Nghiên cứu đặc điểm lâm sàng và đối chiếu kết quả xét nghiệm PCR thủy dịch của bệnh nhân bị viêm màng bồ đào trước cấp tính

Nhóm virus Herpes gây bệnh cảnhlâm sàng rất đặc thù như: teo mống mắt, tủa sau giác mạc, nhãn áp cao , .Chúng có thể gây viêm MBĐ đơn độc hay phối hợp với viêm giác mạc.Tại Việt Nam, ứng

Đặt vấn đề

Viêm màng bồ đào (MBĐ) là một cấp cứu nhãn khoa thường gặp Nếukhông điều trị có thể để lại hậu quả nặng nề Viêm MBĐ có nhiều nguyênnhân khác nhau và cách thức điều trị thay đổi tùy theo các nguyên nhân.Các nghiên cứu gần đây đã xác định được nhiều nhóm nguyên nhân quantrọng Tỷ lệ các nhóm nguyên nhân này theo đổi tùy theo mỗi quốc gia.Viêm MBĐ do nhiễm trùng ngày càng thường gặp và tác nhân gây bệnh đãđược xác định cụ thể ở nhiều trường hợp nhờ những tiến bộ về huyết thanhhọc, sinh học phân tử và các nghiên cứu lâm sàng

Nhóm Herpes bao gồm Cytomegalovirus (CMV), Herpes Simplexvirus (HSV) và Herpes Zoster virus (HZV) đã được nhiều báo cáo chứng tỏ

là nguyên nhân gây bệnh quan trọng Nhóm virus Herpes gây bệnh cảnhlâm sàng rất đặc thù như: teo mống mắt, tủa sau giác mạc, nhãn áp cao , Chúng có thể gây viêm MBĐ đơn độc hay phối hợp với viêm giác mạc.Tại Việt Nam, ứng dụng phản ứng chuỗi polymerase (PCR) đã pháthiện thấy kháng nguyên Herpes trong thủy dịch của bệnh nhân bị glôcômthể mi Viêm MBĐ trước một mắt hay cả hai mắt gần đây xuất hiện rấtnhiều Điều trị phổ thông bằng corticosteroid có thể làm bệnh nặng lên nếutác nhân không được xác định Chính vì vậy nghiên cứu tìm hiểu đặc điểmlâm sàng, nguyên nhân gây bệnh nhằm cụ thể hóa các dấu hiệu lâm sàng để

có hướng điều trị cụ thể mang ý nghĩa quan trọng và có giá trị thực tiễn.Xuất phát từ thực tế trên chúng tôi tiến hành nghiên cứu đề tài:

“Nghiên cứu đặc điểm lâm sàng và đối chiếu kết quả xét nghiệm PCR thủy dịch của bệnh nhân bị viêm màng bồ đào trước cấp tính”.

Với 2 mục tiêu nghiên cứu:

1 Mô tả đặc điểm lâm sàng của bệnh nhân bị viêm màng bồ đào trước cấp tính.

2 Nhận xét sự phù hợp giữa bệnh cảnh lâm sàng và kết quả xét nghiệm PCR thủy dịch của bệnh nhân bị viêm màng bồ đào trước cấp tính.

Chương 1 Tổng quan

1.1 Màng bồ đào

Màng bồ đào (MBĐ) thuộc tổ chức trung bì, còn gọi là mạch mạc, baogồm 3 phần: Mống mắt ở trước, thể mi ở giữa và hắc mạc ở sau Màng bồđào có năm nhiệm vụ chính: điều chỉnh ánh sáng, dinh dưỡng, tiết thể dịch,điều tiết và tạo buồng tối để ảnh hiện rõ trên võng mạc

* Mống mắt

- Mống mắt là phần trước của MBĐ được nuôi dưỡng bởi hai vòngđộng lớn và nhỏ có nguồn gốc từ động mạch mi dài sau Cơ co đồng tử dodây thần kinh số III chi phối với giới hạn ở 1/3 trong mống mắt Cơ giãnđồng tử do dây thần kinh giao cảm chi phối Nhu mô mống mắt ở trước vàbiểu mô sắc tố ở sau, biểu mô sắc tố mống mắt liên tục với biểu mô sắc tốthể mi và biểu mô sắc tố võng mạc Teo mống mắt xuất hiện do tắc mạch làdấu hiệu thường gặp trong một số bệnh lý mống mắt

- Chức năng: mống mắt có nhiệm vụ như một màn chắn, để điều chỉnhlượng ánh sáng vào trong nhãn cầu nhờ thay đổi đường kính đồng tử dohoạt động của các cơ vòng và cơ nan hoa của mống mắt

mạch máu hắc mạc có tác dụng dinh dưỡng cho các lớp võng mạc ngoài vàtham gia vào quá trình lưu thông của dịch nội nhãn

Hình 1.3 Hắc mạc

Nguồn: http://en.wikipedia.org/choroid_ (anatomy)

- Biểu mô sắc tố là phần trong của hắc mạc, là hàng rào ngăn giữa hắcmạc và võng mạc, có tác dụng thực bào các đĩa của các tế bào cảm quang.Biểu mô sắc tố tham gia vào hàng rào võng mạc ngoài, ngăn những chấthữu hình không xâm lấn vào võng mạc và nội nhãn Biểu mô sắc tố thamgia vào quá trình làm sẹo võng mạc và nó có thể bị tổn thương trong một sốbệnh lý của MBĐ hay di thực tạo nên hình ảnh tế bào xương trong bệnhvõng mạc sắc tố, một số bệnh viêm hắc võng mạc khác [6]

1.2 Bệnh viêm màng bồ đào

1.2.1 Định nghĩa

Catalan, Nelson (1992) định nghĩa về viêm màng bồ đào như sau [7]:Viêm MBĐ là một tên gọi chung về hình thái viêm nhiễm của MBĐ Sựviêm nhiễm không chỉ giới hạn trong cấu trúc của MBĐ mà còn bao gồmcác cấu trúc không phải của MBĐ như: dịch kính, võng mạc, mạch máuvõng mạc, củng mạc và thượng củng mạc

* Theo tác nhân:

- Viêm MBĐ do nhiễm trùng và viêm MBĐ không do nhiễm trùng.

