NGHIÊN cứu một số TRIỆU CHỨNG lâm SÀNG và đặc điểm BỆNH lý của lợn mắc PORCINE EPIDEMIC DIARRHEA VIRUS

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA THÚ Y o0o KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: NGHIÊN CỨU MỘT SỐ TRIỆU CHỨNG LÂM SÀNG VÀ ĐẶC ĐIỂM BỆNH LÝ CỦA LỢN MẮC PORCINE EPIDEMIC DIARRHEA VIRUS Người thực : NGUYỄN THỊ NHÂM Lớp : TYE – K56 Giáo viên hướng dẫn : PGS.TS NGUYỄN THỊ LAN Bộ môn : Bệnh lý Hà Nội – 2015 LỜI CẢM ƠN Để hồn thành khóa luận tốt nghiệp này, xin chân thành cảm ơn thầy, khoa Thú y tận tình giảng dạy, hướng dẫn giúp đỡ, động viên khuyến khích suốt năm học tập rèn luyện Học Viện Nông Nghiệp Việt Nam Đặc biệt, xin gửi lời biết ơn sâu sắc đến PGS.TS Nguyễn Thị Lan người tận tình bảo, tạo điều kiện giúp đỡ tơi hồn thành khóa luận tốt nghiệp Ngồi ra, tơi xin gửi lời cảm ơn tới thầy cô môn Bệnh lý, anh chị cơng tác phòng thí nghiệm trọng điểm CNSH thú y, Học Viện Nông Nghiệp Việt Nam, gia đình bạn bè giúp tơi thực đề tài Cuối cùng, tơi xin kính chúc tồn thể Thầy, Cơ khoa Thú y gia đình ln mạnh khỏe cơng tác tốt Hà Nội, ngày 30 tháng năm 2015 Sinhviên Nguyễn Thị Nhâm MỤC LỤC Hình ảnh 2.1 Cấu trúc Coronavirus ( Kathryn V.Holmes, 2003) Hình ảnh 2.2 Cơ chế gây bệnh PEDV 10 Hình ảnh 2.3 Mơ hình nguyên lý phản ứng RT-PCR 13 Hình ảnh 2.4 Hình ảnh Test chẩn đốn nhanh bệnh PED 14 Bảng 4.1 Nguồn gốc lợn theo mẹ nghiên cứu 27 Hình ảnh 4.1 Gen khuếch đại phần gen S (651bp) 29 Bảng 4.2 Kết phản ứng RT-PCR mẫu bệnh phẩm .29 chẩn đoán bệnh PED 29 Bảng 4.4 Kết phản ứng RT-PCR mẫu bệnh phẩm chẩn đốn có mặt PCV2 32 Bảng 4.6 Một số triệu chứng lâm sàng lợn nghi mắc PEDV 33 Hình ảnh 4.2 Lợn gầy yếu, mệt mỏi 35 Hình ảnh 4.3 Lợn tiêu chảy phân lỏng, phân dính bết hậu mơn 35 Hình ảnh 4.4 Lợn nằm chồng đống lên 35 Hình ảnh 4.5 Xác chết gầy còm .35 Bảng 4.7 Bảng kết biến đổi bệnh tích đại thể chủ yếu lợn mắc PED .36 Hình ảnh 4.6 Ruột chứa dich lỏng màu vàng 38 Hình ảnh 4.7 Thành ruột mỏng chứa đầy 38 Hình ảnh 4.8 Hạch bẹn nông sưng to .38 Hình ảnh 4.9 Lách nhồi huyết, sưng, rìa tù 38 .38 Hình ảnh 4.10 Phổi xuất huyết 38 .38 Hình ảnh 4.11 Gan sưng túi mật căng 38 Bảng 4.8 Kết nghiên cứu bệnh tích vi thể ruột lợn theo mẹ PEDV .40 Bảng 4.9 Biến đổi bệnh tích vi thể số quan lợn theo mẹ mắc PED 43 .47 Hình ảnh 4.12 Dạ dày đứt nát lông nhung (H.E 10X) 47 .47 Hình ảnh 4.13.Gan sung huyết thâm nhiễm tế bào (H.E 10X) .47 Hình ảnh 4.14 Hạch lympho sung huyết (H.E10X) 47 Hình ảnh 4.15 Lách sung huyết, thâm nhiễm tế bào (H.E 10X) 47 Hình ảnh 4.16 Ruột gãy lơng nhung (H.E10X) 47 Hình ảnh 4.17 Tiêu bệnh tích vi thể ruột lợn mắc PEDV (H.E 40X) 47 .48 Hình ảnh 4.18 Thận sung huyết, thâm nhiễm tế bào (H.E 10X) 48 .48 Hình ảnh 4.19 Phổi viêm sung huyết thâm nhiễm tế bào (H.E 40X) .48 Hình ảnh 4.20 Lách sung huyết (H.E10X) .48 Hình ảnh 4.21 Phổi thâm nhiễm tế bào viêm (H.E 10X) 48 DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT CSF : Classic Swine Fever CSFV : Classic Swine Fever Virus DMEM : Dulbecco's Modified Eagle's Medium dNTP : Deoxynucleotide triphosphate DTL : Dịch tả lợn ELISA : Enzyme Linked Immune Sorbent Assay HE : Hematoxilin – Eosin IHC : Immunohistochemistry IMPA : Immunoperoxidase monolayer assay NXB : Nhà Xuất Bản OIE : Office International