Xác định hàm lượng ochratoxin trong thực phẩm bằng phương pháp sắc ký lỏng hai lần khối phổ (LC MSMS)”

Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Hà Bình MỞ ĐẦU Vấn đề an toàn vệ sinh thực phẩm ngày quan tâm liên quan trực tiếp tới sức khỏe tất người tiêu dùng Thời gian vừa qua nước liên tiếp phát vụ ngộ độc thực phẩm có vụ ngộ độc mycotoxin đặc biệt nghiêm trọng …đã gây tâm lý lo ngại cho người tiêu dùng lựa chọn thực phẩm sử dụng thực phẩm cách Theo thống kê Cục An toàn thực phẩm vụ ngộ độc thực phẩm năm gần nước: - Năm 2009: Toàn quốc xảy 147 vụ ngộ độc thực phẩm, có 5026 người mắc; 3958 người nhập viện; 33 người tử vong - Năm 2010: Tình hình NĐTP năm 2010 phức tạp Toàn quốc xảy 175 vụ ngộ độc có 34 vụ ngộ độc 30 người làm 5664 người mắc 42 trường hợp tử vong, so sánh với số liệu trung bình năm giai đoạn 20062009, số vụ ngộ độc giảm 9,1%; số mắc giảm 17,6% số tử vong giảm 19,2% - Năm 2011: 148 vụ, 4700 người mắc, 27 người tử vong - Năm 2012: 168 vụ, 5541 người mắc, 34 người tử vong Theo TS Trần Quang Trung, Cục trưởng Cục An toàn thực phẩm - Bộ Y tế, tháng năm 2013, nước có 108 vụ ngộ độc thực phẩm làm 2.800 người mắc, có 18 ca tử vong Trong 40 vụ ngộ độc thực phẩm thống kê quý III nguyên nhân vi sinh vật 23 vụ, độc tố tự nhiên vụ, hóa chất vụ 11 vụ chưa xác định nguyên nhân Các vụ ngộ độc xảy khắp nơi, từ gia đình riêng đến tập thể Ochratoxin loại độc tố sinh chủng nấm mốc thuộc giống Aspergilus ochraceus Penicillium verrucusum loại độc tố có tiềm gây ung thư viêm thận người động vật Độc tố phát nhiều nông sản khác bao gồm ngũ cốc sản phẩm chúng Điều đáng lo ngại ăn phải thức ăn bị nhiễm ochratoxin không gây ngộ Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Hà Bình độc cấp tính mà tích lũy dần thể - nguy tiềm ẩn đe dọa sức khỏe cho người Trong số 10.000 loại nấm mốc khác biết đến có khoảng 50 loại có hại gia súc gia cầm người Các loại nấm sản sinh độc tố gọi chung mycotoxin Mycotoxin chất độc sinh từ nấm mốc, hình thành nấm chuyển hóa chất dinh dưỡng có thức ăn nguyên liệu Theo tổ chức lương thực nông nghiệp Liên Hiệp Quốc (FAO), khoảng 25% số ngũ cốc giới có chứa hàm lượng mycotoxin mức độ Tùy vào địa lý, khả nhiễm mycotoxin lại khác Ở điều kiện nhiệt đới cận nhiệt đới, nguy nhiễm mycotoxin cao Đặc thù khí hậu sản xuất nông nghiệp Việt Nam tình trạng nhiễm độc tố nấm mốc phổ biến Sự hình thành nấm mốc độc tố chúng đồng, lúc thu hoạch, bảo quản trình chế biến thức ăn cho vật nuôi Như vậy, không nơi giới thoát khỏi nấm mốc độc tố từ chúng, tác hại chúng vô to lớn suất vật nuôi sức khỏe người Để kiểm soát mức độ nhiễm ochratoxin thực phẩm, Việt Nam giới có nhiều phương pháp phân tích nghiên cứu ứng dụng Nhưng với đặc điểm ưu việt độ xác cao nên phương pháp phân tích sắc ký lỏng khối phổ coi phương pháp phân tích có giá trị pháp lý để phát định lượng nồng độ ochratoxin lượng vết hay siêu vết Xuất phát từ tính cấp thiết xã hội tính ưu việt phương pháp phân tích, xây dựng phương pháp nghiên cứu: "Xác định hàm lượng Ochratoxin thực phẩm phương pháp sắc ký lỏng hai lần khối phổ (LC-MS/MS)” Mục tiêu thực đề tài nghiên cứu là: Xây dựng phương pháp xác định hàm lượng Ochratoxin thực phẩm bao gồm: - Khảo sát điều kiện máy sắc ký lỏng hai lần khối phổ Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Hà Bình - Khảo sát điều kiện xử lý mẫu - Thẩm định phương pháp xây dựng Áp dụng phương pháp xác định ochratoxin ngũ cốc, sản phẩm từ ngũ cốc, rượu lên men thị trường nước Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Hà Bình CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1.Giới thiệu chung ochratoxins[14-15] 1.1.1.Định nghĩa Độc tố ochratoxin, sản phẩm chuyển hoá thứ cấp số loài nấm mốc Ochratoxin có mặt khắp loại nông sản thực phẩm: ngũ cốc, thảo dược, bia, cà phê sản phẩm có nguồn gốc động vật bị lây nhiễm trước Ochratoxins biết đến sản phẩm loài nấm Aspergillus Penicillium thường tìm thấy nhiều loại sản phẩm lương thực thức ăn chăn nuôi Ochratoxin A lần tìm thấy nấm mốc A ochraceus vùng Nam Phi Scott (1965) hạt lúa bị nhiễm A.ochraceus Ở Đức tìm thấy Ochratoxin thường xuyên thịt Ở Anh, chúng tìm thấy đậu nành, bắp bột, ca cao M.Nakajima năm 1997 ghi nhận tỷ lệ chiểm 30% hàm lượng OTA từ 0.1 – 17,4 µg/kg 47 mẫu café nhập vào Nhật Bản từ nước Nam Phi , số nước ASIAN Tại Việt Nam, nghiên cứu tiến hành 123 mẫu ngô xã Cán Tỷ Lùng Tám huyện Quản Bạ tỉnh Hà Giang Kết cho thấy: 123 mẫu ngô phân tích có tới 50 mẫu (40,7 %) phát có ochratoxin A, số có mẫu (1,6 %) vượt mức dư lượng theo quy định Bộ Y tế Cho tới phát loại ochratoxin khác Trong khuôn khổ luận văn quan tâm nghiên cứu đến ochratoxin A B Ochratoxin A Ochratoxin B Hình 1.1: Cấu trúc Ochratoxins Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Hà Bình 1.1.2.Tính chất hóa lý Ochratoxins Ochratoxins đốc tố tinh thể không màu, bền với nhiệt, tan dung môi hữu phân cực chloroform, methanol, …, tan nước tan đệm carbonat loãng) Ochratoxins bền vững với xử lý nhiệt hóa chất Độc tố sản sinh nhiều nhiệt độ từ 20-25 0C Sự sản sinh ochratoxins phụ thuộc chủng nấm mốc, hoạt tính nước hạt, chất, nhiệt độ Ochratoxins dễ bị phân hủy ánh sáng, môi trường kiềm chất tẩy rửa Ochratoxin A phát huỳnh quang hấp thụ UV cực đại 365nm Ochratoxin A có điểm nóng chảy 1690C Phổ hồng ngoại cloroform cho píc có độ dài 3380, 1723,1678, 1655 cm -1 OTA có tính axit yếu pK a1 = 4,2-4,4 pKa2 = 7,07,3 Ochratoxin A phát huỳnh quang xanh dùng thiết bị sắc ký lớp mỏng (TLC) chiếu tia UV 366nm Ochratoxin B có trọng lượng phân tử 369,37 Ochratoxin B phát huỳnh quang màu xanh chiếu tia UV bước sóng 318 nm Nhiệt độ nóng chảy khoảng 2210C Cơ chế tác động ochratoxins: ochratoxins gây ức chế vận chuyển ribonucleic axit (tARN) axitamin Ochratoxins ức chế vi khuẩn, nấm men phenylalanine - tARN gan Tác động làm ức chế tổng hợp protein tế bào thể Sự ức chế miễn dịch ochratoxin biểu làm giảm thực bào ức chế tế bào lympho Ức chế tương tự amino axit synlaza tARN tương ứng ochratoxin A gây ức chế hydroxylase phenylalanine, nửa phenylalanine ochratoxin A phần hydroxyl hóa để tyrosin gây bệnh tế bào gan thể Ochratoxin ức chế tổng hợp ARN làm ảnh hưởng đến protein vòng tuần hoàn Tác động đến tế bào màng ti thể gây hiệu ứng khác ti thể Kích thích hình thành ADN thận, gan lách Các ADN sợi đơn bị phá vỡ Các nguyên liệu dễ nhiễm độc tố cám gạo, lúa mì, bột mì, bắp, đậu nành, cà phê Dư lượng ochratoxin tìm thấy thịt heo thịt gia Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Hà Bình cầm Độc tố gây hại đến gan thận động vật Với nồng độ lớn ppm làm giảm sản lượng trứng gà đẻ, nồng độ lớn ppm gây nên tổn thương gan ruột Tương tự Aflatoxin, độc tố gây nên giảm sức đề kháng tác nhân gây ung thư người - Gây tổn thương tế bào gan: tất trường hợp xác định ngộ độc Ochratoxin có bệnh tích giống chỗ gan bị hư hại nặng Tùy theo mức độ nhiễm hay nhiều, lâu hay mau mà tình trạng bệnh gan khác Biểu chung ban đầu gan động vật (điển hình gà) biến thành màu vàng tươi, mật sưng sau gan sưng phồng bắt đầu mụn nhỏ bề mặt làm cho gồ ghề có nốt hoại tử màu trắng, sau nhiễm khuẩn mà gan trở nên bở dễ vỡ - Thận sưng to làm cho việc đào thải chất độc khỏi thể trở nên khó khăn, từ làm cho triệu chứng ngộ độc trở nên trầm trọng - Làm giảm khả đề kháng động vật, ức chế hệ thống sinh kháng thể, gây tử vong cho động vật Khi nhiễm độc ochratoxin thể mẫn cảm với loại bệnh thông thường - Bào mòn niêm mạc ống tiêu hóa lớp tế bào niêm mạc bị chết bong bị khô lại hình thành nên lớp màng bọc làm cản trở chuyển thức ăn ống tiêu hóa - Làm thay đổi hoạt động sinh lý bình thường gây rối loạn sinh sản Ở thú mang thai gây chết thai Đối với gia cầm gây tỷ lệ chết phôi giai đoạn đầu cao, tỷ lệ nở thấp - Làm giảm tính ngon miệng thức ăn phát triển nấm mốc làm mùi thức ăn - Làm hư hại vitamin thức ăn lên men phân giải nấm mốc - Ngoài tác hại nấm mốc có thức ăn lên men phân giải nguồn dường chất (glucid, protein, acid amin, vitamin ) làm cho thức ăn bị giảm Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Hà Bình giá trị nghiêm trọng, làm mùi tự nhiên, chuyển sang mùi hôi mốc, vật nuôi không thích ăn Như nói độc tố nấm gây tác hại lớn hậu vô nghiêm trọng cho thể người động vật Tùy theo loại mà độc tố nấm mốc gây nhiễm độc cấp tính mãn tính Độc tố nấm mốc gây ngộ độc cấp tính, gây hại thể từ từ làm cho không hay biết Nhưng phát sinh triệu chứng quan phận chúng công hư hại nghiêm trọng khó chữa trị Tuy nhiên, độc tố nấm mốc thức ăn gây nên huỷ hoại thầm lặng hệ thống miễn dịch gia súc, làm cho chúng mẫn cảm bệnh Khác với bệnh nhiễm trùng kháng sinh không điều trị nhiễm độc tố nấm mốc Cách tốt ngăn ngừa không cho độc tố nấm mốc nhiễm vào thức ăn Trên heo: Liều gây chết : LD50 