nguyên trên nhân tế bào có thể gây âm tính giả làm sai lệch kết quả giải phẫu bệnh. Thay thế dung dịch acit Nitric 5% bằng dung dịch AFF trong quá trình khử canxi tại Khoa Giải phẫu bệnh. TÀI LIỆU THAM KHẢO Brown RS, Edwards J, Bartlett JW et al (2002). Routine acid decalcification of bone marrow samples can preserve DNA for FISH and CGH studies in metastatic prostate cancer. J Histochem Cytochem. 50(1):113‐5. Fend F, Bock O, Kremer M et al. (2005) Ancillary techniques in bone marrow pathology: molecular diagnostics on bone marrow trephine biopsies. Virchows Arch.447(6):909‐19. Gala JL, Chenut F, Hong KB et al (1997). A panel of antibodies for the immunostaining of Bouinʹs fixed bone marrow trephine biopsies. J Clin Pathol. 50521–50524. Chuyên Đề Truyền Máu Huyết Học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Số 5 * 2013 Kremer M, Quintanilla, Martinez L, Nahrig J. et al (2005) Immunohistochemistry in bone marrow pathology: a useful adjunct for morphologic diagnosis. Virchows Arch. 447(6):920‐937. Machado‐Silveiro LH, Gonzalez‐Lopez S, Gonzalez ‐ Rodriguez MP (2004). Decalcification of root canal dentin by citric acid, EDTA and sodium citrate. Int Endod J. 37(6):365‐ 369. Mawhinney WH, Richardson E, Malcolm AJ (1984). Control of rapid nitric acid decalcification. J Clin Patholl. 37:1409‐1413. McCluggage WG, Roddy S, Whiteside C et al (1995). Immunohistochemical staining of plastic embedded bone marrow trephine biopsy specimens after microwave heating. J Clin Pathol. 48(9):840‐4. Milan L, Trachtenberg MC (1981). Ultrasonic decalcification of bone. Am J Surg Pathol. 5(6):573‐579. Nghiên cứu Y học 10 11 Naresh KN, Lampert I, Hasserjian R. et al (2006). Optimal processing of bone marrow trephine biopsy: the Hammersmith Protocol. J Clin Pathol. 59(9):903‐11. Torlakovic EE, Naresh KN, Brunning RD (2008). Bone Marrow Immunohistochemistry. American Society for Clinical pathology. Zappa J, Cieslik‐Bielecka A, Adwent M, Cieslik T, Sabat D (2005). Comparison of different decalcification methods to hard teeth tissues morphological analysis. Dent Med Probl ; 42:21‐26. Ngày nhận bài báo: Ngày 15 tháng 8 năm 2013 Ngày phản biện: ngày 29 tháng 8 năm 2013 Ngày bài báo được đăng: Chuyên Đề Truyền Máu Huyết Học 125 ... Canxi mô tủy xương sinh thiết bằng dung dịch AFF cho chất lượng tiêu bản nhuộm H&E tốt hơn so với dung dịch acit Nitric 5%: Dung dịch AFF rút ngắn thời gian trả kết quả với các xét nghiệm tủy xương sinh thiết. ... nhuộm khác thời gian trả kết quả cũng được rút ngắn 0.6, 0.7 ngày làm việc. Tóm lại, thay thế dung dịch AFF cho dung dịch acit Nitric rút ngắn thời gian trả kết quả giải phẫu bệnh với mô tủy xương sinh thiết . ... rút ngắn thời gian trả kết quả với các xét nghiệm tủy xương sinh thiết. Khử canxi mô tủy xương sinh thiết bằng dung dịch acit Nitric 5% có tác động làm biến đổi các kháng