Epizooties ORF : Open reading fraction PBS : Phosphate Buffer Saline PCR : Polymerase Chain Reaction PCV : Porcine Circo Virus type PED : Porcine Epidemic Diarrhea PEDV : Porcine Epidemic Diarrhea Virus PK15 : Pig Kidney 15 PRRS : Porcine Reprodutive Respiratory Syndrome PRRSV : Porcine Reproductive & Respiratory syndrome Virus TE : Tris EDTA TBE : Tris borate EDTA RT-PCR : Reverse transcriptase polymerase chain reaction µl : Micro lit DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Hệ thống máy chuyển đúc mẫu tự động gồm 12 bình Error: Reference source not found Bảng 4.1 Nguồn gốc lợn theo mẹ nghiên cứu .Error: Reference source not found Bảng 4.2 Kết phản ứng RT-PCR mẫu bệnh phẩm .Error: Reference source not found chẩn đoán bệnh PED .Error: Reference source not found Bảng 4.3 Kết phản ứng RT-PCR mẫu bệnh phẩm chẩn đoán có mặt PRRSV Error: Reference source not found Bảng 4.4 Kết phản ứng RT-PCR mẫu bệnh phẩm chẩn đoán có mặt PCV2 .Error: Reference source not found Bảng 4.5 Kết phản ứng RT-PCR mẫu bệnh phẩm chẩn đoán có mặt CSFV .Error: Reference source not found Bảng 4.6 Một số triệu chứng lâm sàng lợn nghi mắc PEDV Error: Reference source not found Bảng 4.7 Bảng kết biến đổi bệnh tích đại thể chủ yếu lợn mắc PED Error: Reference source not found Bảng 4.8 Kết nghiên cứu bệnh tích vi thể ruột lợn theo mẹ PEDV Error: Reference source not found Bảng 4.9 Biến đổi bệnh tích vi thể số quan lợn theo mẹ mắc PED Error: Reference source not found DANH MỤC HỈNH Hình ảnh 2.1 Cấu trúc Coronavirus ( Kathryn V.Holmes, 2003) Error: Reference source not found Hình ảnh 2.2 Cơ chế gây bệnh PEDV Error: Reference source not found Hình ảnh 2.3 Mơ hình ngun lý phản ứng RT-PCR.Error: Reference source not found Hình ảnh 2.4 Hình ảnh Test chẩn đốn nhanh bệnh PED Error: Reference source not found Hình ảnh 4.1 Gen khuếch đại phần gen S (651bp) .Error: Reference source not found Hình ảnh 4.2 Lợn gầy yếu, mệt mỏi Error: Reference source not found Hình ảnh 4.3 Lợn tiêu chảy phân lỏng, phân dính bết hậu mơn Error: Reference source not found Hình ảnh 4.4 Lợn nằm chồng đống lên Error: Reference source not found Hình ảnh 4.5 Xác chết gầy còm .Error: Reference source not found Hình ảnh 4.6 Ruột chứa dich lỏng màu vàng Error: Reference source not found Hình ảnh 4.7 Thành ruột mỏng chứa đầy Error: Reference source not found Hình ảnh 4.8 Hạch bẹn nông sưng to Error: Reference source not found Hình ảnh 4.9 Lách nhồi huyết, sưng, rìa tù Error: Reference source not found Hình ảnh 4.10 Phổi xuất huyết Error: Reference source not found Hình ảnh 4.11 Gan sưng túi mật căng .Error: Reference source not found Hình ảnh 4.12 Dạ dày đứt nát lơng nhung (H.E 10X) Error: Reference source not found Hình ảnh 4.13.Gan sung huyết thâm nhiễm tế bào (H.E 10X) Error: Reference source not found Hình ảnh 4.14 Hạch lympho sung huyết (H.E10X) Error: Reference source not found Hình ảnh 4.15 Lách sung huyết, thâm nhiễm tế bào (H.E 10X) Error: Reference source not found Hình ảnh 4.16 Ruột gãy lông nhung (H.E10X) .Error: Reference source not found Hình ảnh 4.17 Tiêu bệnh tích vi thể ruột lợn mắc PEDV (H.E 40X) .Error: Reference source not found Hình ảnh 4.18 Thận sung huyết, thâm nhiễm tế bào (H.E 10X) Error: Reference