Qui trình giám định tuyến trùng bào nang là đối tượng kiểm dịch thực vật của Việt Nam

Qui trình giám định tuyến trùng bào nang là đối tượng kiểm dịch thực vật của Việt NamQui trình giám định tuyến trùng bào nang là đối tượng kiểm dịch thực vật của Việt NamQui trình giám định tuyến trùng bào nang là đối tượng kiểm dịch thực vật của Việt NamQui trình giám định tuyến trùng bào nang là đối tượng kiểm dịch thực vật của Việt NamQui trình giám định tuyến trùng bào nang là đối tượng kiểm dịch thực vật của Việt Nam

10 TCN 583 - 2003 tiêu chuẩn ngành Tuyển tập tiêu chuẩn bảo vệ thực vật 10 TCN 583 - 2003 qui trình giám định tuyến trùng bào nang đối tợng Kiểm dịch thực vật Việt Nam The procedure of identification for cyst Nematodes - Plant Quarantine Pests of Vietnam Phạm vi đối tợng áp dụng 1.1 Phạm vi Quy trình áp dụng thống phạm vi toàn quốc 1.2 Đối tợng Quy trình áp dụng cho việc giám định tuyến trùng bào nang thuộc danh mục đối tợng KDTV Việt Nam ban hành kèm theo Quyết định số 117/2000/QĐ-BNN-BVTV ngày 20/11/2000 Bộ trởng Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn Tiêu chuẩn trích dẫn Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 4731 - 89 Kiểm dịch thực vật - Phơng pháp lấy mẫu, 1989 Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 3937 - 2000 Kiểm dịch thực vật Thuật ngữ Định nghĩa, 1999 Tiêu chuẩn ngành 10 TCN 336 - 98 Kiểm dịch thực vật - Phơng pháp kiểm tra củ, xuất, nhập cảnh, 1998 Tiêu chuẩn ngành 10 TCN 336 - 98 Kiểm dịch thực vật - Phơng pháp kiểm tra loại hạt xuất, nhập cảnh, 1998 Tiêu chuẩn ngành 10 TCN 336 - 98 Kiểm dịch thực vật - Phơng pháp kiểm tra xuất, nhập cảnh, 1998 Thuật ngữ định nghĩa Trong tiêu chuẩn thuật ngữ dới đợc hiểu nh sau: 3.1 Đối tợng kiểm dịch thực vật loài sinh vật có tiềm gây tác hại nghiêm trọng tài nguyên thực vật vùng mà loài sinh vật cha xuất xuất có phân bố hẹp 168 10 TCN 583 - 2003 Tuyển tập tiêu chuẩn bảo vệ thực vật 3.2 Thực vật phận sống bao gồm hạt giống 3.3 Vật thể thuộc diện kiểm dịch thực vật thực vật, sản phẩm thực vật, phơng tiện sản xuất, bảo quản, vận chuyển vật thể khác có khả mang đối tợng kiểm dịch thực vật 3.4 Dịch hại thực vật loài, dòng, dạng sinh học thực vật, động vật tác nhân gây hại cho thực vật sản phẩm thực vật 3.5 Lô vật thể lợng định vật thể có điều kiện yếu tố giống khả nhiễm dịch 3.6 Mẫu khối lợng thực vật, sản phẩm thực vật đất đợc lấy theo qui tắc định 3.7 Mẫu ban đầu khối lợng mẫu thực vật, sản phẩm thực vật đất đợc lấy từ vị trí lô vật thể 3.8 Mẫu chung mẫu gộp mẫu ban đầu 3.9 Mẫu trung bình khối lợng thực vật, sản phẩm thực vật đất đợc lấy từ mẫu chung theo qui tắc định, dùng để làm mẫu lu mẫu phân tích 3.10 Mẫu phân tích khối lợng thực vật, sản phẩm thực vật đất đợc dùng để phân tích tuyến trùng phòng thí nghiệm 3.11 Tiêu mẫu vật điển hình tiêu biểu tuyến trùng bào nang đợc dùng cho việc định loại, nghiên cứu, giảng dạy, phổ biến kỹ thuật bảo tàng 3.12 Tuyến