Nghiên cứu nhân giống lan thạch hộc (dendrobium nobile lindt) từ hạt bằng phương pháp nuôi cấy mô tại trường đại học nông lâm thái nguyên

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM ĐỖ THỊ HÀO Tên đề tài: “NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG LAN THẠCH HỘC (Dendrobium nobile Lindl) TỪ HẠT BẰNG PHƢƠNG PHÁP NUÔI CẤY MÔ TẠI TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÁI NGUYÊN” KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo: Chính quy Chun ngành: Cơng nghệ Sinh học Khoa: CNSH - CNTP Khóa học: 2011 – 2015 Thái Nguyên - 2015 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM ĐỖ THỊ HÀO Tên đề tài: “NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG LAN THẠCH HỘC (Dendrobium nobile Lindl) TỪ HẠT BẰNG PHƢƠNG PHÁP NUÔI CẤY MÔ TẠI TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÁI NGUYÊN” KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo: Chính quy Chun ngành: Cơng nghệ Sinh học Khoa: CNSH - CNTP Khóa học: 2011 – 2015 Giảng viên hƣớng dẫn: ThS Nguyễn Thị Tình ThS Bùi Đình Lãm Khoa CNSH–CNTP–Trƣờng Đại học Nơng lâm Thái Ngun - 2015 i LỜI CẢM ƠN Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Ban Giám hiệu trường Đại học Nông lâm Thái Nguyên, Ban Chủ nhiệm khoa Công nghệ Sinh học Công nghệ Thực phẩm thầy cô khoa tạo điều kiện tốt cho em suốt trình thực tập Em xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến giáo Nguyễn Thị Tình thầy giáo Bùi Đình Lãm tận tình bảo, giúp đỡ hướng dẫn em thời gian thực đề tài Cuối cùng, em xin cảm ơn gia đình tạo điều kiện vật chất tốt ln chỗ dựa tinh thần cho em trình thực tập; cảm ơn bạn bè giúp đỡ em thời gian vừa qua Do thời gian thực đề tài có hạn nên khơng thể tránh cịn nhiều thiếu xót, em mong nhận đóng góp ý kiến chân thành từ thầy cô bạn để đề tài hoàn thiện Em xin chân thành cảm ơn! Thái Nguyên, tháng năm 2015 Sinh viên Đỗ Thị Hào ii DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 3.1: Các hóa chất, dụng cụ thiết bị sử dụng nuôi cấy 23 Bảng 3.2: Ảnh hưởng hiệu khử trùng NaOCl nồng độ, thời gian khác đến khả tạo vật liệu nấm vi khuẩn đưa vào nuôi cấy (sau tuần theo dõi) 24 Bảng 3.3: Ảnh hưởng số loại môi trường (MS, 1/2MS, B5, SH WPM) đến tỉ lệ nảy mầm hạt lan Thạch hộc ( sau 12 tuần theo dõi) 25 Bảng 3.4: Ảnh hưởng nồng độ số chất kích thích sinh trưởng đến khả nhân cụm chồi lan Thạch hộc tái sinh từ hạt .26 Bảng 3.5: Ảnh hưởng hợp chất hữu đến nhân nhanh cụm chồi lan Thạch hộc tái sinh từ hạt (sau tuần theo dõi) 27 Bảng 3.6: Ảnh hưởng nồng độ NAA than hoạt tính đến khả rễ lan Thạch hộc (sau tuần theo dõi) 27 Bảng 3.7: Ảnh hưởng số giá thể đến khả sinh trưởng lan Thạch hộc vườn ươm (sau tuần theo dõi) 28 Bảng 4.1: Ảnh hưởng khử trùng NaOCl lan Thạch hộc nồng độ, thời gian khác (sau tuần theo dõi) .30 Bảng 4.2: Ảnh hưởng môi trường (MS, 1/2MS, 2/3MS, B5 WPM ) đến tỉ lệ nảy mầm lan Thạch hộc (sau 12 tuần theo dõi) 32 Bảng 4.3: Ảnh hưởng nồng độ BA, Kinetine TDZ đến khả