+ Nguyên nhân do nhiễm trùng: có thể do [11]:

Virus (nhóm Herpes gồm có: HSV, HZV, CMV) là nguyên

quan trọng

Viêm MBĐ do vi khuẩn: Hiện đã được xác định theo mức độ phổ

biến là giang mai, lao, Lyme, Bartonella, Ricketsia và viêm mủ nội nhãn

Viêm MBĐ do nấm: Thường gặp ở những bệnh nhân suy giảm miễn

dịch (ghép tạng, bệnh tự miễn, HIV, đặt sonde niệu đạo kéo dài) Các tácnhân cụ thể thường gặp là Candida, Aspergillus, Histoplasma

Viêm MBĐ do Toxoplasma rất thường gặp, có liên quan đến ký sinh

trùng chó, mèo Ấu trùng có trong thịt động vật sống như lợn, bò và đếnkhu trú ở võng mạc người gây ra viêm hắc võng mạc điển hình

+ Viêm MBD không do nhiễm trùng: do các nguyên nhân khác nhau Liên quan đến bệnh lý tự miễn như bệnh Vogt – Koyanagi – Harada,

Behcet, HLA B27, HLA A19, là một nhóm bệnh khó điều trị

Một số hội chứng giả viêm MBĐ như khối u nội nhãn

(Retinoplastoma), u lympho làm cho chẩn đoán trở nên phức tạp

* Theo giải phẫu: viêm MBĐ trước, viêm MBĐ trung gian (pars plana),

viêm MBĐ sau và viêm MBĐ toàn bộ

* Theo diễn biến: viêm MBĐ cấp, viêm MBĐ mạn tính và viêm MBĐ tái phát

- Viêm MBĐ mạn tính là viêm MBĐ tái phát sau 2 đến 3 ngày sau khidừng điều trị

- Viêm MBĐ tái phát là viêm MBĐ đã ổn định và tái xuất hiện sau 1thời gian dài có hay không có điều trị.

Viêm MBĐ mạn tính thường hay xảy ra biến chứng hơn viêm MBĐtái phát

* Theo thời gian:

- Viêm MBĐ cấp tính khi bệnh kéo dài liên tục dưới 3 tháng

- Viêm MBĐ mạn tính khi bệnh kéo dài liên tục trên 3 tháng

1.2.3 Cơ chế bệnh sinh viêm MBĐ

Viêm MBĐ cũng diễn biến theo các cơ chế sinh lý bệnh của mọi quátrình viêm khác bao gồm: cương tụ và giãn mạch, thoát dịch viêm, di thực

tế bào viêm, thực bào và làm sẹo Quá trình viêm MBĐ trước làm mạchmáu mống mắt, thể mi cương tụ, giãn mạch, thoát dịch viêm vào thủy dịchgây đục thủy dịch (Tyndall tiền phòng) Viêm mạch máu võng mạc thường

đi kèm gây tắc mạch và thiếu máu võng mạc Hoại tử võng mạc do tác dụngcủa độc tố hay tắc mạch dẫn đến rách và bong võng mạc Phù hoàng điểm

do tác động của cytokin Phù hoàng điểm kéo dài dẫn đến phù hoàng điểmdạng nang và lỗ hoàng điểm gây giảm thị lực nghiêm trọng Một số thểviêm MBĐ có xuất tiết nhiều, ổ viêm gần vùng hoàng điểm tạo sao hoàngđiểm Bong thanh dịch là đặc điểm của một số thể viêm MBĐ như hộichứng Vogt – Koyanagi – Harada Tăng sinh xơ, di thực các tế bào thầnkinh đệm và biểu mô sắc tố có thể xuất hiện ở giai đoạn cuối của quá trìnhviêm tạo nên màng trước võng mạc gây co kéo, có thể gây bong võng mạc.Sẹo hắc võng mạc hình thành làm teo tổ chức, hở lộ củng mạc và thường cólắng đọng sắc tố

1.2.4 Viêm MBĐ trước cấp tính

Viêm MBĐ trước cấp tính là thể loại viêm MBĐ hay gặp nhất Có thểxác định nguyên nhân thông qua khai thác bệnh sử và thăm khám lâm sàngcẩn thận Các xét nghiệm có ý nghĩa quan trọng trong chẩn đoán nguyênnhân nhưng không thể thay thế được khai thác bệnh sử và khám lâm sàng.Trong các xét nghiệm cận lâm sàng, xét nghiệm PCR và nuôi cấy mang ýnghĩa quan trọng Sinh thiết có thể được áp dụng để chẩn đoán phân biệtvới khối u nội nhãn

Khai thác bệnh sử bao gồm xác định các yếu tố như: sốt, sụt cân, cácdấu hiệu da, cơ, xương, đường tiêu hóa, đường tiết niệu, tiền sử bị côntrùng đốt hay điều trị trước đó (thuốc chống ung thư, đặt sonde niệu đạo).Nhiễm HIV cũng mang ý nghĩa quan trọng Khai thác bệnh sử cũng cầnlưu ý đến tiền sử phẫu thuật (glôcôm, thể thủy tinh), tiền sử chấn thương(rách giác mạc, dị vật nội nhãn, rách củng mạc), nhãn viêm giao cảm Tiền

sử dùng thuốc như corticoid, các thuốc chống miễn dịch là những yếu tốthuận lợi gây viêm MBĐ

Thăm khám cần chú ý đến thị lực, các phản xạ đồng tử, vận nhãn.Khám sinh hiển vi nhằm phát hiện các nốt hay u hạt bất thường ở kết mạc(viêm MBĐ trong hội chứng Wegener) Các dấu hiệu của giác mạc nếu cócũng mang ý nghĩa vô cùng quan trọng như: mất biểu mô giác mạc (viêmloét giác mạc hình cành cây), viêm nhu mô (viêm giác mạc hình đĩa) Cácdấu hiệu ở nội mô giác mạc như tủa giác mạc Cần đánh giá chi tiết: tủanhỏ (bụi), tủa trung bình, mức độ đều nhau hay không đều nhau (tủa mỡcừu) Màu sắc của tủa như: màu trắng (thường do virus), có sắc tố (thường

do vi khuẩn) Phân bố tủa cũng có tác dụng gợi ý xác định nguyên nhân ,

Khám tiền phòng cần xác định độ sâu tiền phòng để đánh giá khả năngđóng góc, mủ, máu trong tiền phòng và tế bào sắc tố tiền phòng Soi góctiền phòng nhằm xác định khả năng dính trước.

Mống mắt cần được xác định các khối tổ chức bất thường (u hạt trongbệnh sarcoid hay lao), teo mống mắt (do nhóm Herpes), tân mạch mống mắt(viêm MBĐ mạn tính)

Thể thủy tinh bị đục trong viêm MBĐ mạn tính kéo dài Màng xuất tiếtdiện đồng tử xảy ra trong viêm MBĐ trước cấp tính Đục bao sau hay lắngđọng chất bất thường hay gặp trong viêm MBĐ trung gian hay viêm MBĐsau Cần lưu ý đục dưới bao sau hay do dùng corticoid kéo dài

Hình 1.4 Đục dưới bao sau thể thủy tinh do corticoid

Nguồn: http://en.wikipedia.org/cataract

Đo nhãn áp thường đi kèm soi góc tiền phòng nếu thấy nhãn áp tăngcao Giãn đồng tử soi đáy mắt nhằm xác định tổn thường hoàng điểm(phù hoàng điểm, teo hoàng điểm), viêm mạch máu, viêm hắc võng mạc,bong thanh dịch võng mạc Soi võng mạc chu biên có ý nghĩa quan trọngnhằm tránh bỏ sót tổn thương như: viêm mạch máu chu biên, viêm parsplana