trùng bào nang loài tuyến trùng ký sinh thuộc Họ phụ Heteroderinae, Họ Heteroderidae, Bộ Tylenchida Trong trình phát triển, tuyến trùng phình to dần thành hình cầu, hình lê hình hạt chanh Đẻ trứng thể, đến thời điểm định, tuyến trùng chết trở thành bào nang bảo vệ trứng trớc tác động bất lợi điều kiện ngoại cảnh Phơng pháp thu thập bảo quản mẫu 4.1 Thu thập mẫu - Đối với thực vật, sản phẩm thực vật xuất, nhập khẩu, cảnh vận chuyển nớc: Tiến hành lấy mẫu theo phơng pháp tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 4731 - 89: Kiểm dịch thực vật - Phơng pháp lấy mẫu - Đối với trồng đồng ruộng: Lấy mẫu theo Phơng pháp Tiêu chuẩn ngành số 10 TCN 224 - 2003 4.2 Bảo quản mẫu - Mẫu rễ củ thu đợc để túi polyethylen bảo quản tủ lạnh nhiệt độ - 10oC nhiệt độ phòng 169 Tuyển tập tiêu chuẩn bảo vệ thực vật 10 TCN 583 - 2003 - Mẫu đất thu đợc để khô tự nhiên điều kiện nhiệt độ phòng sấy nhiệt độ 35 - 40oC đất khô để bào nang dễ dàng tách rời khỏi đất 5.1 Phơng pháp tách lọc tuyến trùng làm tiêu giám định Tách tuyến trùng bào nang khỏi đất rễ 5.1.1 Tách tuyến trùng bào nang khỏi đất: Có ba phơng pháp tách lọc tuyến trùng khỏi đất 5.1.1.1 Lọc qua giấy Buhr: khối lợng mẫu đất từ - 100gam - Cho đất vào cốc chứa 0,5 lít nớc, cho thêm vào - giọt dung dịch kiềm bão hoà (NaOH KOH), khuấy - Đổ hỗn hợp dịch qua rây có đờng kính mắt lỗ 2mm để lọc đá, rác - Lấy giấy lọc xung quanh mặt cốc thuỷ tinh cho hai mép giấy chồng lên cm, đổ dịch lọc vào khuấy theo chiều phút sau dừng lại cho bào nang bám vào mép giấy lọc - Lấy giấy lọc v quan sát trực tiếp bào nang rửa giấy lọc vào cốc nớc đổ nớc lên rây có đờng kính mắt lỗ 0,05 - 0,1 mm, quan sát kính lúp cầm tay có độ phóng đại 10 lần (10 X) 5.1.1.2 Dùng dung dịch NaCl: khối lợng mẫu đất từ 10 - 100gam - Pha dung dịch NaCl nồng độ 10% - Cho đất vào dung dịch NaCl trên, khuấy cho bào nang lên - Đổ hỗn hợp dịch nói qua rây có đờng kính mắt lỗ 2mm để lọc đá, rác - Đổ hỗn hợp dịch qua rây có đờng kính mắt lỗ 0,05 - 0,1 mm để giữ lại bào nang - Quan sát bào nang thu đợc kính lúp cầm tay có độ phóng đại 10 lần (10X) 5.1.1.3 Dùng bình lọc Fenwick (hình 1): khối lợng mẫu đất từ 100 - 250 gam 170 10 TCN 583 - 2003 Tuyển tập tiêu chuẩn bảo vệ thực vật Hình Bình Fenwick để tách bào nang đất Ghi chú: Mẫu đất giám định Máng thu bào nang Phễu lọc Đờng máng thu bào nang Bình lọc Rây thu bào nang Đáy phễu lọc Đáy bình lọc Vòi nớc 10 Vòi bình - Đổ đất vào rây có đờng kính mắt lỗ 2mm, xối nớc trực tiếp vào đất để đất tan vào bình lợng nớc gần đầy bình, loại bỏ phần cặn rây - Mở vòi bình lọc với tốc độ chảy vừa phải cho hạt đất tiếp tục chìm xuống bào nang lên mặt nớc tràn qua miệng bình theo máng dẫn xuống rây thu bào nang có đờng kính mắt lỗ 0,05 - 0,1 mm phía dới - Hong khô rây thu bào nang quan sát đếm 5.1.2 Tách tuyến trùng bào nang khỏi rễ: - Rửa rễ dới vòi nớc, thu phần nớc rửa lọc qua rây có đờng kính mắt lỗ 0.05 - 0,1 mm Hong khô rây đa