nhân cụm chồi lan Thạch hộc tái sinh từ hạt .34 Bảng 4.4: Ảnh hưởng hợp chất hữu đến nhân nhanh cụm chồi lan Thạch hộc tái sinh từ hạt .37 Bảng 4.5: Ảnh hưởng nồng độ NAA than hoạt tính đến khả rễ lan Thạch hộc 39 Bảng 4.6: Ảnh hưởng số giá thể đến khả sinh trưởng lan Thạch hộc vườn ươm .41 iii DANH MỤC TỪ, CỤM TỪ VIẾT TẮT B5: Gamborg’s BA: 6- Benzylaminopurin Cồn: C2H5OH CR: Cà rốt CT: Công thức CV: Coefficient of Variation (Hệ số biến động) Đ/C: Đối chứng HSN: Hệ số nhân HCHC: Hợp chất hữu KC: Knudson C Kinitine: 6- Furfuryaminopurin KT: Khoai tây LSD: Least Singnificant Difference Test (Sai số trung bình nhỏ nhấtcó ý nghĩa) MS: Murashige and Skoog’s MT: Môi trường NAA: Naphlene axetic acid ND: Nước dừa Nxb: Nhà xuất RE: Robert Ernst TDZ: Thidiazuron Tp HCM: Thành phố Hồ Chí Minh THT: Than hoạt tính VW: Vacin and Went WPM: Wood Plant Medium iv MỤC LỤC Phần 1: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu yêu cầu đề tài .2 1.2.1 Mục tiêu đề tài 1.2.2 Yêu cầu đề tài .2 1.3 Ý nghĩa đề tài Phần 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu chung hoa lan 2.1.1 Nguồn gốc phân loại 2.1.2 Đặc điểm sinh học 2.1.3 Các phương pháp nhân giống 2.1.4 Giá thể trồng lan 2.2 Giới thiệu giống lan Dendrobium 2.2.1 Phân loại phân bố 2.2.2 Đặc diểm hình thái 2.2.3 Các điều kiện để nuôi trồng 12 2.3 Giới thiệu lan Thạch hộc .13 2.3.1 Nguồn gốc phân bố 13 2.3.2 Đặc điểm hình thái 14 2.4 Giá trị lan Thạch hộc 15 2.4.1 Giá trị dược liệu 15 2.4.2 Giá trị kinh tế 17 2.5 Tình hình nghiên cứu giới nước .18 2.5.1 Tình hình nghiên cứu giới 19 2.5.2 Tình hình nghiên cứu nước 19 Phần 3: ĐỐI TƢỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 3.1 Đối tượng, vật liệu phạm vi nghiên cứu 23 3.2 Địa điểm thời gian tiến hành nghiên cứu 23 v 3.3 Điều kiện nuôi cấy .23 3.4 Hóa chất thiết bị 23 3.5 Nội dung nghiên cứu 24 3.6 Phương pháp nghiên cứu 24 3.6.1 Nghiên cứu hiệu khử trùng NaOCl nồng độ, thời gian khác đến khả tạo vật liệu nấm vi khuẩn đưa vào nuôi cấy (sau tuần theo dõi) 24 3.6.2 Nghiên cứu ảnh hưởng số loại môi trường (MS, 1/2MS, 2/3MS, B5, WPM) đến tỉ lệ nảy mầm hạt lan Thạch hộc ( sau 12 tuần theo dõi) 25 3.6.3 Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ số chất kích thích sinh trưởng hợp chất hữu đến nhân nhanh cụm chồi lan Thạch hộc tái sinh từ hạt (sau tuần theo dõi) 26 3.6.4 Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ NAA than hoạt tính đến khả rễ lan Thạch hộc (sau tuần theo dõi) 27 3.6.5 Nghiên cứu ảnh hưởng số giá thể đến khả sinh trưởng lan Thạch hộc vườn ươm (sau tuần theo dõi) .28 3.7 Chỉ tiêu theo dõi 28 3.8 Phương pháp xử lí số liệu 29 Phần 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 30 4.1 Kết nghiên cứu hiệu khử trùng NaOCl nồng độ, thời gian khác đến khả tạo vật liệu nấm vi khuẩn đưa vào nuôi cấy 30 4.