Xác định nguyên nhân viêm MBĐ hiện nay được coi là mấu chốt vớitất cả các bệnh nhân Các dấu hiệu cơ bản gợi ý nguyên nhân bao gồm:mắt bị bệnh (bệnh xuất hiện một bên hay cả hai bên) Những viêm MBĐ

do virus nhóm Herpes, Toxocara, Toxoplasma thường chỉ ở một bên mắt.Viêm MBĐ do Herpes thường kèm theo tăng nhãn áp, teo mống mắt, sẹo

và phù giác mạc hoặc kèm theo các những dấu hiệu điển hình khác (sốt,người mệt mỏi, mụn nước trên da, loét miệng) Tuy nhiên có nhiều loạiviêm MBĐ trước biểu hiện ở cả hai mắt như viêm MBĐ do HLA B27,viêm củng mạc

Các dấu hiệu toàn thân cần khai thác vì có ý nghĩa quan trọng Mụn bọnghay phát ban ngoài da có liên quan đến Herpes Phát ban lòng bàn tay, bànchân có liên quan đến giang mai Ban ngoài da di chuyển liên quan đến bệnhLyme và tiền sử côn trùng đốt Những bệnh da như vảy nến cũng cần đượcphát hiện

Một số dạng viêm MBĐ có kèm theo viêm tuyến lệ (hội chứngMikulicz), viêm tuyến mang tai (hội chứng Heerfordt)

Hình thái của mủ tiền phòng nếu có cũng mang ý nghĩa quan trọng

Mủ tiền phòng có thể vô khuẩn, nhiễm trùng hay do khối u nội nhãn

Viêm dịch kính cũng cần được xác định để loại trừ viêm MBĐ toàn bộhay viêm MBĐ sau lan ra trước

Xét nghiệm xác định nguyên nhân viêm MBĐ: Theo các nghiên cứu

về viêm MBĐ hiện nay, xét nghiệm nên tập trung vào nhiễm HSV, HZV,CMV, Toxoplasma, sarcoid, giang mai, lao, viêm khớp và các bệnh tựmiễn khác

1.3 Phản ứng chuỗi polymerase (PCR)

Năm 1983, Kary Mullis đã phát hiện ra các nguyên tắc cơ bản giúpông có thể phát triển và triển khai thành công kỹ thuật PCR Phương phápPCR là phương pháp dùng khuếch đại đoạn gen đích, ưu điểm lớn nhất củaphương pháp này là có xác định được hàm lượng DNA rất thấp trong mẫu,khoảng 102 copies/ml

Nguyên lý của PCR là phản ứng hóa học tổng hợp DNA dựa trên sợiDNA khuôn mẫu ban đầu nhờ hoạt động của enzym DNA-polymerase.Phản ứng dựa trên sự thay đổi nhiệt độ theo chu kỳ, ban đầu DNA khuônđược biến tính từ sợi đôi thành sợi đơn ở nhiệt độ cao (khoảng 920C), tiếptheo nhiệt độ được giảm xuống khoảng 550C đến 650C để tạo điều kiệncho mồi gắn vào DNA khuôn, sau bước này nhiệt độ lại tăng lên khoảng

720C cho enzym hoạt động tổng hợp kéo dài chuỗi DNA từ trình tự mồi,sau 3 bước nhiệt độ, quá trình được quay lại từ bước một đến bước 3, cứnhư vậy quá trình lặp lại liên tiếp khoảng 30 đến 35 chu kỳ Kết thúcphản ứng, lượng DNA tạo ra là Ax2n (A là số DNA khuôn ban đầu trongmẫu, n là chu kỳ nhiệt)

Thành phần chính tham gia phản ứng PCR là:

- DNA khuôn: là DNA của vius, vi khuẩn hay của tế bào sinh vật khác

- Mồi: là 2 trình tự nucleotide ngắn, đặc trưng cho gen cần nhân lên

- Enzym: Là emzym có hoạt tính DNA polymerase

- dNTPs: là các nucleotide dùng làm nguyên vật liệu tổng hợp DNA

- Đệm: là môi trường cho phản ứng, đệm chứa nước và một số ion cần thiết

Hình 1.5 Sơ đồ minh họa các bước phản ứng PCR

(1) Biến tính; (2) Gắn mồi; (3) Kéo dài chuỗi; (4) Sản phẩm Nguồn: PCR và một số kỹ thuật y sinh học phân tử/Tạ Thành Văn/2010

Trong một số kít thương mại như hãng Amplicor dùng một đoạn104bp trên vùng bảo tồn của gen pre-core Ngoài ra PCR giúp phát hiện độtbiến trên gen pre-core hay core promoter cũng như định lượng cccDNA(covalently closed circular DNA) trong quá trình điều trị với thuốc khángvius và interferon trên bệnh nhân

Trong kỹ thuật PCR, sau khi hoàn tất khuyếch đại đoạn DNA đích,người làm thí nghiệm phải tiếp tục làm một số bước thí nghiệm để đọc kếtquả xác định có sản phẩm khuyếch đại mong muốn trong ống phản ứng haykhông Giai đoạn này được gọi là giai đoạn thí nghiệm sau PCR Trong giaiđoạn này người làm thí nghiệm có thể thực hiện điện di sản phẩm PCR trêngel agarose để xem có vạch sản phẩm khuyếch đại đúng kích thước mongmuốn hay không, cũng có thể thực hiện thí nghiệm lại với các đoạn dò đặc

hiệu (trên màng, trên giếng hay phiến nhựa…) để xem sản phẩm khuyếchđại có trình tự mong muốn hay không Kỹ thuật PCR mà cần phải có giaiđoạn thí nghiệm để đọc và phân tích sau khi hoàn tất phản ứng khuyếch đạiđược gọi là PCR cổ điển (classical PCR).