lên kính lúp soi có độ phóng đại từ 40 - 70 lần để quan sát đếm bào nang - Cắt rễ rửa, ngâm đĩa petri có chứa nớc Sau 24giờ, đa đĩa petri lên kính lúp soi có độ phóng đại từ 40 - 70 lần để quan sát bào nang tuyến trùng 5.2 Làm tiêu lỗ hậu môn tuyến trùng: - Ngâm tuyến trùng bào nang tách lọc nớc 24giờ 171 Tuyển tập tiêu chuẩn bảo vệ thực vật 10 TCN 583 - 2003 - Vớt ra, quan sát dới kính lúp soi có độ phóng đại từ 40 - 70 lần dùng dao lam cắt lấy phần thân có hậu môn (xem hình 2) Phần thân có hậu môn Phần bỏ Hình Cách cắt tiêu phần thân có hậu môn - Đặt phần thân có hậu môn lên lam kính, nhỏ vài giọt glyxerin để quan sát dới kính hiển vi Trình tự giám định Quan sát tiêu dới kính hiển vi tiêu sau - Hình dạng đo chiều dài kim hút, đếm số vòng vùng môi, quan sát gai giao hợp đuôi tuyến trùng đực - Hình dạng đo kích thớc tuyến trùng - Hình dạng đo kích thớc trứng - Màu sắc, nếp nhăn đờng vân, vị trí lỗ sinh dục bào nang - Đặc điểm lỗ hậu môn Đặc điểm hình thái, giải phẫu tuyến trùng bào nang ánh vàng khoai tây Heterodera rostochiensis Wollenweber tuyến trùng bào nang khoai tây Heterodera pallida Stone đợc trình bày phụ lục Thẩm định kết giám định báo cáo Sau khẳng định kết giám định tuyến trùng bào nang đối tợng kiểm dịch thực vật Việt Nam, đơn vị giám định phải báo cáo Cục Bảo vệ thực vật (kèm phiếu kết giám định), đồng 172 10 TCN 583 - 2003 Tuyển tập tiêu chuẩn bảo vệ thực vật thời gửi tiêu mẫu tuyến trùng bào nang Trung tâm Phân tích giám định thí nghiệm KDTV để phúc tra Đơn vị lần giám định phát đợc tuyến trùng bào nang đối tợng KDTV Việt Nam phải gửi mẫu tiêu Trung tâm Phân tích giám định thí nghiệm KDTV để thẩm định trớc định công bố dịch xử lý Đơn vị giám định phải lu mẫu thời hạn tháng để giải khiếu nại kết giám định (nếu có) Mẫu phiếu kết giám định nh phụ lục Phụ lục 1 Đặc điểm nhận dạng tuyến trùng bào nang ánh vàng khoai tây Heterodera rostochiensis Wollenweber - Đối tợng kiểm dịch thực vật nhóm I Việt Nam - Con cái: Hình cầu, đờng kính 0,5 - 0,8 mm - Trứng: Hình bầu dục dài, kích thớc 102 x 42 - Bào nang: Hình cầu, màu nâu đỏ, nhỏ nh đầu đinh ghim, bề mặt có đờng vân chấm hợp lại Lỗ sinh 173 Tuyển tập tiêu chuẩn bảo vệ thực vật 10 TCN 583 - 2003 dục lỗ hậu môn bé Lỗ sinh dục nằm giao điểm đờng vân tạo thành hình chữ V (nhìn nh mảnh vòng cung) - Con đực: Hình giun, dài 1mm, kim hút khỏe, dài 27 - 28 Gốc chân kim hút nhỏ tròn (hình 3) Đầu tuyến trùng thuôn múp, vùng môi có - vòng, có gai giao hợp, đuôi tròn ngắn Đặc điểm nhận dạng tuyến trùng bào nang khoai tây Heterodera pallida Stone - Đối tợng kiểm dịch thực vật nhóm I Việt Nam - Con hình cầu, đờng kính 0,5 - 0,8 mm - Trứng hình bầu dục dài, kích thớc 102 x 42 - Bào nang hình cầu, màu nâu, nhỏ nh đầu đinh ghim, bề mặt có đờng vân chấm hợp lại Lỗ sinh dục lỗ hậu môn bé Lỗ sinh dục nằm giao điểm đờng vân không tạo thành hình chữ V - Con đực hình giun, dài 1mm, kim hút khỏe, dài 27 - 28 Gốc chân