1-6 mg/kg, Ở gà: LD50 3,6 mg/kg gà 10 ngày tuổi 1.1.3 Giới hạn tồn dư tối đa cho phép (MRL) - Mức dư lượng tối đa cho phép giới hạn dư lượng loại thuốc, phép tồn mặt pháp lí xem chấp nhận nông sản, thức ăn mà không gây hại cho người sử dụng vật nuôi dùng Bảng 1.1: Mức dư lượng tối đa cho phép Ochratoxin A Việt Nam Loại Ngũ cốc chưa qua chế biến µg/g Hạt cà phê rang, cà phê bột Cà phê uống liền 10 Rượu vang, nước nho ép Thực phẩm dành cho trẻ 36 tháng tuổi 0,5 Gia vị 30 Sản phẩm chiết xuất từ cam thảo 80 Ngũ cốc bột ngũ cốc Hiện chưa có quy định cụ thể mức MRL cho ochratoxin B kể nước tiêu chuẩn Châu Âu (EN) Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Hà Bình 1.2 Các phương pháp xác định 1.2.1 Phương pháp ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) Nguyên tắc dựa kết hợp đặc hiệu kháng nguyên kháng thể Ochratoxin chuẩn cộng hợp với enzyme, tạo thành phức hợp Ochratoxinenzyme sử dụng kháng nguyên nồng độ định, cạnh tranh với ochratoxin có mẫu Kháng thể đặc hiệu với ochratoxin gắn lên bề mặt giếng nhựa polystryren Dịch chiết mẫu methanol 70% trộn cộng hợp với ochratoxin – enzyme cho vào giếng có phủ kháng thể, ochratoxin có mẫu (nếu có) cạnh tranh với phức hợp ochratoxin- enzyme để gắn vào kháng thể cố định polystryren Sau rửa phức hợp thừa, chất phản ứng với enzyme đưa vào tạo màu Ủ thời gian sau thêm vào dung dịch ngưng phát màu để tạo điều kiện đồng thời gian cho giếng Tiến hành đo độ hấp thụ mẫu dãy chuẩn máy đo màu, từ tính nồng độ ochratoxin có mẫu Màu đậm chứng tỏ cộng hợp ochratoxin – enzyme giữ giếng nhiều, đồng nghĩa với nồng độ ochratoxin mẫu thấp Ngược lại, màu nhạt nồng độ Ochratoxin cao Sử dụng phương pháp ELISA để xác định ochratoxin kể đến số nghiên cứu sau: Nhóm tác giả Aihua Zhang, Yanna Ma, Lulu Feng, Ying Wang, Chenghua He, Xichun Wang, Haibin Zhang [14] xác định Ochratoxin đối tượng mẫu ngũ cốc nguyên liệu Nanjing, Trung Quốc Phương pháp phân tích có giới hạn phát 0,15 ng/ml Độ thu hồi phương pháp đạt từ 87-101% mức thêm chuẩn 2,5-10 ppb Nhóm tiến hành phân tích 65 mẫu ngô, gạo, lúa mì Kết cho thấy số 22 mẫu lúa mì chứa Ochratoxin A khoảng 2- ppb (chiếm 36% tổng số mẫu), số 23 mẫu ngô (chiếm khoảng 26% tổng số mẫu) dương tính với Ochratoxin A khoảng 3-23 ppb, số 20 mẫu gạo (chiếm khoảng 15% tổng số mẫu) dương tính với Ochratoxin A khoảng 2-3 ppb Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Hà Bình Nhóm tác giả Pedro Novoa, Géraud Moulasa, Duarte Miguel Franc¸ Prazeresb, Virginia Chua, João Pedro Conde [32] xác định Ochratoxin mẫu rượu với giới hạn phát 0,85 ng/ml Ochratoxin phát dung dịch đệm PBS với việc sử dụng cấu hình kênh thẳng Kỹ thuật có ưu điểm: nhanh, đơn giản,tiết kiệm dung môi, đặc hiệu nhạy so với phương pháp HPLC hiệu dễ cho kết dương tính giả âm tính giả 1.2.2 Phương pháp sắc ký khí (Gas chromatography-GC) Phương pháp sắc ký khí số tác giả ứng dụng để xác định loại độc tố Ochratoxin Tuy nhiên phương pháp phân tích chất dễ bay hơi, chất khó bay phải tạo dẫn xuất nên tốn thời gian hóa chất Hơn nữa, để phân tích đồng thời chất cần thời gian phân tích dài Do vậy, phương pháp ứng dụng để phân tích loại độc tố Ochratoxin Tác giả Yuying Jiao cộng [31] tiến hành xác định Ochratoxin thực phẩm phương pháp sắc ký khí Ở Ochratoxin A chuyển thành dạng dẫn xuất ester 0-methyl ochratoxin A xác định sắc ký khí khối phổ với chế độ ESI âm 1.2.3 Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) cột lực miễn dịch (IAC) Giống ELISA, cột lực miễn dịch dựa kết hợp đặc hiệu kháng nguyên kháng thể Kháng thể đặc hiệu với ochratoxin gắn lên giá rắn cột sắc ký (thường dùng Sepharose 4B), tạo cho IAC đặc tính vừa tinh vừa cô đặc ochratoxin Mẫu chiết với acetonitril/H 2O, sau pha loãng cho qua cột lực miễn dịch Cột rửa tạp chất không gắn lên kháng thể giải hấp methanol Tiến hành định lượng HPLC với detector huỳnh quang Bản thân Ochratoxin chất phát huỳnh quang bước sóng hập thụ 333 nm, bước sóng phát xạ 460 nm nên có nhiều nghiên cứu sử dụng phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao với detector huỳnh quang để xác định Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Hà Bình Tác giả Catherine Tessini cộng [18] tiến hành thực phân tích 154 mẫu rượu xuất xứ Chi Lê, khảo sát cột lực miễn dịch với hệ dung môi khác nhau, giới hạn phát phương pháp từ 1-9 ppb, hiệu suất thu hồi nằm khoảng 60-90% Tác giả R Ghali cống [27] tiến hành thực 180 mẫu thực phẩm xuất xứ Tunisia Mẫu chiết ACN/H2O (80/20) làm cột lực miễn dịch Độ thu hồi mức nồng độ 0,5 ng/g khoảng 84 đến 94 % Phương pháp có giới hạn phát 0,1 ng/g Loại mẫu thường bị nhiêm lúa mạch, lúa mì.Tuy nhiên, sử dụng detector huỳnh quang phương pháp có độ nhạy tương đối tốt, nhận biết chất phân tích thông qua thời gian lưu Đối với mẫu phức tạp, chất phân tích dễ bị ảnh hưởng mẫu, dựa vào thời gian lưu khó để khẳng định đắn chất cần phân tích 1.2.4 Phương pháp sắc ký lỏng khối phổ Phương pháp sắc ký lỏng khối phổ, đặc biệt phương pháp sắc ký lỏng hai lần khối phổ kĩ thuật phát triển năm gần Về bản, phương pháp sắc ký lỏng sử dụng phận phát detector khối phổ Phương pháp có nhiều ưu điểm độ chọn lọc cao, giới hạn phát thấp, thời gian phân tích nhanh, định lượng đồng thời chất có thời gian lưu giống mà phương pháp sắc kí lỏng thường không làm R Vatinnoa, D Vuckovica, C.G Zamboninb, J Pawliszyna [28] tiến hành xác định Ochratoxin 96 mẫu nước tiểu phương pháp vi chiết pha rắn kết hợp với sắc ký lỏng khối phổ Mẫu chỉnh pH đệm photphatsalin 0,5 M trước vi chiết pha rắn Chương trình sắc ký lỏng gradient khoảng phút cho chất phân tích với tín hiệu tốt Độ thu hồi, độ chụm tiến hành đo mức nồng độ 1, 10, 50 ng/ml Giới hạn phát giới hạn định lượng nước tiểu tương ứng 0,3 0,7 ng/ml Cột sắc ký sử dụng cột C18 – Waters, tốc độ dòng 0,5 ml/phút Pha động: 90% kênh A (nướu, acetonitril, aceticacid 90:10:0,1) phút, tăng tỷ lệ 60% A/40%B (acetonitril 10 Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Hà Bình II Kiến nghị  Tiếp tục nghiên cứu thêm quy trình phân tích đồng thời mycotoxin khác thực phẩm hệ thống LC-MS/MS  Mở rộng thêm đối tượng phân tích phân tích đồng thời mycotoxin thức ăn chăn nuôi, thực phẩm chức năng, sữa, thịt,… 61 Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Hà Bình TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Cục Quản lý chất lượng nông lâm sản thủy sản, Báo cáo kết công tác tháng 3/2012 trọng tâm công tác tháng 4/2012 (ngày 4/4/2012) Báo cáo kết công tác tháng 4/2012 trọng tâm công tác tháng 5/2012 (ngày 14/5/2012) Trần Tứ Hiếu, Từ Vọng Nghi, Nguyễn Văn Ri, Nguyễn Xuân Trung (2007), Hóa học phân tích, phần 2: Các phương pháp phân tích công cụ, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội Nguyễn Văn Ri (2009), Giáo trình Các phương pháp tách, khoa Hóa học trường Đại học Khoa học Tự Nhiên, Đại học Quốc Gia Hà Nội Nguyễn Đình Thành (2011), Cơ sở phương pháp phổ ứng dụng hóa học, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội Phạm Luận (1998), Cơ sở lý thuyết phân tích sắc ký lỏng hiệu cao, ĐH Quốc Gia Hà Nội Tạ Thị Thảo (2010), Giáo trình Thống kê Hóa học phân tích, khoa Hóa học trường Đại học Khoa học Tự Nhiên, Đại học Quốc Gia Hà Nội Mai Tất Tố, Nguyễn Thị Trâm (2007), Dược lý học tập 1, NXB Y học Mai Tất Tố, Nguyễn Thị Trâm (2007), Dược lý học tập 2, NXB Y học TCVN 9524:2012 Thực phẩm - Xác định hàm lượng ochratoxin A rượu vang bia - Phương pháp sắc kí lỏng hiệu cao (HPLC) có làm cột lực miễn nhiễm 10 TCVN 8426:2010 Cà phê nhân - Xác định ochratoxin A phương pháp sắc ký lỏng có làm cột lực miễn nhiễm 11 Trần Cao Sơn, Phạm Xuân Đà, Lê Thị Hồng Hảo, Nguyễn Thành Trung (2010), Thẩm định phương pháp phân tích hóa học & vi sinh vật, Nxb Khoa Học Kỹ Thuật 62 Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Hà Bình Tiếng Anh 12 Agnieszka Waskiewicz, Monika Beszterda, Jan Bocianowski, Piotr Golinski(2013), “Natural occurrence of fumonisins and ochratoxin A in some herbs and spices commercialized in Poland analyzed by UPLC – MS/MS method”, Food Microbiology, 36, pp 426-431 13 Angel Medina, Francisco M Valle-Algarra, Jos´ e V Gimeno-Adelantado, Rufino Mateo, Fernando Mateo, Misericordia Jim´ enez (2006), “New method for determination of ochratoxin A in beer using zinc acetate and solid-phase extraction silica cartridges”, Journal of Chromatography A, 1121, pp.178–183 14 Aihua Zhang, Yanna Ma, Lulu Feng, Ying Wang, Chenghua He, Xichun Wang (2011), “Development of a sensitive competitive indirect ELISA method for determination of ochratoxin A levels in cereals originating from Nanjing, China”, Food Control 22, 706, pp 269–277 15 Arnau Vidal, Sonia Marín, Antonio J Ramos, German Cano-Sancho, Vicente Sanchis (2013), “Determination