Real-time PCR là kỹ thuật PCR mà kết quả khuyếch đại DNA đíchhiển thị được ngay sau mỗi chu kỳ nhiệt của phản ứng, chính vì vậy nênđược gọi là real-time Do đặc điểm này nên với real-time PCR người làmthí nghiệm không cần thiết phải làm tiếp các thí nghiệm để đọc và phân tíchkết quả để xác định có sản phẩm khuyếch đại đích hay không vì kết quảcuối cùng của phản ứng khuyếch đại cũng được hiển thị ngay sau khi hoàntất phản ứng khuyếch đại

* Nguyên lý phản ứng real-time PCR

Phản ứng real-time sử dụng TaqMan probe được thiết kế gồm: Một bộmồi đặc hiệu và một chuỗi oligonucleotide (probe) có trình tự bổ sung vớiđoạn trình tự khuôn nằm giữa hai mồi

Mẫu dò oligonucleotide được thiết kế với đầu 5’ gắn chất phát tín hiệuhuỳnh quang (reporter) và đầu 3’ gắn một chất kìm hãm sự phát tín hiệuhuỳnh quang phát ra từ reporter được gọi chung là quencher Mẫu dò này ởtrạng thái nguyên vẹn (không bị phân hủy) Ở trạng thái bình thường (không

bị kích hoạt) thì toàn bộ năng lượng phát ra từ reporter được truyền sangquencher khiến cho reporter không phát được tín hiệu huỳnh quang mà chỉ

có quencher phát được, nhưng máy chủ sẽ không nhận được tín hiệu vì hệthống kính lọc không phù hợp với bước sóng phát ra từ quencher

Khi phản ứng PCR diễn ra, mẫu dò sẽ bắt cặp bổ sung vào DNA khuôn

sau đó bị phân cắt bởi 5’exonuclease của TaqDNA polymerase trong quá

trình tổng hợp chuỗi Chính nhờ sự phân cắt này, reporter được giải phóngkhỏi quencher để phát tín hiệu huỳnh quang, đồng thời loại bỏ mẫu dò khỏikhuôn DNA cho phép kéo dài tiếp sản phẩm PCR Reporter bị phân cắtkhỏi khuôn DNA sau mỗi chu kỳ của phản ứng PCR có nghĩa là tín hiệuhuỳnh quang thu được tỷ lệ với sự nhân lên của sản phẩm PCR.

Hình 1.6 Nguyên lý phản ứng định lượng real-time PCR sử dụng TaqMan

probe

Nguồn: PCR và một số kỹ thuật y sinh học phân tử/Tạ Thành Văn/2010

* Kỹ thuật PCR bao gồm 3 giai đoạn khác biệt nhau và được điều hòa bởi nhiệt độ:

- Giai đoạn 1: chuỗi xoắn kép DNA khuôn bị biến tính, tách khỏi nhauthành hai chuỗi đơn nhờ nhiệt độ tăng lên (khoảng 94 - 95°C)

- Giai đoạn 2: Nhiệt độ được hạ xuống về nhiệt độ gắn mồi (40- 72°C,thường là 55°C) cho phép các đoạn oligonucleotid gắn với sợi DNA khuôn

Trong quá trình gắn mồi, enzym DNA polymerase bền với nhiệt sẽ đượchoạt hóa và bắt đầu giai đoạn kéo dài mồi.

- Giai đoạn 3: Nhiệt độ lại được nâng lên đến nhiệt độ tối ưu củaenzyme (khoảng 72°C), xúc tác cho quá trình kéo dài phân tử DNA bắt đầu

từ hai đoạn mồi

Hình 1.7 Kỹ thuật PCR (P1 và P2: các đoạn mồi)

Nguồn: PCR và một số kỹ thuật y sinh học phân tử/Tạ Thành Văn/2010

Chu kỳ nhiệt gồm ba giai đoạn trên được nhắc lại 25-40 lần Số lượngchu kỳ tùy thuộc vào từng mục đích ứng dụng cụ thể

Cuối cùng sản phẩm của phản ứng được làm lạnh về nhiệt độ phònghoặc 4°C, tùy theo mục đích ứng dụng và loại thiết bị tạo chu kỳ nhiệt được

sử dụng

* Vai trò của cặp mồi:

- Cặp mồi và đầu dò (probe) được thiết kế dựa trên chương trìnhBeacon designer, trình tự mồi và đầu dò được thiết kế trên vùng bảo tồn đặctrưng cho DNA genome của virus CMV và HSV, HZV

-Tất cả các trình tự mồi và đầu dò đều được khảo sát các đặc tính vềtrình tự nucleotide A,T,G,C; cấu trúc thứ cấp bằng phần mềm Beacondesigner Kết quả các thông số phải nằm trong giới hạn cho phép để đảmbảo sự hoạt động tốt nhất của mồi và đầu dò Các trình tự này cũng đượcBLAST với các trình gen trên NCBI để kiểm tra độ tương đồng của chúngvới các trình tự gen đích của CMV và HSV, HZV và các trình tự gen khác.Mồi được lựa chọn khi kết quả cho thấy các trình tự có độ tương đồng

100% với DNA genome của CMV,HSV, HZV và không có sự tương đồng

với các trình tự khác hoặc nếu có thì rất thấp

- Các đoạn mồi (primers) xuôi và ngược là các đoạn oligonucleotide cóchiều dài khoảng 20- 30 nucleotide có trình tự bổ sung một cách đặc hiệuvới trình tự của hai đầu đoạn DNA sẽ được nhân bản Ở giai đoạn 2 cácđoạn mồi tìm đến bắt cặp bổ sung vào hai đầu của đoạn DNA đích Giaiđoạn 3 dưới hoạt tính của men Taq polymerase để kéo các dNTP lại đầu 3’của đoạn mồi đang bắt cặp trên đầu 5’ của sợi DNA đích để bắt nguồn cho

sự tổng hợp nên mạch bổ sung Như vậy qua một chu kỳ nhiệt một DNAđích đã được nhân bản thành hai bản sao Nếu chu kỳ này được lặp đi lặplại liên tục 25 đến 40 lần thì từ một DNA đích đã nhân bản được thành 225

đến 240 bản sao, tức là đến hàng tỷ bản sao

1.3.1 Cytomegalovirus (CMV)

CMV thuộc họ Herpes viridae có acid nucleic là DNA hai sợi thẳng,capsid có đối xứng hình khối bao gồm 162 capsome, có vỏ ngoài, virusđược lấy từ màng nhân tế bào, có dạng hình cầu, đường kính từ 120 -200nm, lắp ráp trong nhân tế bào, nhạy cảm Ether, gây nhiễm nhiều loàiđộng vật và người Trên cơ thể người CMV nhân lên trong tế bào của nhiều

cơ quan như tế bào tuyến nước bọt, tế bào gan, thận, phổi Gần đây virus

này được xác định trong tế bào lympho ở máu người bệnh khỏe mạnh cóphản ứng huyết thanh dương tính

Đặc điểm cơ bản của bệnh do CMV gây ra là những thể vùi khổng lồtrong nhân tế bào bị nhiễm CMV có ba hình thái nhiễm trùng là gây hủyhoại tế bào (bệnh cấp tính), tiềm tàng và nhiễm virus thể ẩn