source not found Hình ảnh 4.19 Phổi viêm sung huyết thâm nhiễm tế bào (H.E 40X) .Error: Reference source not found Hình ảnh 4.20 Lách sung huyết (H.E10X) Error: Reference source not found Hình ảnh 4.21 Phổi thâm nhiễm tế bào viêm (H.E 10X) Error: Reference source not found PHẦN I MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Chăn ni ngày có vị trí quan trọng cấu ngành nơng nghiệp nước ta sở chăn nuôi ngày mở rộng Cùng với việc mở rộng dịch bệnh yếu tố ảnh hưởng không nhỏ đến hiệu chăn nuôi Hiện nay, dịch bệnh diễn phức tạp, có nhiều bệnh xuất khó kiểm sốt gây thiệt hại lớn cho người chăn ni Trong phải kể đến dịch tiêu chảy lợn virus PED, làm giảm sức đề kháng lợn kế phát bệnh khác dẫn đến việc chữa trị gặp nhiều khó khăn Bệnh tiêu chảy virus PED gây bệnh truyền nhiễm nguy hiểm cho đàn lợn Lợn lứa tuổi mắc bệnh chủ yếu gặp lợn theo mẹ, có triệu chứng điển nơn, tiêu chảy, lạnh nằm chồng lên thích nằm bụng mẹ, phân lợn màu vàng lỏng có chứa sữa chưa tiêu hết, lợn lớn bị mắc bệnh phân có màu xi-măng, thành ruột mỏng Ở Việt Nam, virus PED phát số đàn lợn bị tiêu chảy vào năm 2008, gây thiệt hại lớn cho sở chăn nuôi Từ phát bệnh PED chưa có nhiều nghiên cứu sâu triệu chứng lâm sàng, đặc điểm bệnh lý đại thể vi thể để đưa kết luận chắn triệu chứng lâm sàng đặc điểm bệnh lý đặc trưng mà dựa vào đặc điểm khẳng định có mặt PEDV cơng tác chẩn đốn lâm sàng, phát bệnh sớm bệnh cán thú y sở để kịp thời đưa biện pháp phòng chống bệnh PED sở chăn nuôi gặp nhiều khó khăn chưa có điều kiện máy móc để xét nghiệm đưa kết xác nguyên nhân bệnh Hơn ngày nhiều bệnh ghép xảy với tốc độ lây lan nhanh, có triệu chứng lâm sàng, đặc điểm bệnh tích gần giống khó xác định ngun nhân Vì dịch bệnh xảy cán thú y chẩn đốn xác bệnh dựa vào quan sát triệu chứng lâm sàng chung chung, mổ khám bệnh tích mà phải gửi mẫu đến phòng thí nghiệm để làm xét nghiệm với nhiều tiêu chẩn đoán tốn kém, thời gian Do tính chất nghiêm trọng khả lây lan rộng bệnh, việc chẩn đoán phát bệnh sớm quan trọng Những năm gần đây, kỹ thuật sinh học phân tử phát triển cách mạnh mẽ chứng minh vai trò ưu việt mình, có kỹ thuật RT- PCR ngày ứng dụng rộng rãi Đây kỹ thuật có độ xác cao, tiêu tốn thời gian Một kỹ thuật cho kết nhanh chóng, có độ xác cao Từ kết xét nghiêm bẳng phương pháp RT –PCR khẳng định nguyên nhân gây bệnh PED lợn có triệu chứng lâm sàng, bệnh tích đặc trưng phân biệt với nhiều bệnh dễ lẫn khác Từ thực tế đó, đồng ý Khoa Thú Y, Học viện Nông nghiệp Việt Nam Bộ môn Bệnh lý, tiến hành nghiên cứu đề tài: ”Nghiên cứu số triệu chứng lâm sàng đặc điểm bệnh lý lợn mắc Porcine Epidemic Diarrhea (PED)” 1.2 Mục tiêu đề tài - Xác định đặc điểm bệnh lý chủ yếu Porcine Epidemic Diarrhea Virus (PEDV), từ làm nguồn tư liệu tham khảo cho bác sỹ thú y sở, người làm công tác chẩn đoán lĩnh vực thú y bệnh PED Bảng 4.8 Kết nghiên cứu bệnh tích vi thể ruột lợn theo mẹ PEDV Các tổn thương vi thể (n=15x2) Sung huyết STT Xuất huyết Cơ quan Dương tính Tỷ lệ (%) Dương tính Tỷ lệ (%) Thâm nhiễm Lơng nhung bị Thối hóa tế tế bào phá hủy bào Dương tính Tỷ lệ (%) Dương tính Tỷ lệ (%) Dương tính Tỷ lệ (%) Hoại tử tế bào Dương tính Tỷ lệ (%) Tăng sinh nang lympho Dương tính Tỷ lệ (%) Tá tràng 30 100 18 60 18 60 30 100 30 100 18 60 30 100 