of aflatoxins, deoxynivalenol, ochratoxin A and zearalenone in wheat and oat based bran supplements sold in the Spanish market”, Food and Chemiscal Toxicology, 53, pp 133-138 16 Bulent Kabak (2012), “Determination of aflatoxins and ochratoxin A in retail cereal products from Turkey by high performance liquid chromatography with fluorescence detection”, Food Control, 28, pp 1-6 17 Catherine Tessini, Claudia Mardones, Dietrich von Baer, Mario Vega, Erika Herlitz, Roberto Saelzer, Jorge Silva, Olga Torres (2010), “Alternatives for sample pre-treatment and HPLC determination of Ochratoxin A in red wine using fluorescence detection”, Analytica Chimica Acta, 660, pp 119-126 18 Joan M Sáez , Ángel Medina, José V Gimeno-Adelantado, Rufino Mateo, Misericordia Jiménez (2004), “Comparison of different sample treatments for the analysis of ochratoxin A in must, wine and beer by liquid chromatography”, Journal of Chromatography A, 1029, pp 125–133 63 Luận văn thạc sĩ 19 Nguyễn Thị Hà Bình Eduardo Beltrán, María Ibáñez, Juan Vicente Sancho, Miguel Ángel Cortés, Vicent Yusà , Félix Hernández (2011), “Simultaneous determination of aflatoxin M, ochratoxin A, zearalenoneanda-zearalenol in milk by UHPLC–MS/MS”, Food Chemistry, 126, pp.737–744 20 Mario Vega, Katherine Muñoz, Carolina Sepúlveda, Mario Aranda, Victor Campos, Ricardo Villegas Orialis Villarroel (2009), “Solid-phase extraction and HPLC determination of Ochratoxin A in cereals products on Chilean market”, Food Control, 20, pp 631-634 21 Mohammad Hossein Mashhadizadeh Mitra Amoli-Diva, Kamyar Pourghazi (2013), “Magnetic Nanoparticles solid phase extraction for determination of ochratoxin A in cereals using high-performance liquid chromatography with fluorescence detection”, Journal Of Chromatography A, 1320, pp 17-25 22 N.A Al-Hazmi (2010), “Determination of Patulin and Ochratoxin A using HPLC in apple juice samples in Saudi Arabia”, Saudi Journal of Biological Sciences, 17, pp 353-359 23 Natalia Arroyo-Manzanares, Laura Gámiz-Gracia, Ana M García-Campaña (2012), “Determination of ochratoxin A in wines by capillary liquid chromatography with laser induced fluorescence detection using dispersive liquid– liquid microextraction”, Food Chemistry, 135, pp 368-372 24 L.C Huang, N Zheng, B.Q Zhen, F Wen, J.B Cheng, R.W Han, X.M Xu , S.L Li J.Q Wang (2013), “Simultaneous determination of aflatoxin M, ochratoxin A, zearalenoneanda-zearalenol in milk by UHPLC–MS/MS”, Food Chemistry, 146, pp 242-249 25 Lizhi Wang, Zhen Wang, Weiwei Gao, Juan Chen, Meihua Yang, Ying Kuang, Linfang Huang, Shilin Chen (2013), “Simultaneous determination of aflatoxin B and ochratoxin A in licorice roots and fritillary bulbs by solid-phase extraction coupled with high performance liquid chromatography–tandem mass spectrometry”, Food Chemistry, 138, pp 1048-1054 64 Luận văn thạc sĩ 26 Nguyễn Thị Hà Bình R Ghali, K Hmaissia-khlifa, H Ghorbel, K Maaroufi A Hedili (2009), “HPLC determination of ochratoxin A in high consumption Tunisian foods”, Food Control, 20, pp.716-720 27 R Vatinnoa, D Vuckovica, C.G Zamboninb, J Pawliszyna (2008), “Automated high-throughput method using solid-phase microextraction–liquid chromatography– tandem mass spectrometry for the determination of ochratoxin A in human urine”, Journal of Chromatography A, 1201,pp 215–221 28 Vlastimil Dohnal, Vladimír Dvor, František Malír, Vladimír Ostry, Tomáš Roubal (2013), “A comparison of ELISA and HPLC methods for determination of ochratoxin A in human blood serum in the Czech Republic, Food and Chemiscal Toxicology, 62, pp 427-431 29 Yuying Jiao*, Werner Blaas, Christian Riihl* and Rudolf Weber (1992), “Short Communication identification of ochratoxin A in food samples by chemical derivatization and gas chromatography-mass spectrometry”, Journal of Chromatography, pp.364-367 30 Pedro Novoa, Géraud Moulasa, Duarte Miguel Franc¸ Prazeresb, Virginia Chua, Joao Pedro Conde (2013), “Detection of ochratoxin A in wine and beer by chemiluminescence-based ELISA in microfluidics with integrated photodiodes”, Sensors and Actuators B, pp.232-240 65 Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Hà Bình PHỤ LỤC Phụ lục 1: Sắc đồ khảo sát thành phần pha động Intensity, Intensity, cps cps cps Intensity, Intensity, Intensity, cps cps cps Intensity, Intensity, Intensity, cpscps cpsIntensity, X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T B f r o m S a m p l e ( S a m p l e ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) M a x e c p s e 4 e e 6 0 0 5 T i m e , m i n X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T B f r o m S a m p l e ( S a m p l e ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) M a x e c p s 6 0 e 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 5 T i m e , m i n X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T A f r o m S a m p l e ( S a m p l e ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) M a x e c p s e 4 e e 0 0 5 T i m e , m i n Hình P1.1: Sắc đồ OTs sử dụng pha động gồm MeOH axit acetic 1% X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T B f r o m S a m p l e ( S t d m i x p p b ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) M a x e c p s e e e 0 0 0 0 5 T i m e , m i n X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T B f r o m S a m p l e ( S t d m i x p p b ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) M a x e c p s e e e 0 0 0 0 5 T i m e , m i n X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T A f r o m S a m p l e ( S t d m i x p p b ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) M a x e c p s e e 0 0 0 0 5 T i m e , m i n Hình P1.2: Sắc đồ OTs sử dụng pha động chứa amoniacetat 10% X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T B f r o m S a m p l e ( S t d p p b ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) M a x 6 c p s 6 0 0 0 4 5 0 0 5 T i m e , m i n X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T B f r o m S a m p l e ( S t d p p b ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) 8 M a x 6 c p s 6 0 0 0 4 5 0 0 5 T i m e , m i n X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T A f r o m S a m p l e ( S t d p p b ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) 8 M a x c p s 0 0 0 0 0 0 6 2 5 T i m e , m n i 5 9 Hình P1.3: Sắc đồ OTs sử dụng pha động chứa amoniacetat 5% 66 Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Hà Bình Intensity, Intensity, Intensity, cps cps X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T B f r o m S a m p l e ( S t d p p b ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) M a x c p s 0 0 0 0 0 0 0 5 T i m e , m i n X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T B f r o m S a m p l e ( S t d p p b ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) M a x c p s 0 0 0 0 0 0 0 5 T i m e , m i n X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T A f r o m S a m p l e ( S t d p p b ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) M a x 2 c p s 0 0 0 0 0 0 0 5 T i m e , m i n Hình P1.4: Sắc đồ OTs sử dụng pha động chứa amoniacetat 20% Intensity, Intensity, Intensity, cps cps cps Phụ lục 2: Kết khảo sát tốc độ pha động X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T B f r o m S a m p l e ( t e s t ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) M a x 7 c p s 7 0 0 0 0 0 5 T i m e , m i n X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T B f r o m S a m p l e ( t e s t ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) M a x 7 c p s 7 0 0 0 0 0 5 T i m e , m i n X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T A f r o m S a m p l e ( t e s t ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) M a x 7 c p s 8 7 3 0 0 0 0 0 5 T i m e , m i n Hình P2.1: Sắc đồ OTs sử dụng tốc độ dòng 0,8 ml/phut cps Intensity, Intensity, Intensity, cps cps X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T B f r o m S a m p l e ( S t d m i x p p b ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) M a x e c p s e e e 0 0 0 0 5 T i m e , m i n X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T B f r o m S a m p l e ( S t d m i x p p b ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) M a x e c p s e e e 0 0 0 0 5 T i m e , m i n X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T A f r o m S a m p l e ( S t d m i x p p b ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) M a x e c p s e e 0 0 0 0 5 T i m e , m i n Hình P2.2: Sắc đồ OTs sử dụng tốc độ dòng 1,0 ml/phut cps 67 Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Hà Bình Intensity, Intensity, Intensity, cps cps X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T