kim hút to, thô nhô phía trớc (hình 3) Đầu tuyến trùng thuôn múp, vùng môi có vòng, có gai giao hợp, đuôi tròn ngắn Đầu Thân Gốc Heterodera pallida Stone Heterodera rostochiensis Wollenweber Hình 3: Hình dạng kim hút tuyến trùng bào nang Heterodera rostochiensis Wollenweber Heterodera pallida Stone Lu ý: Thông thờng, số lợng cá thể nghiên cứu phải đảm bảo 30 (n = 30) Trong trờng hợp số lợng cá thể phát đợc cá thể tuyến trùng có đặc điểm nhận dạng nh cho phép kết luận loài Heterodera rostochiensis Wollenweber Heterodera pallida Stone (chỉ áp dụng đơn vị giám định đợc tuyến trùng Heterodera rostochiensis Wollenweber Heterodera pallida Stone) Phụ lục 174 10 TCN 583 - 2003 Tuyển tập tiêu chuẩn bảo vệ thực vật Cộng hoà xã hội chủ nghĩa Việt Nam Độc lập Tự Hạnh phúc - ., ngày tháng năm 200 Phiếu kết giám định tuyến trùng bào nang đối tợng KDTV Việt Nam Tên lô hàng trồng: Nớc xuất địa điểm gieo trồng nớc: Nớc xuất xứ: Phơng tiện vận chuyển: Khối lợng: Địa điểm lấy mẫu: Ngày lấy mẫu: Ngời lấy mẫu: Tình trạng mẫu trồng bị hại: Ký hiệu mẫu: 10 Số mẫu lu: 11 Ngời giám định: 12 Phơng pháp giám định: Theo tiêu chuẩn ngành số 10 TCN 5832003 Quy trình giám định tuyến trùng bào nang đối tợng kiểm dịch thực vật Việt Nam 13 Kết giám định: Tên khoa học: Họ: Heteroderidae Bộ: Tylenchida Là đối tợng KDTV nhóm thuộc Danh mục đối tợng kiểm dịch thực vật Việt Nam thủ trởng Đơn vị (Ký tên đóng dấu) 175 Trởng phòng kỹ thuật (hoặc ngời giám định) Tuyển tập tiêu chuẩn bảo vệ thực vật 10 TCN 583 - 2003 Tài liệu tham khảo Pháp lệnh Bảo vệ Kiểm dịch thực vật đợc công bố Lệnh Chủ tịch nớc số 11/2001/LCTN ngày 08 tháng 08 năm 2001 Điều lệ kiểm dịch thực vật ban hành kèm theo Nghị định số 58/2002/NĐ-CP Chính phủ ngày 03 tháng 06 năm 2002 Đờng Hồng Dật - Chủ biên (1996) Từ điển bách khoa Bảo vệ thực vật, Nhà xuất Nông nghiệp Viện Bảo vệ thực vật (1997) Phơng pháp nghiên cứu Bảo vệ thực vật, tập 1, Nhà xuất Nông nghiệp Gooch , P.S; Siddiqui, M.R., Sheila, W., Mary Franklin (1973) C.I.H Desriptions of Plant parasitic Nematodes, Commonwealth Institute of Helminthology st Albans herts, England William, R N (1991) Manual of Agricultural Nematology, E., Marcel Deker, Inc., New York Decker, H.H (1969) Phytonematologie - Biologie und Bekọmpfung Planzenparasitọrer Nematoden,Deutschcr Landwirtschaftsverlag - Berlin 176 ... đợc trình bày phụ lục Thẩm định kết giám định báo cáo Sau khẳng định kết giám định tuyến trùng bào nang đối tợng kiểm dịch thực vật Việt Nam, đơn vị giám định phải báo cáo Cục Bảo vệ thực vật. .. lu: 11 Ngời giám định: 12 Phơng pháp giám định: Theo tiêu chuẩn ngành số 10 TCN 5832003 Quy trình giám định tuyến trùng bào nang đối tợng kiểm dịch thực vật Việt Nam 13 Kết giám định: Tên khoa... khả mang đối tợng kiểm dịch thực vật 3.4 Dịch hại thực vật loài, dòng, dạng sinh học thực vật, động vật tác nhân gây hại cho thực vật sản phẩm thực vật 3.5 Lô vật thể lợng định vật thể có điều