Luận văn xác định hàm lượng ochratoxin trong thực phẩm bằng phương pháp sắc ký lỏng hai lần khối phổ (LC MSMS)

Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Hà Bình ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - Đặng Thị Kiều Oanh Xác định hàm lượng Ochratoxin thực phẩm phương pháp sắc ký lỏng hai lần khối phổ (LC-MS/MS) LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Hà Bình MỞ ĐẦU Vấn đề an toàn vệ sinh thực phẩm ngày quan tâm liên quan trực tiếp tới sức khỏe tất người tiêu dùng Thời gian vừa qua nước liên tiếp phát vụ ngộ độc thực phẩm có vụ ngộ độc mycotoxin đặc biệt nghiêm trọng …đã gây tâm lý lo ngại cho người tiêu dùng lựa chọn thực phẩm sử dụng thực phẩm cách Theo thống kê Cục An toàn thực phẩm vụ ngộ độc thực phẩm năm gần nước: - Năm 2009: Toàn quốc xảy 147 vụ ngộ độc thực phẩm, có 5026 người mắc; 3958 người nhập viện; 33 người tử vong - Năm 2010: Tình hình NĐTP năm 2010 phức tạp Toàn quốc xảy 175 vụ ngộ độc có 34 vụ ngộ độc 30 người làm 5664 người mắc 42 trường hợp tử vong, so sánh với số liệu trung bình năm giai đoạn 20062009, số vụ ngộ độc giảm 9,1%; số mắc giảm 17,6% số tử vong giảm 19,2% - Năm 2011: 148 vụ, 4700 người mắc, 27 người tử vong - Năm 2012: 168 vụ, 5541 người mắc, 34 người tử vong Theo TS Trần Quang Trung, Cục trưởng Cục An toàn thực phẩm - Bộ Y tế, tháng năm 2013, nước có 108 vụ ngộ độc thực phẩm làm 2.800 người mắc, có 18 ca tử vong Trong 40 vụ ngộ độc thực phẩm thống kê quý III nguyên nhân vi sinh vật 23 vụ, độc tố tự nhiên vụ, hóa chất vụ 11 vụ chưa xác định nguyên nhân Các vụ ngộ độc xảy khắp nơi, từ gia đình riêng đến tập thể Ochratoxin loại độc tố sinh chủng nấm mốc thuộc giống Aspergilus ochraceus Penicillium verrucusum loại độc tố có tiềm gây ung thư viêm thận người động vật Độc tố phát nhiều nông sản khác bao gồm ngũ cốc sản phẩm chúng Điều đáng lo ngại ăn phải thức ăn bị nhiễm ochratoxin không gây ngộ độc cấp tính mà tích lũy dần thể - nguy tiềm ẩn đe dọa sức khỏe cho Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Hà Bình người Trong số 10.000 loại nấm mốc khác biết đến có khoảng 50 loại có hại gia súc gia cầm người Các loại nấm sản sinh độc tố gọi chung mycotoxin Mycotoxin chất độc sinh từ nấm mốc, hình thành nấm chuyển hóa chất dinh dưỡng có thức ăn nguyên liệu Theo tổ chức lương thực nông nghiệp Liên Hiệp Quốc (FAO), khoảng 25% số ngũ cốc giới có chứa hàm lượng mycotoxin mức độ Tùy vào địa lý, khả nhiễm mycotoxin lại khác Ở điều kiện nhiệt đới cận nhiệt đới, nguy nhiễm mycotoxin cao Đặc thù khí hậu sản xuất nông nghiệp Việt Nam tình trạng nhiễm độc tố nấm mốc phổ biến Sự hình thành nấm mốc độc tố chúng đồng, lúc thu hoạch, bảo quản trình chế biến thức ăn cho vật nuôi Như vậy, không nơi giới thoát khỏi nấm mốc độc tố từ chúng, tác hại chúng vô to lớn suất vật nuôi sức khỏe người Để kiểm soát mức độ nhiễm ochratoxin thực phẩm, Việt Nam giới có nhiều phương pháp phân tích nghiên cứu ứng dụng Nhưng với đặc điểm ưu việt độ xác cao nên phương pháp phân tích sắc ký lỏng khối phổ coi phương pháp phân tích có giá trị pháp lý để phát định lượng nồng độ ochratoxin lượng vết hay siêu vết Xuất phát từ tính cấp thiết xã hội tính ưu việt phương pháp phân tích, xây dựng phương pháp nghiên cứu: "Xác định hàm lượng Ochratoxin thực phẩm phương pháp sắc ký lỏng hai lần khối phổ (LC-MS/MS)” Mục tiêu thực đề tài nghiên cứu là: Xây dựng phương pháp xác định hàm lượng Ochratoxin thực phẩm bao gồm: - Khảo sát điều kiện máy sắc ký lỏng hai lần khối phổ - Khảo sát điều kiện xử lý mẫu Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Hà Bình - Thẩm định phương pháp xây dựng Áp dụng phương pháp xác định ochratoxin ngũ cốc, sản phẩm từ ngũ cốc, rượu lên men thị trường nước Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Hà Bình CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1.Giới thiệu chung ochratoxins[14-15] 1.1.1.Định nghĩa Độc tố ochratoxin, sản phẩm chuyển hoá thứ cấp số loài nấm mốc Ochratoxin có mặt khắp loại nông sản thực phẩm: ngũ cốc, thảo dược, bia, cà phê sản phẩm có nguồn gốc động vật bị lây nhiễm trước Ochratoxins biết đến sản phẩm loài nấm Aspergillus Penicillium thường tìm thấy nhiều loại sản phẩm lương thực thức ăn chăn nuôi Ochratoxin A lần tìm thấy nấm mốc A ochraceus vùng Nam Phi Scott (1965) hạt lúa bị nhiễm A.ochraceus Ở Đức tìm thấy Ochratoxin thường xuyên thịt Ở Anh, chúng tìm thấy đậu nành, bắp bột, ca cao M.Nakajima năm 1997 ghi nhận tỷ lệ chiểm 30% hàm lượng OTA từ 0.1 – 17,4 µg/kg 47 mẫu café nhập vào Nhật Bản từ nước Nam Phi , số nước ASIAN Tại Việt Nam, nghiên cứu tiến hành 123 mẫu ngô xã Cán Tỷ Lùng Tám huyện Quản Bạ tỉnh Hà Giang Kết cho thấy: 123 mẫu ngô phân tích có tới 50 mẫu (40,7 %) phát có ochratoxin A, số có mẫu (1,6 %) vượt mức dư lượng theo quy định Bộ Y tế Cho tới phát loại ochratoxin khác Trong khuôn khổ luận văn quan tâm nghiên cứu đến ochratoxin A B Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Hà Bình Ochratoxin B Ochratoxin A Hình 1.1: Cấu trúc Ochratoxins 1.1.2.Tính chất hóa lý Ochratoxins Ochratoxins đốc tố tinh thể không màu, bền với nhiệt, tan dung môi hữu phân cực chloroform, methanol, …, tan nước tan đệm carbonat loãng) Ochratoxins bền vững với xử lý nhiệt hóa chất Độc tố sản sinh nhiều nhiệt độ từ 20-25 0C Sự sản sinh ochratoxins phụ thuộc chủng nấm mốc, hoạt tính nước hạt, chất, nhiệt độ Ochratoxins dễ bị phân hủy ánh sáng, môi trường kiềm chất tẩy rửa Ochratoxin A phát huỳnh quang hấp thụ UV cực đại 365nm Ochratoxin A có điểm nóng chảy 1690C Phổ hồng ngoại cloroform cho píc có độ dài 3380, 1723,1678, 1655 cm-1 OTA có tính axit yếu pKa1 = 4,2-4,4 pKa2 = 7,07,3 Ochratoxin A phát huỳnh quang xanh dùng thiết bị sắc ký lớp mỏng (TLC) Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Hà Bình chiếu tia UV 366nm Ochratoxin B có trọng lượng phân tử 369,37 Ochratoxin B phát huỳnh quang màu xanh chiếu tia UV bước sóng 318 nm Nhiệt độ nóng chảy khoảng 2210C Cơ chế tác động ochratoxins: ochratoxins