Không tràng 20 60 12 40 12 40 30 100 24 80 12 40 24 80 Hồi tràng 24 80 24 80 18 60 18 60 30 100 20 18 60 Kết tràng 24 80 18 60 18 60 12 40 18 60 20 20 40 Trong n - số block nghiên cứu Nghiên cứu biến đổi vi thể lợn nghi mắc PEDV chúng tơi thấy: Bệnh tích vi thể đáng lợn nghiên cứu biến đổi ruột Qua bảng 4.4 ta thấy cấu trúc vi thể ruột non thay đổi, tượng bệnh lý sung huyết, lông nhung bị phá hủy, tăng sinh lang lympho, thối hóa tế bào xảy tất mẫu đoạn tá tràng lợn nghiên cứu, ruột quan bị tác động sớm nhiều Khi cấu trúc ruột thay đổi thấy biểu mơ niêm mạc ruột thối hóa tế bào, tế bào thường mọng nước, gây phù nhẹ niêm mạc, với hạ niêm mạc thấy xuất huyết mạch quản Các trường hợp bệnh nặng bệnh tích đại thể rõ lớn có chỗ lại bị bào mòn nhẵn lơng nhung Các biến đổi bệnh lý diễn rõ ràng hơn, bệnh tích vi thể tương ứng ruột có bệnh lý biến đổi phức tạp hơn, đặc trưng Tế bào niêm mạc ruột bị hoại tử bắt màu hồng đều, cấu trúc tế bào, không phân biệt rõ nhân tế bào chất, tuyến tiêu hóa khơng nhìn thấy rõ nữa, lơng nhung bị đứt nát ta có nơi tạo thành mảng Ở hạ niêm mạc tượng thâm nhiễm tế bào bên cạnh có tăng sinh tế bào lympho, nhiều đại thực bào, tế bào đa nhân trung tính Nhìn lại bảng 4.8 ta thấy biến đổi mạnh mẽ tế bào tá tràng, không tràng, hồi tràng Cụ thể không tràng tượng lơng nhung bị phá hủy (100%), thối hóa tế bào (80%), tăng sinh nang lympho (80%), sung huyết chiếm 60%, thâm nhiễm, xuất huyết hoại tử tế bào chiếm 40% Nhìn chung đoạn ruột tổn thương tá tràng trầm trọng loại tổn thương: tăng sinh nang lympho, sung huyết, lơng nhung bị phá hủy thối hóa tế bào diễn tất 10 lợn chiếm tỷ lệ 100%, xuất huyết, thâm nhiễm hoại tử tế bào chiếm tới 60% Quan sát vi trường nhận thấy tổn thương có giảm dần đoạn từ 41 xuống Ở hai đoạn hồi tràng kết tràng nhìn chung tổn thương có phần nhẹ cụ thể sau: hồi tràng tổn thương thối hóa tế bào chiếm tỷ lệ cao 100%, tiếp đến xuất huyết sung huyết chiếm 80%, 60% hồi tràng bị thâm nhiễm, lông nhung bị phá hủy, tăng sinh nang lympho Hoại tử tế bào hồi tràng không đáng kể chiếm 20% Kết tràng sung huyết 80%, xuất huyết, thâm nhiễm tế bào, thối hóa tế bào chiếm tỷ lệ 60%, hoại tử tế bào tăng sinh nang lympho chiếm 20% Bên cạnh nghiên cứu biến đổi đặc trưng tế bào ruột nghiên cứu thay đổi bệnh tích quan phổi, tim, dày, gan, lách, thận, hạch ruột, ruột Kết tổng hợp lại bảng sau 42 Bảng 4.9 Biến đổi bệnh tích vi thể số quan lợn theo mẹ mắc PED Tổn thương vi thể STT Cơ quan Dạ dày Hạch ruột Ruột Phổi Gan Thận Lách Tim Xuất huyết Sung huyết Thối hóa tế bào Hoại tử tế bào (n=15) (n=15) (n=15) (n=15) Dương Tỷ lệ Dương Tỷ lệ tính 22 18 22 12 12 Dương Tỷ lệ % tính % tính 73,33 60 73,33 20 40 20 60 13,33 24 30 24 24 10 10 80 100 80 80 33,33 20 50 13,33 18 20 12 18 24 n: Số block nghiên cứu Dương tính 43 Thâm nhiễm tế bào viêm (n=15) Dương Tỷ Dương Tỷ lệ % tính lệ tính % 60 66,67 40 26,67 60 80 30 6,67 18 18 12 12 4 % 60 60 40 20 40 20 20 20 20 22 24 12 18 20 66,67 73,33 80 40 60 40 20 Qua bảng 4.9 ta nhận thấy trình tổn thương hạch, phổi, hạch ruột, gan, thận chủ yếu bị sung huyết xuất huyết, thâm nhiễm hoại tử có tất loại tế bào nghiên cứu sau Ruột: Ruột xuất huyết (73,33%), sung huyết nặng (80%), lơng nhung bị gãy nát thành mảng có chỗ lông