B f r o m S a m p l e ( T E S T T C ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) M a x e c p s e 0 e 0 e 0 e 4 0 e 0 e 0 0 5 T i m e , m i n X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T B f r o m S a m p l e ( T E S T T C ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) M a x e c p s 0 e 0 e 0 e 4 0 e 0 e 0 0 5 T i m e , m i n X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T A f r o m S a m p l e ( T E S T T C ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) M a x e c p s e 0 e 0 e 0 e 4 0 e 0 e 0 0 5 T i m e , m i n Hình P2.3: Sắc đồ OTs sử dụng tốc độ dòng 1,2 ml/phut cps Intensity, Intensity, Intensity, cps cps cps Intensity, Intensity, Intensity, cps cps Phụ lục 3: Kết khảo sát gradient pha động X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T B f r o m S a m p l e ( S t d m i x p p b ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) M a x e c p s e e e 0 0 0 0 5 T i m e , m i n X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T B f r o m S a m p l e ( S t d m i x p p b ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) M a x e c p s e e e 0 0 0 0 5 T i m e , m i n X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T A f r o m S a m p l e ( S t d m i x p p b ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) M a x e c p s e e 0 0 0 0 5 T i m e , m i n Hình P3.1: Sắc đồ OTs sử dụng gradient X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T B f r o m S a m p l e ( t e s t ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) M a x 7 c p s 7 0 0 0 0 0 5 T i m e , m i n X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T B f r o m S a m p l e ( t e s t ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) M a x 7 c p s 7 0 0 0 0 0 5 T i m e , m i n X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T A f r o m S a m p l e ( t e s t ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) M a x 7 c p s 8 7 3 0 0 0 0 0 5 T i m e , m i n Hình P3.2: Sắc đồ OTs sử dụng gradient cps 68 Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Hà Bình Intensity, Intensity, Intensity, cps cps X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T B f r o m S a m p l e ( Q T b l o p d u o i ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) M a x c p s 0 0 0 0 0 5 T i m e , m i n X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T B f r o m S a m p l e ( Q T b l o p d u o i ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) M a x c p s 0 0 0 0 0 5 T i m e , m i n X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T A f r o m S a m p l e ( Q T b l o p d u o i ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) M a x c p s 0 0 0 0 0 0 5 T i m e , m i n Hình P3.3: Sắc đồ OTs sử dụng gradient Intensity, Intensity, Intensity, cps cps cps X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T B f r o m S a m p l e ( Q T b l o p t r e n ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) M a x 1 c p s 1 0 0 0 0 0 0 0 5 T i m e , m i n X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T B f r o m S a m p l e ( Q T b l o p t r e n ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) M a x 1 c p s 1 0 0 0 0 0 0 0 5 T i m e , m i n X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T A f r o m S a m p l e ( Q T b l o p t r e n ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) M a x 1 c p s 0 0 0 0 0 0 5 T i m e , m i n Hình P3.4: Sắc đồ OTs sử dụng gradient cps Phụ lục 4: Sắc đồ thẩm định phương pháp (LOD, độ lặp lại, độ thu hồi) S a m p leN a m e :" L O D " S a m p l eID :" " F i le :" D a ta S E T w i ff" P e a kN a m e :" O T B " M a s s ( e s ) :" 0 / 0 0D a " C o m m e n t :" " A n n o ta tio n :" " S a m p l eN a m e :"L O D " S a m p l eID :"" F il e :"D a ta S E T w i ff" P e a kN a m e :"O T B " M a s s (e s ) :"3 0 /2 0 0D a " C o m m e n t:"" A n n o ta ti o n :" " S a m p l e I n d e x : S a m p l e T y p e : U n k n o w n C o n c e n t r a t i o n : N / A C a l c u l a t e d C o n c : 0 n g / m L A c q D a t e : / 1 / A c q T i m e : : : P M S a m p l e I n d e x : S a m p l e T y p e : U n k no w n C o n c e n t r a t i o n: N/ A C a l c u l a t e d C on c : 0 n g / m L A c q D a t e : / 1/ A c q T i m e : : 1: P M 0 0 0 0 0 4 0 0 0 I n t T y p e : B a s e T o B a se R e t e n t i o n T i me : mi n A r e a : e + 00 c ou n t s H e i g h t : e+ 0 cp s S t a r t T i m e : mi n E n d T i m e : mi n 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 S a m p leN a m e :" L O D " S a m p l eID :" " F i le :" D a ta S E T w i ff" P e a kN a m e :" O T A " M a s s ( e s ) :" 0 / 0 0D a " C o m m e n t :" " A n n o ta tio n :" " S a m p l e I n d e x : S a m p l e T y p e : U n k n o w n C o n c e n t r a t i o n : N / A C a l c u l a t e d C o n c : 0 n g / m L A c q D a t e : / 1 / A c q T i m e : : : P M T i m e ,m in 0 2 0 8 4 0 0 0 1 0 I n t T y p e : M a n u a l R e t e n t i o n T i m e : m i n A r e a : e + 0 c o u n t s H e i g h t : e + 0 c p s S t a r t T i m e : m i n E n d T i m e : m i n 0 0 0 0 0 cps 0 0 0 1 0 T i m e ,m in T i m e ,m in 2 0 0 0 0 HìnhP4.1: Sắc đồ OTs LOD 0,1 ng/g 69 M o d i f i e d : Y e s P r o c A l g o r i t h m : S p e c i f y P a r a m e t e r s - M Q I I I N o i s e P e r c e n t a g e : B a s e S u b W i n d o w : 0 m i n P e a k S p l i t F a c t o r : R e p o r t L a r g e s t P e a k : Y e s M i n P e a k H e i g h t : 0 c p s M i n P e a k W i d t h : 0 s e c S m o o t h i n g W i d t h : p o i n t s R T W i n d o w : s e c E x p e c t e d R T : m i n U s e R e l a t i v e R T : N o 0 0 2 Intensity, Intensity, cps 0 0 0 S a m p l eN a m e :"L O D " S a m p l eID :"" F il e :"D a ta S E T w i ff" P e a kN a m e :"O T A " M a s s (e s ) :"4 0 /1 6 0D a " C o m m e n t:"" A n n o ta ti o n :" " S a m p l e I n d e x : S a m p l e T y p e : U n k n o w n C o n c e n t r a t i o n : N / A C a l c u l a t e d C o n c : 0 n g / m L A c q D a t e : / 1 / A c q T i m e : : : P M 0 6 0 0 I n t T y p e : M a n u a l R e t e n t i o n T i m e : m i n A r e a : e + 0 c o u n t s H e i g h t : e + 0 c p s S t a r t T i m e : m i n E n d T i m e : m i n 1 0 M o d i f i e d : Y e s P r o c A l g o r i t h m : S p e c i f y P a r a m e t e r s - M Q I I I N o i s e P e r c e n t a g e : B a s e S u b W i n d o w : 0 m i n P e a k S p l i t F a c t o r : R e p o r t L a r g e s t P e a k : Y e s M i n P e a k H e i g h t : 0 c p s M i n P e a k W i d t h : 0 s e c S m o o t h i n g W i d t h : p o i n t s R T W i n d o w : s e c E x p e c t e d R T : m i n U s e R e l a t i v e R T : N o 0 0 0 cps I n t T y p e : V a l l e y R e t e n t i o n T i m e : m i n A r e a : e + 0 c o u n t s H e i g h t : e + 0 c p s S t a r t T i m e : m i n E n d T i m e : m i n 4 M o d i f i e d : No P r o c A l g o r i th m : S p e ci f y P a m e t e r s - M Q I I I N o i s e P e r c e n ta g e : B a s e S u b W in d o w : 0 m i n P e a k S p l i t Fa c t o r : R e p o r t L a r g e st P e a k : Y e s M i n P e a k H e ig h t : 0 c p s M i n P e a k W i dt h : 0 s e c S m o o t h i n g W i dt h : p o i n t s R T W i n d o w : 0 se c E x p e c t e d R T : 6 mi n U s e R e l a t i v e R T : No 0 Intensity, 0 Intensity, cps M o d i f i e d : N o P r o c A l g o r i t h m : S p e c i f y P a r a m e t e r s - M Q I I I N o i s e P e r c e n t a g e : B a s e S u b W i n d o w : 0 m i n P e a k S p l i t F a c t o r : R e p o r t L a r g e s t P e a k : Y e s M i n P e a k H e i g h t : 0 c p s M i n P e a k W i d t h : 0 s e c S m o o t h i n g W i d t h : p o i n t s R T W i n d o w : s e c E x p e c t e d R T : m i n U s e R e l a t i v e R T : N o 2 T i m e ,m in 7 8 9 Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Hà Bình Std 0.5 Standard 2013\T7\11\ DataSE 1.34e+003 3.50e+002 Analyte Concentration (ng/mL) 0.500 N/A Calcula te d Concentration (ng/mL) 0.493 98.6 Spike 2.5 Std Std 10 Quality Control Standard Standard 2013\T7\11\ DataSE 2.80e+003 2013\T7\11\ DataSE 5.02e+003 2013\T7\11\ DataSE 8.77e+003 7.38e+002 1.19e+003 1.81e+003 2.50 5.00 10.0 N/A N/A N/A 2.34 5.14 9.87 93.4 103 98.7 M1-5.98 Unknown 2013\T7\11\ DataSE 0.00e+000 0.00e+000 N/A N/A No Peak N/A Sample Name Sample ID Sa mple Type Analyte Pea k Are a (counts) File Nam e Analyte Peak Height (cps) 0 0 0 0 T m i e , m i n 9 M o d i f i e d : Y e s P r o c A l g o r i t h m : S p e c i f y P a r a m e t e r s M Q I I I N o i s e P e r c e n t a g e : B a s e S u b W i n d o w : 0 m i n P e a k S p l i t F a c t o r : R e p o r t L a r g e s t P e a k : Y e s M i n P e a k H e i g h t : 0 c p s M i n P e a k W i d t h : 0 s e c S m o o t h i n g W i d