Nghiên cứu nhân giống lan Thạch hộc (Dendrobium nobile Lindt) từ hạt bằng phương pháp nuôi cấy mô tại trường Đại học Nông lâm Thái Nguyên (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu nhân giống lan Thạch hộc (Dendrobium nobile Lindt) từ hạt bằng phương pháp nuôi cấy mô tại trường Đại học Nông lâm Thái Nguyên (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu nhân giống lan Thạch hộc (Dendrobium nobile Lindt) từ hạt bằng phương pháp nuôi cấy mô tại trường Đại học Nông lâm Thái Nguyên (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu nhân giống lan Thạch hộc (Dendrobium nobile Lindt) từ hạt bằng phương pháp nuôi cấy mô tại trường Đại học Nông lâm Thái Nguyên (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu nhân giống lan Thạch hộc (Dendrobium nobile Lindt) từ hạt bằng phương pháp nuôi cấy mô tại trường Đại học Nông lâm Thái Nguyên (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu nhân giống lan Thạch hộc (Dendrobium nobile Lindt) từ hạt bằng phương pháp nuôi cấy mô tại trường Đại học Nông lâm Thái Nguyên (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu nhân giống lan Thạch hộc (Dendrobium nobile Lindt) từ hạt bằng phương pháp nuôi cấy mô tại trường Đại học Nông lâm Thái Nguyên (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu nhân giống lan Thạch hộc (Dendrobium nobile Lindt) từ hạt bằng phương pháp nuôi cấy mô tại trường Đại học Nông lâm Thái Nguyên (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu nhân giống lan Thạch hộc (Dendrobium nobile Lindt) từ hạt bằng phương pháp nuôi cấy mô tại trường Đại học Nông lâm Thái Nguyên (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu nhân giống lan Thạch hộc (Dendrobium nobile Lindt) từ hạt bằng phương pháp nuôi cấy mô tại trường Đại học Nông lâm Thái Nguyên (Khóa luận tốt nghiệp)
I H C THÁI NGUYÊN I H C NÔNG LÂM TH HÀO tài: U NHÂN GI NG LAN TH CH H C (Dendrobium nobile Lindl) T T H TB Y MƠ IH KHĨA LU N T T NGHI H o: IH C Chính quy Chun ngành: Cơng ngh Sinh h c Khoa: CNSH - CNTP Khóa h c: 2011 2015 Thái Nguyên - 2015 I H C THÁI NGUYÊN I H C NÔNG LÂM TH HÀO tài: U NHÂN GI NG LAN TH CH H C (Dendrobium nobile Lindl) T T H TB Y MƠ IH KHĨA LU N T T NGHI IH C H o: Chính quy Chuyên ngành: Cơng ngh Sinh h c Khoa: CNSH - CNTP Khóa h c: 2011 2015 Gi ng d n: ThS Nguy n Th Tình ThS Khoa CNSH CNTP i h c Nông lâm Thái Nguyên - 2015 i cô giáo tài x Sinh viên giáo ii DANH M C CÁC B NG B ng 3.1: Các hóa ch t, d ng c thi t b s d ng nuôi c y 23 B ng 3.2: n kh ng hi u qu kh trùng c a NaOCl n , th i gian khác o v t li u s ch n