gây ức chế vận chuyển ribonucleic axit (tARN) axitamin Ochratoxins ức chế vi khuẩn, nấm men phenylalanine - tARN gan Tác động làm ức chế tổng hợp protein tế bào thể Sự ức chế miễn dịch ochratoxin biểu làm giảm thực bào ức chế tế bào lympho Ức chế tương tự amino axit synlaza tARN tương ứng ochratoxin A gây ức chế hydroxylase phenylalanine, nửa phenylalanine ochratoxin A phần hydroxyl hóa để tyrosin gây bệnh tế bào gan thể Ochratoxin ức chế tổng hợp ARN làm ảnh hưởng đến protein vòng tuần hoàn Tác động đến tế bào màng ti thể gây hiệu ứng khác ti thể Kích thích hình thành ADN thận, gan lách Các ADN sợi đơn bị phá vỡ Các nguyên liệu dễ nhiễm độc tố cám gạo, lúa mì, bột mì, bắp, đậu nành, cà phê Dư lượng ochratoxin tìm thấy thịt heo thịt gia cầm Độc tố gây hại đến gan thận động vật Với nồng độ lớn ppm làm giảm sản lượng trứng gà đẻ, nồng độ lớn ppm gây nên tổn thương gan ruột Tương tự Aflatoxin, độc tố gây nên giảm sức đề kháng tác nhân gây ung thư người - Gây tổn thương tế bào gan: tất trường hợp xác định ngộ độc Ochratoxin có bệnh tích giống chỗ gan bị hư hại nặng Tùy theo mức độ nhiễm hay nhiều, lâu hay mau mà tình trạng bệnh gan khác Biểu chung ban đầu gan động vật (điển hình gà) biến thành màu vàng tươi, mật sưng sau gan sưng phồng bắt đầu mụn nhỏ bề mặt làm cho gồ ghề có nốt hoại tử màu trắng, sau nhiễm khuẩn mà gan trở nên bở dễ vỡ - Thận sưng to làm cho việc đào thải chất độc khỏi thể trở nên Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Hà Bình khó khăn, từ làm cho triệu chứng ngộ độc trở nên trầm trọng - Làm giảm khả đề kháng động vật, ức chế hệ thống sinh kháng thể, gây tử vong cho động vật Khi nhiễm độc ochratoxin thể mẫn cảm với loại bệnh thông thường - Bào mòn niêm mạc ống tiêu hóa lớp tế bào niêm mạc bị chết bong bị khô lại hình thành nên lớp màng bọc làm cản trở chuyển thức ăn ống tiêu hóa - Làm thay đổi hoạt động sinh lý bình thường gây rối loạn sinh sản Ở thú mang thai gây chết thai Đối với gia cầm gây tỷ lệ chết phôi giai đoạn đầu cao, tỷ lệ nở thấp - Làm giảm tính ngon miệng thức ăn phát triển nấm mốc làm mùi thức ăn - Làm hư hại vitamin thức ăn lên men phân giải nấm mốc - Ngoài tác hại nấm mốc có thức ăn lên men phân giải nguồn dường chất (glucid, protein, acid amin, vitamin ) làm cho thức ăn bị giảm giá trị nghiêm trọng, làm mùi tự nhiên, chuyển sang mùi hôi mốc, vật nuôi không thích ăn Như nói độc tố nấm gây tác hại lớn hậu vô nghiêm trọng cho thể người động vật Tùy theo loại mà độc tố nấm mốc gây nhiễm độc cấp tính mãn tính Độc tố nấm mốc gây ngộ độc cấp tính, gây hại thể từ từ làm cho không hay biết Nhưng phát sinh triệu chứng quan phận chúng công hư hại nghiêm trọng khó chữa trị Tuy nhiên, độc tố nấm mốc thức ăn gây nên huỷ hoại thầm lặng hệ thống miễn dịch gia súc, làm cho chúng mẫn cảm bệnh Khác với bệnh nhiễm trùng kháng sinh không điều trị nhiễm độc tố nấm mốc Cách tốt ngăn ngừa không cho độc tố nấm mốc nhiễm vào thức ăn Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Hà Bình Trên heo: Liều gây chết : LD50 1-6 mg/kg, Ở gà: LD50 3,6 mg/kg gà 10 ngày tuổi 1.1.3 Giới hạn tồn dư tối đa cho phép (MRL) - Mức dư lượng tối đa cho phép giới hạn dư lượng loại thuốc, phép tồn mặt pháp lí xem chấp nhận nông sản, thức ăn mà không gây hại cho người sử dụng vật nuôi dùng Bảng 1.1: Mức dư lượng tối đa cho phép Ochratoxin A Việt Nam Loại Ngũ cốc chưa qua chế biến µg/g Hạt cà phê rang, cà phê bột Cà phê uống liền 10 Rượu vang, nước nho ép Thực phẩm dành cho trẻ 36 tháng tuổi 0,5 Gia vị 30 Sản phẩm chiết xuất từ cam thảo 80 Ngũ cốc bột ngũ cốc Hiện chưa có quy định cụ thể mức MRL cho ochratoxin B kể nước tiêu chuẩn Châu Âu (EN) 1.2 Các phương pháp xác định 1.2.1 Phương pháp ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) Nguyên tắc dựa kết hợp đặc hiệu kháng nguyên kháng thể Ochratoxin chuẩn cộng hợp với enzyme, tạo thành phức hợp Ochratoxinenzyme sử dụng kháng nguyên nồng độ định, cạnh tranh với ochratoxin có mẫu Kháng thể đặc hiệu với ochratoxin gắn lên bề mặt giếng nhựa polystryren Dịch chiết mẫu methanol 70% trộn cộng hợp với ochratoxin – enzyme cho vào giếng có phủ kháng thể, ochratoxin có mẫu (nếu có) cạnh tranh với phức hợp ochratoxin- enzyme để gắn vào kháng thể cố định polystryren Sau rửa phức hợp thừa, chất phản ứng với enzyme đưa vào tạo màu Ủ thời gian sau thêm vào dung dịch ngưng phát màu để tạo điều kiện đồng thời gian cho giếng Tiến hành đo độ hấp thụ mẫu dãy chuẩn máy đo màu, từ tính nồng độ ochratoxin có mẫu Màu đậm chứng tỏ cộng hợp Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Hà Bình ochratoxin – enzyme giữ giếng nhiều, đồng nghĩa với nồng độ ochratoxin mẫu thấp Ngược lại, màu nhạt nồng độ Ochratoxin cao Sử dụng phương pháp ELISA để xác định ochratoxin kể đến số nghiên cứu sau: Nhóm tác giả Aihua Zhang, Yanna Ma, Lulu Feng, Ying Wang, Chenghua He, Xichun Wang, Haibin Zhang [14] xác định Ochratoxin đối tượng mẫu ngũ cốc nguyên liệu Nanjing, Trung Quốc Phương pháp phân tích có giới hạn phát 0,15 ng/ml Độ thu hồi phương pháp đạt từ 87-101% mức thêm chuẩn 2,5-10 ppb Nhóm tiến hành phân tích 65 mẫu ngô, gạo, lúa mì Kết cho thấy số 22 mẫu lúa mì chứa Ochratoxin A khoảng 2- ppb (chiếm 36% tổng số mẫu), số 23 mẫu ngô (chiếm khoảng 26% tổng số mẫu) dương tính với Ochratoxin A khoảng 3-23 ppb, số 20 mẫu gạo (chiếm khoảng 15% tổng số mẫu) dương tính với Ochratoxin A khoảng 2-3 ppb Nhóm tác giả Pedro Novoa, Géraud Moulasa, Duarte Miguel Franc¸ Prazeresb, Virginia Chua, João Pedro Conde [32] xác định Ochratoxin mẫu rượu với giới hạn phát 0,85 ng/ml Ochratoxin phát dung dịch đệm PBS với việc sử dụng cấu hình kênh thẳng Kỹ thuật có ưu điểm: nhanh, đơn giản,tiết kiệm dung môi, đặc hiệu nhạy so với phương pháp HPLC hiệu dễ cho kết dương tính giả âm tính giả 1.2.2 Phương pháp sắc ký khí (Gas chromatography-GC) Phương pháp sắc ký khí số tác giả ứng dụng để xác định loại độc tố Ochratoxin Tuy nhiên phương pháp phân tích chất dễ bay hơi, chất khó bay phải tạo dẫn xuất