nhung bị rụng gần niêm mạc ruột bị bào mòn, tế bào biểu mơ bị thối hóa (40%) Thâm nhiễm tế bào nặng chiếm 73,33% có nhiều bạch cầu đa nhân trung tính Các tổn thương ruột điển hình với tỷ lệ nhiễm cao Dạ dày: Dạ dày có tổn thương sung huyết (80%), xuất huyết (73,33%), thối hóa tế bào (60%) Khi soi kính hiển vi thấy lông nhung dày bị gãy nát, biểu mô bị bong tróc thành mảng, có nơi biểu mơ bị bào mòn, tế bào biểu mơ bị thối hóa Cũng giống ruột dày bị thâm nhiễm tế bào không nhiều chiếm 20% vị trí bị thâm nhiễm tế bào tập trung bạch cầu đa nhân trung tính Hạch ruột: Hạch quan cửa ngõ cho phản ứng thể trước tác nhân gây bệnh, tham gia vào đáp ứng miễn dịch nên hạch quan chịu tác động sớm bị ảnh hưởng rõ rệt Do biến đổi bệnh lý hạch xảy phức tạp nặng nề Các tượng biến đổi hạch chiếm tỷ lệ tương đối cao tượng hạch sung huyết 100%, thối hóa tế bào, thâm nhiễm tế bào viêm chiếm 66,67%, bên cạnh hoại tử tế bào xuất huyết chiếm 66,67% Các tế bào lympho bị thối hóa thâm nhiễm tế bào viêm tế bào thực bào minh họa hình, đặc biệt tế bào chất thường chứa hạt nhỏ, thể vùi Hầu hết tiêu quan sát thấy tượng tế bào mô hạch bị thối hóa lan tràn miền vỏ hạch lympho Ngồi ra, có xuất cảu tế bào khổng lồ nhiều nhân hay gọi thể hợp bào minh họa hình ảnh 4.14, xuất tế bào khổng lồ nguyên nhân dẫn tới việc khó khăn tìm tế bào miễn dịch đa nhân trung tính, đơn nhân lớn, lympho bào, tương bào Giải thích cho suy giảm tế bào nang lympho 44 Gan: Gan quan sung yếu máy tiêu hóa với chức phức tạp nên dễ bị tổn thương, diễn biến bệnh lý gan lại phụ thuộc vào nhiều yếu tố thời gian kể từ tác nhân gây bệnh xâm nhiễm vào thể Sự tổn thương tế bào gan tập trung vào tế bào bị thối hóa thâm nhiễm tế bào viêm đặc trưng Các tổ chức liên kết vỏ khơng có nhiều biến đổi, xuất nhiều hồng cầu gan bị xuất huyết nặng Tế bào gan thối hóa khơng bào ngun sinh chất có nhiều khoảng trống trắng hậu trình rối loạn trao đổi protein Dạng thối hóa tế bào phổ biến tế bào gan xuất viêm u hạt hay tế bào khổng lồ (Chae, 2004) Khi gan bị tổn thương không bào tạo khoảng không sáng lỗ trỗ nhân tế bào lại không thấy biểu Còn gan vào trạng thái tổn thương nặng khoảng khơng chiếm gần hết dung tích tế bào chất, lúc nguyên sinh chất vệt dựa vào mảng xung quanh nhân Nhân tế bào gan bị ảnh hưởng rõ rệt, chất nhân tiêu biến đi, khoảng không gian nhân to lên quan sát thấy nhân to hợn bình thường có vỏ nhân tròn, số trường hợp khác lại thối hóa mỡ, tế bào giọt mỡ tròn sáng rõ Cấu trúc gan bị thay đổi, ranh giới tế bào gan khơng rõ thối hóa gan kiều chiếm tỷ lệ lớn, nhân tế bào gan bị vỡ tan lẫn vào tế bào chất tạo thành hình ảnh đồng nhất, xem kính hiển vi màu hồng đồng với thuốc nhuộm Eosin Từ bảng nhận thấy biến đổi bệnh tích vi thể gan chủ yếu thối hóa tế bào chiếm cao 60% tượng biến đổi bệnh lý khác Các tương thâm nhiễm tế bào, tăng sinh tế bào nang lympho chiếm tỷ lệ thấp 40% Trong sung huyết tai gan chếm 33,33% Phổi: Phổi bị sung huyết thâm nhiễm tế bào lớn hai bệnh tích chiếm tỷ lệ cao tới 80%,tiếp đến thối hóa tế bào 26,67%, xuất huyết, hoại tử tế bào phổi không nhiều chiếm 20% Nhìn vào tế bào phổi lợn 45 mắc PEDV thấy rõ sung huyết, mạch quản dãn rộng chứa đầy hồng cầu, bên cạnh thấy tượng xuất huyết từ hồng cầu tràn ngập vào lòng