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng môi trường (MS, 1/2MS, 2/3MS, B5 WPM) đến tỉ lệ nảy mầm hat lan Thạch hộc ( sau 12 tuần theo dõi) 32 4.3 Kết ảnh hưởng số chất kích thích sinh trưởng hợp chất hữu đến nhân nhanh chồi lan Thạch hộc tái sinh từ hạt (sau tuần theo dõi) 33 4.3.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ BA, Kinetine TDZ đến khả nhân cụm chồi lan Thạch hộc tái sinh từ hạt .33 4.3.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng hợp chất hữu đến nhân nhanh cụm chồi lan Thạch hộc tái sinh từ hạt .36 vi 4.4 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ NAA than hoạt tính đến khả rễ lan Thạch hộc (sau tuần theo dõi) 39 4.5 Kết nghiên cứu ảnh hưởng số giá thể đến khả sinh trưởng phát triển lan Thạch hộc giai đoạn vườn ươm (sau tuần theo dõi) 41 Phần 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 43 5.1 Kết luận 43 5.2 Kiến nghị 43 Phần MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Nước ta có trữ lượng lan rừng lớn nhiều lồi có giá trị như: Vanda, Phaphiopedilum, Cymbidium Dendrobium Dendrobium giống hoa lan phong phú, đa dạng với 1500 loài Dendrobium phong phú màu sắc hương thơm hoa Ngoài loài hoa cịn có giá trị dược liệu Lan Thạch hộc thuộc chi Dendrobium Đây đối tượng quý Đặc điểm giống sai hoa, hoa to, đẹp, hương thơm nên ưa chuộng Theo Đặng Văn Đông (2004) [4] giá hoa lan từ 100.000-1.000.000 đồng/cây Lan Thạch hộc (Dendrobium nobile Lindt) phân bố vùng trung du miền núi phía bắc Việt Nam Qua kiểm nghiệm lâm sàng cho thấy lồi lan có nhiều giá trị dược học: chống ung thư, lão hóa tăng sức đề kháng thể [44], [48] Điều làm nên giá trị dược liệu lồi lan hợp chất alkaloid Với giá trị dược liệu lan Thạch hộc bị khai thác tới mức bị tuyệt chủng tự nhiên [8], [49] Hiện Lan Thạch hộc nằm danh mục Đỏ “Sách đỏ Việt Nam” năm 2007 [21] Số lồi lan q Đi chồn, Đai Châu, Lan Hài bị đe dọa tuyệt chủng tự nhiên bảo tồn nhờ phương thức nảy mầm từ hạt [47] Theo TS Trần Minh (2011) công nghệ nhân giống in vitro cho hệ số nhân giống từ lan cao phương pháp tái sinh từ phận khác [16] Chính tiến hành nghiên cứu đề tài “Nghiên cứu nhân giống lan Thạch hộc (Dendrobium nobile Lindt) từ hạt phƣơng pháp nuôi cấy mô trƣờng Đại học Nông lâm Thái Nguyên” với mục đích bảo tồn nguồn dược liệu q đồng thời góp phần phát triển lồi thuốc nam có giá trị 1.2 Mục tiêu yêu cầu đề tài 1.2.1 Mục tiêu đề tài Tái sinh nhân giống lan Thạch hộc phương pháp in vitro 1.2.2 Yêu cầu đề tài - Xác định hiệu khử trùng NaClO nồng độ mốc thời gian đến khả tạo vật liệu nấm vi khuẩn đưa vào nuôi cấy - Xác định ảnh hưởng môi trường MS, 1/2MS, 2/3MS, B5 WPM đến tỉ lệ nảy mầm hạt lan - Xác định ảnh hưởng nồng độ chất kích thích sinh trưởng hợp chất hữu đến nhân nhanh cụm chồi lan Thạch hộc - Xác định nồng độ NAA than hoạt tính đến khả rễ lan Thạch hộc - Xác định loại giá thể thích hợp đến sinh trưởng phát triển giai đoạn vườn ươm 1.3 Ý nghĩa đề tài - Ý nghĩa khoa học Kết nghiên cứu xây dựng biện pháp kỹ thuật nhân giống Lan Thạch hộc phương pháp in vitro - Ý nghĩa thực tiễn Đề xuất quy trình nhân nhanh giống Lan Thạch hộc phương pháp nuôi cấy in vitro, đảm bảo cung cấp số lượng lớn giống có chất lượng cao, đồng cho sản xuất PHỤ LỤC Phụ lục 1: Một số hình ảnh thí nghiệm a b c Hình 4.1: Khử trùng gieo hạt lan Thạch hộc a - Quả lan Thạch hộc sau khử trùng NaOCl 1% 15 phút b - Tách theo dọc gân theo đường gân c - Gieo hạt lan môi trường CT1 CT2 CT4 CT3 CT5 Hình 4.2: Chồi lan Thạch hộc tái sinh mơi trƣờng khoáng CT1 (MS) cho tỉ lệ tái sinh 100 sau 8,67 tuần, chồi có màu xanh, nảy mầm đều, khỏe CT2 (1/2MS) cho tỉ lệ tái sinh 100% sau 10,33 tuần, chồi có màu xanh, nảy mầm CT3 (2/3MS) cho tỉ lệ tái sinh 80,00% sau 11,00 tuần, chồi xanh nảy mầm CT4 (B5) cho tỉ lệ tái sinh 70,00% sau 10,67 tuần chồi có màu xanh, nảy mầm CT5 (WPM) cho tỉ lệ tái sinh 63,33% sau 11,33 tuần chồi nảy mầm không đồng có màu nâu nhạt CT1 CT2 CT3 CT4 Hình 4.3: Chồi lan Thạch hộc môi trƣờng bổ sung BA CT1 (Đ/C) có hệ số nhân 2,90 chồi/mẫu, chồi nhỏ, xanh nhạt CT2 (BA 0,5 mg/l) có hệ số nhân 5,50 chồi/mẫu, chồi mập, xanh đậm CT3 (BA 1,0 mg/l) có hệ số nhân cao 6,13 chồi/mẫu, chất lượng chồi tốt CT4 (BA 1,5 mg/l) có hệ số nhân 5,93 chồi/mẫu, chồi mập, xanh đậm CT5 CT5 CT6 CT6 CT7 Hình 4.4: Chồi lan Thạch hộc môi trƣờng bổ sung Kinitine CT5 (Kinitine 0,5 mg/l) có hệ số nhân 4,2 chồi/mẫu, chất lượng chồi tốt CT6 (Kinitine 1,0 mg/l) có hệ số nhân 5,60 chồi/mẫu, chồi nhỏ, xanh đậm CT7 (Kinitine 1,5 mg/l) có hệ số nhân 5,10 chồi/mẫu chất lượng chồi tốt CT8 CT9 CT10 Hình 4.5: Chồi lan Thạch hộc môi trƣờng bổ sung TDZ CT8 (TDZ 0,5 mg/l) có hệ số nhân 3,27 chồi/mẫu, chồi nhỏ, xanh nhạt CT9 (TDZ 1,0 mg/l) có hệ số nhân 3,83 chồi/mẫu chồi nhỏ, xanh nhạt CT10 (TDZ 1,5 mg/l) có hệ số nhân 5,23 chồi/mẫu, chồi mập, xanh đậm CT1 CT2 CT3 CT4 Hình 4.6: Chồi lan Thạch hộc môi trƣờng bổ sung khoai tây CT1 (Đ/C) có hệ số nhân 2,90 chồi nhỏ, xanh nhạt CT2 (Khoai tây 20 g/l) có hệ số nhân 3,2 chồi/mẫu chồi mập, xanh đậm CT3 (Khoai tây 50 g/l) có hệ số nhân 5,47 chồi/mẫu chồi mập, xanh đậm CT4 (Khoai tây 70 g/l) có hệ số nhân 4,2 chồi/mẫu chồi mập, xanh đậm CT5 CT6 CT7 Hình 4.7: Chồi lan Thạch hộc môi trƣờng bổ sung cà rốt CT5 (Cà rốt 20 g/l) có hệ số nhân 3,47 chồi/mẫu chồi nhỏ, xanh nhạt CT6 (Cà rốt 50 g/l) có hệ số nhân 4,73 chồi/mẫu chồi mập, xanh đậm CT7 (Cà rốt 70 g/l) có hệ số nhân 3,67 chồi/mẫu chồi mập, xanh đậm CT8 CT9 CT10 Hình 4.8: Chồi lan Thạch hộc môi trƣờng bổ sung nƣớc dừa CT8 (Nước dừa 50 ml/l) có hệ số nhân 3,60 chồi/mẫu chồi mập, xanh đậm CT9 (Nước dừa 100 ml/l) có hệ số nhân 3,87 chồi/mẫu, chồi nhỏ, xanh nhạt CT10 (Nước dừa 150 ml/l) có hệ số nhân 4,60 chồi/mẫu, chồi mập, xanh đậm CT1 CT2 CT4 CT3 CT5 CT6 Hình 4.9: Chồi lan Thạch hộc giai đoạn rễ CT1 (NAA 0,0 mg/l): số rễ trung bình/chồi đạt 2,01 rễ/chồi CT2 (NAA 0,3 mg/l): số rễ trung bình/chồi đạt 2,47 rễ/chồi CT3 (NAA 0,5 mg/l): số rễ trung bình/chồi đạt 4,10 rễ/chồi CT4 (NAA 1,0 mg/l): số rễ trung bình/chồi đạt 3,03 rễ/chồi CT5 (THT 0,5 g/l): số rễ trung bình/chồi cao đạt 4,60 rễ/chồi CT6 (THT 1,0 g/l: số rễ trung bình/chồi đạt 2,40 rễ/chồi H a b c Hình 4.10: Cây lan Thạch hộc giai đoạn vƣờn ƣơm a (Dớn) có tỉ lệ sống cao đạt 100% khỏe xanh b (Xơ dừa) có tỉ lệ sống đạt 85,56% khỏe xanh c (Mùn cưa) có tỉ lệ sống đạt 88,89% khỏe xanh d (Than củi) có tỉ lệ sống đạt 92,22% khỏe xanh d Phụ lục 2: Kết xử lí số liệu Thí nghiệm 1: Ảnh hƣởng nồng độ thời gian khử trùng NaOCl tạo lan Thạch hộc nấm vi khuẩn SINGLE EFFECT ANOVA FOR UNBALANCED DATA FILE IRRISTAT 21/ 5/** 19:14 PAGE ANOVA FOR SINGLE EFFECT - NL -VARIATE TREATMENT MS - DF RESIDUAL MS - DF F-RATIO F-PROB TLMS 4.9537 106.38 24 0.05 0.954 TLMN 26.620 251.79 24 0.11 0.900 TLMC 127.22 131.06 24 0.97 0.395 ANOVA FOR SINGLE EFFECT - NDO$ -VARIATE TREATMENT MS - DF RESIDUAL MS - DF F-RATIO F-PROB TLMS 3.7037 106.48 24 0.03 0.966 TLMN 359.26 224.07 24 1.60 0.221 TLMC 1211.1 40.741 24 29.73 0.000 ANOVA FOR SINGLE EFFECT - TIME$ -VARIATE TREATMENT MS - DF RESIDUAL MS - DF F-RATIO F-PROB TLMS 414.81 72.222 24 5.74 0.009 TLMN 514.81 211.11 24 2.44 0.107 TLMC 233.33 122.22 24 1.91 0.168 ANOVA FOR SINGLE EFFECT - NDO$*TIME$ -VARIATE TREATMENT MS - DF RESIDUAL MS - DF F-RATIO F-PROB TLMS 237.04 37.037 18 6.40 0.001 TLMN 445.37 140.74 18 3.16 0.020 TLMC 366.67 25.926 18 14.14 0.000 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE IRRISTAT 21/ 5/** 19:14 PAGE MEANS FOR EFFECT NL NL NOS TLMS TLMN TLMC 72.2222 22.2222 7.77778 73.7500 18.7500 7.50000 10 73.0000 20.0000 14.0000 SE(N= 9) 3.43798 5.28934 3.81612 5%LSD 24DF 10.0345 15.4381 11.1382 MEANS FOR EFFECT NDO$ NDO$ NOS TLMS TLMN TLMC 72.2222 25.5556 2.22222 73.3333 22.2222 4.44444 73.3333 13.3333 23.3333 SE(N= 9) 3.43966 4.98970 2.12762 5%LSD 24DF 10.0394 14.5635 6.20991 MEANS FOR EFFECT TIME$ TIME$ NOS TLMS TLMN TLMC 10 65.5556 28.8889 5.55556 15 78.8889 17.7778 8.88889 20 74.4444 14.4444 15.5556 SE(N= 9) 2.83279 4.84322 3.68514 5%LSD 24DF 8.26812 14.1360 10.7559 MEANS FOR EFFECT NDO$*TIME$ NDO$ TIME$ NOS TLMS TLMN TLMC 10 56.6667 43.3333 0.000000 15 86.6667 13.3333 0.000000 20 73.3333 20.0000 6.66667 10 63.3333 36.6667 0.000000 15 76.6667 20.0000 3.33333 20 80.0000 10.0000 10.0000 10 76.6667 6.66667 16.6667 15 73.3333 0.00000 23.3333 20 70.0000 0.00000 30.0000 SE(N= 3) 3.51364 6.84935 2.93972 5%LSD 18DF 10.4395 20.3504 8.73435 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE IRRISTAT 21/ 5/** 19:14 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |NL |NDO$ |TIME$ |NDO$*TIM| (N= 27) SD/MEAN | | | |E$ | NO BASED ON BASED ON % | | | | | OBS TOTAL SS RESID SS | | | | | TLMS 27 72.963 9.9285 6.0858 8.3 0.9545 0.9661 0.0091 0.0006 TLMN 27 20.370 15.313 11.863 58.2 0.8998 0.2208 0.1069 0.0202 TLMC 27 10.000 11.435 5.0918 50.9 0.3953 0.0000 0.1683 0.0000 Thí nghiệm 2: Ảnh hƣởng môi trƣờng MS, 1/2MS, 2/3MS, B5và WPM lên tỉ lệ lan Thạch hộc nảy mầm sau 12 tuần theo dõi BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLNM FILE HAOKHI 21/ 5/** 9:26 PAGE VARIATE V003 TLNM LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 3426.67 856.667 18.36 0.000 * RESIDUAL 10 466.667 46.6667 * TOTAL (CORRECTED) 14 3893.33 278.095 BALANCED ANOVA FOR VARIATE TGNM FILE HAOKHI 21/ 5/** 9:26 PAGE VARIATE V004 TGNM LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 12.9333 3.23333 6.93 0.006 * RESIDUAL 10 4.66667 466667 * TOTAL (CORRECTED) 14 17.6000 1.25714 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE HAOKHI 21/ 5/** 9:26 PAGE MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS TLNM TGNM 100.000 8.66667 100.000 10.3333 3 80.0000 11.0000 70.0000 10.6667 63.3333 11.3333 SE(N= 3) 3.94405 0.394405 5%LSD 10DF 12.4279 1.24279 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE HAOKHI 21/ 5/** 9:26 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ | (N= 15) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | TLNM 15 82.667 16.676 6.8313 8.3 0.0002 TGNM 15 10.400 1.1212 0.68313 6.6 0.0064 Thí nghiệm 3: Ảnh hợp mơt số chất kích thích sinh trƣởng hợp chất hữu đến nhân cụm chồi lan Thạch hộc Ảnh hƣởng mơt số chất kích thích sinh trƣởng BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNBA FILE BAH2 24/ 5/** 16:15 PAGE anh huong cua BA, KIN, TDZ den kha nang nhan choi VARIATE V003 HSNBA LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 20.2833 6.76111 162.27 0.000 * RESIDUAL 333336 416670E-01 * TOTAL (CORRECTED) 11 20.6167 1.87424 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNKIN FILE BAH2 24/ 5/** 16:15 PAGE anh huong cua BA, KIN, TDZ den kha nang nhan choi VARIATE V004 HSNKIN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 12.6300 4.21000 129.54 0.000 * RESIDUAL 260000 325000E-01 * TOTAL (CORRECTED) 11 12.8900 1.17182 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNTDZ FILE BAH2 24/ 5/** 16:15 PAGE anh huong cua BA, KIN, TDZ den kha nang nhan choi VARIATE V005 HSNTDZ LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 9.44917 3.14972 42.00 0.000 * RESIDUAL 600000 750000E-01 * TOTAL (CORRECTED) 11 10.0492 913561 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BAH2 24/ 5/** 16:15 PAGE anh huong cua BA, KIN, TDZ den kha nang nhan choi MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS HSNBA HSNKIN HSNTDZ 2.90000 2.90000 2.90000 5.50000 4.20000 3.26667 3 6.13333 5.60000 3.83333 5.93333 5.10000 5.23333 SE(N= 3) 0.117852 0.104083 0.158114 5%LSD 8DF 0.384302 0.339405 0.515593 - ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BAH2 24/ 5/** 16:15 -anh huong cua BA, KIN, TDZ den kha nang nhan choi F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ (N= 12) SD/MEAN | NO BASED ON BASED ON % | OBS TOTAL SS RESID SS | HSNBA 12 5.1167 1.3690 0.20412 4.0 0.0000 HSNKIN 12 4.4500 1.0825 0.18028 4.1 0.0000 HSNTDZ 12 3.8083 0.95580 0.27386 7.2 0.0001 PAGE | | | | Ảnh hƣởng hợp chất hữu BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNKT FILE KHOAI 1/ 6/** 23: PAGE Anh huong cua mot so hop chat huu co VARIATE V003 HSNKT LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 7.74222 3.87111 124.43 0.000 * RESIDUAL 186667 311112E-01 * TOTAL (CORRECTED) 7.92889 991111 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNCR FILE KHOAI 1/ 6/** 23: PAGE Anh huong cua mot so hop chat huu co VARIATE V004 HSNCR LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 2.78222 1.39111 104.33 0.000 * RESIDUAL 800001E-01 133333E-01 * TOTAL (CORRECTED) 2.86222 357778 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNND FILE KHOAI 1/ 6/** 23: PAGE Anh huong cua mot so hop chat huu co VARIATE V005 HSNND LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 1.60889 804445 45.25 0.000 * RESIDUAL 106667 177778E-01 * TOTAL (CORRECTED) 1.71556 214445 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE KHOAI 1/ 6/** 23: PAGE Anh huong cua mot so hop chat huu co MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS HSNKT HSNCR HSNND 3.20000 3.46667 3.60000 3 5.46667 4.73333 3.86667 4.20000 3.66667 4.60000 SE(N= 3) 0.101835 0.666667E-01 0.769801E-01 5%LSD 6DF 0.352264 0.230611 0.266287 - ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE KHOAI 1/ 6/** 23: -Anh huong cua mot so hop chat huu co F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ (N= 9) SD/MEAN | NO BASED ON BASED ON % | OBS TOTAL SS RESID SS | HSNKT 4.2889 0.99555 0.17638 4.1 0.0001 HSNCR 3.9556 0.59815 0.11547 2.9 0.0001 HSNND 4.0222 0.46308 0.13333 3.3 0.0004 PAGE | | | | Thí nghiệm 5: Ảnh hƣởng NAA THT đến khả rễ lan Thạch hộc in vitro BALANCED ANOVA FOR VARIATE SO RE FILE 21/ 5/** 15: PAGE Anh huong cua NAA va than hoat tinh den kha nang re VARIATE V003 SO RE LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 15.4317 3.08633 99.20 0.000 * RESIDUAL 12 373334 311111E-01 * TOTAL (CORRECTED) 17 15.8050 929706 BALANCED ANOVA FOR VARIATE C-DAI RE FILE 21/ 5/** 15: PAGE Anh huong cua NAA va than hoat tinh den kha nang re VARIATE V004 C-DAI RE LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 11.0267 2.20533 124.05 0.000 * RESIDUAL 12 213333 177778E-01 * TOTAL (CORRECTED) 17 11.2400 661176 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 21/ 5/** 15: PAGE Anh huong cua NAA va than hoat tinh den kha nang re MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS SO RE C-DAI RE 2.10000 2.20000 2.46667 2.43333 3 4.10000 4.13333 3.03333 1.86667 4.60000 2.03333 2.40000 3.13333 SE(N= 3) 0.101835 0.769800E-01 5%LSD 12DF 0.313788 0.237202 - ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 21/ 5/** 15: -Anh huong cua NAA va than hoat tinh den kha nang re F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ (N= 18) SD/MEAN | NO BASED ON BASED ON % | OBS TOTAL SS RESID SS | SO RE 18 3.1167 0.96421 0.17638 5.7 0.0000 C-DAI RE 18 2.6333 0.81313 0.13333 5.1 0.0000 PAGE | | | | Thí nghiệm 6: Ảnh hƣởng số giá thể đến khả sinh trƣởng phát triển Lan Thạch hộc vƣờn ƣơm BALANCED ANOVA FOR VARIATE TL.SONG FILE 21/ 5/** 15: PAGE Anh huong cua loai