nên tốn thời gian hóa chất Hơn nữa, để phân tích đồng thời chất cần thời gian phân tích dài Do vậy, phương pháp ứng dụng để phân tích loại độc tố Ochratoxin Tác giả Yuying Jiao cộng [31] tiến hành xác định Ochratoxin thực phẩm phương pháp sắc ký khí Ở Ochratoxin A chuyển 10 Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Hà Bình X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T B f r o m S a m p l e ( t e s t ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) 7 0 0 0 0 0 5 T i m e , m i n X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T B f r o m S a m p l e ( t e s t ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) 7 0 0 0 0 0 5 T i m e , m i n X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T A f r o m S a m p l e ( t e s t ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) 8 7 3 0 0 0 Hình P3.2: Sắc đồ OTs sử dụng gradient 0 0 5 T i m e , m i n 86 Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Hà Bình X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T B f r o m S a m p l e ( Q T b l o p d u o i ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) 0 0 0 0 0 5 T i m e , m i n X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T B f r o m S a m p l e ( Q T b l o p d u o i ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) 0 0 0 0 0 5 T i m e , m i n X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T A f r o m S a m p l e ( Q T b l o p d u o i ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) 0 0 0 0 0 Hình P3.3: Sắc đồ OTs sử dụng gradient 0 0 5 T i m e , m i n 87 Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Hà Bình X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T B f r o m S a m p l e ( Q T b l o p t r e n ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) 1 0 0 0 0 0 0 0 5 T i m e , m i n X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T B f r o m S a m p l e ( Q T b l o p t r e n ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) 1 0 0 0 0 0 0 0 5 T i m e , m i n X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T A f r o m S a m p l e ( Q T b l o p t r e n ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) 0 0 0 0 0 Hình P3.4: Sắc đồ OTs sử dụng gradient 0 0 5 Phụ lục 4: Sắc đồ thẩm định phương pháp (LOD, T độ lặp lại, độ thu hồi) i m e , m i n 88 Luận văn thạc sĩ Sam pleN am e: "LO D" Sam pleID: "" File: "DataSET1.w iff" PeakN am e: "O TB1" M ass(es): "368.000/324.000D a" Com m ent: "" Annotation: "" Sample Index: Sample Type: Unknown Concentration: N/A Calculated Conc: 0.00 ng/mL Acq Date: 7/11/2013 Acq Time: 2:01:20 PM Nguyễn Thị Hà Bình Sam pleNam e: "LO D " Sam pleID : "" File: "DataSET1.w iff" PeakNam e: "O TB3" M ass(es): "368.000/220.000Da" Com m ent: "" Annotation: "" Sample Index: Sample Type: Unknown Concentration: N/A Calculated Conc: 0.00 ng/mL Acq Date: 7/11/2013 Acq Time: 2:01:20 PM 6.76 2100 2000 Int Type: Valley Retention Time: 6.76 Area: 1.20e+004 counts Height: 2.23e+003 cps Start Time: 6.61 End Time: 6.90 1200 440 Modified: No Proc Algorithm: Specify Parameters - MQ III Noise Percentage: 50 Base Sub Window: 1.00 Peak-Split Factor: Report Largest Peak: Yes Min Peak Height: 0.00 cps Min Peak Width: 0.00 sec Smoothing Width: points RT Window: 30.0 sec Expected RT: 6.69 Use Relative RT: No 1800 1700 1600 1500 1400 1300 Int Type: Base To Base Retention Time: 6.74 Area: 2.25e+003 counts Height: 4.70e+002 cps Start Time: 6.57 End Time: 6.98 1100 1000 900 Intensity, cps 1900 Intensity, cps Modified: No Proc Algorithm: Specify Parameters - MQ III Noise Percentage: 50 Base Sub Window: 1.00 Peak-Split Factor: Report Largest Peak: Yes Min Peak Height: 0.00 cps Min Peak Width: 0.00 sec Smoothing Width: points RT Window: 30.0 sec Expected RT: 6.70 Use Relative RT: No 460 800 7.30 300 280 260 240 220 200 180 60 5.95 200 40 100 20 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 Tim e, m in 6.0 7.0 8.0 0.0 9.0 Sam pleNam e: "LO D " Sam pleID : "" File: "DataSET1.w iff" PeakNam e: "O TA2" M ass(es): "402.000/166.900Da" Com m ent: "" Annotation: "" Sample Index: Sample Type: Unknown Concentration: N/A Calculated Conc: 0.00 ng/mL Acq Date: 7/11/2013 Acq Time: 2:01:20 PM 6.97 1800 1700 1500 1400 1300 1200 1100 Int Type: Manual Retention Time: 6.95 Area: 1.40e+003 Height: 2.68e+002 Start Time: 6.82 End Time: 7.06 900 800 700 600 counts cps min 1.0 2.0 1.0 2.0 240 Modified: Yes Proc Algorithm: Specify Parameters - MQ III Noise Percentage: 50 Base Sub Window: 1.00 Peak-Split Factor: Report Largest Peak: Yes Min Peak Height: 0.00 cps Min Peak Width: 0.00 sec Smoothing Width: points RT Window: 30.0 sec Expected RT: 6.90 Use Relative RT: No Intensity, cps Intensity, cps 1000 320 80 300 Int Type: Manual Retention Time: 6.97 Area: 9.19e+003 counts Height: 1.83e+003 cps Start Time: 6.82 End Time: 7.10 340 100 400 1600 360 120 500 Modified: Yes Proc Algorithm: Specify Parameters - MQ III Noise Percentage: 50 Base Sub Window: 1.00 Peak-Split Factor: Report Largest Peak: Yes Min Peak Height: 0.00 cps Min Peak Width: 0.00 sec Smoothing Width: points RT Window: 30.0 sec Expected RT: 6.93 Use Relative RT: No 380 140 600 Sam pleN am e: "LO D" Sam pleID: "" File: "DataSET1.w iff" PeakN am e: "O TA1" M ass(es): "402.000/358.000D a" Com m ent: "" Annotation: "" Sample Index: Sample Type: Unknown Concentration: N/A Calculated Conc: 0.00 ng/mL Acq Date: 7/11/2013 Acq Time: 2:01:20 PM 400 160 700 0.0 420 220 200 180 160 140 120 100 80 500 60 400 300 40 HìnhP4.1: Sắc đồ OTs LOD 0,1 ng/g 200 6.59 6.41 100 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 Tim e, m in 6.0 7.0 89 8.0 9.0 20 0.0 Luận văn thạc sĩ Sample Name Sample ID Nguyễn Thị Hà Bình Sample Type Std 0.5 Spike 2.5 Std Std 10 M1-5.98 Standard Quality Control Standard Standard Unknown 2013\T7\11\DataSE 2013\T7\11\DataSE 2013\T7\11\DataSE 2013\T7\11\DataSE 2013\T7\11\DataSE 1.34e+003 2.80e+003 5.02e+003 8.77e+003 0.00e+000 M o d i f i e d : Y