Đa số người bị nhiễm CMV không có triệu chứng lâm sàng Các cáthể có biểu hiện lâm sàng thường là các đối tượng có nguy cơ cao nhất như

bị nhiễm ở thời kỳ chu sinh, điều trị ức chế miễn dịch, truyền máu hoặcghép cơ quan Nhiễm CMV ở người lớn là khá phổ biến, tỉ lệ nhiễm CMVtăng dần từ thời thơ ấu đến tuổi thành niên Sự lây nhiễm virus dễ dàng dotiếp xúc gần gũi với các cá thể Người ta biết đến viêm võng mạc do CMV

là một trong những nhiễm trùng cơ hội hay gặp nhất trên các bệnh nhânAIDS, điển hình đặc trưng là có CD4+ lymphocyte < 50 tế bào/ µL Dù sốlượng ca bệnh giảm khi sử dụng phác đồ HAART nhưng các ca mới vẫnđược ghi nhận Các bệnh nhân viêm võng mạc do CMV bị giảm thị lực, cóthể dẫn đến mù nếu không được điều trị Bệnh có thể biểu hiện ở một mắthoặc hai mắt Điều trị viêm võng mạc do CMV cần phải kéo dài để ngănngừa tái phát Viêm mống mắt do CMV có thể biểu hiện từng đợt, thường

sợ ánh sáng, giảm thị lực, đau nhãn cầu Một số bệnh nhân có phù hoàngđiểm dẫn đến mất thị lực hoặc bệnh lý màng bồ đào và võng mạc tăng sinh,xuất huyết võng mạc tự phát và bong võng mạc ,

Hình 1.8 Viêm võng mạc do CMV

Nguồn: Viêm nội nhãn và viêm màng bồ đào/ Nhà xuất bản Y học/1995

1.3.2 Herpes Simplex virus (HSV)

HSV gây nhiễm cho tế bào người bởi đặc trưng gây tổn thương lớpniêm mạc và xuất hiện các tiểu thể nội bào Sự xuất hiện của virus ở nhân

và chất nguyên sinh đã được chứng minh bằng kỹ thuật miễn dịch huỳnhquang

HSV có hai type huyết thanh là HSV1 và HSV2 Chúng có khángnguyên rất giống nhau nhưng vẫn tách biệt được bằng kỹ thuật trung hòahoặc huỳnh quang Hai type này cũng gây nhiễm những cơ quan khác nhau:

- HSV1: Thường gây nhiễm phần trên thắt lưng như mắt, mồm, môi, da…

- HSV2: Thường gây nhiễm phần dưới thắt lưng, đặc biệt là nhiễmvirus đường sinh dục và tiết niệu

Nhiễm HSV lần đầu thường nặng, biểu hiện toàn thân và có thể tửvong Sơ nhiễm thường xảy ra với người chưa bị nhiễm hoặc chưa có khángthể trung hòa HSV gây sơ nhiễm thường không thể loại trừ ra khỏi cơ thể

mà nó tồn tại tiềm ẩn Tái nhiễm HSV có thể với Serotype khác Với các cáthể đã có kháng thể trung hòa chỉ bị nhiễm HSV khu trú mà không bị nhiễmtoàn thân

Tại mắt HSV có thể gây ra viêm kết mạc - giác mạc,viêm màng bồđào Viêm màng bồ đào do HSV có ba hình thái: viêm mống mắt - thể mi -giác mạc, viêm mống mắt - thể mi không có viêm giác mạc, viêm hắc võngmạc

+ Viêm mống mắt - thể mi - giác mạc do HSV: Hay gặp viêm mốngmắt - thể mi nhẹ, thoáng qua và tự ổn định Có ít tủa giác mạc, ít tế bào

trong thủy dịch Tổn thương giác mạc thường là loét giác mạc hình cànhcây hoặc viêm giác mạc hình đĩa, cảm giác giác mạc giảm.

Có thể thấy viêm mống mắt - thể mi - giác mạc nặng: cương tụ rìanhiều, tủa giác mạc to và nhiều ở toàn bộ giác mạc, thủy dịch đục nhiều, cóthể xuất huyết hoặc mủ tiền phòng, dính sau Thường có tăng nhãn áp donghẽn hoặc viêm vùng bè Hình thái này có thể do virus xâm nhập trực tiếp ởmàng bồ đào

Hình 1.9 Viêm giác mạc do HSV

A: Viêm giác mạc biểu mô/ B: Viêm giác mạc nhu mô

Nguồn: Viêm nội nhãn và viêm màng bồ đào/ Nhà xuất bản Y học/1995

+ Viêm mống mắt - thể mi không có viêm giác mạc do HSV: Tổnthương do virus xâm nhập trực tiếp ở màng bồ đào, có thể kèm theo tổnthương Herpes ở mặt hoặc ở đường sinh dục Mắt đau đỏ, tủa giác mạcnhiều, Tyndall dương tính, tiền phòng có thể có mủ hoặc máu, dính sau, cóthể teo mống mắt từng mảng và thường teo mống mắt ở gần cơ vòng đồng

tử Hay có tăng nhãn áp do viêm vùng bè hoặc dính trước Có thể có biếnchứng đục thủy tinh thể

Hình 1.10 Viêm mống mắt thể mi do HSV

Nguồn: Viêm nội nhãn và viêm màng bồ đào/ Nhà xuất bản Y học/1995

+ Viêm hắc võng mạc do HSV: Tổn thương do virus xâm nhập vàohắc mạc hoặc do một quá trình miễn dịch trong đợt nhiễm HSV toàn thân

có thể có viêm não do HSV Những ổ viêm hắc võng mạc hoại tử ở cả haimắt, xuất tiết màu vàng trắng, ranh giới rõ, võng mạc phù đục tỏa lan, đụcdịch kính Có thể có viêm quanh mạch máu, xuất huyết võng mạc, phù gaithị Bong võng mạc xuất tiết là biến chứng phổ biến Khi viêm thành sẹo, cóbiến đổi sắc tố võng mạc, những vùng mất sắc tố và những vùng tăng sinhsắc tố

1.3.3 Herpes Zoster virus (HZV)

Thông thường viêm màng bồ đào do HZV là một viêm giác mạc mống mắt thứ phát sau bệnh giác mạc Đôi khi viêm mống mắt có thể xảy

-ra mà không có viêm giác mạc rõ ràng Trong nhiều trường hợp viêm trởthành mạn tính Cần nghĩ đến HZV trong chẩn đoán phân biệt của mốngmắt - thể mi một bên mạn tính, ngay cả khi triệu chứng da đã có trong quákhứ hoặc thậm chí nếu có thì rất ít ,

Những mụn nước ở cạnh đầu mũi chứng tỏ tổn thương thần kinh mũi –

mi và có nhiều khả năng mắt sẽ bị tổn thương

Tủa trong viêm MBĐ do HZV đôi khi có hình sao Tủa giác mạc hìnhsao thường phân bố tỏa lan, trái ngược với phân bố thông thường ở mộtphần ba dưới giác mạc (tam giác Arlt) Ngoài ra tủa giác mạc nhỏ và hìnhdạng sợi, thường có hình sao rõ ràng khi khám bằng sinh hiển vi với độphóng đại cao Ở những bệnh nhân có bệnh Herpes và giác mạc đồngthời, dù nhẹ đến mức nào, viêm phần trước cũng có thể kèm theo giảmcảm giác giác mạc tỏa lan hoặc khu trú và viêm giác mạc do dinh dưỡngthần kinh