gia the den sinh truong, phat trien o giai doan vuon uom VARIATE V003 TL.SONG LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 344.444 114.815 8.27 0.008 * RESIDUAL 111.133 13.8917 * TOTAL (CORRECTED) 11 455.578 41.4162 BALANCED ANOVA FOR VARIATE TL.CHET FILE 21/ 5/** 15: PAGE Anh huong cua loai gia the den sinh truong, phat trien o giai doan vuon uom VARIATE V004 TL.CHET LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 344.411 114.804 8.27 0.008 * RESIDUAL 111.068 13.8835 * TOTAL (CORRECTED) 11 455.479 41.4072 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 21/ 5/** 15: PAGE Anh huong cua loai gia the den sinh truong, phat trien o giai doan vuon uom MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS TL.SONG TL.CHET 100.000 0.000000 85.5567 14.4433 3 88.8867 11.1133 92.2233 7.78667 SE(N= 3) 2.15187 2.15124 5%LSD 8DF 7.01704 7.01496 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 21/ 5/** 15: PAGE Anh huong cua loai gia the den sinh truong, phat trien o giai doan vuon uom F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ | (N= 12) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | TL.SONG 12 91.667 6.4355 3.7272 4.1 0.0082 TL.CHET 12 8.3358 6.4348 3.7261 44.7 0.0082 Phụ lục 3: Môi trƣờng Table 1: Preparation of modified Murashige & Skoog’s MS medium Amount to Stock Final take Bottle Component Solution concentratic preparation (g/l) (mg/ l) (ml) NH4NO3 82,5 1.650,0 I 20 KNO3 95 1.900,0 MgSO4 7H2O 37,0 370,0 MnSO4 4H2O 2,23 22,3 II 10 ZnSO4 7H2O 1,058 10,6 CuSO4 5H2O 0,0025 0,025 CaCl2.2H2O 44,0 440,0 III KI 0,083 10 0,83 CoCl2.6H2O 0,0025 0,025 17,0 KH2PO4 170,0 0,62 IV H3BO3 10 6,2 0,025 Na2MoO4.2H2O 0,25 V FeSO4 7H2O Na2EDTA 2H2O 2,784 3,724 10 27,85 37,25 0,5 2,0 0,1 0,5 0,5 2,0 0,1 0,5 mg/100ml Vitamin Nicotinic acid Glycine ThiamineHCl PyridoxineHCl 100 100 100 100 Inositol 100,0 Sucrose 30.000,0 Agar 8.000,0 pH 5,8 Table 2: Preparation of modified Gamborg’s B5 medium (E-24medium ) Bottle Component Stock Solution (g/l) Amount to take preparation (ml) Final concentratic (mg/ l) KNO3 250 20 2500,0 (NH4)2SO4 13,4 10 134,0 MgSO4.7H2O 15,0 NaH2PO4.H2O 15 10 150,0 MnSO4.H2O 1,0 10 10,0 H3BO3 0,3 3,0 ZnSO4.7H2O 0,2 2,0 KI 0,075 10 0,75 Na2MoO4.2H2O 0,025 10 0,25 CuSO4.5H2O 0,0025 0,025 CoCl2.6H2O 0,0025 0,025 FeSO4.7H2O 2,785 Na2EDTA 3,725 37,25 CaCl2.2H2O 15,0 150,0 10 Inositol 27,85 160 mg/100ml Vitamins Nicotinic acid 100 1,0 Thiamine HCL 100 10 10,0 Pyridoxine HCL 100 1,0 Sucrose 8000,0 Agar pH 5,6 - 5,8 Table 3: Preparation of modified Gamborg’s B5 medium (E-24medium ) Final Component Final Concentratic Component (mg/ l) concentratic (mg/ l) NH4NO3 400 H3BO3 6,2 Ca(NO3)2.4H2O 556 ZnSO4.7H2O 8,6 CaCl2.2H2O 96 Na2EDTA.2 H2O 37,2 MgSO4.7H2O 370 CuSO4.5H2O 0,25 K2SO4 990 FeSO4.7H2O 27,8 KH2PO4 170 MgSO4.4H2O 22,3 Na2MoO4.2H2O 0,25 mg/l Myo-inositol 100 Nicotinic acid 0,5 Pyridoxine HCL 0,5 Thiamine HCL 1,0 Glycine 2,0 Agar 6,0 Sucrose 20 pH 5,6 - 5,8