e s P r o c A l g o r i t h m : S p e c i f y P a r a m e t e r s M Q I I I N o i s e P e r c e n t a g e : B a s e S u b W i n d o w : 0 m i n P e a k S p l i t F a c t o r : R e p o r t L a r g e s t P e a k : Y e s M i n P e a k H e i g h t : 0 c p s M i n P e a k W i d t h : 0 s e c S m o o t h i n g W i d t h : p o i n t s R T W i n d o w : s e c E x p e c t e d R T : m i n 0 0 T i m e ,m i n 9 0 0 0 5 7 2 0 0 T i m e ,m i n C Con 0.49 2.34 5.14 9.87 No M o d i f i e d : Y e s P r o c A l g o r i t h m : S p e c i f y P a r a m e t e r s M Q I I I N o i s e P e r c e n t a g e : B a s e S u b W i n d o w : 0 m i n P e a k S p l i t F a c t o r : R e p o r t L a r g e s t P e a k :Y e s M i n P e a k H e i g h t : 0 c p s M i n P e a k W i d t h : 0 s e c S m o o t h i n g W i d t h : p o i n t s R T W i n d o w : s e c E x p e c t e d R T : m i n 0 0 0 0 0 0 S a m p l e N a m e :" S t d "S a m p l e I D :" "F i l e :" D a t a S E T w i f f " P e a k N a m e :" O T A "M a s s ( e s ) :" 0 / 0 D a " C o m m e n t :" "A n n o t a t i o n :" " S a m p l e I n d e x : S a m p l e T y p e : S t a n d a r d C o n c e n t r a t i o n : n g / m L C a l c u l a t e d C o n c : n g / m L A c q D a t e : / 1 / 0 A c q T i m e : : : P M 0 0 Record Modified N/A N/A N/A N/A N/A Intensity, cps Intensity, cps S a m p l e N a m e :" S t d "S a m p l e I D :" "F i l e :" D a t a S E T w i f f " P e a k N a m e :" O T A "M a s s ( e s ) :" 0 / 0 D a " C o m m e n t :" "A n n o t a t i o n :" " S a m p l e I n d e x : S a m p l e T y p e : S t a n d a r d C o n c e n t r a t i o n : 0 n g / m L C a l c u l a t e d C o n c : n g / m L A c q D a t e : / 1 / A c q T i m e : : : P M 0 Use Record S a m p l e N a m e :" S p i k e "S a m p l e I D :" "F i l e :" D a t a S E T w i f f " P e a k N a m e :" O T A "M a s s ( e s ) :" 0 / 0 D a " C o m m e n t :" "A n n o t a t i o n :" " S a m p l e I n d e x : S a m p l e T y p e : Q C C o n c e n t r a t i o n : n g / m L 0 C a l c u l a t e d C o n c : n g / m L 0 A c q D a t e : / 1 / A c q T i m e : : : P M 0 0 Standard Query Status Intensity, cps Intensity, cps S a m p l e N a m e :" S t d "S a m p l e I D :" "F i l e :" D a t a S E T w i f f " P e a k N a m e :" O T A "M a s s ( e s ) :" 0 / 0 D a " C o m m e n t :" "A n n o t a t i o n :" " S a m p l e I n d e x : S a m p l e T y p e : S t a n d a r d C o n c e n t r a t i o n : 0 n g / m L C a l c u l a t e d C o n c : n g / m L A c q D a t e : / 1 / 0 A c q T i m e : : : P M M o d i f i e d : Y e s P r o c A l g o r i t h m : S p e c i f y P a r a m e t e r s M Q I I I N o i s e P e r c e n t a g e : B a s e S u b W i n d o w : 0 m i n P e a k S p l i t F a c t o r : R e p o r t L a r g e s t P e a k : Y e s M i n P e a k H e i g h t : 0 c p s M i n P e a k W i d t h : 0 s e c S m o o t h i n g W i d t h : p o i n t s R T W i n d o w : s e c E x p e c t e d R T : m i n Analyte Analyte Peak Height (cps) Concentration (ng/mL) 3.50e+002 0.500 7.38e+002 2.50 1.19e+003 5.00 1.81e+003 10.0 0.00e+000 N/A Analyte Peak Area (counts) File Name M o d i f i e d : Y e s P r o c A l g o r i t h m : S p e c i f y P a r a m e t e r s M Q I I I N o i s e P e r c e n t a g e : B a s e S u b W i n d o w : 0 m i n P e a k S p l i t F a c t o r : R e p o r t L a r g e s t P e a k :Y e s M i n P e a k H e i g h t : 0 c p s M i n P e a k W i d t h : 0 s e c S m o o t h i n g W i d t h : p o i n t s R T W i n d o w : s e c E x p e c t e d R T : m i n 0 0 0 U n t i t l e d ( O T A ) : " L i n e a r " R e g r e s s i o n ( " / x " w e i g h t i n g ) : y = x + ( r = 9 ) 0 0 Hình P4.2: Sắc đồ OTs mẫu ngô thêm chuẩn 2,5 ng/g 0 51 01 52 02 53 03 54 04 55 05 56 06 57 07 58 C o n c e n t r a t i o n , n g / m L 90 Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Hà Bình X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T B f r o m S a m p l e ( m a u l a c B G ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) e e e 0 0 0 5 T i m e , m i n X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T B f r o m S a m p l e ( m a u l a c B G ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) 0 0 0 0 0 0 0 5 T i m e , m i n X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T A f r o m S a m p l e ( m a u l a c B G ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) 6 e e e 0 Hình P4.3: Sắc đồ OTs mẫu trắng ngô thêm chuẩn 10 ng/g 0 0 5 Phụ lục 5: Một số sắc đồ phân tích mẫu thực tế T i m e , m i n 91 Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Hà Bình X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T B f r o m S a m p l e ( 1 ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) 0 6 0 0 5 T i m e , m i n X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T B f r o m S a m p l e ( 1 ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) 0 6 0 0 5 T i m e , m i n X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T A f r o m S a m p l e ( 1 ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) 0 Hình P5.1: Sắc đồ mẫu rượu OTs 5 0 0 5 T i m e , m i n 92 Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Hà Bình X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T B f r o m S a m p l e ( B l a n k ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) 0 0 0 16 4 0 0 5 T i m e , m i n X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T B f r o m S a m p l e ( B l a n k ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) 0 0 0 16 4 0 0 5 T i m e , m i n X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T A f r o m S a m p l e ( B l a n k ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) 0 Hình P5.2: Sắc đồ mẫu lạc OTs 6 0 0 5 T i m e , m i n 93 Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Hà Bình X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T B f r o m S a m p l e ( 1 m l ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) 7 2 6 0 0 5 T i m e , m i n