Teo mống mắt cũng đặc hiệu cho viêm do Herpes, đặc biệt là HerpesZoster Đối với Herpes Zoster teo thường xảy ra ở gần chân mống mắt.Teo mống mắt khu vực là đặc điểm của Herpes Zoster, nó gây ra viêmtắc mạch máu nhu mô mống mắt là nguyên nhân của hình thái khác biệtnày ,

Viêm võng mạc do HZV có thể gặp, đặc biệt ở những cá thể bị suygiảm miễn dịch Viêm mạch máu thường xảy ra trong bệnh Zona mắt vàgây thiếu máu cục bộ phần trước, tắc động mạch võng mạc và viêm củngmạc Viêm mạch máu trong hốc mắt có thể dẫn đến liệt cơ

Hình 1.11 Viêm mống mắt thể mi do HZV

Nguồn: Viêm nội nhãn và viêm màng bồ đào/Nhà xuất bản Y học/1995

1.4 Tình hình nghiên cứu về nguyên nhân gây viêm MBĐ trên thế giới

và tại Việt Nam

Năm 2002, nhóm các tác giả gồm Christina Canakis và cộng sự trongmột báo cáo tại tạp chí nhãn khoa Mỹ đã đề cập đến 2 trường hợp bị viêmMBĐ trước có teo mống mắt khu vực và kèm theo tăng nhãn áp ảnh hưởngđến thần kinh thị giác mà nguyên nhân gây ra là do CMV Các tác giả cũng

đã điều trị cho 2 bệnh nhân này bằng thuốc kháng virus Ganciclovir và chokết quả đáp ứng khá tốt Sau quá trình nghiên cứu họ đã đưa ra kết luận làquá trình nhiễm CMV có thể sản xuất ra những chất tấn công MBĐ gây ranhững đợt tái phát viêm MBĐ với những đặc điểm lâm sàng không thể nhậnbiết được từ những dấu hiệu gợi ý trước đó hoặc thậm chí đặc trưng bệnhviêm do Herpes

Soon Phaik Chee và cộng sự (2004 – 2006) đã nghiên cứu tại Trungtâm mắt quốc gia Singapore trên 105 mắt bị viêm MBĐ trước của nhữngbệnh nhân không bị nhiễm HIV bằng cách lấy thủy dịch và phân tích bằngxét nghiệm PCR, đã đưa ra kết quả sau: 24 mắt dương tính với CMV, chiếm

tỷ lệ 22,8%; trong đó 18 mắt có hội chứng Posner – Schlossman (tỷ lệ75%); 12 mắt trong số 24 mắt có CMV dương tính được điều trị bằngthuốc kháng virus Ganciclovir Kết thúc điều trị cả 12 mắt đều có đápứng tốt, kết quả làm xét nghiệm PCR chứng minh CMV âm tính trongthủy dịch Tuy nhiên sau đó 9 mắt bị tái phát trong vòng 8 tháng sau khidừng điều trị và yêu cầu phải điều trị tiếp một đợt Ganciclovir kéo dàihơn 81 mắt còn lại có CMV âm tính bao gồm 30 mắt bị hội chứngPosner – Schlossman, 11 mắt bị viêm mống mắt dị sắc Fush, 27 mắt bịviêm màng bồ đào tăng nhãn áp không rõ nguyên nhân và 13 mắt viêmMBĐ trước nghĩ nhiều do Herpes Sau quá trình nghiên cứu với các kết

quả thu được, tác giả đã đưa ra kết luận viêm MBĐ trước do CMV khôngphải là hiếm thấy ở bệnh nhân có miễn dịch bình thường và nó có thể như

là đợt tái phát cấp hoặc viêm mạn tính ,

Một số nhóm nghiên cứu khác như Schryver và cộng sự (2006), VanBoxtel (2007) cũng đề cập tới sự có mặt của CMV trong thủy dịch của bệnhnhân bị viêm MBĐ trước và cho đây là nguyên nhân gây viêm MBĐ trướccủa những bệnh nhân này Các nhóm tác giả này đã điều trị cho bệnh nhânbằng thuốc kháng virus Gancicilovir cho kết quả khá tốt, tỷ lệ khỏi bệnh và

Chương 2

Đối tượng và phương pháp nghiên cứu

2.1 Đối tượng nghiên cứu

Những người bệnh đến khám tại bệnh viện Mắt Trung Ương đượcchẩn đoán viêm MBĐ trước cấp tính, thời gian từ tháng 5/2016 đếntháng 8/2017

2.1.1 Tiêu chuẩn lựa chọn bệnh nhân

- Người bệnh được chẩn đoán viêm MBĐ trước cấp tính

- Người bệnh đồng ý tham gia nghiên cứu

2.1.2 Tiêu chuẩn loại trừ

- Những người bệnh già yếu trên 75 tuổi và trẻ dưới 15 tuổi do khóhợp tác trong nghiên cứu

- Những người có bệnh toàn thân không cho phép tham gia nghiên cứunhư mắc bệnh tâm thần, bệnh tăng huyết áp, bệnh tim mạch…

- Người bệnh đang có tổn thương viêm, loét giác mạc kèm theo

- Viêm MBĐ thứ phát sau chấn thương đụng dập hoặc chấn thươngxuyên nhãn cầu

- Viêm MBĐ đã xác định được nguyên nhân khác như: hội chứngVogt – Koyanagi – Harada, Behcet, Nhãn viêm giao cảm…

2.2 Phương pháp nghiên cứu và phương tiện nghiên cứu

2.2.1 Thiết kế nghiên cứu

- Nghiên cứu tiến cứu, mô tả cắt ngang

- Cỡ mẫu nghiên cứu được tính theo công thức:

2 ) (

) 1 (

2 ) 2 / 1 (





p

p p

Z

Trong đó: N: là số lượng người bệnh nghiên cứu

p: là tỉ lệ người bệnh dương tính với CMV trên tổng số người bệnh

bị viêm MBĐ trước cấp tính (p = 22,8%) [39]

Z (1 – α/2): là độ tin cậy của xác suất với α = 0,05 thì Z (1 – α/2) = 1,96

 : là khoảng sai lệch tương đối, chọn  = 0,1

Qua tính toán, tổng số người bệnh mắc bệnh viêm MBĐ trước cấptính cần nghiên cứu là 25 bệnh nhân

2.2.2 Phương tiện nghiên cứu

- Bảng thử thị lực Snellen

- Hộp thử kính

- Bộ đo nhãn áp Maclakov với quả cân 10g

- Máy sinh hiển vi khám bệnh Inami của Nhật Bản

- Kính Volk +90D soi đáy mắt đảo ngược

- Kính soi góc Goldman một mặt gương

- Máy sinh hiển vi phẫu thuật

- Thuốc tê tra mắt Dicain1%

- Dung dịch Betadin 5%

- Kim1ml (30G ×8mm) chọc lấy dịch tiền phòng và đựng bệnh phẩm(đóng gói vô khuẩn do Mỹ sản xuất)

- Điều trị trước khi đến viện.