m vi khu y (sau tu n theo dõi) 24 B ng 3.3: ng c a m t s lo ng (MS, 1/2MS, B5, SH WPM) n t l n y m m h t lan Th ch h c ( sau 12 tu n theo dõi) 25 B ng 3.4: ng n m t s ch n kh nhân c m ch i lan Th ch h c tái sinh t h t 26 B ng 3.5: ng h p ch t h n nhân nhanh c m ch i lan Th ch h c tái sinh t h t (sau tu n theo dõi) 27 B ng 3.6: ng c a n NAA than ho n kh lan Th ch h c (sau tu n theo dõi) 27 B ng 3.7: ng c a m t s giá th Th ch h c B ng 4.1: n kh ng c a lan n theo dõi) 28 ng kh trùng NaOCl qu lan Th ch h c n , th i gian khác (sau tu n theo dõi) .30 B ng 4.2: ng c ng (MS, 1/2MS, 2/3MS, B5 WPM nt l n y m m lan Th ch h c (sau 12 tu n theo dõi) 32 B ng 4.3: ng n n kh m ch i lan Th ch h c tái sinh t h t .34 B ng 4.4: ng c a h p ch t h n nhân nhanh c m ch i lan Th ch h c tái sinh t h t .37 B ng 4.5: ng c a n NAA than ho n kh lan Th ch h c 39 B ng 4.6: Th ch h c ng c a m t s giá th n kh ng c a lan .41 iii DANH M C T , C M T VI T T T B5: BA: 6- Benzylaminopurin C n: C2H5OH CR: Cà r t CT: Công th c CV: Coefficient of Variation (H s bi : ng) i ch ng HSN: H s nhân HCHC: H p ch t h KC: Knudson C Kinitine: 6- Furfuryaminopurin KT: Khoai tây LSD: Least Singnificant Difference Test (Sai s trung bình nh nh t MS: MT: NAA: ng Naphlene axetic acid ND: cd a Nxb: Nhà xu t b n RE: Robert Ernst TDZ: Thidiazuron Tp HCM: Thành ph H Chí Minh THT: Than ho t tính VW: Vacin and Went WPM: Wood Plant Medium iv M CL C U Ph n 1: M 1.1 tv 1.2 M c tiêu yêu c u c tài .2 1.2.1 M c tiêu c tài 1.2.2 Yêu c u c tài .2 tài .2 Ph n 2: T NG QUAN TÀI LI U 2.1 Gi i thi u chung v hoa lan 2.1.1 Ngu n g c phân lo i m sinh h c ng 2.1.4 Giá th tr ng lan 2.2 Gi i thi u v gi ng lan Dendrobium 2.2.1 Phân lo i phân b c di m hình thái u ki nuôi tr ng .12 2.3 Gi i thi u v lan Th ch h c .13 2.3.1 Ngu n g c s phân b 13 2.3 m hình thái 14 2.4 Giá tr c a lan Th ch h c 15 2.4.1 Giá tr c li u 15 2.4.2 Giá tr kinh t 17 2.5 Tình hình nghiên c u th gi c .18 2.5.1 Tình hình nghiên c u th gi i 19 2.5.2 Tình hình nghiên c Ph n 3: NG, N c 19 U 23 ng, v t li u ph m vi nghiên c u 23 m th i gian ti n hành nghiên c u 23 v u ki n nuôi c y .23 3.4 Hóa ch t thi t b 23 3.5 N i dung nghiên c u 24 nghiên c u 24 3.6.1 Nghiên c u hi u qu kh trùng c a NaOCl n o v t li u s ch n m vi khu 3.6.2 Nghiên c u , th n kh y (sau tu n theo dõi) 24 ng c a m t s lo ng (MS, 1/2MS, 2/3MS, B5, n t l n y m m h t lan Th ch h c ( sau 12 tu n theo dõi) 25 3.6.3 Nghiên c u ch t h ng n c a m t s ch ng h p n nhân nhanh c m ch i lan Th ch h c tái sinh t h t (sau tu n theo dõi) 26 3.6.4 Nghiên c u ng c a n NAA than ho n kh r lan Th ch h c (sau tu n theo dõi) 27 3.6.5 Nghiên c u ng c a m t s giá th lan Th ch h c n kh ng c a n theo dõi) .28 3.7 Ch tiêu theo dõi 28 lí s li u 29 Ph n 4: K T QU VÀ TH O LU N 30 4.1 K t qu nghiên c u hi u qu kh trùng c a NaOCl n kh o v t li u s ch n m vi khu 4.2 K t qu nghiên c u ng c n , th i gian khác y 30 ng (MS, 1/2MS, 2/3MS, B5 n t l n y m m hat lan Th ch h c ( sau 12 tu n theo dõi) 32 4.3 K t qu n ng c a m t s ch ng h p ch t h n nhân nhanh ch i lan Th ch h c tái sinh t h t (sau tu n theo dõi) 33 4.3.1 K t qu nghiên c u ng n BA, Kin n kh nhân c m ch i lan Th ch h c tái sinh t h t 33 4.3.2 K t qu nghiên c u ng c a h p ch t h n nhân nhanh c m ch i lan Th ch h c tái sinh t h t .36 vi 4.4 K t qu nghiên c u ng c a n NAA than ho n kh lan Th ch h c (sau tu n theo dõi) 39 4.5 K t qu nghiên c u ng c a m t s giá th phát tri n c a lan Th ch h c n kh ng n theo dõi) 41 Ph n 5: K T LU N VÀ KI N NGH 43 5.1 K t lu n 43 5.2 Ki n ngh 43 Ph n M U 1.1 c ta có tr Vanda, ng lan r ng r t l n nhi u lồi có giá tr Phaphiopedilum, Cymbidium Dendrobium Dendrobium m t nh ng gi Dendrobium phong phú ng v v màu s a hoa Ngoài lồi hoa có giá tr Lan Th ch h c thu c chi Dendrobium c li u ng quý hi c a gi m ng ng i n giá c a m t hoa lan có th t 100.000-1.000.000 ng/cây Lan Th ch h c (Dendrobium nobile Lindt) phân b vùng trung du mi n núi phía b c Vi t Nam Qua ki m nghi m lâm sàng cho th y loài lan có nhi u giá tr c h c: ch kháng c u làm nên giá tr tr [44], [48] c li u c a lồi lan h p ch t alkaloid V i giá c li u lan Th ch h khai thác t i m c b t ch ng t nhiên [8], [49] Hi n Lan Th ch h c n m danh m c a cu Vi t 2007 [21] S loài lan quý hi ch ng t a t c b o t n nh c n y m m t h t [47] Theo TS Tr n Minh (2011) công ngh nhân gi ng in vitro cho h s nhân gi ng t qu lan cao b ph n khác [16] Chính v y ti n hành nghiên c tài Nghiên c u nhân gi ng lan Th ch h c (Dendrobium nobile Lindt) t h t b mô t c li i h c Nông lâm Thái Nguyên v i m y o t n ngu n ng th i góp ph n phát tri n m t loài thu c nam có giá tr 1.2 1.2.1 M c tiêu c tài in vitro Tái sinh nhân gi ng lan Th ch h c b 1.2.2 Yêu c u c kh tài nh hi u qu kh trùng c a NaClO n o v t li u s ch n m vi khu - nh m c th n nuôi c y ng ng MS, 1/2MS, 2/3MS, B5 ng n ch nt l n y m m c a h t lan - nh ng h p ch t h n nhân nhanh c m ch i lan Th ch h c - nh n - nh lo i giá th thích h - NAA than ho t tín n kh lan Th ch h c ng phát tri n c a khoa h c K t qu nghiên c u s xây d in vitro Th ch h c b - c m t bi n pháp k thu t nhân gi ng Lan c ti n xu nuôi c y in vitro, u cho s n xu t c quy trình nhân nhanh gi ng Lan Th ch h c b m b o cung c p s ng l n gi ng có ch ng PH L C Ph l c 1: M t s hình nh thí nghi m a b c Hình 4.1: Kh trùng gieo h t lan Th ch h c a - Qu lan Th ch h c sau kh trùng NaOCl 1% 15 phút b - Tách theo d c gân qu c - Gieo h ng gân ng CT1 CT2 CT4 Hình 4.2: Ch i lan Th ch h c tái sinh tr CT3 CT5 ng khoáng CT1 (MS) cho t l tái sinh 100 sau 8,67 tu n, ch i có màu xanh, n y m u, kh e CT2 (1/2MS) cho t l tái sinh 100% sau 10,33 tu n, ch i có màu xanh, n y m CT3 (2/3MS) cho t l tái sinh 80,00% sau 11,00 tu n, ch i xanh n y m CT4 (B5) cho t l tái sinh 70,00% sau 10,67 tu n ch i có màu xanh, n y m CT5 (WPM) cho t l tái sinh 63,33% sau 11,33 tu n ch i n y m có màu nâu nh t u u u u CT1 CT2 CT3 Hình 4.3: Ch i lan Th ch h CT4 ng b sung BA s nhân 2,90 ch i/m u, ch i nh , xanh nh t CT2 (BA 0,5 mg/l) có h s nhân 5,50 ch i/m u, ch i m m CT3 (BA 1,0 mg/l) có h s nhân cao nh t 6,13 ch i/m u, ch ng ch i t t CT4 (BA 1,5 mg/l) có h s nhân 5,93 ch i/m u, ch i m CT5 CT5 m CT6 CT6 Hình 4.4: Ch i lan Th ch h CT7 ng b sung Kinitine CT5 (Kinitine 0,5 mg/l) có h s nhân 4,2 ch i/m u, ch ng ch i t t CT6 (Kinitine 1,0 mg/l) có h s nhân 5,60 ch i/m u, ch i nh CT7 (Kinitine 1,5 mg/l) có h s nhân 5,10 ch i/m u ch m ng ch i t t CT8 CT9 CT10 Hình 4.5: Ch i lan Th ch h ng b sung TDZ CT8 (TDZ 0,5 mg/l) có h s nhân 3,27 ch i/m u, ch i nh , xanh nh t CT9 (TDZ 1,0 mg/l) có h s nhân 3,83 ch i/m u ch i nh , xanh nh t CT10 (TDZ 1,5 mg/l) có h s nhân 5,23 ch i/m u, ch i m CT1 CT2 Hình 4.6: Ch i lan Th ch h CT3 m CT4 ng b sung khoai tây s nhân 2,90 ch i nh , xanh nh t CT2 (Khoai tây 20 g/l) có h s nhân 3,2 ch i/m u ch i m CT3 (Khoai tây 50 g/l) có h s nhân 5,47 ch i/m u ch i m CT4 (Khoai tây 70 g/l) có h s nhân 4,2 ch i/m u ch i m m m m CT5 CT6 Hình 4.7: Ch i lan Th ch h CT7 ng b sung cà r t CT5 (Cà r t 20 g/l) có h s nhân 3,47 ch i/m u ch i nh , xanh nh t CT6 (Cà r t 50 g/l) có h s nhân 4,73 ch i/m u ch i m m CT7 (Cà r t 70 g/l) có h s nhân 3,67 ch i/m u ch i m m CT8 Hình 4.8: Ch i lan Th ch h CT9 CT10 ng b c d a 50 ml/l) có h s nhân 3,60 ch i/m u ch i m cd a m c d a 100 ml/l) có h s nhân 3,87 ch i/m u, ch i nh , xanh nh t c d a 150 ml/l) có h s nhân 4,60 ch i/m u, ch i m m CT1 CT2 CT4 CT3 CT5 CT6 Hình 4.9: CT2 (NAA CT3 (NAA CT4 (NAA CT5 (THT 0,5 CT6 (THT 1,0 a c b Hình 4.10: Cây lan Th ch h c a (D n) có t l s ng cao nh a) có t l s d n t 100% kh e xanh t 85,56% kh e xanh l s t 88,89% kh e xanh d (Than c i) có t l s t 92,22% kh e xanh Ph l c 2: K t qu x lí s li u Thí nghi m 1: ng n Th ch h c s ch n m vi khu n th i gian kh trùng c a NaOCl t o qu lan Thí nghi m 2: n ng c ng MS, 1/2MS, 2/3MS, B5và WPM lên t l lan Th ch h c n y m m sau 12 tu n theo dõi Thí nghi m 3: h nh c a h p môt s ch ng h p ch t n nhân c m ch i lan Th ch h c ng c a môt s ch ng ng c a h p ch t h Thí nghi m 5: h c in vitro ng c n kh lan Th ch Thí nghi m 6: nh Lan Th ch h c ng m t s giá th n kh ng phát tri n Ph l ng S medium Bottle I II III Component NH4NO3 KNO3 MgSO4 7H2O MnSO4 4H2O ZnSO4 7H2O CuSO4 5H2O CaCl2.2H2O KI CoCl2.6H2O IV KH2PO4 H3BO3 Na2MoO4.2H2O V FeSO4 7H2O Na2EDTA 2H2O Stock Solution (g/l) 82,5 95 37,0 2,23 1,058 0,0025 44,0 0,083 0,0025 17,0 0,62 0,025 2,784 3,724 Amount to take preparation (ml) 20 10 10 Final concentratic (mg/ l) 1.650,0 1.900,0 370,0 22,3 10,6 0,025 440,0 0,83 0,025 10 170,0 6,2 0,25 10 27,85 37,25 0,5 2,0 0,1 0,5 0,5 2,0 0,1 0,5 mg/100ml Vitamin Nicotinic acid Glycine ThiamineHCl PyridoxineHCl 100 100 100 100 Inositol 100,0 Sucrose 30.000,0 Agar 8.000,0 pH 5,8 Table 2: Preparation of modified Gamborg s B5 medium (E-24medium ) Bottle Component Stock Solution (g/l) Amount to take preparation (ml) Final concentratic (mg/ l) KNO3 250 20 2500,0 (NH4)2SO4 13,4 10 134,0 MgSO4.7H2O 15,0 NaH2PO4.H2O 15 10 150,0 MnSO4.H2O 1,0 10 10,0 H3BO3 0,3 3,0 ZnSO4.7H2O 0,2 2,0 KI 0,075 10 0,75 Na2MoO4.2H2O 0,025 10 0,25 CuSO4.5H2O 0,0025 0,025 CoCl2.6H2O 0,0025 0,025 FeSO4.7H2O 2,785 Na2EDTA 3,725 37,25 CaCl2.2H2O 15,0 150,0 10 Inositol 27,85 160 mg/100ml Vitamins Nicotinic acid 100 1,0 Thiamine HCL 100 10 10,0 Pyridoxine HCL 100 1,0 Sucrose 8000,0 Agar pH 5,6 - 5,8 Table 3: Preparation of modified Gamborg s B5 medium (E-24medium ) Final Component Final Concentratic Component (mg/ l) concentratic (mg/ l) NH4NO3 400 H3BO3 6,2 Ca(NO3)2.4H2O 556 ZnSO4.7H2O 8,6 CaCl2.2H2O 96 Na2EDTA.2 H2O 37,2 MgSO4.7H2O 370 CuSO4.5H2O 0,25 K2SO4 990 FeSO4.7H2O 27,8 KH2PO4 170 MgSO4.4H2O 22,3 Na2MoO4.2H2O 0,25 mg/l Myo-inositol 100 Nicotinic acid 0,5 Pyridoxine HCL 0,5 Thiamine HCL 1,0 Glycine 2,0 Agar 6,0 Sucrose 20 pH 5,6 - 5,8 ... ng nghiên c u: Gi ng hoa lan Th ch h c (Dendrobium nobile Lindt) kh e m nh, s ch b c thu th p t Thái Nguyên - V t li u nghiên c u: Qu lan Th ch h c tháng tu i thu th p t Thái Nguyên - Ph m vi nghiên. .. ngh nhân gi ng in vitro cho h s nhân gi ng t qu lan cao b ph n khác [16] Chính v y chúng tơi ti n hành nghiên c tài Nghiên c u nhân gi ng lan Th ch h c (Dendrobium nobile Lindt) t h t b mô t...I H C THÁI NGUYÊN I H C NÔNG LÂM TH HÀO tài: U NHÂN GI NG LAN TH CH H C (Dendrobium nobile Lindl) T T H TB Y MƠ IH KHĨA LU N T T NGHI IH C H