X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T B f r o m S a m p l e ( 1 m l ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) 2 5 6 0 0 5 T i m e , m i n X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T A f r o m S a m p l e ( 1 m l ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) 0 Hình P5.3: Sắc đồ mẫu ngô OTs 1 0 0 5 T i m e , m i n 94 Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Hà Bình X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T B f r o m S a m p l e ( n g o T H ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) e e e e e 0 0 0 0 5 T i m e , m i n X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T B f r o m S a m p l e ( n g o T H ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) e e e e e 0 0 0 0 5 T i m e , m i n X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T A f r o m S a m p l e ( n g o T H ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) 1 e e e 0 Hình P5.4 Sắc đồ mẫu Ngo-TH-03 có OTs 0 0 5 T i m e , m i n 95 Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Hà Bình X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T B f r o m S a m p l e ( L N B G g ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) e e e e 5 e 0 0 5 T i m e , m i n X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T B f r o m S a m p l e ( L N B G g ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) e e e e 5 e 0 0 5 T i m e , m i n X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T A f r o m S a m p l e ( L N B G g ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) e e e 0 Hình P5.5: Sắc đồ mẫu LN-BG-03 0 0 5 T i m e , m i n 96 Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Hà Bình Sample Name: "ruou-01-spike5-04" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTB1" Mass(es): "368.000/324.000 Da" Comment: "" Annotation: "" Sample Name: "ruou-01-spike5-04" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTB3" Mass(es): "368.000/220.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 6.34 Sample Name: "ruou-01-spike5-04" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTA1" Mass(es): "402.000/358.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 6.37 6.59 4500 1.4e4 1.5e4 1.4e4 1.3e4 4000 1.3e4 1.2e4 1.2e4 3500 1.1e4 1.1e4 1.0e4 3000 7000.0 6000.0 5000.0 1.0e4 2500 2000 1500 Intensity, cps 8000.0 Intensity, cps Intensity, cps 9000.0 9000.0 8000.0 7000.0 6000.0 5000.0 4000.0 4000.0 1000 3000.0 3000.0 7.26 2000.0 2000.0 500 1000.0 0.0 0.0 S P C 1000.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "ruou-01-spike5-05" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTB1" Mass(es): "368.000/324.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 8.0 0.0 9.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "ruou-01-spike5-05" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTB3" Mass(es): "368.000/220.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 6.41 8.0 0.0 0.0 9.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "ruou-01-spike5-05" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTA1" Mass(es): "402.000/358.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 6.37 9.0 S P C 6.62 6.5e4 1.10e4 2.0e4 8.0 6.0e4 1.00e4 1.8e4 5.5e4 9000.00 1.6e4 1.4e4 8000.0 4.0e4 6000.00 5000.00 4000.00 Intensity, cps 1.0e4 4.5e4 7000.00 Intensity, cps Intensity, cps 1.2e4 5.0e4 8000.00 3.5e4 3.0e4 2.5e4 2.0e4 6000.0 3000.00 4000.0 2000.00 2000.0 1000.00 0.0 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "ruou-01-spike5-06" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTB1" Mass(es): "368.000/324.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 8.0 1.5e4 1.0e4 5000.0 0.00 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "ruou-01-spike5-06" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTB3" Mass(es): "368.000/220.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 9.0 6.40 8.0 0.0 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "ruou-01-spike5-06" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTA1" Mass(es): "402.000/358.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 9.0 6.37 1.4e4 8.0 9.0 S P C 6.61 9000 5.0e4 8000 4.5e4 7000 4.0e4 1.3e4 1.2e4 1.1e4 1.0e4 7000.0 6000.0 5000 4000 3.5e4 3.0e4 2.5e4 Hình P5.6: Sắc đồ mẫu rượu thêm chuẩn mức ppb 5000.0 3000 4000.0 2000.0 1.0e4 1000 1000.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 Time, 7.0 8.0 9.0 0.0 2.0e4 1.5e4 2000 3000.0 0.0 0.0 6000 Intensity, cps 8000.0 Intensity, cps Intensity, cps 9000.0 5000.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 Time, 97 7.0 8.0 9.0 0.0 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 Time, 7.0 8.0 9.0 Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Hà Bình Sample Name: "ruou-01-spike 5" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTB1" Mass(es): "368.000/324.000 Da" Comment: "" Annotation: "" Sample Name: "ruou-01-spike 5" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTB3" Mass(es): "368.000/220.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 6.41 6.38 4000 2.2e4 2.0e4 Sample Name: "ruou-01-spike 5" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTA1" Mass(es): "402.000/358.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 6.64 1.5e4 1.4e4 3500 1.3e4 1.8e4 1.2e4 3000 1.6e4 1.0e4 8000.0 2000 1500 9000.0 8000.0 7000.0 6000.0 5000.0 6000.0 4000.0 1000 3000.0 4000.0 7.66 2000.0 500 2000.0 1000.0 0.0 0.0 1.0 -03-spike 2.0 5" 3.0 4.0"" File: 5.0 "DataSET1.wiff" 6.0 7.0 Sample Nam e: "LN-BG Sample ID: Peak Name: "OTA1" Mass(es): "402.000/358.000Time, Da" Sample Nam "ruou-01-spike5-02" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Com ment: "" e: Annotation: "" Peak Name: "OTA1" Mass(es): "402.000/358.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 7.06 9.0 6.40 2000 3000 1400 2000 1200 1500 1000 800 1000 200 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Nam e: "LN-BG-03-spike File: "DataSET1.wiff" 0.0 1.0 2.0 5-02" 3.0 Sample 4.0ID: "" 5.0 6.0 7.0 Peak Name: "OTB3" Mass(es): "368.000/220.000Tim Da"e, Com ment: "" e: Annotation: "" Sample Nam "ruou-01-spike5-03" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTB3" Mass(es): "368.000/220.