t h : p o i n t s R T W i n d o w : s e c E x p e c t e d R T : m i n S a m p l e I n d e x : S a m p l e T y p e : S t a n d a r d C o n c e n t r a t i o n : n g / m L C a l c u l a t e d C o n c : n g / m L A c q D a t e : / 1 / A c q T i m e : : : P M 0 0 M o d i f i e d : Y e s P r o c A l g o r i t h m : S p e c i f y P a r a m e t e r s M Q I I I N o i s e P e r c e n t a g e : B a s e S u b W i n d o w : 0 m i n P e a k S p l i t F a c t o r : R e p o r t L a r g e s t P e a k : Y e s M i n P e a k H e i g h t : 0 c p s M i n P e a k W i d t h : 0 s e c S m o o t h i n g W i d t h : p o i n t s R T W i n d o w : s e c E x p e c t e d R T : m i n 0 0 0 5 7 2 0 0 T m i e , m i n M o d i f i e d : Y e s P r o c A l g o r i t h m : S p e c i f y P a r a m e t e r s M Q I I I N o i s e P e r c e n t a g e : B a s e S u b W i n d o w : 0 m i n P e a k S p l i t F a c t o r : R e p o r t L a r g e s t P e a k : Y e s M i n P e a k H e i g h t : 0 c p s M i n P e a k W i d t h : 0 s e c S m o o t h i n g W i d t h : p o i n t s R T W i n d o w : s e c E x p e c t e d R T : m i n U n t i t l e d ( O T A ) : " L i n e a r " R e g r e s s i o n ( " / x " w e i g h t i n g ) : y = x + ( r = 9 ) 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 5 5 5 T i m e , m i n 0 0 0 0 T i m e , m i n cps 0 Accuracy (%) S a m p l e N a m e : " S t d "S a m p l e I D : " "F i l e : " D a t a S E T w i f f " P e a k N a m e : " O T A "M a s s ( e s ) : " 0 / 0 D a " C o m m e n t :" "A n n o t a t i o n : " " cps Area, S a m p l e N a m e :" S t d "S a m p e l I D : " "F i l e :" D a t a S E T w i f f " P e a k N a m e : " O T A "M a s s ( e s ) :" 0 / 0 D a " C o m m e n t : " "A n n o t a t i o n : " " S a m p l e I n d e x : S a m p l e T y p e : S t a n d a r d C o n c e n t r a t i o n : 0 n g / m L C a l c u l a t e d C o n c : n g / m L A c q D a t e : / 1 / A c q T i m e : : : P M Record Modified S a m p l e N a m e : " S p i k e "S a m p l e I D : " "F i l e :" D a t a S E T w i f f " P e a k N a m e : " O T A "M a s s ( e s ) : " 0 / 0 D a " C o m m e n t :" "A n n o t a t i o n : " " S a m p l e I n d e x : S a m p l e T y p e : Q C C o n c e n t r a t i o n : n g / m L C a l c u l a t e d C o n c : n g / m L A c q D a t e : / 1 / A c q T i m e : : : P M 0 M o d i f i e d : Y e s P r o c A l g o r i t h m : S p e c i f y P a r a m e t e r s M Q I I I N o i s e P e r c e n t a g e : B a s e S u b W i n d o w : 0 m i n P e a k S p l i t F a c t o r : R e p o r t L a r g e s t P e a k : Y e s M i n P e a k H e i g h t : 0 c p s M i n P e a k W i d t h : 0 s e c S m o o t h i n g W i d t h : p o i n t s R T W i n d o w : s e c E x p e c t e d R T : m i n Use Record Intensity,Intensity, cps Intensity,Intensity, cps S a m p l e N a m e :" S t d "S a m p l e I D : " "F i l e : " D a t a S E T w i f f " P e a k N a m e : " O T A "M a s s ( e s ) :" 0 / 0 D a " C o m m e n t : " "A n n o t a t i o n : " " S a m p l e I n d e x : S a m p l e T y p e : S t a n d a r d C o n c e n t r a t i o n : 0 n g / m L C a l c u l a t e d C o n c : n g / m L A c q D a t e : / 1 / A c q T i m e : : : P M Standa rd Query Status 0 5 09 C o n c e n t r a t i o n , n g / m L counts Intensity, Intensity, Intensity, cps cps Hình P4.2: Sắc đồ OTs mẫu ngô thêm chuẩn 2,5 ng/g X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T B f r o m S a m p l e ( m a u l a c B G ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) M a x c p s e e e 0 0 0 5 T i m e , m i n X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T B f r o m S a m p l e ( m a u l a c B G ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) M a x c p s 0 0 0 0 0 0 0 5 T i m e , m i n X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T A f r o m S a m p l e ( m a u l a c B G ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) M a x e c p s 6 e e e 0 0 0 5 T i m e , m i n Hình P4.3: Sắc đồ OTs mẫu trắng ngô thêm chuẩn 10 ng/g cps Intensity, Intensity, Intensity, cps cpscps Phụ lục 5: Một số sắc đồ phân tích mẫu thực tế X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T B f r o m S a m p l e ( 1 ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) M a x c p s 0 6 0 0 5 T i m e , m i n X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T B f r o m S a m p l e ( 1 ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) M a x c p s 0 6 0 0 5 T i m e , m i n X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T A f r o m S a m p l e ( 1 ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) M a x c p s 0 0 5 5 T i m e , m i n Hình P5.1: Sắc đồ mẫu rượu OTs 70 Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Hà Bình Intensity, Intensity, Intensity, cps cps X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T B f r o m S a m p l e ( B l a n k ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) M a x c p s 0 0 0 6 4 0 0 5 T i m e , m i n X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T B f r o m S a m p l e ( B l a n k ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) 9 M a x c p s 0 0 0 6 4 0 0 5 T i m e , m i n X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T A f r o m S a m p l e ( B l a n k ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) 9 M a x c p s 0 0 0 5 T i m e , m i n 8 Hình P5.2: Sắc đồ mẫu lạc OTs cps Intensity, Intensity, Intensity, cps cps X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T B f r o m S a m p l e ( 1 m l ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) M a x c p s 7 2 0 6 5 T i m e , m i n X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T B f r o m S a m p l e ( 1 m l ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) M a x c p s 2 5 6 0 0 5 T i m e , m i n X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T A f r o m S a m p l e ( 1 m l ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) M a x c p s 0 0 1 5 4 5 T i m e , m i n 5 5 Hình P5.3: Sắc đồ mẫu ngô OTs cps Intensity, Intensity, Intensity, cps cps X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T B f r o m S a m p l e ( n g o T H ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) M a x e c p s e e e e e 0 0 0 0 5 T i m e , m i n X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T B f r o m S a m p l e ( n g o T H ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) M a x e c p s e e e e e 0 0 0 0 5 T i m e , m i n X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T A f r o m S a m p l e ( n g o T H ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) M a x e c p s 1 e e e 0 0 0 5 T i m e , m i n cps Hình P5.4 Sắc đồ mẫu Ngo-TH-03 có OTs 71 Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Hà Bình Intensity, Intensity, Intensity, cps cps X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T B f r o m S a m p l e ( L N B G g ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) M a x e c p s e e e e 5 e 0 0 5 T i m e , m i n X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T B f r o m S a m p l e ( L N B G g ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) M a x e c p s e e e e 5 e 0 0 5 T i m e , m i n X I C o f M R M ( p a i r s ) : 0 / 0 D a I D : O T A f r o m S a m p l e ( L N B G g ) o f D a t a S E T w i f f ( T u r b o S p r a y ) M a x e c p s 2 e e e 0 0 0 0 5 T i m e , m i n cps Hình P5.5: Sắc đồ mẫu LN-BG-03 Sample Name: "ruou-01-spike5-04" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTB1" Mass(es): "368.000/324.000 Da" Comment: "" Annotation: "" Sample Name: "ruou-01-spike5-04" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTB3" Mass(es): "368.000/220.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 6.34 Sample Name: "ruou-01-spike5-04" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTA1" Mass(es): "402.000/358.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 6.37 6.59 4500 1.4e4 4000 7000 6000 1.2e4 3500 1.1e4 6500 1.3e4 1.2e4 5500 1.1e4 1.0e4 3000 7000.0 6000.0 5000.0 2000 1500 4000.0 1000 3000.0 7.26 2000.0 5000 1.0e4 2500 Intensity, cps 8000.0 Intensity, cps Intensity, cps Intensity, cps 9000.0 9000.0 8000.0 7000.0 6000.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "ruou-01-spike5-05" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTB1" Mass(es): "368.000/324.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 8.0 9.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "ruou-01-spike5-05" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTB3" Mass(es): "368.000/220.