- Tiền sử cá nhân, gia đình có mắc bệnh tại mắt và toàn thân

2.3.2 Thăm khám mắt

- Thử thị lực bằng bảng Snellen

- Đo nhãn áp bằng nhãn áp kế Maclakov với quả cân 10g

- Khám bằng đèn khe máy sinh hiển vi khám bệnh để phát hiện tìnhtrạng tổn thương bán phần trước nhãn cầu: kết mạc, giác mạc, tiền phòng,mống mắt, đồng tử, thủy tinh thể Kết hợp sử dụng kính Goldmann một mặtgương để đánh giá tình trạng góc tiền phòng

- Soi đáy mắt bằng kính Volk +90D kết hợp máy sinh hiển vi khámbệnh (nếu còn soi được đáy mắt) để đánh giá tình trạng bán phần sau nhãncầu: dịch kính, võng mạc, gai thị, hoàng điểm

2.3.3 Lấy bệnh phẩm làm xét nghiệm PCR

Chúng tôi tiến hành cho người bệnh làm xét ngiệm PCR bằng cách lấydịch tiền phòng trong điều kiện vô trùng của phòng mổ Các bước tiến hànhnhư sau:

- Người bệnh được giải thích kỹ, viết giấy cam đoan tham gia nghiêncứu khoa học, được cho mặc quần áo bệnh nhân và đưa lên phòng mổ

- Sát trùng mắt lấy bệnh phẩm bằng Betadin 5% hai lần, mỗi lần cáchnhau 1 phút, nhỏ gây tê bề mặt bằng Dicain 1% × 2 giọt

- Người lấy bệnh phẩm rửa tay vô khuẩn, mặc áo vô khuẩn và đi găngtay vô khuẩn (qui trình như chuẩn bị cho một ca phẫu thuật)

- Người bệnh được nằm trên bàn mổ, trải phủ săng vô khuẩn và đượclấy mẫu bệnh phẩm: Qua máy sinh hiển vi phẫu thuật dùng kim 1ml (loạikim 30G * 8mm) chọc qua vùng rìa giác mạc vào tiền phòng, hút lấy 0,1 mldịch tiền phòng rồi đậy đầu kim vô trùng, đặt kim này vào hộp vô khuẩn,bảo quản lạnh (180 - 250 C) gửi sang trung tâm nghiên cứu Gen-Protein củatrường đại học Y Hà Nội làm xét nghiệm

- Sau đó người bệnh được tra dung dịch Betadin 5%, tra mỡ khángviêm corticoid, kháng sinh, băng vô trùng mắt

- Người bệnh được điều trị theo phác đồ thông thường cho một viêmMBĐ trước cấp tính: Nhỏ Atropin 1%, dùng kháng sinh, kháng viêm steroid

và non - steroid tại chỗ và toàn thân

- Người bệnh được hẹn khám lại sau khi có kết quả xét nghiệm dịchtiền phòng

* Quy trình ly trích DNA:

Ly trích DNA bằng bộ kit ly trích QIAamp DNA mini USA) theo hướng dẫn của nhà sản xuất

(QIAGEN-Hình 2.2 Kit QIAamp DNA mini ly trích DNA

Nguồn: PCR và một số kỹ thuật y sinh học phân tử/Tạ Thành Văn/2010

+ Đặt mẫu vào ống Axygen, thêm 200 µl PBS 1X vào từng ống Ủkhoảng 5 phút ở trong máy real-time PCR

+ Thêm 10 µl protease K và 200 µl dung dịch đệm AL Trộn đều bằngcách voltex 15 giây Quay dưới 10 giây

+ Ủ 56oC 10 phút Quay dưới 10 giây

+ Thêm 200 µl Ethanol 100% lạnh vào rồi lắc nhẹ Quay dưới 10 giây.Cho tất cả hỗn hợp này vào ống (1) có chứa QIAGEN (ống QIAGEN:610µl) + Đậy nắp ống (1) lại Quay ly tâm 8.000 vòng trong 1 phút

+ Lấy các chất có trong ống (1) cho vào 1 ống mới (ống 2), bỏ ống (1) đi.+ Cho 500 µl dung dịch rửa AW1 vào ống (2) Ly tâm 8.000 vòngtrong 1 phút

+ Lại lấy các chất trong ống (2) cho vào 1 ống mới (ống 3), bỏ ống (2)

+ Cho 500 µl dung dịch rửa AW2 vào ống (3) Ly tâm 14.000 vòng 3 phút+ Lấy các chất trong ống (3) cho vào 1 ống Axygen mới (ống 4), bỏ ống (3) + Ly tâm 14.000 vòng 1 phút Lấy ống (4) cho vào 1 ống mới (ống 5), bỏống (4) Cho 100 µl dung dịch hòa tan AE vào ống (5) Ủ khoảng 1 phút ởnhiệt độ phòng, quay ly tâm 8.000 vòng trong 1 phút để ly trích được DNA.+ DNA sau tách chiết được kiểm tra bằng đo OD và điện di trên gelAgarose.

Độ tinh khiết của dung dịch DNA được xác định bằng tỷ lệ giữa độhấp thụ quang của dung dịch DNA ở bước sóng 260 nm và 280 nm (A260/A280) Độ tinh khiết tốt nhất trong khoảng 1,8 – 2,0 Nếu độ tinh khiết <1,6chứng tỏ mẫu còn lẫn protein, dựa vào mục đích sử dụng DNA tách chiếtđược để xem xét có thể sử dụng được hay phải tinh sạch lại Độ tinh khiếtđược kiểm tra song song bằng điện di dung dịch DNA trên gel agarose 1%

2.4 Các biến số, chỉ số đánh giá kết quả

2.4.1 Đặc điểm lâm sàng của bệnh nhân bị viêm MBĐ trước cấp tính

Tuổi

Chúng tôi chia độ tuổi người bệnh thành các nhóm: dưới 20 tuổi,

21-40 tuổi, 41- 60 tuổi và trên 60 tuổi

 Giới

Chia thành 2 nhóm: nam và nữ

Thời gian mắc bệnh trong năm

Chúng tôi chia bệnh nhân thành 6 nhóm theo thời gian trong năm nhưsau: Tháng 5 - tháng 6, tháng 7 - tháng 8, tháng 9 - tháng 10, tháng 11 -tháng 12, tháng 1 - tháng 2 và tháng 3 - tháng 4

- 1 mắt: mắt phải hay mắt trái.