phế quản, tăng sinh tế bào tượng hoại tử tế bào xơ, phù kẽ phổi vài điểm tế bào chiếm tỷ lệ thấp Sự tâm nhiễm tế bào với có mặt tế bào đợn nhân lớn, bạch cầu đa nhân trung tính, lâm ba cầu Tim: Bệnh tích tim giãn rộng thối hóa tim rối loạn hơ hấp vật, bệnh tích phổi làm phổi khơng hồn thành chức kéo theo tim bị ảnh hưởng gián tiếp, phổi bị viêm gây khó thở, thở nhanh để đáp ứng nhu cầu oxy cho thể tim phải tăng co bóp làm tim nhão có tượng tim bị viêm xuất hiện tượng thâm nhiễm tế bào, hoại tử tế bào chiếm tỷ lệ 20%, lại tổn thương sung huyết, xuất huyết chiếm 13,33%, thối hóa tế bào khơng đáng kể, tim giãn rộng theo thời gian Thận: Khác với gan thận có tượng bệnh lý khác biệt biến đổi kẽ thận xuất huyết xâm nhiễm chiếm tới 20%, với bệnh tích đặc trưng thận : thâm nhiễm tế bào viêm 60%, thối hóa chiếm 80% trường hợp nghiên cứu bệnh tích tiêu nghiên cứu có số tiêu thấy ống thận bị hoại tử, kẽ thận xuất huyết có nhiều hồng cầu tập trung, tế bào viêm thâm nhiễm chèn ép ống thận, có dạng tế bào thường gặp lympho, tổ chức tế bào (histyocyte), lâm ba cầu, có hoại tử xảy không đáng kể Lách: có tượng sung huyết, thâm nhiễm tế bào viêm Đặc biệt có nhiều tế bào khổng lồ dấu hiệu đặc trưng bệnh PEDV gây Tế bào khổng lồ hình thành hợp bào tương tế bào thực bào Trong tế bào có nhiều nhân, hình thái tế bào khơng điển hình có hình tròn hay bầu dục, thường có hai loại tế bào khổng lồ langhans với xếp nhân quanh ngoại vi bào tương, tế bào khổng lồ nhân xếp lộn xộn Chúng thu số hình ảnh bệnh tích vi thể lợn mắc PED 46 HÌNH ẢNH BỆNH TÍCH VI THỂ CỦA LỢN NGHI MẮC PEDV Hình ảnh 4.12 Dạ dày đứt nát lơng nhung (H.E 10X) Hình ảnh 4.13.Gan sung huyết thâm nhiễm tế bào (H.E 10X) Hình ảnh 4.14 Hạch lympho sung huyết (H.E10X) Hình ảnh 4.15 Lách sung huyết, thâm nhiễm tế bào (H.E 10X) Hình ảnh 4.16 Ruột gãy lơng nhung (H.E10X) Hình ảnh 4.17 Tiêu bệnh tích vi thể ruột lợn mắc PEDV (H.E 40X) 47 Hình ảnh 4.18 Thận sung huyết, Hình ảnh 4.19 Phổi viêm thâm nhiễm tế bào (H.E 10X) sung huyết thâm nhiễm tế bào (H.E 40X) Hình ảnh 4.20 Lách sung huyết Hình ảnh 4.21 Phổi thâm nhiễm tế (H.E10X) bào viêm (H.E 10X) 48 PHẦN V KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 KẾT LUẬN Từ kết nghiên cứu đưa số kết luận sau Tỷ lệ mắc bệnh tiêu chảy virus PEDV gây lên cao lợn theo mẹ độ tuổi ngày tuổi có tỷ lệ tử vong lớn Các triệu chứng điển hình lợn mắc PEDV; lợn ủ rũ mệt mỏi bỏ ăn, bỏ bú, lợn bị tiêu chảy nặng, phân lỏng màu vàng lợn (100%), gầy sút giảm cân (80%), nằm chồng đống, thích nằm bụng mẹ (48%) Các bệnh tích đại thể thường gặp quan lợn mắc PEDV chủ yếu gặp đường tiêu hóa: ruột căng phồng chứa đầy dịch vàng bên trong, có chứa căng mọng, thành ruột mỏng (100%), có sung huyết ruột, gan sưng, túi mật căng, dịch mật đặc (86,67%) Dạ dày chứa thức ăn khơng tiêu, sữa vón đơng 100% Một số quan khác có bệnh tích khơng phải đặc trưng bệnh Một số bệnh tích vi thể bệnh: sung huyết thâm nhiễm tế bào, hoại tử tế bào, tăng sinh tế bào lympho đoạn ruột non loại tổn thương sung huyết, thối hóa tế bào chiếm tỷ lệ cao từ (60-100%), lông nhung bị phá hủy chiếm 100% Lông nhung bị phá hủy tăng sinh nang lympho tập trung chủ yếu tá tràng không tràng (80-100%) Tổn thương đoạn ruột hồi tràng, kết tràng chiếm tỷ lệ thấp