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 6.34 4500 8.0 9.0 8.0 9.0 3.00e4 6000.0 2.00e4 2500 5000 4500 2000 4000 3500 1500 3000 6.78 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 Time, Sample0.0 Name: "LN-BG-03-spike 5-03" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" 0.0 2.0 "368.000/324.000 3.0 4.0 Da"5.0 6.0 7.0 Peak Name: "OTB1"1.0Mass(es): Time, Comment: "" Annotation: "" 8.0 9.0 8.0 9.0 7.30 2.0e4 2.5e4 1.8e4 2.0e4 1.6e4 1.4e4 1.5e4 1.2e4 1.0e4 1.0e4 5000.0 6000.0 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Nam e: "LN-BG-03-spike 5-03" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" 0.0 2.0 "368.000/220.000 3.0 4.0 Da"5.0 6.0 7.0 Peak Name: "OTB3"1.0Mass(es): Time, Comment: "" Annotation: "" 1.0 2.0 3.0 4.0 8.0 9.0 8.0 9.0 4000.0 0.0 2000.00.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 Time, Sample0.0 Name: "LN-BG-03-spike 5-03" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" 0.0 2.0 "402.000/358.000 3.0 4.0 Da"5.0 6.0 7.0 Peak Name: "OTA1"1.0Mass(es): Time, Comment: "" Annotation: "" 6.37 1.3e4 2.0e5 9.0 8.0 9.0 7.0e4 1.1e4 1.6e5 1.0e4 6.0e4 9000.0 5.5e4 6.5e4 6.37 8.0e4 8000.0 7000.0 6000.0 5000.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 Time, 7.0 8.0 9.0 0.0 0.0 8.59 3.0e4 1.0e4 6.81 1000.0 1.0 3.5e4 1.5e4 2000.0 2.0e4 4.0e4 2.0e4 3000.0 4.0e4 4.5e4 2.5e4 4000.0 6.0e4 5.0e4 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 Time, 98 7.0 7.24 5000.0 8.0 9.0 0.0 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 Time, 7.0 8.0 9.0 Intensity, cps 1.0e5 Intensity, cps Intensity, cps Hình P5.7: Sắc đồ mẫu rượu trắng thêm chuẩn mức ppb 1.2e5 S P C 6.61 1.8e5 0.0 0.0 8.0 7.5e4 1.2e4 1.4e5 8.59 8000.0 2000 500 1500 2.0 S P C S P C 3.0e4 2.2e4 6000 3000 5500 1000 0.0 500 9.0 2.4e4 1000 2500 4000.0 1.00e4 9.0 8.0 Intensity, cps cps Intensity, 8000.0 4.00e4 8.0 2.6e4 3.5e4 Intensity, cps cps Intensity, Intensity, cps cps Intensity, 6.00e4 1.0e4 5.00e4 8000.0 1.0e4 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 Time, 0.0 Sample Nam e: "LN-BG File: "DataSET1.w 0.0 1.0 -03-spike 2.0 5-02" 3.0 Sample 4.0ID: "" 5.0 6.0 7.0iff" Peak Name: "OTA1" Mass(es): "402.000/358.000Time, Da" Com ment: "" Annotation: "" Sample Name: "ruou-01-spike5-03" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTA1" Mass(es): "402.000/358.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 6.58 4.0e4 6.61 6.37 7.00e4 1.2e4 1.5e4 1.0e4 2000.0 0.0 0.0 4000 7500 1.4e4 8.00e4 1.2e4 5000.0 4000.0 500 400 1.00e5 1.6e4 9.00e4 2.0e4 6000.0 600 7000 3500 6500 1.0 8.63 1.4e4 9.0 S P S C P C 1.6e4 2.5e4 2500 1600 9.0 9.0 6.62 3.0e4 1.8e4 1800 8.0 Intensity, Intensity, cps cps 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 Time, 0.0 Sample Nam e: "LN-BG-03-spike File: "DataSET1.wiff" 0.0 1.0 2.0 5-02" 3.0 Sample 4.0ID: "" 5.0 6.0 7.0 8.0 Peak Name: "OTB1" Mass(es): "368.000/324.000Time, Da" Co mm ent: "" e: Annotation: "" Sam ple Nam "ruou-01-spike5-03" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTB1" Mass(es): "368.000/324.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 7.29 6.37 1.20e5 6.37 1.10e5 1.8e4 8.0 Intensity, Intensity, cps cps 0.0 2000.00.0 0.0 1.0 2.0 5" 3.0 4.0"" File: 5.0 "DataSET1.w 6.0 7.0 Sample Nam e: "LN-BG-03-spike Sample ID: iff" Peak Name: "OTB3" Mass(es): "368.000/220.000Tim Da"e, Sample Name: "ruou-01-spike5-02" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Com ment: "" Annotation: "" Peak Name: "OTB3" Mass(es): "368.000/220.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 6.37 9.0 Intensity, Intensity, cps cps 0.0 0.0 1.0 2.0 5" 3.0 4.0"" File: 5.0 "DataSET1.w 6.0 7.0 8.0 Sample Nam e: "LN-BG-03-spike Sample ID: iff" Peak Name: "OTB1" Mass(es): "368.000/324.000Time, Da" Sam ple Nam "ruou-01-spike5-02" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Co mm ent: "" e: Annotation: "" Peak Name: "OTB1" Mass(es): "368.000/324.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 7.30 1.3e5 6.37 1.2e5 2.6e4 1.1e5 2.4e4 1.0e5 2.2e4 9.0e4 2.0e4 8.0e4 1.8e4 7.0e4 1.6e4 6.0e4 1.4e4 5.0e4 1.2e4 4.0e4 1.0e4 6.37 3.0e4 8000.0 2.0e4 6000.0 7.42 1.0e4 4000.0 0.00 2000.0 0.0 1.0e4 Intensity, cps 1.2e4 1.1e4 2500 Intensity, cps Intensity, cps 1.4e4 S P C Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Hà Bình Hình P5.8: Sắc đồ mẫu LN-BG-03 thêm chuẩn mức 5ppb Sample Name: "LN-BG-03-spike 5-04" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTB1" Mass(es): "368.000/324.000 Da" Comment: "" Annotation: "" Sample Name: "LN-BG-03-spike 5-04" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTB3" Mass(es): "368.000/220.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 6.37 7.29 6.61 2.2e4 2400 3.0e4 2.0e4 2000 1.8e4 1800 1600 6.78 1400 1200 1000 2.2e4 8.0 6.37 5.0 6.0 7.0 Time, 2.2e4 Sample Name: "LN-BG-03-spike 5-05" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTB3" Mass(es): "368.000/220.000 Da" 2.0e4 Comm ent: "" Annotation: "" 2.4e40.0 9.0 4.0 6.37 0.0 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 1.00e5 Time, Sample Name: "LN-BG-03-spike 5-06" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTB1" Mass(es): "368.000/324.000 Da" 9.00e4 Comment: "" Annotation: "" 8.00e4 8.0 8.0 6.40 5.0 6.0 7.0 Time, 1.0 2.0 3.0 4.0 8.0 8.0 2.6e4 5500 8000.0 5000 6000.0 4500 4000 4000.0 3500 2000.0 3000 8.0 8.0 2.5e4 5.0e4 4.5e4 2.0e4 4.0e4 1.5e4 8.65 3.5e4 1.0e4 3.0e4 5000.0 2.5e4 0.0 2.0e40.0 8.0 9.0 S P C 8.0 9.0 S P C 6.61 6.0e4 2.5e4 5.5e4 5.0e4 2.0e4 4.5e4 1.5e4 4.0e4 3.5e4 1.0e4 3.0e4 5000.0 2.5e4 0.0 2.2e40.0 9.0 S P C 3.0e4 5.5e4 8.61 2.0e4 0.0 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 1.5e4 Time, Sample Name: "ngo-TH-03-spike 03" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" 1.0e4 Peak Name: "OTA1" Mass(es): "402.000/358.