- 2 mắt: luân phiên hay đồng thời

Triệu chứng chủ quan

- Nhìn mờ hay không nhìn mờ

- Đau nhức hay không đau nhức mắt

- Chảy nước mắt hay không chảy

Để đánh giá tình trạng giác mạc chúng tôi chia theo các mức độ sau:

- Giác mạc trong: giác mạc trong suốt, trên sinh hiển vi nhìn rõ cácthành phần phía sau giác mạc

- Giác mạc phù nhẹ: có nếp gấp màng Descemet, trên sinh hiển vi vẫnnhìn rõ các thành phần phía sau giác mạc

- Giác mạc phù vừa: giác mạc phù, mất trong suốt Trên sinh hiển viquan sát các thành phần phía sau giác mạc mờ

- Giác mạc phù nặng: giác mạc phù dày, trắng đục, bọng biểu mô.Trên sinh hiển vi không nhìn thấy hoặc lờ mờ thấy các thành phần sau giác mạc

Tủa mặt sau giác mạc

Đánh giá về vị trí, số lượng, kích thước, màu sắc, hình dạng

* Vị trí:1/2 dưới giác mạc, trung tâm giác mạc hoặc toàn bộ mặt saugiác mạc

* Số lượng:

- Tủa ít: có thể đếm được khi khám bằng máy sinh hiển vi và ≤ 10 tủa

- Tủa vừa: khi khám bằng máy sinh hiển vi nhiều hơn 10 tủa và cònđếm được.

- Tủa nhiều: không đếm được khi khám bằng máy sinh hiển vi

* Kích thước: tủa nhỏ như bụi, tủa trung bình hoặc tủa to đốm như mỡ cừu

* Màu sắc: tủa màu trắng hoặc màu nâu

* Hình dạng: tủa hình tròn hoặc hình khía

Tiền phòng

Đánh giá độ sâu tiền phòng, mức độ Tyndall trong tiền phòng

* Độ sâu: Đo độ sâu tiền phòng theo phương pháp Smith

0+: Không có tế bào viêm

1+: dưới 10 tế bào viêm

2+: 10 - 20 tế bào viêm

3+: 20 - 30 tế bào viêm

4+: Tế bào viêm rất nhiều, không thể đếm được

Mủ hoặc máu trong tiền phòng

Tình trạng mống mắt

* Màu sắc: Nâu xốp, bạc màu hay dị sắc

* Tổn hại teo nhu mô mống mắt:

Có teo nhu mô hay không teo nhu mô mống mắt

- Đục độ 4: đục nhiều, nâu sẫm, ánh đồng tử màu tối

- Đục độ 5: đục nhiều nâu đen, ánh đồng tử tối

4

Grade 3

Đặc điểm toàn thân

- Test HIV: dương tính hoặc âm tính

2.4.2 Kết quả xét nghiệm PCR thủy dịch

CMV

- Dương tính: khi làm phản ứng real-time PCR đường biểu diễn vượtcao hơn đường nền

Hình 2.4 Đường biểu diễn real-time PCR dương tính với CMV

Nguồn: PCR và một số kỹ thuật y sinh học phân tử/Tạ Thành Văn/2010

- Âm tính: khi làm phản ứng real-time PCR đường biểu diễn thấp hơnđường nền.

Hình 2.5 Đường biểu diễn real-time PCR âm tính với CMV

Nguồn: PCR và một số kỹ thuật y sinh học phân tử/Tạ Thành Văn/2010

* Chúng tôi so sánh đặc điểm lâm sàng của người bệnh nhóm CMVdương tính và nhóm CMV âm tính về tuổi, giới, nhãn áp, tình trạng mống mắt,đồng tử, hình thái tủa, số lượng tủa, vị trí, kích thước tủa, Tyndall tiền phòng

 HSV, HZV

- Dương tính: khi làm phản ứng real-time PCR đường biểu diễn vượtcao hơn đường nền

Hình 2.6 Đường biểu diễn real-time PCR dương tính với HSV, HZV

Nguồn: PCR và một số kỹ thuật y sinh học phân tử/Tạ Thành Văn/2010

Mẫu chứng âm Chứng nội

Mẫu xét nghiệm1

- Âm tính: khi làm phản ứng real-time PCR đường biểu diễn thấp hơnđường nền.

Hình 2.7 Đường biểu diễn real-time PCR âm tính với HSV, HZV

Nguồn: PCR và một số kỹ thuật y sinh học phân tử/Tạ Thành Văn/2010

* So sánh đặc điểm lâm sàng của người bệnh nhóm HSV, HZVdương tính và nhóm HSV, HZV âm tính về tuổi, giới, nhãn áp, tình trạngmống mắt, đồng tử, hình thái tủa, số lượng tủa, vị trí, kích thước tủa,Tyndall tiền phòng

* So sánh đặc điểm lâm sàng của người bệnh nhóm CMV dương tính

và nhóm HSV, HZV dương tính về tuổi, giới, nhãn áp, tình trạng mống mắt,đồng tử, hình thái tủa, số lượng tủa, vị trí, kích thước tủa, Tyndall tiềnphòng

2.4.3 Thu thập và xử lý số liệu

Các số liệu thu được trong quá trình thăm khám lâm sàng và xétnghiệm của bệnh nhân được ghi chép đầy đủ, chi tiết vào các mẫu bệnh ánnghiên cứu Chúng tôi xử lý số liệu bằng phần mềm SPSS 16.0 và sử dụngcác thuật toán thống kê để phân tích và đánh giá kết quả

Mẫu chứng âm Chứng nội

2.5 Đạo đức trong nghiên cứu

- Đề cương nghiên cứu đã được hội đồng khoa học của trường ĐạiHọc Y Hà Nội và bệnh viện Mắt Trung Ương thông qua

- Đối tượng nghiên cứu được giải thích rõ về tình hình bệnh tật, cáchthức tiến hành, triển vọng và biến chứng có thể xảy ra

- Người bệnh và gia đình tự nguyện chấp nhận tham gia vào nghiêncứu, được ký giấy cam đoan và có thể chấm dứt ở bất kỳ thời điểm nào củanghiên cứu

- Các trường hợp từ chối nghiên cứu được chấp nhận và không bị phânbiệt đối xử

- Các tai biến và biến chứng nếu có xảy ra sẽ được thông báo trungthực, đầy đủ và có biện pháp xử lý, khắc phục tới mức tốt nhất

- Số liệu thu thập phải mang tính chính xác, khách quan theo biểu mẫu

Chỉ có 10% số bệnh nhân trên 60 tuổi Có 46,7% số bệnh nhân từ 21

-40 tuổi và 43,3% số người 41 - 60 tuổi

Trong nghiên cứu này, tỷ lệ bệnh nhân nam và nữ là cân bằng với 50%

Về thời gian bị bệnh: 100% bệnh nhân trong nghiên cứu của chúng

tôi có thời gian bị bệnh dưới 1 tháng

93.3%

6.7%

Lần đầu Tái phát ít

Biểu đồ 3.3 Phân bố số lần tái phát bệnh

Nhận xét: