Các phương pháp xác định hàm lượng vitamin trong thực phẩm

MỞ ĐẦU Vitamin thành phần không nhiều lại quan trọng thực phẩm Nó cần thiết cho phát triển, trì thực hoạt động chức thể người Vitamin tổng hợp chủ yếu thể thực vật vi sinh vật, người động vật tự tổng hợp vitamin Tuy nhiên có vài vitamin đặc biệt :vitamin C tổng hợp hầu hết thể động vật, vitamin A, D phát thấy thể người ,động vật thực vật Nhu cầu vitamin thể người thiết phải cung cấp đầy đủ qua thức ăn có nguồn từ động vật, thực vật, vi sinh vật.khi thiếu vitamin người động vật mắc bệnh Có nhiều vitamin chia làm nhóm lớn: vitamin tan nước vitamin tan chất béo Do vitamin có cấu tạo hóa học khác nhau, nên loại vitamin có phản ứng hóa học đặc trưng khác Người ta sử dụng phản ứng hóa học đặc trưng để định tính định lượng vitamin VITAMIN Vitamin, hay sinh tố, phân tử hữu cần thiết lượng nhỏ cho hoạt động chuyển hoá bình thường thể sinh vật Có nhiều loại vitamin chúng khác chất hoá học lẫn tác dụng sinh lý Các loại vitamin Vitamin A, B1, B2, B3, B5, B6, B7, B9, B12, C, D1, D2, D3, D4, D5, E, K Vitamin A, D, E, K hòa tan chất béo Vitamin B, C hòa tan nước Vitamin A Còn có tên retinol, axerophthol Vitamin A tồn tự nhiên gồm dạng: Retinol: dạng hoạt động vitamin A, đồng hoá trực tiếp thể Tiền vitamin A: tiền chất vitamin A biết đến nhiều tên bêtacaroten Tiền chất chuyển hoá ruột thành vitamin A để thể sử dụng Vitamin A1, A2 gặp trạng thái tự nhiên thể động vật: Vitamin A có nhiều chức quan trọng thể người: Thị giác: mắt cấu tạo sắc tố có chứa vitamin A Nó hấp thụ luồng thần kinh vận chuyển nhờ dây thần kinh thị giác Vì có mặt vitamin A phần thiếu việc đảm bảo thị giác người Các mô: Vitamin A kích thích trình phát triển biểu mô mô sừng, ruột đường hô hấp Nó ảnh hưởng đặc biệt đến da, kích thích liền sẹo phòng ngừa chứng bệnh da trứng cá Sự sinh trưởng: vai trò quan trọng phát triển tế bào người, nên vitamin A yếu tố thiếu phát triển cua phôi thai trẻ em Vitamin A có vai trò phát triển xương, thiếu vitamin A làm xương mềm mảnh bình thường, trình vôi hoá bị rối loạn Hệ thống miễn dịch: hoạt động đặc hiệu lên tế bào thể, vitamin A tham gia tích cực vào sức chống chịu bệnh tật người Chống lão hoá: Vitamin A kéo dài trình lão hoá làm ngăn chặn phát triển gốc tự Chống ung thư: hoạt động kìm hãm với gốc tự dẫn đến ngăn chặn số bệnh ung thư Vitamin D Còn có tên antirachitic factor, calcitriol Đây nhóm hóa chất phương diện dinh dưỡng có chất quan trọng ecgocanxiferon (vitamin D2) colecanxiferon (vitamin D3) Trong thực vật ecgosterol, tác dụng ánh nắng cho ecgocanxiferon Trong động vật người có 7-dehydrocholesterol, tác dụng cửa ánh nắng cho colecanxiferon Vai trò: Hình thành hệ xương: vitamin tham gia vào trình hấp thụ canxi photpho ruột non, tham gia vào củng cố, tu sửa xương Cốt hóa răng: tham gia vào việc tạo độ cho người Chức khác: vitamin D tham gia vào điều hoà chức số gen Ngoài ra, tham gia số chức tiết cảu insulin, hormon cận giáp, hệ miễn dịch, phát triển hệ sinh sản da nữ giới Vitamin E Vitamin E chất chống oxy hoá tốt cản trở phản ứng xấu gốc tự tế bào thể Vai trò: Ngăn ngừa lão hoá: phản ứng chống oxy hoá cách ngăn chặn gốc tự mà vitamin E có vai trò quan trọng việc chống lão hoá Ngăn ngừa ung thư: kết hợp với vitamin C tạo thành nhân tố quan trọng làm chậm phát sinh số bệnh ung thư Ngăn ngừa bệnh tim mạch: vitamin E làm giảm cholestrol xấu làm tănng tuần hoàn máu nên làm giảm nguy mắc bênh tim mạch Hệ thống miễn dịch: kích thích hệ thống miễn dịch hoạt động bình thường việc bảo vệ tế bào Vitamin B1 Còn có tên thiamin, aneurin Vitamin B1 đóng vai trò quan trọng việc tạo lượng cần thiết cho hoạt động chức người Vai trò: Đồng hoá đường: vitamin B1 cần thiết cho việc tạo loại enzym (tham gia vào thành phần coenzyme) quan trọng tham gia vào trình chuyển hoá đường trình phát triển thể Khi thiếu vitamin B1 axit pyruvic tích lũy thể gây độc cho hệ thống thần kinh Vì nhu cầu vitamin B1 thể tỉ lệ thuận với nhu cầu lượng Nhân tố ngon miệng: kích thích tạo thành loại enzyme tham gia vào trình đồng hoá thức ăn, kích thích cảm giác thèm ăn Sự cân thần kinh: Vitamin B1 tham gia điều hòa trình dẫn truyền xung tác thần kinh, kích thích hoạt động trí óc trí nhớ Vitamin B2 Còn có tên riboflavin Vitamin B2 giữ vai trò xác định phản ứng số enzyme cần thiết cho trình hô hấp (tham gia vào thành phần enzyme vận chuyển hiđrô) Vai trò: Cân dinh dưỡng: vitamin B2 tham gia vào chuyển hoá thức ăn thành lượng thông qua việc tham gia chuyển hoá glucid,lipid protein enzyme Nhân tố phát triển Tình trạng da Thị giác: vitamin B2 có ảnh hưởng tới khả cảm thụ ánh sáng mắt nhìn màu Kết hợp với vitamin A làm cho dây thần kinh thị giác hoạt động tốt đảm bảo thị giác người Vitamin C Còn có tên acid ascorbic Vitamin C chất chống oxy hoá tốt, tham gia vào nhiều hoạt động sống quan trọng thể Vai trò: Kìm hãm lão hoá tế bào: nhờ phản ứng chống oxy hoá mà vitamin C ngăn chặn ảnh hưởng xấu gốc tự do, có phản ứng tái sinh mà vitamin E - chất chống oxy hoá - Kích thích bảo vệ mô: chức đặc trưng riêng viamin C vai trò quan trọng trình hình thành collagen, protein quan trọng đốI với tạo thành bảo vệ mô da, sụn, mạch máu, xương Kích thích nhanh liền sẹo: vai trò việc bảo vệ mô mà vitamin C đóng vai trò trình liền seo Ngăn ngừa ung thư: kết hợp với vitamin E tạo thành nhân tố quan trọng làm chậm trình phát bệnh số bênh ung thư Tăng cường khả chống nhiễm khuẩn: kích thích tổng hợp nên interferon - chất ngăn chặn xâm nhập vi khuẩn virut tế bào Dọn thể: vitamin C làm giảm chất thải có hại thể thuốc trừ sâu, kim loại nặng, CO, SO2, chất độc thể tạo Chống lại chứng thiếu máu: vitamin C kích thích hấp thụ sắt ruột non Sắt nhân tố tạo màu cho máu làm tăng nhanh tạo thành hồng cầu, cho phép làm giảm nguy thiếu máu ĐỊNH TÍNH, ĐỊNH LƯỢNG VITAMIN A) ĐỊNH TÍNH VITAMIN I) Nhóm vitamin tan chất béo 1) Các phản ứng vitamin A (retinol) a) Phản ứng vitamin A với H2SO4 Nguyên tắc: tác dụng với H2SO4 đặc, vitamin A bị nước tạo thành sản phẩm ngưng tụ có màu hồng không bền, sau biến đổi nhanh thành màu đặc trưng lipocrom Nguyên liệu hóa chất: Dầu cá hòa tan clorofooc với tỷ lệ 1/5; H2SO4 đặc Tiến hành: Cho vào ống nghiệm 1ml dung dịch vitamin A clorofooc hai giọt H2SO4 đặc Lắc đều, quan sát biến đổi màu ống nghiệm, giải thích kết b) Phản ứng vitamin A với SbCl3 Nguyên tắc: Vitamin A có tác dụng tương hỗ với SbCl3 bão hoà chlorofooc, bị nước tạo thành sản phẩm ngưng tụ có màu, sau có biến đổi màu ống nghiệm Hóa chất: SbCl3 bão hòa chlorofooc không ngậm nứơc; dầu cá Dụng cụ: ống nghiệm (1), lọ đựng hóa chất (2) Tiến hành: cho vào ống nghiệm giọt dầu cá 1ml SbCl3 bão hòa chlorofooc Quan sát xuất màu ống nghiệm, giải thích kết quả? c) Phản ứng vitamin A với FeSO4 Nguyên tắc: Trong môi trường axit, vitamin A tác dụng với FeSO4 tạo thành sản phẩm có màu không ổn định (đối với carotin tiền vitamin A tạo thành màu đặc trưng) Hóa chất nguyên liệu: FeSO4 bão hòa CH3COOH kết tinh, H2SO4(đ), dầu cá tươi Tiến hành: cho vào ống nghiệm khô giọt dầu cá, 1ml FeSO4 bão hòa CH3COOH giọt H2SO4(đ) quan sát biến đổi màu ống nghiệm giải thích tượng 2) Phản ứng vitamin K với anilin Nguyên tắc: Metinon có cấu trúc tương tự vitamin K1, tổng hợp nhân tạo, có hoạt tính sinh học cao Khi metinon tác dụng với anilin tạo thành hợp chất màu Phản ứng sau: ﾧ O O CH3 H 2N CH3 Aniline NH HO CH3 O Metinon 2methyl 1,4 naphtoquinon O methyl phenyl amino 1,4 naphtoquinon (dạng oxy hoá) HO Metinon (dạng khử) Nguyên liệu hóa chất: vitamin K 0,2% cồn, anilin chưng cất lại Tiến hành: Cho vào ống nghiệm 1ml vitamin K 0,2% 10 giọt thuốc thử anilin Lắc đều, quan sát xuất màu ống nghiệm, giải thích kết 3) Các phản ứng vitamin E (Tocopherol) a) Phản ứng vitamin E với FeCl3 Nguyên tắc: Tocopherol tác dụng với FeCl3, bị oxy hóa thành tocopherylquinon xảy phản ứng sau: Hóa chất: FeCl3 5%, vitamin E 0,1% cồn Dụng cụ: ống nghiệm, lọ đưng hóa chất Tiến hành: cho vào ống nghiệm 10 giọt vitamin E 0,1% 10 giọt FeCl3 5%, lắc Quan sát xuất màu ống nghiệm, giải thích kết quả? b) Phản ứng vitamin E với HNO3 Nguyên tắc: tác dụng HNO3 đặc, vitamin E bị oxi hóa thành hợp chất kinon Nguyên liệu hóa chất:vitamin E( 0.1 %) cồn 96 ,HNO3(đ) Tiến hành: cho vào ống nghiệm khô 10 giọt vitamin E (0.1 %) 1ml HNO3(đ) lắc nhẹ, để đến phút quan sát giải thích tượng 4) Phản ứng vitamin D (canxipherol) a) Phản ứng vitamin D với anilin Nguyên tắc: môi trường axit ,vitamin D tác dụng với anilin,tạo thành hợp chất màu đặc trưng Tiến hành: cho vào ống nghiệm khô giọt dầu cá, ml clorofooc giọt thuốc thử anilin,lắc ống nghiệm xuất nhũ tương có màu Đun ống nghiệm sôi 30 giây, dung dịch biến đổi thành màu đặc trưng b) Phản ứng vitamin D với SbCl3 Nguyên tắc: vitamin D tác dụng với SbCl3 clorofooc tạo thành hợp chất màu đặc trưng Tiến hành: cho vào ống nghiệm khô ml dầu cá tan clorofooc Lắc quan sát màu ống nghiệm, giải thích kết c)phản ứng với brome Khi cho dung dịch Br2/CHCl3 vào dung dịch vitamin chất lỏng có màu xanh Tiến hành: Cho vào ống nghiệm giọt dầu cá sau thêm giọt dung dịch Br2/CHCl3 chờ môtl lúc dung dịch xuất màu xanh II)ﾧﾧ Nhóm vitamin tan nước 1) Phản ứng phát huỳnh quang vitamin B1 a) phản ứng tạo thành thiocrom Nguyên tắc: Trong môi trường kiềm, tác dụng ferrixianuakali, tiamin bị oxi hóa thành tiocrom Dưới ánh sáng tia tử ngoại, tiocrom phát huỳnh quang có màu đặc trưng.phản ứng sau: Nguyên liệu hóa chất: Vitamin B1 1%, NaOH 10%, K3[Fe(CN)6] 1%, rượu izobutilic Tiến hành: Cho vào ống nghiệm 20 giọt vitamin B1 1%, 10 giọt NaOH 10% giọt K3[Fe(CN)6] 1% Lắc dung dịch xuất màu Thêm vào ống nghiệm 20 giọt rượu izobutilic, lắc đều, sau để yên, dung dịch ống tạo thành lớp ngăn cách Để ống nghiệm ánh sáng mặt trời ánh đèn tia tử ngoại, quan sát tạo thành huỳnh quang, giải thích kết b) phản ứng AgNO3 Nguyên tắc: Thiamin phản ứng với nitrat Ag kết tủa màu xám Tiến hành:Dùng 2ml dung dịch vitamin B1 ,axit hóa axit nitric loãng 0.1% them vào ml dung dịch AgNO30.5%, màng kết tủa xuất c) Phản ứng với thuốc thử diazo (hỗn hợp axit sulfannilic natri nitric) Nguyên tắc: vitamin B1 phản ứng với thuốc thử diazo cho màu vàng da cam đỏ Nguyên tắc: Cho vào ống nghiệm 0.5 ml dung dịch axit sulfannilic vào 0.5 ml dung dich natri nitric, thêm vào vài giọt dung dịch vitamin B1 10 giọt carbonat Na 10%.Lắc ống nghiệm ta thấy màu đỏ da cam 2) Phản ứng vitamin B6 (Pyridoxin) với FeCl3: Nguyên tắc: Pyridoxin tác dụng với FeCl3 tạo thành phức chất có màu đặc trưng.phản ứng sau: Hóa chất: pyridoxin 1%; FeCl3 5%; Dụng cụ: ống nghiệm (1); lọ đựng hóa chất (2) Tiến hành: cho vào ống nghiệm 1ml pyridoxin 1% giọt FeCl3, lắc Quan sát xuất màu ống nghiệm, giải thích kết quả? 3) Các phản ứng vitamin C a) Phản ứng vitamin C với ferrixianuakali (K3[Fe(CN)6]) Nguyên tắc: Vitamin C có nhóm enol linh động dễ dàng tham gia vào phản ứng oxy hoá khử với số chất như: ferrixianuakali; 2,6 – diclorophenol indolphenol, iot.phản ứng xảy sau: Hóa chất: K3[Fe(CN)6] 5%; FeCl3 5%; axit ascorbic 1% Dụng cụ: ống nghiệm , lọ đựng hóa chất Tiến hành: cho vào ống nghiệm 1ml axit ascorbic 1%, 1ml K3[Fe(CN)6] 5% giọt FeCl3 5%, lắc nhẹ Quan sát xuất màu ống nghiệm, giải thích kết quả? b) Phản ứng vitamin C với 2,6-diclorophenol indophenol (2,6D) 2,6D môi trường kiềm có màu xanh, môi trường axit có màu hồng, tác dụng với vitamin C, phản ứng oxi hóa –khử diễn sau: Hóa chất:axit ascorrbic 1%, 2,6D 0.01%; HCl 2% Tiến hành: cho vào ống nghiệm 20 giọt 2,6D 0.01% giọt HCl 2%dung dịch xuất màu.sau cho 10 giọt B) ĐỊNH LƯỢNG VITAMIN I)Xác định Vitamin A thực phẩm phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao Chuẩn bị dụng cụ: - Hệ thống máy HPLC, Shimadzu - Cột Purospher Star RP-18e( 150x4.6mm,5um) - Cân phân tích có độ xác 0.1mg - chưng cất có ống sinhhàn hồi lưu - bình định mức 10ml - pipet loại : 0.1ml, 0.5ml,1ml, 2ml, 5ml, 10ml, - ống Hatch - Dụng cụ thủy tinh loại: Becher, erlen Chuẩn bị hóa chất: Hóa chất phải loại tinh khiết sử dụng để phân tích , gồm: nước cất loại dùng cho HPLC - Dietyl ete tinh khiết Peroxit - Etanol - Dung dịch Kalihydroxyde( KOH) 2M cồn : hòa tan 11.2g KOH 100ml cồn 96o - Dung dịch Kalihydroxyde ( KOH) 2% nước : Hòa tan 2g KOH 100ml nước cất - Acetonnitrile, HPLC - Na2SO4 khan Cách tiến hành: Xây dựng đường chuẩn: Nếu dùng chuẩn vitamin A phân tích thiết bị HPLC Nếu Dùng vitamin A dạng este, thí dụ vitamin A acetat, vitamin A palmitat, phải tiến hành xà phòng hóa để giải phóng vitamin A thể tự tiến hành phân tích HPLC Xây dựng đường chuẩn dùng Vitamin A palmitat Quá trình xà phòng hóa: Cân 18.32 mg vitamin A palmitat tương ứng với 10mg vitamin A ( phân tử lượng Vitamin A 286, phân tử lượng vitamin A Palmitat 524) cho vào bình cầu có cổ nhám, thêm 20-40ml dung dịch KOH 2M etanol 0.5natri ascorbat lắp ống sinh hàn hồi lưu Đặt nồi cách thủy, xà phòng hóa nhiệt độ 70oC 30 phút Chuyển dung dịch nóng vào bình lóng, rửa bình cầu nhiều lần H2O cất tập trung nước rửa vào bình lóng Chú ý: lượng nước không lầnlượng KOH 2M để tránh hình thành nhủ tương gây Vitamin A chiết Vitamin A từ dung dịch xà phòng hóa chiết lần dietyl ete peroxit lần, lần 40ml Tập trung lớp ete chiết vào bình lóng Rửa lớp ete nhiều lần với nước cất (mỗi lần 50ml) không vết kiềm (thử với phenolphtalein) Loại nước dịch chiết etebằng cách lọc qua lớp Na2SO4 khan, rửa lớp Na2SO4 ba lần, lần với 10ml ete Gộp tất lốp ete vào bình lê Cô quay đến cạn Cặn lại hòa tan acetonitrile, chuyển sang bình định mức 10ml Định mức đến vạch acetonitrile Dung dịch dùng để làm dung dịch vitamin A chuẩn gốc (1000mg/l) Dung dịch chuẩn 100ug/ml: hút xác 1ml dung dịch vitamin A chuẩn gốc 1000ug/ml vào bình định mức 10ml Định mức tới vạch ACN Chuẩn bị mẫu thử : Cân khoảng 10g mẫu thử nghiền nhỏ ( cần) cho vào bình cầu thuỷ tinh có cổ nhám tiến hành xà phòng hoá ghi phần Sau rửa dịch chiết ete 15ml KOH 2% nhiều lần với nước cất ( lần 50ml) cho 10 đến không vết kiềm ( thử với phenoltalein) Loại nước dung dịch chiết ete cách lọc qua lớp NaSO4 khan , rửa lớp Na2SO4 ba lần, lần với 10ml ete Gộp tất lớp ete vào bình lê Cô quay đến cạn Hoà tan phần lại xác 1ml dung dịch pha động ( vortex 15giây siêu âm phút) Lọc dịch đục qua màng lọc 13mm, 0.45um thu dịch lọc tiến hành phân tích HPLC Chuẩn bị mẫu kiểm tra hiệu suất thu hồi: Cho thêm 0.5ml dung dịch chuẩn 10ng/ml vào 10g mẫu trắng đồng mẫu chách siêu âm khoảng phút tiến hành chuẩn bị mẫu giống chuẩn bị mẫu thử Tiến hành phân tích HPLC: Điều kiện phân tích : - pha động - tốc độ dòng - detector UV, λ= 325nm tiêm dung dịch mẫu thử nghiệm theo thứ tự sau: - Các dịch chuẩn Dựng đừơng chuẩn nồng độ chuẩn vitamin A diện tích chuẩn Vitamin A Tính toán hệ số tương quan hồi quy tuyến tính - Dung dịch mẫu trắng - Dung dịch mẫu kiểm soát tính hàm lượng vitamin A dịch chiết mẫu thông qua đường chuẩn xây dựng bước Tính độ thu hồi mẫu kiểm soát (R) - Các dung dịch mẫu thử nghiệm tính hàm lượng vitamin A dịch chiết ( Co ) thông qua đường chuẩn xây dựng bước Tinh kết quả: Hàm lượng vitamin A có mẫu tính theo công thức sau: C = Co/m Trong đó: - C hàm lượng Vitamin A có mẫu Tính theo mg/Kg - Co hàm lượng Vatamin A dịch chiết.( Co) thông qua đường chuẩn, mg/L - m : Khối lượng (g 11 II.Định lượng vitamin C theo phương pháp chuẩn độ 1)Phương pháp sử dụng 2,6 - diclophenol - inodophenol – DPIP a)Nguyên tắc: Vitamin C (axit ascorbic) hòa tan nước, dễ bị phân hủy tác dụng chất oxi hóa bền môi trường axit Vì người ta thường chiết axit ascorbic mẫu phân tích dung dịch axit axit axetic 5%, axit metaphôtphoric 2% Phương pháp dựa nguyên tắc axit ascorbic có khả oxi hóa khử thuận nghịch chất thị 2,6 - diclophenol - inodophenol – DPIP Dựa vào lượng chất thị tiêu tốn tính lượng axit ascorbic có mẫu phân tích Phản ứng xẩy sau: Chất thị có khả chuyển màu PH môi trường thay đổi từ kiềm sang axit, có màu tím khoảng PH từ đến có màu hồng PH < b)Hóa chất : Dung dịch HCl 1% CH3COOH 5% Dung dịch axit metaphosphoric (HPO3) 2% hay axit axetic 1% Dung dịch amoni oxalate (C2H8N2O4) bão hòa Tinh thể KI Dung dịch H2SO4 2% axit ascorbic (Vitamin C) tinh khiết ( bảo quản kín lọ màu tối) Dung dịch hồ tinh bột 1% Dung dịch thuốc thị DPIP 0.001N: cân 0.15g DPIP cho vào bình định mức dung tích 500 ml, them 350ml nước cất, cho tiếp dung dịch đệm phôtphat PH = 6,9 đến 7,0 đến vạch mức nước, thuốc thử bị phá hủy nhanh nên pha với dung dịch đệm Thuốc thử DPIP bảo quản bình có màu nơi tối ( không ngày) Dung dịch đệm phosphate PH = 6.9 đến 7,0: trộn thể tích KH 2PO4 (9,075 gam KH2PO4 lit nước cất) thể tích Na 2HPO4 (11,867 gam Na2HPO4 2H2O lit nước cất) với trước đem dùng c)Tiến hành: Cân 10 đến 50 g rau tươi đến 10 g sản phẩm đóng hộp, tùy theo hàm lượng Vitamin C có lọ nguyên liệu Cho mẫu vào cối sứ Cho thêm 4,5 ml HCl 1% (hoặc CH3COOH 5%) vào cối (ngập kín mẫu) Khi lấy mẫu tránh dung dụng cụ sắt đồng Nghiền mẫu không 10 phút Cho dịch nghiền vào bình định mức 100 ml Cho thêm 25 ml axit metaphosphoric 2% ( chì axetat 5%) để loại bỏ protein Lắc đều, tiếp tục 12 cho thêm HCl 1% (hoặc axit oxalic 1%) để tráng cối thêm đến vạch mức Khi thí nghiệm với mẫu động vật dùng axit tricloaxetic (CCl 3COOH) 20%, cho nồng độ đạt 5% dung dịch (25 ml) Trong trường hợp axit metaphosphoric (HPO3) oxalic (C2H2O4) dùng HCl 1% CH3COOH 5% Lắc để yên 10 phút, lọc Dùng pipet lấy ml dịch chiết lọc cho vào bình nón 50 ml, thêm ml dung dịch amoni oxalate bão hòa, 10 ml nước cất chuẩn độ dung dịch DPIP xuất màu hồng bền ( không màu 10 phút) Trong truờng hợp dùng axit oxalic không cẩn cho thêm amoni oxalate Song song làm thí nghiệm kiểm tra với hóa chất sử dụng Chú ý: Khi xác định Vitamin C mẫu thí nghiệm phải phân tích mẫu, mẫu bình thí nghiệm Kết chuẩn độ lần không sai khác 0,03 ml DPIP 0,001N Thời gian chuẩn độ không phút lượng thuốc thử DPIP dung để chuẩn độ khoảng từ đến ml (không ml ml) d)Tính kết quả: Hàm lượng Vitamin C (mg %) tính theo công thức    a −b  × f ×V ×100   Trong đó: a – Số ml dung X = 5×W dịch DPIP 0,001N dung chuẩn độ bình thí nghiệm, b – Số ml dụng dịch DPIP 0,001N dung chuẩn độ bình kiểm tra, f – hệ số dung dịch chuẩn, V – Thể tích dịch chiết Vitamin C (ml), w – khối lượng mẫu thí nghiêm (g) Xác định hệ số f : hòa tan đến 1,5 mg axit ascorbic vào 50 ml H 2SO4 2% Lấy ml dung dịch chuẩn độ dung dịch DPIP 0,001N màu hồng bền lấy vào bình định mức khác ml dung dịch axit ascorbic trên, thêm tinh thể KI (3 – mg) giọt hồ tinh bột 1% Chuẩn độ dung dịch KIO3 0,001N xuất màu xanh Hệ số f tính theo công thức: f = 0,088×a b Trong đó: 0,088 – số mg axit ascorbic ứng với 1ml dung dịc KIO3 0,001N (giống với 1ml dung dịch DPIP 0,001N) a – số ml dung dịch KIO 0,001N dùng để chuẩn độ ml dung dịch axit ascorbic b – số ml dung dịch DPIP 0,001N để chuẩn độ ml dung dịch axit ascorbic 2) Phương pháp sử dụng iot: a) Nguyên tắc: Vitamin C khử dung dịch iot Dựa vào lượng iot bị khử Vitamin C có mẫu, suy hàm lượng vitaminC b) Hóa chất: 13 - Dung dịch HCl 5% - Dung dịch 0,01N - Dung dịch tinh bột 1% c) Tiến hành: Cân gam tươi nghiền nhỏ cối sứ với ml HCl 5%, nghiền kĩ, cho vào ống đong (hoặc bình định mức), dẫn đến vạch 50 ml nước cất Khuấy đều, lấy 20 ml dịch nghiền cho vào bình nón dung tích 100 ml, chuẩn độ dung dịch I2 có tinh bột làm thị màu màu xanh d)Tính kết quả: Hàm lượng Vitamin C tính theo công thức sau: V ×V ×0,00088×100 X %= Trong đó: V – số ml dung V ×W dịch iot 0.01N dùn chuẩn độ V1- thể tích dịch mẫu thí nghiệm (50ml) V2- thể tích dịch mẫu lấy để xác định (20ml) w- khối lượng mẫu(g) 0.00088- số gam vitamin C tương ứng với 1ml dung dịch iot 0.01N III địng lượng vitamin B2 phương pháp huỳnh quang Sự phát quiang hiểu lượng tách nguyên tử kích thích chùm sáng có bước song tới hạn, tương tự tượng lân quang Tuy nhiên khác nhau,giữa hai tượng phát huỳnh quang giải phóng lượng ánh sáng hấp thụ từ nguyên tử hay phân tử, lân quang giải phóng từ lượng hấp thụ Cả hai phát quang Rất nhiều hợp chất giàu e, hợp chấy chứa hai nhiều nối đôi liên hợp có ∏-electron nên phát huỳnh quang Các e phân tử tồn điều kiện lượng thấp (mức l ượng thấp trạng thái bản)vì e không ổn định bậc lượng khác Trạng thái trạng thái lượng bình thường phân tử phân tử bị chiếu xạ tử ngoại hấp thụ số proton phân tử bị kích thíchđén trạng thái lượng cao Hiện tượng giống tượng xảy e e thu lượng nhảy từ trạng thái lượng đến mức lượng cao trạng thái kích thích Theo lí thuyết lượng tử mức lượng phân tử tồn số trạng thái xác định ,cho nên có ánh sáng với tần số tương ứng với lượng cần thiết để nâng phân tử từ trạng thái lên trạng thái kích thích bị hấp thụ Bởi nhiều trạng thái kích thích hình thành, nên hợp chất hấp thụ ánh sáng với tần ssó khác Quá trình hấp thụ xảy nhanh khoảng 10 -15 giây Electron se trì trạng thái kích thích từ 10-8 ddeens 10-4 giây Sau bắt đàu nhảyvề trạng 14 thái trình xảy qua va chạm phân tử mà lượng tỏa dạng nhiêựt e rơi xuống mức dao động thấp trạng thái ,đồng thời giải phóng photon lượng phát huỳnh quang Do lượng lượng dã bị trước e nhảy xuống trạng thái lượng thấp ,nên lượng giải phóng dạng photon phải có lượng photon kích thích Các hợp chất phát quang tự nhiên đươc gọi phát huỳnh quang tự phát Nhiều hợp chất không phát huỳnh quang chuyển hóa hóa học thành chất phát huỳnh quang hóa học.nếu e hợp chất tự (ví dụ cách thay O,N S vào cấu trúc) khả phát huỳnh quang tăng lên Tuy nhiên số nhóm có xu hướng định xứ điện tử làm giảm độ huỳnh quang.từ điều thấy bước song hấp thụ bước song phát xạ hợp chất khác Có nhiều hợp chất hấp thụ lượng vpứi bứơc sóng nhau,một số chất phát quang bước sóng kết hợp hai bước sóngkhá đặc trưng cho hợp chất, phép đo huỳnh quang dùng phân tích định tính Nếu có nghi ngờ có mặt hợp chất phát quang, tiếp tục đo bước sóng lân quang, xê dịch bước sóng huỳnh quang PH, hiệu suất lượng tử, thời gian phát quang liệu phân cưch hóa hoàn chỉnh nghiên cứu Tính đặc thù phép đo huỳnh quang đơn giản hóa làm tăng độ tin cậy trình phân tíchvì hợp chất thường đo trực tiếp mà chiết tách trước không giống quang phổ hấp thụ mà hợp chất khác co khả hấp thụ bước sóng kích thích khác Với việc thay đổi bước sóng kích thích cực đại thay đổi PH, làm giảm chí đến mức tối thiểu tính chất Phép đo huỳnh quang dùng phân tich dịnh lượng cường độ huỳnh quang tỉ lệ thuận với nồng độ hợp chất phát quang Tuy nhiên mối liên quan trực tiếp với dung dịch loãng ánh sáng phát từ chất phát quang phải di qua dung dịch trước đến máy đo quang lượng ánh sáng bị hấp thụ phân tử khác dung dịch Nồng độ cao lượng ánh sáng phát xạ bị hấp thụ lớn, điểm định mà tăng tiến tới bão hòa cường độ huỳnh quang bắt đầu giảm dần (vì lí mà đường chuẩn thường dùng thí nghiệm đo huỳnh quang ) Do giá trị cường độ huỳnh quang tương ứng với hai giá trị nồng độ chất phát quang Chất tan có ảnh hưởng đến tính chất phát huỳnh quang hợp chất chất tan khác làm tăng giảm cường độ phát quang Cũng số điện môi thể mức độ phát quang tự điện tử л thể thay đổi bước sóng cực đại huỳnh quang Dung dịch đệm có xu hướng gây ảnh hưởng dập tắt bước sóng số chất ảnh hưởng tăng dung dịch đệm tăng lên 15 Cường độ phát huỳnh quang hợp chất dễ bị ion hóa thay đổi theo trạng thái ion hóa mà trình ion hóa lại phụ thuộc độ PH Nhiều hợp chất sinh học có khả phát huỳnh quang tự nhiên pháy huỳnh quang hóa học dễ bị ion hóa, cường độ phát huỳnh quang chất phụ thuộc vào PH Một số hợp chất bị ion hóa ánh sáng phát huỳnh quang Cường độ huỳnh quang có xu hướng giảm nhiệt độ tăng Nhiệt độ cao tốc độ chuyển động phân tử dung dịch tăng Do lượng hấp thụ chuyển thành nhiệt huỳnh quang Với số chất không bền dung dịch ,tốc độ phân hủy quang phụ thuộc vào cường độ ánh sáng Phần lớn chất phát huỳnh quang phân hủy thành chất không phát huỳnh quang Tuy nhiên số phân hủy thành chất có độ huỳnh quang chí cao chất ban đầu Phần lớn máy đo huỳnh quang có khe đóng mở ghiữa nguồn sáng mẫu thí nghiệm, khe mở trước đo để giảm tối thiểu phân hủy quang Sự dập tắt xảy phat huỳnh quang chất bị giảm chất khác Có hai loại dập tắt: dập tắt ảnh hưởng màng lọc dập tắt thật ảnh hưởng màng lọc xảy màng lọc hấp thụ ánh sáng kích thích ánh sáng phát xạ dập tắt thật xảy yếu tố gây tắt làm giảm lượng phát quang.làm cho lượng hấp thụ biến thành dạng lượng khác thành dạng lượng huỳnh quang.sự dập tắt xảy trường hợp chất phát quang chuyển hóa thành chất không phát quang Có thể phân tích yếu tố dập tắt thong qua biến hợp chất phát quang dung dịch Ví dụ biến phức chất borat-benzoin phổ phát quang oxi Đóng góp quan trọng phương pháp đo quang phổ huỳnh quang tính đặc thù độ nhạy tính đặc thù miêu tả ,còn độ nhạy thường gấp vài nghìn lần so với phương pháp quang phổ hấp thụ Trong phương pháp đo phổ huỳnh quang ,bước sóng ánh sáng phát xạ dài bước sóng ánh sang kích thích Vì vậy, máy đơn sắc dược dung để ngăn phần lopứn ánh sang kích thích đến máy ghi phổ mà cho phép ánh sáng huỳnh quang qua,cho nên phép đo huỳnh quang tiến hành điều kiện cường độ ánh sang thấp kĩ thuật hấp thụ độ nhạy cảm mức hấp thụ thấp phụ thuộc vào tính xác, so sánh hai cường độ ánh sáng tương tự Có hai ưu điểm việc sử dụng đo huỳnh quang so với kĩ thuật hấp thụ là: Chỉ cần đo lần không cần đo hai lần kĩ thuật hấp thụ Kết đưa từ máy đo huỳnh quang tỉ lệ thuận trực tiếp với nồng độ tỉ lệ nghịch với logarit nồng độ Dựa vào ưu điểm mà người ta dung phương pháp huỳnh quang để xác định hàm lượng vitamin B2 1.Nguyên tắc: 16 Trong ngũ cốc riboflavin (latoflavin,vitamin G, vitamin B 2) chất có màu vàng-xanh định phương pháp phân tích huỳnh quang riboflavin có nhiều tế bào động vật thực vật bền muối khoáng phần lớn tác nhân oxi hóa ,nhưng lại không bền dung dịch kiềm.nó nhạy cảm với tia khả kiến tia tử ngoại nên thap tác thực ánh sáng dịu dụng cụ thí nghiệm thủy tinh có độ quang hóa thấp Trong tế bào sống ,riboflavin thừờng kết hợp với axit photphorichoawcj với axit adenylic (FMN FAD) Cả kết hợp số protein đặc thù để hình thành enzyme oxi hóa Trong số sản phẩm ( sữa), riboflavin tồn dạng tự thẩm tách dạng coenzyme Trong phần lớn quy trình riboflavin, cần thiết phải xử lý sản phẩm tự nhiên với axit enzyme để thu giá trị tối đa Bước xử lý giải phóng riboflavin khỏi phức chất protein giúp cho việc tách chiết dễ dàng Riboflavin tách chiết từ ngũ cốc phân tích máy quang phổ quét tự vi Dùng máy quang phổ huỳnh quang quét có điều khiển để điều chỉnh phát huỳnh quang riboflavin có mặt chất gây cản trở, chất theo lý thuyết có ảnh hưởng đến chất chuẩn mẫu thí nghiệm Do cường độ phát huỳnh quang tỷ lệ với nồng độ riboflavin dung dịch loãng nồng độ đo dựa vào chênh lệch độ huỳnh quang trước sau khử Natritiosunfit (Na2S2O4 ) 2) Tiến hành a) Quy trình thí nghiệm tách chiết 1.cân 6.0 g ngũ cốc (dự tính chứa đến 10 microgam riboflavin), nghiền cối sứ 2.đổ vào bình nón 100 ml them 50 ml dung dịch HCl 0.01M lức bình để tẩm ươt hết ngũ cốc sau đậy nắp bình giấy nhôm (tốt giấy bạc) để tránh riboflavin bị phân hủy ánh sáng Đặt nồi cách thủy đun sôi khoảng giờ, phút lại lắc lần kiểm tra mức nước lần lắc bình, không để nước cạn 3.Làm nguội bình đến nhiệt độ phòng cho vào cốc 100 ml.dùng máy đo PH chỉnh đến 6.0 (bằng dung dịch NaOH 0.5M) Chú ý: Cho NaOH từ từ dể tránh chổ có PH cao dẫn đến mât riboflavin 4.Ngay them HCl 1M để giảm PH đến 4.5.li tâm ống li tâm thủy tinh 100 ml 2000 v/phút (rpm) 10 phút 5.Pha loãng dịch lọc đến 250 ml với nước cất bình định mức b) Quá trình axit hóa oxi hóa dịch chiết 1.Lấy ống nghiệm, cho vào ống 10ml dịch chiết ml nước.trộn máy trộn 17 2.Lấy 2ống nghiệm khác, cho vào óng 10 ml dịch chiết 1ml dung dịch chuẩn riboflavin (0.5 microgam/ml) trộn 3.Cho ml axit axetic đặc vào ống nghiệm để phút 4.Cho thêm 0.5 ml dung dịch KMnO4 3%vào ống, trộn để phút 5.Cho 0.5 ml H2O2 3% vào ống trộn màu đỏ biến vong 10 giây c) Đo độ huỳnh quang dịch chiết 1.Để đo độ huỳnh quang riboflavin, bước song phát xạ bước sóng kích thích phải xác định máy đo quang phổ quét (scanning spectrophotometer) 2.Xác định cực đại bước sóng phát xạ bước sóng kích thích dung dịch chuẩn riboflavin (nồng độ microgam/ml riboflavin) giá trị cực đại cho kích thích nên có giá trị 450 nm Giá trị cực đại cho phát xạ 530nm F =2.303.Ф.p0.έ.b.c Trong đó: Ф –hiệu suất lượng tử P0 –cường độ tối έ – độ hấp thụ phân tử b –độ dài đường dẫn c – nồng độ Phương trình với dung dịch có nồng độ thấp phương trình trên,cường độ huỳnh quang tỉ lệ thuận với cường độ tối p nồng độ c độ huỳnh quang tăng p0 tăng (hoặc công suất nguồn tăng), độ huỳnh quang tăng nồng độ chất phát quang tăng Để thành lập mối lien quan theo định luật Lambert-Beer, có đường chuẩn độ cho riboflavin chứa 0.5 – 1.0 – 2.0 4.0 microgam/ml Chú ý: Trong đo huỳnh quang, phải để cẩn thận tránh không cho dung dịch tiếp xúc với tia tử ngoại lâu không làm riboflavin bị phân hủy nhanh 3.Đo độ huỳnh quang dịch chiết không chứa riboflavin (kết A) dung 3ml dung dịch cuvett 4.Cho vào cuvett chứa ml dịch chiết khoảng 5mg Na 2S2O4 (pha nước) trộn đo (kết C) 5.Đo độ huỳnh quang dịch chiết có chứa riboflavin thêm vào (kết B) 3) Tính kết Tính lượng riboflavin có ngũ cốc công thức sau: 4) Báo cáo thí nghiệm vẽ đường chuẩn để thành lập mối liên hệ theo định luật Lambert-Beer cho riboflavin, dung dung dịch riboflavin chuẩn 0.5;1.0;2.0 micrôgam/ml 18 2.So sánh kết thu với giá trị vỏ hộp (đã xác định nhà sản xuất) 3.Vẽ cấu tạo hóa học riboflavin chất phần phát huỳnh quang 4.Sự tăng lượng tử chất ảnh hưởng đến cường độ huỳnh quang nào? IV Định lượng vitamin B1 phương pháp huỳnh quang 1)Nguyên tắc Khi oxi hóa vitamin B1(thiamin) kali feroxianua môi trường kiềm tạo thành hợp chất thiochom,chất có màu huỳnh quang xanh ánh sáng tử ngoại.Cứ phân tử thiamin tạo thành phân tử thiocrom Để xác định hàm lượng thiamin, người ta dùng dung dịch chuẩn thiamin tinh khiết so sánh với dung dịch nghên cứu trước tiến hành phản ứng, thiamin phải giải phóng khỏi mẫu chế phẩm enzim photphataza , papayolin ,hoặc takađiataza 2)Hóa chất -Dung dịch H2SO4 0.1N -Dung dịch CH3COOH 30% -Dung dịch NaOH 15% -Dung dịch kaliferoxianua [K 3Fe(CN)6] 1%chẩn bị để dùng ngày giữ lo mầu -Rượu butylic (C4H9OH) isoamylic [(CH3)2CH(CH2)2OH]: rượu không phát huỳnh quang Nếu phát huỳnh quang phải khử than hoạt tính(15 g than cho vào ml rượu): rượu trộ với than lắc 30 phút máy lắc ,lọc làm khan CaCl2 cất nhiệt độ thích hợp -Chế phẩm photphataza khuẩn ti penicillium: khẩn sấy khô nhiệt độ 400c lấy 10 mg khuẩn nghiền với 1ml dung dịch natri axetat 30%, chuyển vào bình định mức, thêm natri axetat đến PH=5 -Dung dịch vitamin B1 chuẩn +Dung dịch gốc(a): 10mg thiamim tinh thể hòa tan vào 10ml HCl 0.01N.Chuyển dung dịch vào bình định mức dung tích 100ml.Thêm cất đến vạch,lắc kỹ.Đựng chai màu nâu,để chổ mát tháng.Cứ 1ml dung dịch 100γ –thiamim.Lấy 1ml dung dịch cho vào bình dịnh mức dung tích 100ml,thêm nước cất đến bình định mức,lắc kỹ,1ml dung dịch chứa γ thiamim + Dãy dung dịch thiamim chuẩn(b):từ dung dịch cho vào ống nghiệm 0.5;1.0;1.5;2ml(chứa 0.5;1.0;1.5;2 γ thiamim ),thêm vào ông nghiệp 4.5;4.0;3.5;3.0ml nước cất 1ml dung dịch K 3Fe(CN)6 1% (mới pha).Cuối cho vào ống 3ml dung dịch NaOH 1%.Lắc nhanh,mỗi ống lại cho thêm 10ml rượu butylic,lắc.Để yên 10 phút ,dung dịch tách thành lớp.Li tâm ,tách bơ lớp dưới,cho vào 1g Na 2SO4 khan.Dung dịch rượu khan chứa thiỏcom cho vào dãy ống nghiệp khác.Ta dãy 19 màu tiêu chuẩn bền 2-3 ngày 3)Tiến hành: 1.Cân 5-10g mẫu, nghiền cối sứ với 10-15ml H 2SO4 0.1N.Chuyển vào bình định mức cỡ 100ml,thêm H2SO4 đến 75ml 2.Đặt bình vào nồi cách thủy sôi 45 phút ,lắc điều, để nguội vào thêm chế phẩm photphataza vào( 1g mãu cần 0.03g khuẩn ti khô)bằng cách:cân khuẩn ti,đem nghiền cối với 2-3ml natri axetat 30% chuyển vào bình định mức, thêm natri axetat đến pH=5 3.Đặt bình vào máy ổn nhiệt 40 oC 12 giờ.Sau lấy bình ra,thêm nước cất đến bình định mức,lắc kỹ,lọc 4.Hút lấy 5ml nước lọc cho vào phiễu chiết,thêm 10ml rượu butylic,lắc mạnh 1-2 phút ,chiết tách bỏ lớp rượu Thêm vào 1ml dung dịch K 3Fe(CN)6 1% 3ml NaOH 15% ,lắc nhanh thêm 10ml rượu butylic.Lắc,tách bỏ lớp nước.Lọc lớp rượu qua giấy lọc chứa NaOH khan.Chuyển dung dịch vào ống nghiệm 5.Đo cường độ huỳnh quang mẫu thí nghiệm so với dãy dung dịch thiamim chuẩn máy quang phổ ánh sáng tử ngoại đèn thạch anh,thủy ngân TIK-4,kính lọc màu đen(kích thước 432ml nm,sự phát xạ 545nm) 4)Tính kết quả: Hàm lượng vitamim B1(mg%)được tính theo công thứ sau: X = a×V ×100 V ×W×1000 Trong đó: a- lượng vitamim có ống nghiệm chuẩn có màu huỳnh quang trùng với mẫu ống nghiệm (γ) V-dung tích bình định mức(ml) V1- thể tích dung dịch thí nghiệm lấy để oxi hóa(ml) w- khối lượng mẫu(g) 1000-chuyển từ γ mg V.Chuẩn hoá phương pháp xác định hàm lượng Vitamin D ( D2 D3) thực phẩm phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC Nguyên tắc: Xác định vitamin D (D2 and D3) thực phẩm phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao sử dụng rộng rãi giới Để chuẩn hoá phương pháp phù hợp với phòng thí nghiệm tiến hành khảo sát phân tích HPLC hãng Finnigan Mẫu xà phòng hoá dung dịch kali hydroxit môi trường ethanol nhiệt độ phòng qua đêm nhiệt độ 75oC Sau chất không xà phòng hoá (trong có vitamin D) chiết ete dầu hoả làm qua cột SPE Bơm dung dịch rửa giải thu vào hệ thống sắc ký xác định vitamin D định detector DAD bước sóng 265nm Kết thu cho giới hạn phát vitamin D2 D3 2,2 3,4ppb; giới hạn định lượng tương ứng 11ppb; độ thu hồi vitamin D đạt 75-90 % 20 [...]