Bên cạnh tổn thương vi thể ruột quan dày, gan, lách có tổn thương đặc trưng dày xuất huyết (73,33%,) sung huyết (80%) Thâm nhiễm tế bào tổn thương chiếm tỷ lệ lớn quan: hạch ruột (66,67%), ruột (73,33%), phổi (80%) Phản ứng RT-PCR phương pháp chẩn đốn nhanh, phát xác có mặt PEDV thể lợn 5.2 ĐỀ NGHỊ 49 Cần nghiên cứu đặc điểm triệu chứng lâm sàng bệnh tích đại thể bệnh PED lợn độ tuổi khác có ghép với bệnh lợn Tiếp tục ứng dụng phản ứng RT-PCR với loại mẫu bệnh phẩm khác nước bọt, thực quản… để chẩn đoán phát sớm virus lợn mắc PED từ đưa biện pháp điều trị bệnh đạt hiệu cao giảm thiệt hại cho người chăn nuôi Tiến hành nghiên cứu sâu sinh học phân tử để thu kết có giá trị thực tiễn cao Nghiên cứu sâu để khẳng định chắn có mặt PEDV Việt Nam Trên sở nghiên cứu quy trình sản xuất văc xin phù hợp hiệu phòng bệnh PED cho đàn lợn Việt Nam TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tham khảo nước Đào Trọng Đạt, Phan Thanh Phượng, Lê Ngọc Mỹ (1995), Bệnh đường tiêu hóa lợn NXB Nơng Nghiệp 50 Đào Trọng Đạt, Phan Thanh Phượng, Lê Ngọc Mỹ, Huỳnh Văn Kháng (2000), Bệnh lợn nái lợn NXB Nông Nghiệp Hồ Văn Nam, Nguyễn Thị Đào Nguyên, Phạm Ngọc Thạch (1997) Giáo trình chẩn đốn lâm sàng thú y, NXB Nông Nghiệp Hà Nội Nguyễn Bá Hiên, Huỳnh Thị Mỹ Lệ (2011) , Giáo trình Bệnh Truyền nhiễm thú y, NXB Đại học Nông nghiệp Hà Nội Nguyễn Như Thanh, Nguyễn Bá Hiên, Trần Thị Lan Hương (1997) Giáo trình vi sinh vật thú y, NXB Nơng nghiệp Hà Nội Nguyễn Tất Tồn Đỗ Tiến Duy (2013), Một số yếu tố liên quan đặc điểm sinh học dịch tiêu chảy cấp heo theo mẹ số tỉnh phía Nam” Tạp chí khoa học kỹ thuật thú y, tập XX, số 2, 2013 Nguyễn Văn Điệp Nguyễn Thị Lan (2013), Bệnh tiêu chảy dịch lợn (Porcine Epidemic Diarrhea), thông tin cho công tác chẩn đốn, phòng trị bệnh” Tạp chí khoa học kỹ thuật thú y tập XX, số 2, 2013 Trịnh Văn Thịnh (1995), Bệnh lợn Việt Nam, NXB KHKT, Hà Nội Võ Trọng Hốt, Trần Đình Miên, Võ Văn Sự, Vũ Đình Tơn, Nguyễn Khắc Tích, Đinh Thị Nơng (2000), Giáo trình chăn ni lợn NXB Nơng Nghiệp Hà Nội 10 Nguyễn Ngọc Hải, Chẩn đoán bệnh động vật kỹ thuật phân tử NXB Nông nghiệp Hà Nội 51 Tài liệu nước Bridgen A, Duarte M, Tobler K, Laude H, Ackermann M (1993) “Sequence determination of the nucleocapsid protein gene of the porcine epidemic diarrhoea virus confirms that this virus is a coronavirus related to human coronavirus 229E and porcine transmissible gastroenteritis virus” J Gen Virol 74 (Pt 9):1795–1804 Chasey D, Cartwright SF.(1978) “Virus-like particles associated with porcine epidemic diarrhea” Res Vet Sci Sep;25(2):255–256 Callebaut P, Debouck P, Pensaert M (1982) “Enzyme-linked immunosorbent assay for the detection of the coronavirus-like agent and its antibodies in pigs with porcine epidemic diarrhea” Vet Microbiol 7:295–306 Callebaut P, DeBouck P (1981) “ Some characteristics of a new porcine coronavirrus detection of antibody by ELISA” Proe 5b Int Congr Virol, p 420 Ana Carvajal, Ignacio Lanza, Rafael Diego, Pedro Rubio, Pedro Cármenes (1995) “Seroprevalence of porcine epidemic diarrhea virus infection among different types of breeding swine farms in Spain” Pre Vet Med 23: 33-40 Chae C, Kim O, Choi C, Min K, Cho WS, Kim J, Tai JH 2000 “Prevalence of porcine epidemic diarrhoea virus and transmissible gastroenteritis virus infection in Korean pigs” Vet Rec 147:606–608 DeBouck P, Callebaut P, Pensaert M.