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 6.41 8.0 6.37 2000 1500 1000 500 1.0 2.0 3.0 4.0 8.0 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "ruou-01-spike5-05" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTA2" Mass(es): "402.000/166.900 Da" Comment: "" Annotation: "" 9.0 6.62 6.5e4 1.8e4 7000.00 4.0e4 8000.0 6000.00 5000.00 4000.00 3.5e4 3.0e4 2.5e4 3000.00 4000.0 2000.00 2000.0 1000.00 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "ruou-01-spike5-06" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTB1" Mass(es): "368.000/324.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 1.0 2.0 3.0 4.0 8.0 0.00 0.0 9.0 8.0 9.0 2000 1500 1000 1.5e4 1.0e4 500 5000.0 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "ruou-01-spike5-06" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTB3" Mass(es): "368.000/220.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 1.0 2.0 3.0 4.0 6.40 8.0 0.0 0.0 9.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "ruou-01-spike5-06" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTA1" Mass(es): "402.000/358.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 6.37 8.0 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "ruou-01-spike5-06" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTA2" Mass(es): "402.000/166.900 Da" Comment: "" Annotation: "" 9.0 6.61 6.58 8000 1.4e4 9000 5.0e4 8000 4.5e4 7000 4.0e4 1.3e4 1.2e4 1.1e4 1.0e4 8000.0 7000.0 6000.0 5000.0 6000 5000 4000 3000 4000.0 2000.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 Time, 7.0 8.0 9.0 0.0 2.5e4 2.0e4 5000 4000 3000 2000 1.0e4 1000 1000.0 6000 3.0e4 1.5e4 2000 3000.0 7000 3.5e4 Intensity, cps 9000.0 Intensity, cps Intensity, cps Intensity, cps 9.0 2500 2.0e4 6000.0 0.0 0.0 8.0 3000 Intensity, cps 4.5e4 Intensity, cps Intensity, cps Intensity, cps 1.0e4 3500 5.0e4 8000.00 1.4e4 1.2e4 9.0 6.60 5.5e4 9000.00 1.6e4 8.0 4000 6.0e4 1.00e4 3000 2500 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "ruou-01-spike5-05" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTA1" Mass(es): "402.000/358.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 1.10e4 2.0e4 3500 3000.0 0.0 0.0 9.0 4000 4000.0 1000.0 0.0 4500 5000.0 2000.0 500 1000.0 0.0 0.0 6.58 1.5e4 1.4e4 1.3e4 0.0 0.0 Sample Name: "ruou-01-spike5-04" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTA2" Mass(es): "402.000/166.900 Da" Comment: "" Annotation: "" 1000 5000.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 Time, 7.0 8.0 9.0 0.0 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 Time, 7.0 8.0 9.0 0.0 Hình P5.6: Sắc đồ mẫu rượu thêm chuẩn mức ppb 72 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 Time, 7.0 Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Hà Bình Sample Name: "ruou-01-spike 5" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTB1" Mass(es): "368.000/324.000 Da" Comment: "" Annotation: "" Sample Name: "ruou-01-spike 5" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTB3" Mass(es): "368.000/220.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 6.41 2.0e4 Sample Name: "ruou-01-spike 5" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTA1" Mass(es): "402.000/358.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 6.38 4000 2.2e4 1.4e4 8000.0 6000.0 2000 1500 9000.0 8000.0 7000.0 6000.0 5000.0 4000.0 1000 5000 4000 3000 2000 3000.0 4000.0 7.66 2000.0 500 2000.0 1000 1000.0 0.0 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "ruou-01-spike5-02" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTB1" Mass(es): "368.000/324.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 8.0 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "ruou-01-spike5-02" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTB3" Mass(es): "368.000/220.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 9.0 6.37 8.0 0.0 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "ruou-01-spike5-02" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTA1" Mass(es): "402.000/358.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 9.0 6.40 2000 2.2e4 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "ruou-01-spike5-02" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTA2" Mass(es): "402.000/166.900 Da" Comment: "" Annotation: "" 9.0 6.62 1800 2.4e4 8.0 4500 1.4e4 4000 1400 1.8e4 1.2e4 1.0e4 1200 1000 800 600 8000.0 6000.0 7.42 4000.0 2000.0 0.0 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "ruou-01-spike5-03" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTB1" Mass(es): "368.000/324.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 8.0 9.0 2000.0 8.0 5500 4500 4000 3500 3000 2500 4.0 5.0 Time, 6.0 7.0 8.0 1.4e4 1.2e4 1.0e4 1000 4000.0 500 2000.0 0.0 9.0 1.6e4 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 Time, 6.0 7.0 8.0 0.0 0.0 9.0 8.0 9.0 8000.00 7000.00 6000.00 5000.00 4000.00 3000.00 6000.0 1500 2000.0 1.00e4 9000.00 8000.0 2000 4000.0 1.10e4 2.0e4 Intensity, cps Intensity, cps Intensity, cps Intensity, cps 1.0e4 1.20e4 2.2e4 1.8e4 5000 6000.0 6.58 2.4e4 6000 8000.0 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "ruou-01-spike5-03" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTA2" Mass(es): "402.000/166.900 Da" Comment: "" Annotation: "" 9.0 2.6e4 6500 1.2e4 8.0 6.61 7000 9.0 2000 500 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "ruou-01-spike5-03" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTA1" Mass(es): "402.000/358.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 7500 1.4e4 8.0 2500 1000 0.0 0.0 9.0 3000 1500 6.37 1.6e4 3.0 6000.0 200 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "ruou-01-spike5-03" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTB3" Mass(es): "368.000/220.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 1.8e4 2.0 8000.0 4000.0 6.37 1.0 1.0e4 400 0.0 3500 1.2e4 Intensity, cps 1.4e4 Intensity, cps Intensity, cps Intensity, cps 1.6e4 9.0 5000 1.6e4 1600 2.0e4 8.0 6.61 1.8e4 2.6e4 0.0 0.0 1.0e4 Intensity, cps 1.0e4 6000 1.1e4 2500 Intensity, cps Intensity, cps Intensity, cps 1.2e4 7000 1.3e4 1.2e4 3000 1.4e4 6.62 8000 1.5e4 3500 1.8e4 1.6e4 Sample Name: "ruou-01-spike 5" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTA2" Mass(es): "402.000/166.900 Da" Comment: "" Annotation: "" 6.64 2000.00 1000.00 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 Time, 6.0 7.0 8.0 0.00 0.0 9.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 Time, 6.0 7.0 Hình P5.7: Sắc đồ mẫu rượu trắng thêm chuẩn mức ppb Sample Name: "LN-BG-03-spike 5" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTB1" Mass(es): "368.000/324.000 Da" Comment: "" Annotation: "" Sample Name: "LN-BG-03-spike 5" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTB3" Mass(es): "368.000/220.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 7.30 1.3e5 Sample Name: "LN-BG-03-spike 5" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTA1" Mass(es): "402.000/358.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 6.37 1.2e5 Sample Name: "LN-BG-03-spike 5" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTA2" Mass(es): "402.000/166.900 Da" Comment: "" Annotation: "" 7.06 6.61 3.0e4 3000 5000 1.1e5 4500 1.0e5 2.5e4 2500 4000 9.0e4 8.63 6.0e4 5.0e4 4.0e4 2000 1500 1000 2.0e4 Intensity, cps 7.0e4 Intensity, cps Intensity, cps Intensity, cps 8.0e4 1.5e4 1.0e4 2.0e4 500 2000 1000 500 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "LN-BG-03-spike 5-02" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTB1" Mass(es): "368.000/324.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 1.0 2.0 3.0 4.0 8.0 0.0 9.0 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "LN-BG-03-spike 5-02" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTB3" Mass(es): "368.000/220.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 7.29 1.0 2.0 3.0 4.0 8.0 0.0 0.0 9.0 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "LN-BG-03-spike 5-02" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTA1" Mass(es): "402.000/358.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 1.00e5 2.0 3.0 4.0 8.0 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "LN-BG-03-spike 5-02" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTA2" Mass(es): "402.000/166.900 Da" Comment: "" Annotation: "" 9.0 6.58 2500 2000 1500 6.78 3.00e4 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "LN-BG-03-spike 5-03" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTB1" Mass(es): "368.000/324.