... hàm lượng vitamin A trong dịch chiết ( Co ) thông qua đường chuẩn xây dựng ở bước trên Tinh kết quả: Hàm lượng vitamin A có trong mẫu được tính theo công thức sau: C = Co/m Trong đó: - C là hàm lượng Vitamin A có trong mẫu Tính theo mg/Kg - Co là hàm lượng Vatamin A trong dịch chiết.( Co) thông qua đường chuẩn, mg/L - m : Khối lượng (g 11 II .Định lượng vitamin C theo phương pháp chuẩn độ 1 )Phương pháp. .. Hàm lượng vitamim B1(mg%)được tính theo công thứ sau: X = a×V ×100 V ×W×1000 Trong đó: 1 a- lượng vitamim có trong ống nghiệm chuẩn có màu huỳnh quang trùng với mẫu ống nghiệm (γ) V-dung tích bình định mức(ml) V1- thể tích dung dịch thí nghiệm lấy để oxi hóa(ml) w- khối lượng mẫu(g) 1000-chuyển từ γ ra mg V.Chuẩn hoá phương pháp xác định hàm lượng Vitamin D ( D2 và D3) trong thực phẩm bằng phương pháp. .. điểm trên mà người ta dung phương pháp huỳnh quang để xác định hàm lượng vitamin B2 1.Nguyên tắc: 16 Trong ngũ cốc riboflavin (latoflavin ,vitamin G, vitamin B 2) là chất có màu vàng-xanh lá cây được chỉ định bằng phương pháp phân tích huỳnh quang riboflavin có nhiều trong tế bào động vật và thực vật nó bền trong muối khoáng và phần lớn các tác nhân oxi hóa ,nhưng lại không bền trong dung dịch kiềm.nó... 325nm tiêm các dung dịch mẫu thử nghiệm theo thứ tự sau: - Các dịch chuẩn Dựng đừơng chuẩn giữa nồng độ các chuẩn vitamin A và diện tích của các chuẩn Vitamin A Tính toán hệ số tương quan hồi quy tuyến tính - Dung dịch mẫu trắng - Dung dịch mẫu kiểm soát tính hàm lượng các vitamin A trong dịch chiết và trong mẫu thông qua đường chuẩn xây dựng ở bước trên Tính độ thu hồi mẫu kiểm soát (R) - Các dung... Hàm lượng Vitamin C được tính theo công thức sau: V ×V ×0,00088×100 1 X %= Trong đó: V – số ml dung V ×W 2 dịch iot 0.01N dùn chuẩn độ V1- thể tích dịch mẫu thí nghiệm (50ml) V2- thể tích dịch mẫu lấy để xác định (20ml) w- khối lượng mẫu(g) 0.00088- số gam vitamin C tương ứng với 1ml dung dịch iot 0.01N III địng lượng vitamin B2 bằng phương pháp huỳnh quang Sự phát quiang có thể được hiểu là năng lượng. .. tắc: Xác định vitamin D (D2 and D3) trong thực phẩm bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao được sử dụng rộng rãi trên thế giới Để chuẩn hoá phương pháp này phù hợp với phòng thí nghiệm chúng tôi đã tiến hành khảo sát và phân tích bằng HPLC của hãng Finnigan Mẫu được xà phòng hoá bởi dung dịch kali hydroxit trong môi trường ethanol ở nhiệt độ phòng qua đêm hoặc ở nhiệt độ 75oC trong 1 giờ Sau đó các. .. hoặc các e thu năng lượng và nhảy từ trạng thái năng lượng cơ bản đến mức năng lượng cao nhất của trạng thái kích thích đầu tiên Theo lí thuyết lượng tử thì mức năng lượng của một phân tử có thể tồn tại chỉ trong một số trạng thái xác định ,cho nên chỉ có ánh sáng với những tần số tương ứng với năng lượng cần thiết để nâng phân tử từ trạng thái cơ bản lên trạng thái kích thích bị hấp thụ Bởi vì một trong. .. dung dịch axit ascorbic 2) Phương pháp sử dụng iot: a) Nguyên tắc: Vitamin C có thể khử dung dịch iot Dựa vào lượng iot bị khử bởi Vitamin C có trong mẫu, suy ra hàm lượng vitaminC b) Hóa chất: 13 - Dung dịch HCl 5% - Dung dịch 0,01N - Dung dịch tinh bột 1% c) Tiến hành: Cân 5 gam lá thì là tươi nghiền nhỏ trong cối sứ với 5 ml HCl 5%, nghiền kĩ, cho vào ống đong (hoặc bình định mức), dẫn đến vạch 50... cảm với tia khả kiến và tia tử ngoại nên các thap tác được thực hiện trong ánh sáng dịu hoặc trong các dụng cụ thí nghiệm thủy tinh có độ quang hóa thấp Trong các tế bào sống ,riboflavin thừờng kết hợp với axit photphorichoawcj cả với axit adenylic (FMN hoặc FAD) Cả 2 đều có thể kết hợp một số protein đặc thù để hình thành các enzyme oxi hóa Trong một số sản phẩm ( sữa), riboflavin tồn tại dưới dạng... thu được với giá trị như trên vỏ hộp (đã được xác định bởi nhà sản xuất) 3.Vẽ cấu tạo hóa học của riboflavin và chỉ ra bản chất của những phần phát huỳnh quang 4.Sự tăng lượng tử của một chất ảnh hưởng đến cường độ huỳnh quang như thế nào? IV Định lượng vitamin B1 bằng phương pháp huỳnh quang 1)Nguyên tắc Khi oxi hóa vitamin B1(thiamin) bằng kali feroxianua trong môi trường kiềm sẽ tạo thành hợp chất