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 5000.0 9.0 9.0 6.61 4.5e4 7.0e4 4.0e4 6.5e4 3.5e4 6.0e4 3.0e4 6000 1.0e4 8.0 1.0 2.0 3.0 4.0 2.0e4 5.0 6.0 Time, 8.0 9.0 S P C 6.62 7.0 8.0 9.0 7.0 8.0 9.0 1.8e4 5500 2.2e4 1.6e4 5000 2.0e4 1.4e4 1.2e4 4000 3500 3000 1.4e4 1.2e4 1.0e4 1.0e4 2500 8000.0 8000.0 2000 6000.0 6000.0 1500 4000.0 1000 6.98 2000.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 Time, 7.0 4000.0 2000.0 500 8.0 9.0 0.0 Intensity, cps 1.6e4 4500 Intensity, cps Intensity, cps Hình P5.9: Sắc đồ mẫu lạc LN-BG-03 thêm chuẩn mức ppb 1.8e4 0.0 0.0 4.0 6.61 0.0 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 Time, 4.0e4 Sample Name: "LN-BG-03-spike 5-06" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTA1" Mass(es): "402.000/358.000 Da" 3.5e4 Comm ent: "" Annotation: "" 9.0 6000 2.4e4 3.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 Time, 1.5e4 Sample Name: "ngo-TH-03-spike 02" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak1.0e4 Name: "OTA1" Mass(es): "402.000/358.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 5000.0 6.37 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "ngo-TH-03-spike 03" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" 1500 Peak Name: "OTB3" Mass(es): "368.000/220.000 Da" Comm1000 ent: "" Annotation: "" 500 6.39 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 70000.0 Time, 6500 9.0 8.0 9.0 7500 1.4e4 7000 1.2e4 6500 2500 0.0 0.0 2000 9.0 8.0 2.0 Intensity, cps 4.0 2000.0 3000 1.0 S P C Intensity, cps 7.0e4 1.00e4 6.0e4 3.0 4000 4000.0 Intensity, cps Intensity, cps 8.0e4 2.00e4 2.0 6000.0 Intensity, cps Intensity, cps 1.1e5 4.00e4 1.0e5 3.00e4 9.0e4 1.0 8000.0 5000 1.6e4 1.4e5 6.00e4 1.3e5 5.00e4 1.2e5 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "ngo-TH-03-spike 03" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" 3.0e4 6.34 Peak Name: "OTB1" Mass(es): "368.000/324.000 Da" 2.0e4 Comm ent: "" Annotation: "" 6.98 1.0e4 6000 1.0e4 6.37 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "LN-BG-03-spike 5-06" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" 2.0e4 Peak Name: "OTB3" Mass(es): "368.000/220.000 Da" Comm ent: "" Annotation: "" 1.8e4 7.30 7.00e4 1.5e5 5.0e4 0.00 0.0 4.0e4 1.2e4 2.2e40.0 6.61 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "LN-BG-03-spike 5-05" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak5.5e4 Name: "OTA1" Mass(es): "402.000/358.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 5.0e4 0.0 0.0 6.0e4 9.0 1.4e4 7000 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "ngo-TH-03-spike 02" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTB3" Mass(es): "368.000/220.000 Da" 6.76 Comm1000 ent: "" Annotation: "" 9.0 8.0 6.37 0.0 0.0 2000 9.0 1.0e4 Intensity, cps 5.0 6.06.38 7.0 Time, 2.0e4 Sample Name: "ngo-TH-03-spike 02" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTB1" Mass(es): "368.000/324.000 Da" 1.0e4 Comm ent: "" Annotation: "" 3.0 1.2e4 Intensity, cps 7.58 2.0 4.0 Intensity, cps Intensity, cps 6.0e4 1.0e4 1.0 3.0 Intensity, cps Intensity, cps 1.4e4 7.0e4 1.2e4 4000.0 4.0e4 2.0 8000 1.6e4 1.8e4 8.0e4 1.6e4 8000.0 5.0e4 6000.0 1.0 1.8e4 7.30 2.0e4 9.0e4 1.4e4 6000.0 Sample Name: "ngo-TH-03-spike 01" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" 4000.0 Peak Name: "OTA1" Mass(es): "402.000/358.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 2000.0 Sample600 Name: "ngo-TH-03-spike 01" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: 400 "OTB3" Mass(es): "368.000/220.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 200 6.39 0.0 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 2.8e4 Time, Sample Name: "LN-BG-03-spike 5-05" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" 2.6e4 Peak Name: "OTB1" Mass(es): "368.000/324.000 Da" Comm ent: "" Annotation: "" 2.4e4 1.6e4 8000.0 800 2.0e4 Sample Name: "ngo-TH-03-spike 01" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTB1" Mass(es): "368.000/324.000 Da" 1.0e4 Comm ent: "" Annotation: "" Intensity, cps 4.0e4 2200 Intensity, cps Intensity, cps 5.0e4 8.63 2.4e4 2600 6.0e4 S P C 2.6e4 2800 7.0e4 0.0 0.0 2.8e4 6.36 3000 8.0e4 2000.0 3.0e4 0.0 0.0 Sample Name: "LN-BG-03-spike 5-04" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTA1" Mass(es): "402.000/358.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 Time, 99 7.0 8.0 9.0 0.0 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 Time, Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Hà Bình Hình P5.10: Sắc đồ mẫu ngo-TH-03 thêm chuẩn mức ppb Sample Name: "ngo-TH-03-spike 04" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTB1" Mass(es): "368.000/324.000 Da" Comment: "" Annotation: "" Sample Name: "ngo-TH-03-spike 04" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTB3" Mass(es): "368.000/220.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 6.33 Sample Name: "ngo-TH-03-spike 04" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTA1" Mass(es): "402.000/358.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 6.33 6.5e4 6500 6.0e4 6000 5.5e4 5500 5.0e4 5000 4.5e4 4500 3.0e4 2.5e4 1.6e4 1.4e4 4000 3500 3000 2500 1.2e4 1.0e4 8000.0 2.0e4 2000 6000.0 1.5e4 1500 4000.0 1.0e4 1000 5000.0 500 0.0 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "ngo-TH-03-spike 05" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTB1" Mass(es): "368.000/324.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 8.0 2000.0 0.0 9.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "ngo-TH-03-spike 05" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTB3" Mass(es): "368.000/220.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 6.38 8.0 0.0 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "ngo-TH-03-spike 05" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTA1" Mass(es): "402.000/358.