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 8.0 9.0 7.30 1.0 2.0 3.0 4.0 8.0 0.0 0.0 9.0 1.6e5 1.0e4 6.37 8.0e4 6.0e4 6000.0 5000.0 4000.0 2.0 3.0 4.0 5.0 Time, 6.0 7.0 8.0 9.0 0.0 0.0 8.0 9.0 2000 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "LN-BG-03-spike 5-03" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTA2" Mass(es): "402.000/166.900 Da" Comment: "" Annotation: "" 9.0 6.59 7.5e4 5500 7.0e4 5000 4500 4000 5.0e4 4.5e4 4.0e4 3.5e4 3.0e4 8.59 2.5e4 1.5e4 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 Time, 7.0 7.24 9.0 0.0 0.0 2500 2000 500 5000.0 8.0 3000 1000 1.0e4 6.81 3500 1500 2.0e4 1000.0 1.0 4.0 5.5e4 7000.0 2000.0 2.0e4 3.0 6.0e4 8000.0 3000.0 4.0e4 2.0 Intensity, cps 1.0e5 2500 6.61 Intensity, cps Intensity, cps Intensity, cps 1.2e5 1.0 6.5e4 9000.0 1.4e5 3000 1000 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "LN-BG-03-spike 5-03" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTA1" Mass(es): "402.000/358.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 1.2e4 1.1e4 3500 1500 6.37 1.3e4 1.8e5 1.5e4 4000 500 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "LN-BG-03-spike 5-03" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTB3" Mass(es): "368.000/220.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 2.0e5 2.0e4 5000.0 500 0.0 2.5e4 1.0e4 1000 2.00e4 1.00e4 8.0 4500 Intensity, cps 4.00e4 Intensity, cps Intensity, cps Intensity, cps 5.00e4 9.0 5000 3.0e4 3000 6.00e4 8.0 5500 8.59 3500 7.00e4 9.0 6000 3.5e4 9.00e4 8.00e4 8.0 6.60 6500 4.0e4 4000 1.10e5 1.0 6.34 4500 6.37 1.20e5 0.0 0.0 2500 1500 5000.0 1.0e4 0.00 0.0 3000 6.37 3.0e4 0.0 0.0 3500 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 Time, 7.0 8.0 9.0 0.0 1.0 Hình P5.8: Sắc đồ mẫu LN-BG-03 thêm chuẩn mức 5ppb 73 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 Time, 7.0 Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Hà Bình Sample Name: "LN-BG-03-spike 5-04" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTB1" Mass(es): "368.000/324.000 Da" Comment: "" Annotation: "" Sample Name: "LN-BG-03-spike 5-04" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTB3" Mass(es): "368.000/220.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 6.37 Sample Name: "LN-BG-03-spike 5-04" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTA1" Mass(es): "402.000/358.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 6.36 3000 7.29 2600 7.0e4 2400 6.0e4 3.0e4 2.0e4 1.8e4 1800 1600 6.78 1400 1200 1.4e4 1.2e4 1.0e4 8000.0 800 0.0 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "LN-BG-03-spike 5-05" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTB1" Mass(es): "368.000/324.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 8.0 400 4000.0 200 2000.0 0.0 9.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "LN-BG-03-spike 5-05" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTB3" Mass(es): "368.000/220.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 7.30 9.0e4 8000 8.0e4 7000 7.0e4 6000 8.0 9.0 6.37 8.0 0.00 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "LN-BG-03-spike 5-05" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTA2" Mass(es): "402.000/166.900 Da" Comment: "" Annotation: "" 9.0 6.61 0.0 0.0 4000 3000 8.0 9.0 8.0 9.0 8.0 9.0 8.0 9.0 6000 4.0e4 8.65 3.5e4 3.0e4 2.5e4 5000 4000 3000 2000 1.5e4 1.0e4 6.76 1000 5000.0 1.0 2.0 3.0 4.0 8.0 0.0 9.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "LN-BG-03-spike 5-06" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTB3" Mass(es): "368.000/220.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 7.30 8.0 0.0 0.0 9.0 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "LN-BG-03-spike 5-06" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTA1" Mass(es): "402.000/358.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 7000 1.3e5 6500 1.2e5 6000 1.1e5 5500 4.5e4 1.0e5 5000 4.0e4 7.0e4 6.0e4 5.0e4 4.0e4 6.34 3.0 4.0 5.0 6.0 Time, 7.0 4500 4000 3500 3000 1.6e4 1.4e4 3.0e4 8.61 2.5e4 2500 2.0e4 2000 1.5e4 0.0 9.0 6.58 1.8e4 3.5e4 1.2e4 1.0e4 8000.0 6000.0 4000.0 1.0e4 2000.0 5000.0 500 8.0 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "LN-BG-03-spike 5-06" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTA2" Mass(es): "402.000/166.900 Da" Comment: "" Annotation: "" 9.0 5.0e4 1000 6.98 8.0 5.5e4 1500 2.0e4 2.0 4.0 Intensity, cps 8.0e4 1.0 3.0 6.0e4 Intensity, cps 9.0e4 1.0e4 2.0 6.61 7500 1.4e5 3.0e4 1.0 6.37 1.5e5 Intensity, cps Intensity, cps 9.0 7000 4.5e4 2.0e4 1000 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "LN-BG-03-spike 5-06" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTB1" Mass(es): "368.000/324.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 0.0 0.0 8.0 8000 5.5e4 5000 2000 1.0e4 9.0 6.0e4 6.38 2.0e4 8.0 6.60 9000 7.0e4 Intensity, cps 3.0e4 4000.00 1000.00 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "LN-BG-03-spike 5-05" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTA1" Mass(es): "402.000/358.000 Da" Comment: "" Annotation: "" Intensity, cps Intensity, cps Intensity, cps 4.0e4 5000.00 2000.00 0.0 0.0 5.0e4 5.0e4 6000.00 3000.00 6.5e4 6.0e4 7000.00 6000.0 600 1.0e4 8000.00 1.6e4 1000 2.0e4 9000.00 Intensity, cps 4.0e4 1.00e4 2.2e4 2000 6.61 1.10e4 2.4e4 2200 Intensity, cps Intensity, cps Intensity, cps 5.0e4 8.63 2.6e4 2800 8.0e4 Sample Name: "LN-BG-03-spike 5-04" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTA2" Mass(es): "402.000/166.900 Da" Comment: "" Annotation: "" 6.61 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 Time, 7.0 8.0 0.0 0.0 9.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 Time, 7.0 8.0 0.0 0.0 9.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 Time, 7.0 Hình P5.9: Sắc đồ mẫu lạc LN-BG-03 thêm chuẩn mức ppb Sample Name: "ngo-TH-03-spike 01" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTB1" Mass(es): "368.000/324.000 Da" Comment: "" Annotation: "" Sample Name: "ngo-TH-03-spike 01" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTB3" Mass(es): "368.000/220.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 6.39 Sample Name: "ngo-TH-03-spike 01" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTA2" Mass(es): "402.000/166.900 Da" Comment: "" Annotation: "" 6.61 2.2e4 2.4e4 2.0e4 2.2e4 1.8e4 2.0e4 1.6e4 1.4e4 1.2e4 1.0e4 8000.0 6000.0 7.58 4000.0 2000.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "ngo-TH-03-spike 02" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTB1" Mass(es): "368.000/324.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 8.0 1.4e4 1.2e4 1.0e4 8000.0 6000 5.0e4 5500 4.5e4 5000 4.0e4 4500 3.5e4 3.0e4 2.5e4 2.0e4 6000.0 1.5e4 4000.0 1.0e4 2000.0 5000.0 0.0 0.0 9.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "ngo-TH-03-spike 02" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTB3" Mass(es): "368.000/220.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 6.37 8.0 0.0 0.0 9.0 6500 5.5e4 Intensity, cps 1.6e4 Intensity, cps Intensity, cps Intensity, cps 1.8e4 3.0 4.0 8.0 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "ngo-TH-03-spike 02" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTA2" Mass(es): "402.000/166.900 Da" Comment: "" Annotation: "" 9.0 6.61 6.58 6000 4.0e4 5500 3.00e4 3.5e4 1.6e4 3.0e4 1.4e4 1.2e4 1.0e4 8000.0 4000.0 1.00e4 2000.0 0.00 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "ngo-TH-03-spike 03" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTB1" Mass(es): "368.000/324.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 8.0 0.0 0.0 9.0 1.5e4 2.0 3.0 4.0 8.0 9.0 6000 1.8e4 4500 1.6e4 1.4e4 1.2e4 1.0e4 4000 3500 3000 2500 8000.0 2000 6000.0 1500 4000.0 1000 6.98 2000.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 Time, 6.0 7.0 9.0 0.0 3.0 4.0 8.0 2500 2000 6.62 6.61 1.10e4 2.0e4 1.00e4 1.8e4 9000.00 1.6e4 8000.00 1.4e4 7000.00 1.2e4 1.0e4 8000.0 3.0 4.0 5.0 Time, 6.0 7.0 8.0 0.0 0.0 9.0 5000.00 4000.00 2000.00 2000.0 2.0 6000.00 3000.00 4000.0 1.0 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "ngo-TH-03-spike 03" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTA2" Mass(es): "402.000/166.900 Da" Comment: "" Annotation: "" 9.0 6000.0 500 8.0 2.0 Intensity, cps 5000 Intensity, cps 2.0e4 Intensity, cps Intensity, cps 5500 1.0 2.2e4 6500 2.2e4 3000 500 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "ngo-TH-03-spike 03" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTA1" Mass(es): "402.000/358.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 7000 2.4e4 3500 1000 1.0 0.0 0.0 6.39 2.6e4 4000 1500 5000.0 6.40 0.0 0.0 2.0e4 1.0e4 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "ngo-TH-03-spike 03" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTB3" Mass(es): "368.000/220.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 2.8e4 4500 2.5e4 6000.0 2.00e4 5000 Intensity, cps 4.00e4 1.8e4 Intensity, cps Intensity, cps Intensity, cps 5.00e4 2500 500 2.0 6.37 6.00e4 3000 1000 1.0 2.0e4 7.00e4 3500 1500 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "ngo-TH-03-spike 02" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTA1" Mass(es): "402.000/358.