(1982) “ Prevalence of the porcine epidemic diarrhea (PED) virut in pig population of the different contries” Proc Congrt Int Pig Vet Soc 7:53 Debouck P and Pensaert M (1980) “Experimental infection of pigs with a new porcine enteric coronavirus, CV777” Am J Vet Res., 41, 219223 52 Hofmann M Wyler R (1987) “Serolgishe Untersuchung uber das Vorkommen der Epizootischen Virusdiarrhoe dẻ Schweine (EVD) in der Schewiz” Schewiz Arch Tierhilkd 129: 437 - 442 10 14 Hofmann M, Wyler R (1988) “Propagation of the virus of porcine 11 epidemic diarrhea in cell culture” J Clin Microbiol 26:2235–2239 Hofmann M Wyler R (1989) “Quantitation, biological physiochemical properties of the cell culture – apdapted porcine epidemic diarrhea coronavirus (PEDV)” Vet Microbiol 20:131 - 142 12 Kadoi K., Sugioka H., Satoh T Kadoi BK (2002) “ The propagation of a porcine epidemic diarrhea virus in swine cell line New Microbiol” 25: 285 -290 13 Kweon CH., Kweon DJ., An SH( 1995) “Insolution of porcine epidemic diarrhea virus (PEDV) infection in Korea” Korean J Vet Rec 35:349 -358 14 Kocherhans., R, Bridgen (2001) “ Completion of the porcine epidemic 15 diarrhea coronavirus (PEDV) genome serotype”.23(3): 135- 246 Lee HK, Yeo SG, (2003) “Propagation of pocine epidemic diarrhea virus Chinjin 99 in Korea” Vet Clin 20: 150 -154 16 Ishikawa K, Sekiguchi H, Ogino T, Suzuki S (1997) “ Direct and rapid detection of porcine epidemic diarrhea virus by RT-PCR” J Virol Methods 69(1-2): 191-5 17 Pensaert MB, de Bouck P (1978) “A new coronavirus-like particle associated with diarrhea in swine” Arch Virol 58:243–247 18 Pensaert, M.B., (1986) “Porcine epidemic diarrhe In: A.D Leman et al (Editors), Diseases of Swine” Iowa State University Press, Ames, IA 19 Pensaert, M.B., (1989) “Porcineepidemic diarrhea.In: M.B Pensaert (Editor), Virus Infectionsof Porcines” Elsevier, Amsterdam 20 Pensaert, M and Callebaut, P., (1982) “Porcine epidemic diarrhea (PED) caused by coronavirus present knowledge” Proc.7th IPVS Congress, July 1982, Mexico Edited by the Scientific Committee of the 7th IPVS Congress,p 52 53 21 Peenseart Van Rech K (1998) “Porcine epidemic diarrhea porcine 22 23 24 25 respiratory coronavirus” 423 -436 http://www.iowapork.org/FileLibrary/States/IA/PEDV%20update%20-4 %20Diagnostics-transmission-management-%20reporting.pdf http://www.usda.gov/documents/pedv-summary-actions.pdf https://www.aasv.org/shap/issues/v10n2/v10n2p81.pdf 54 ... nhiều bệnh dễ lẫn khác Từ thực tế đó, đồng ý Khoa Thú Y, Học viện Nông nghiệp Việt Nam Bộ môn Bệnh lý, tiến hành nghiên cứu đề tài: Nghiên cứu số triệu chứng lâm sàng đặc điểm bệnh lý lợn mắc Porcine. .. Địa điểm lấy mẫu: Các huyện địa bàn Hà Nội: Thanh Oai, Gia Lâm, Phúc Thọ 3.2 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU - Nghiên cứu triệu chứng lâm sàng chủ yếu lợn mắc Porcine Epidemic Diarrhea (PED) - Nghiên cứu bệnh. .. thú y bệnh PED PHẦN II TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU VỀ BỆNH PORCINE EPIDEMIC DIARRHEA (PED) TRÊN THẾ GIỚI VÀ VIỆT NAM 2.1.1 .Một số nghiên cứu bệnh Porcine Epidemic Diarrhea Virus