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 9.0 6.37 3.0e4 2.8e4 2.6e4 3.0e4 1.10e4 2.8e4 8000.00 1.8e4 1.6e4 1.4e4 1.2e4 1.0e4 8000.0 6000.0 2.4e4 2.2e4 7000.00 6000.00 5000.00 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "ngo-TH-03-spike 06" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTB1" Mass(es): "368.000/324.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 8.0 1.4e4 1.2e4 1.0e4 6000.0 4000.0 2000.0 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "ngo-TH-03-spike 06" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTB3" Mass(es): "368.000/220.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 1.0 2.0 3.0 4.0 6.37 8.0 0.0 0.0 9.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "ngo-TH-03-spike 06" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTA1" Mass(es): "402.000/358.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 6.37 4.0e4 S P C 2.0e4 5500 1.8e4 5000 1.6e4 4500 4000 3500 3000 Intensity, cps 2.0e4 6000 Intensity, cps Intensity, cps 2.5e4 9.0 2.2e4 6500 3.0e4 8.0 6.61 7000 3.5e4 1.4e4 1.2e4 1.0e4 Hình P5.12 : Sắc đồ mẫu ngô-TH-03 thêm chuẩn mức ppb 1.5e4 2500 8000.0 2000 1.0e4 6000.0 Hình P5.13: Sắc đồ tỷ lệ ion ochratoxins 1500 5000.0 0.0 0.0 1.6e4 8000.0 0.00 0.0 9.0 1.8e4 3000.00 1000.00 2000.0 2.0e4 4000.00 2000.00 4000.0 S P C Intensity, cps 2.0e4 9.0 2.6e4 Intensity, cps 9000.00 Intensity, cps 2.2e4 8.0 6.61 1.20e4 1.00e4 2.4e4 0.0 0.0 Intensity, cps 3.5e4 6.58 1.8e4 Intensity, cps Intensity, cps 4.0e4 S P C 7.18 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 Time, 7.0 4000.0 1000 2000.0 500 8.0 9.0 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 Time, 100 7.0 8.0 9.0 0.0 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 Time, 7.0 8.0 9.0 [...]... rất khó để có thể khẳng định đúng đắn chất cần phân tích 1.2.4 Phương pháp sắc ký lỏng khối phổ Phương pháp sắc ký lỏng khối phổ, đặc biệt là phương pháp sắc ký lỏng hai lần khối phổ là một kĩ thuật mới được phát triển trong những năm gần đây Về cơ 11 Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Hà Bình bản, nó là phương pháp sắc ký lỏng sử dụng bộ phận phát hiện là detector khối phổ Phương pháp có nhiều ưu điểm như... máy xác định độc tố Ochratoxin có trong sản phẩm rượu lên men, ngũ cốc và sản phẩm từ các loại ngũ cốc bằng phương pháp sắc 21 Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Hà Bình ký lỏng khối phổ (LC- MS/MS)  Xây dựng quy trình tách chiết chất phân tích  Thẩm định phương pháp:  Độ đặc hiệu/chọn lọc của phương pháp  Giới hạn phát hiện LOD, giới hạn định lượng LOQ  Khoảng tuyến tính  Độ chính xác của phương pháp (độ... có thể định lượng đồng thời các chất có thời gian lưu giống nhau mà phương pháp sắc kí lỏng thường không làm được R Vatinnoa, D Vuckovica, C.G Zamboninb, J Pawliszyna [28] đã tiến hành xác định Ochratoxin trong 96 mẫu nước tiểu bằng phương pháp vi chiết pha rắn kết hợp với sắc ký lỏng khối phổ Mẫu được chỉnh pH về 3 bằng đệm photphatsalin 0,5 M trước khi vi chiết pha rắn Chương trình sắc ký lỏng được... khỏi nhau Sắc ký lỏng Ion hóa Bộ phân tích khối Detector/ Lưu giữ số liệu Hình 1.3: Sơ đồ đơn giản của hệ thống sắc ký lỏng Trong HPLC, pha tĩnh chính là chất nhồi cột làm nhiệm vụ tách hỗn hợp chất phân tích, đó là những chất rắn, xốp và kích thước hạt rất nhỏ, từ 3 – 7 µm Tuỳ theo bản chất của pha tĩnh, trong phương pháp sắc ký lỏng thường chia làm 2 loại: sắc ký pha thường (NP-HPLC) và sắc ký pha ngược.. .Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Hà Bình thành dạng dẫn xuất ester 0-methyl ochratoxin A và được xác định bằng sắc ký khí khối phổ với chế độ ESI âm 1.2.3 Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) và cột ái lực miễn dịch (IAC) Giống như ELISA, cột ái lực miễn dịch cũng dựa trên sự kết hợp đặc hiệu giữa kháng nguyên và kháng thể Kháng thể đặc hiệu với ochratoxin được gắn lên giá rắn của cột sắc ký. .. là một phương pháp chuẩn bị mẫu để là giàu và làm sạch mẫu phân tích từ dung dịch bằng cách hấp phụ lên cột chiết pha rắn Sau đó chất phân tích được rửa giải bằng một lượng nhỏ dung môi thích hợp 2.3 Phương tiện nghiên cứu 2.3.1 Thiết bị, dụng cụ 2.3.1.1 Thiết bị  Hệ thống sắc ký lỏng khối phổ khối phổ LC-MS/MS của Shimadzu bao gồm: + Máy sắc ký lỏng của Shimadzu Model 20 AD-UFLC + Máy khối phổ  •... đến 96,7% trong sữa nguyên liệu, sữa lỏng và sữa bột thu thập từ các trang trại và các siêu thị ở Beijing Với những ưu điểm trên, chúng tôi đã chọn phương pháp sắc ký lỏng khối phổ để nghiên cứu xác định các loại độc tố ochratoxins có trong sản phẩm rượu và các loại ngũ cốc và các sản phẩm làm từ ngũ cốc 1.3 Giới thiệu về hệ thống LC-MS/MS Cơ sở lí thuyết của phương pháp được tóm tắt dưới đây: Cấu trúc... Madrid, Tây Ban Nha) Phương pháp cho độ thu hồi 80-110% tại mức thêm chuẩn 0,025 và 0,1 ng/g, RSD nhỏ hơn 15% 12 Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Hà Bình Nhóm tác giả L.C Huang đã nghiên cứu xác định một nhóm các chất aflatoxin M1, ochratoxin A, zearalanone và α-zearalenol trong sữa bằng phương pháp UHPLC-MS/MS Trong nghiên cứu này, độ nhạy và độ nhanh của phương pháp được đặc biệt nghiên cứu trong chế độ UHPLC-ESI-MS/MS... trọng quyết định độ nhạy của phương pháp Tuỳ thuộc bản chất lí hoá của chất phân tích mà lựa chọn detector cho phù hợp Một số loại detector dùng trong HPLC như: Detector quang phổ hấp thụ phân tử (UV-VIS), detector huỳnh quang (RF), detector độ dẫn, detector mảng diot (DAD), detector khối phổ (MS) 1.3.2 Khối phổ (Mass Spectrometry) Khối phổ là thiết bị phân tích dựa trên cơ sở xác định khối lượng phân... thụ và giải hấp thụ là 1 giờ 15 phút Phương pháp có ưu điểm tính tự động hóa cao, ít độc hại cho người phân tích Tại Viện nghiên cứu thuốc trừ sâu và nước, Đại học Jaume, Tây Ban Nha, nhóm tác giả Eduardo Beltrán [20] đã nghiên cứu xác định một số mycotoxin trong thực phẩm và sữa bằng sắc ký lỏng khối phổ Mẫu được chiết bởi acetonitril: nước (80:20), làm sạch mẫu bằng cột ái lực miễn dịch (Aflaochra