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 9.00e4 8.00e4 4000 2000 2.2e4 1.00e5 6.58 7000 6.0e4 2.6e4 0.0 0.0 Sample Name: "ngo-TH-03-spike 01" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTA1" Mass(es): "402.000/358.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 6.37 2.4e4 2.8e4 1000.00 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 Time, 6.0 7.0 8.0 9.0 0.00 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 Time, Hình P5.10: Sắc đồ mẫu ngo-TH-03 thêm chuẩn mức ppb 74 6.0 7.0 Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Hà Bình Sample Name: "ngo-TH-03-spike 04" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTB1" Mass(es): "368.000/324.000 Da" Comment: "" Annotation: "" Sample Name: "ngo-TH-03-spike 04" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTB3" Mass(es): "368.000/220.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 6.33 Sample Name: "ngo-TH-03-spike 04" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTA1" Mass(es): "402.000/358.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 6.33 6.5e4 6500 6.0e4 6000 5.5e4 5500 5.0e4 5000 4.5e4 4500 3.0e4 2.5e4 4000 3500 3000 2500 2000 1.4e4 1800 1.0e4 8000.0 2000 1.5e4 1500 4000.0 1.0e4 1000 5000.0 0.0 0.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "ngo-TH-03-spike 05" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTB1" Mass(es): "368.000/324.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 8.0 0.0 9.0 1.0 2.0 3.0 4.0 6.38 2.6e4 0.0 0.0 9.0 3.0e4 1.10e4 2.8e4 1.6e4 1.4e4 1.2e4 1.0e4 8000.0 5000.00 4000.00 4.0 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "ngo-TH-03-spike 06" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTB1" Mass(es): "368.000/324.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 8.0 0.00 0.0 9.0 1.0 2.0 3.0 4.0 6.37 8.0 9.0 1.2e4 1.0e4 1.5e4 2.0 3.0 4.0 5.0 Time, 6.0 7.0 2.0e4 1.8e4 1.6e4 4500 4000 3500 3000 2500 8.0 9.0 400 200 1.0 2.0 3.0 4.0 8.0 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "ngo-TH-03-spike 06" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTA2" Mass(es): "402.000/166.900 Da" Comment: "" Annotation: "" 9.0 6.58 2.2e4 3500 3000 1.4e4 1.2e4 1.0e4 8000.0 2500 2000 1500 1000 6000.0 4000.0 500 2000.0 500 9.0 1000 600 5000 1000 8.0 1200 800 5500 0.0 1400 6000.0 6000 1500 7.18 1600 6.61 2000 1.0e4 1800 8000.0 Intensity, cps 2.0e4 1.0 2000 1.4e4 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "ngo-TH-03-spike 06" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTA1" Mass(es): "402.000/358.000 Da" Comment: "" Annotation: "" Intensity, cps Intensity, cps Intensity, cps 2.5e4 0.0 0.0 2200 1.6e4 6500 9.0 2400 1.8e4 7000 3.0e4 8.0 2600 6.37 3.5e4 9.0 2800 2.0e4 0.0 0.0 8.0 6.58 3000 2000.0 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "ngo-TH-03-spike 06" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTB3" Mass(es): "368.000/220.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 4.0e4 800 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "ngo-TH-03-spike 05" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTA2" Mass(es): "402.000/166.900 Da" Comment: "" Annotation: "" 9.0 4000.0 1000.00 2000.0 8.0 2.4e4 6000.00 2000.00 4000.0 5000.0 4.0 2.2e4 7000.00 3000.00 6000.0 3.0 3.0 Intensity, cps 1.8e4 2.0 2.0 2.6e4 Intensity, cps 8000.00 Intensity, cps Intensity, cps 9000.00 2.0e4 1.0 1.0 6.61 1.20e4 2.2e4 1000 200 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "ngo-TH-03-spike 05" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTA1" Mass(es): "402.000/358.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 1.00e4 2.4e4 0.0 0.0 8.0 6.37 3.0e4 1200 400 5.0 6.0 7.0 Time, Sample Name: "ngo-TH-03-spike 05" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTB3" Mass(es): "368.000/220.000 Da" Comment: "" Annotation: "" 2.8e4 1400 600 2000.0 500 1.0 1600 1.2e4 6000.0 2.0e4 2200 1.6e4 Intensity, cps 3.5e4 6.59 2400 1.8e4 Intensity, cps Intensity, cps Intensity, cps 4.0e4 Sample Name: "ngo-TH-03-spike 04" Sample ID: "" File: "DataSET1.wiff" Peak Name: "OTA2" Mass(es): "402.000/166.900 Da" Comment: "" Annotation: "" 6.58 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 Time, 6.0 7.0 8.0 0.0 0.0 9.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 Time, 6.0 7.0 8.0 9.0 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 Time, Hình P5.12 : Sắc đồ mẫu ngô-TH-03 thêm chuẩn mức ppb Hình P5.13: Sắc đồ tỷ lệ ion ochratoxins 75 6.0 7.0 [...]... máy xác định độc tố Ochratoxin có trong sản phẩm rượu lên men, ngũ cốc và sản phẩm từ các loại ngũ cốc bằng phương pháp sắc ký lỏng khối phổ (LC- MS/MS)  Xây dựng quy trình tách chiết chất phân tích  Thẩm định phương pháp:  Độ đặc hiệu/chọn lọc của phương pháp  Giới hạn phát hiện LOD, giới hạn định lượng LOQ  Khoảng tuyến tính  Độ chính xác của phương pháp (độ đúng và độ chụm)  Áp dụng phương pháp. .. Bình nhau Sắc ký lỏng Ion hóa Bộ phân tích khối Detector/ Lưu giữ số liệu Hình 1.3: Sơ đồ đơn giản của hệ thống sắc ký lỏng Trong HPLC, pha tĩnh chính là chất nhồi cột làm nhiệm vụ tách hỗn hợp chất phân tích, đó là những chất rắn, xốp và kích thước hạt rất nhỏ, từ 3 – 7 µm Tuỳ theo bản chất của pha tĩnh, trong phương pháp sắc ký lỏng thường chia làm 2 loại: sắc ký pha thường (NP-HPLC) và sắc ký pha ngược... là một phương pháp chuẩn bị mẫu để là giàu và làm sạch mẫu phân tích từ dung dịch bằng cách hấp phụ lên cột chiết pha rắn Sau đó chất phân tích được rửa giải bằng một lượng nhỏ dung môi thích hợp 2.3 Phương tiện nghiên cứu 2.3.1 Thiết bị, dụng cụ 2.3.1.1 Thiết bị  Hệ thống sắc ký lỏng khối phổ khối phổ LC-MS/MS của Shimadzu bao gồm: + Máy sắc ký lỏng của Shimadzu Model 20 AD-UFLC + Máy khối phổ • Nước... 96,7% trong sữa nguyên liệu, sữa lỏng và sữa bột thu thập từ các trang trại và các siêu thị ở Beijing 11 Luận văn thạc sĩ Nguyễn Thị Hà Bình Với những ưu điểm trên, chúng tôi đã chọn phương pháp sắc ký lỏng khối phổ để nghiên cứu xác định các loại độc tố ochratoxins có trong sản phẩm rượu và các loại ngũ cốc và các sản phẩm làm từ ngũ cốc 1.3 Giới thiệu về hệ thống LC-MS/MS Cơ sở lí thuyết của phương pháp. .. cứu xác định một số mycotoxin trong thực phẩm và sữa bằng sắc ký lỏng khối phổ Mẫu được chiết bởi acetonitril: nước (80:20), làm sạch mẫu bằng cột ái lực miễn dịch (Aflaochra HPLCTM) được cung cấp bởi Vicam (Tecasa, Madrid, Tây Ban Nha) Phương pháp cho độ thu hồi 80-110% tại mức thêm chuẩn 0,025 và 0,1 ng/g, RSD nhỏ hơn 15% Nhóm tác giả L.C Huang đã nghiên cứu xác định một nhóm các chất aflatoxin M1, ochratoxin. .. trọng quyết định độ nhạy của phương pháp Tuỳ thuộc bản chất lí hoá của chất phân tích mà lựa chọn detector cho phù hợp Một số loại detector dùng trong HPLC như: Detector quang phổ hấp thụ phân tử (UV-VIS), detector huỳnh quang (RF), detector độ dẫn, detector mảng diot (DAD), detector khối phổ (MS) 1.3.2 Khối phổ (Mass Spectrometry) Khối phổ là thiết bị phân tích dựa trên cơ sở xác định khối lượng phân... Thiết bị khối phổ ba tứ cực thường được gọi là máy khối phổ hai lần (LCMS/MS)  Bộ phận phát hiện Sau khi đi ra khỏi thiết bị phân tích khối lượng, các ion được đưa tới phần cuối của thiết bị khối phổ là bộ phận phát hiện ion Bộ phận phát hiện cho phép khối phổ tạo ra một tín hiệu của các ion tương ứng từ các electron thứ cấp đã được khuếch đại hoặc tạo ra một dòng do điện tích di chuyển Có hai loại... ochratoxin A, zearalanone và α-zearalenol trong sữa bằng phương pháp UHPLC-MS/MS Trong nghiên cứu này, độ nhạy và độ nhanh của phương pháp được đặc biệt nghiên cứu trong chế độ UHPLC-ESI-MS/MS Mẫu sữa được làm sạch bằng cột chiết pha rắn Oasis HLB Giới hạn định lượng của các mycotoxins nằm trong khoảng 0,003-0,015 µg/kg Hệ số tương quan cao (R 2 ≥ 0,996) thu được trong khoảng nồng độ mycotoxin 0,01-1,00... máy khối phổ MS/MS 3.1.1.1 Khảo sát ion mẹ và ion con Vì ochratoxin A, B là những chất có khối lượng phân tử không lớn và độ phân cực trung bình Qua tham khảo tài liệu chúng tôi tiến hành khảo sát xác định các ochratoxin bằng kĩ thuật ion hóa phun điện tử ESI với chế độ bắn phá ion âm Để tối ưu hóa điều kiện khối phổ, dùng xilanh bơm hỗn hợp 2 chất chuẩn 50 ng/ml tiêm trực tiếp vào detector khối phổ. .. 3.1.2.2 Khảo sát thành phần pha động Trong phương pháp sắc ký lỏng khối phổ, pha động không chỉ ảnh hưởng tới quá trình tách các chất mà nó còn ảnh hưởng tới quá trình ion hóa và tín hiệu của chất phân tích Với kĩ thuật ion hóa phun điện tử bắn phá ở chế độ ion âm, quá trình ion hóa tăng khi có thêm các chất như acid acetic, acid formic, amoni acetate Trong phương pháp nghiên cứu, pha tĩnh sử dụng là