I HC QUC GIA H NI TRNG I HC KHOA HC T NHIấN - - TRN NG TUN NGHIấN CU XC NH OXALAT TRONG MU THC PHM BNG PHNG PHP IN DI MAO QUN S DNG DETECTOR O DN KHễNG TIP XC Chuyờn ngnh: Húa phõn tớch Mó s: 60440118 TểM TT LUN VN THC S KHOA HC H Ni 2015 Cụng trỡnh c hon thnh ti Khoa Húa hc- Trng i hc Khoa hc T nhiờn - i hc Quc gia H Ni Ngi hng dn khoa hc: TS Nguyn Th nh Hng Phn bin 1: TS V Hng Sn Vin Cụng ngh Sinh hc v Cụng ngh Thc phm, H Bỏch khoa H Ni Phn bin 2: TS Phm Th Ngc Mai Trng i hc Khoa hc T nhiờn, HQGHN Lun s c bo v trc hi ng chm lun Thc s hp ti Khoa Húa hc Trng i hc Khoa hc T nhiờn - HQGHN vo hi 10 gi ngy 27 thỏng 10 nm 2015 Cú th tỡn lun ti: Khoa Húa hc i hc Khoa hc T nhiờn HQGHN Trung tõm Thụng tin - Th vin HQGHN M U Hin nay, tỡnh hỡnh an ton v sinh thc phm nc ta ang rt c quan tõm, vi nhiu v ng c th xy hng lot v nhiu khu vc khỏc Cú nhiu nguyờn nhõn dn n mt an ton thc phm, ú cú nguyờn nhõn xut phỏt t vic s dng cỏc cht ph gia thc phm Gn õy, d lun c bit quan tõm n s xut hin ca oxalate mt s sn phm thc phm nh bia, m tụm,gõy nh hng xu ti sc khe ngi s dng Theo cỏc nghiờn cu, oxalate l mt nhng tỏc nhõn chớnh gõy nờn bnh si thn [12, 23] to kt ta vi cỏc ion kim loi nh magie, canxi (kt ta ny chim ti 80% v lng ca si thn) Cựng vi oxalate, axit tng ng ca tartrate, citrate l nhng cht ph gia thc phm thng xut hin ng thi nhiu loi thc phm S xut hin ca citrate ng thi vi oxalate s lm gim nguy c hỡnh thnh si thn citrate cú kh nng c ch quỏ trỡnh kt tinh hỡnh thnh canxi oxlate [13] Vỡ vy, ngoi vic phõn tớch, kim tra hm lng oxalate, quy trỡnh s kt hp phõn tớch, kim tra xỏc nh ng thi hm lng ca tartrate v citrate mu thc phm Cú nhiu phng phỏp khỏc xỏc nh hm lng cỏc cht oxalate, tartrate, citrate nh: sc kớ lng hiu nng cao (HPLC), phng phỏp sc ký ph (GC-MS), sc ký ion [13, 15], Cỏc phng phỏp ny thng ch c trang b cỏc phũng thớ nghim hin i vi chi phớ khỏ ln v yờu cu i ng k thut cao Trong nghiờn cu ny, vi mc tiờu xõy dng mt phng phỏp phõn tớch nhanh, hiu qu, n gin vi chi phớ thp, hng ti nhu cu phõn tớch tuyn a phng, chỳng tụi ó xõy dng, phỏt trin quy trỡnh phõn tớch ng thi cỏc cht oxalate, tartrate, citrate thc phm bng phng phỏp in di mao qun s dng detector dn khụng tip xỳc kt ni kiu t in (CE-C 4D) trờn c s h thit b t ch, bỏn t ng CHNG 1: TNG QUAN Gii thiu v cỏc cht oxalate, tartrate v citrate Vn s dng cỏc cht oxalate, tartrate v citrate Vit Nam v trờn th gii Gii thiu cỏc phng phỏp ó s dng xỏc nh ng thi oxalate, tartrate v citrate CHNG 2: THC NGHIM Nghiờn cu c thc hin trờn thit b in di mao qun s dng detector o dn khụng tip xỳc theo kiu kt ni t in (CE C4D) CHNG 3: KT QU V THO LUN - Kho sỏt iu kin ti u xỏc nh ng thi oxalate, tartrate v citrate - Kho sỏt cht nh hng cú th cú nn mu thc phm c la chn - Cỏc kt qu v ỏnh giỏ phng phỏp: Lp ng chun, lp li, thu hi ca phng phỏp - Kt qu xỏc nh ng thi oxalate, tartrate v citrate mt s mu bia, mu mỡ tụm v mu tr bng phng phỏp in di mao qun s dng detector o dn khụng tip xỳc theo kiu kt ni t in (CE C4D) 3.1 Mu bia lon H Ni v mu bia chai H Ni 20mV Bia lon Hà Nôi Bia chai Hà Nội 100 200 300 400 500 Thời gian di chuyển (giây) 600 700 Hỡnh 3.1 in di phõn tớch 1-oxalate, 2-tartrate, 3-citrate mu bia chai H Ni v mu bia lon H Ni + Mu bia lon Halida v Mu bia chai Si Gũn Special 20mV Bia chai Sai Gòn Special Bia lon Halida 100 200 300 400 500 Thời gian di chuyển (giây) 600 700 Hỡnh 3.2 in di phõn tớch 1-oxalate, 2-tartrate, 3-citrate mu bia lon Halida v mu bia chai Si Gũn Special + Mu bia lon Haliken v Mu bia lon Tiger 50mV Bia lon tiger Bia lon Haliken 100 200 300 400 500 Thời gian di chuyển (giây) 600 700 Hỡnh 3.3 in di phõn tớch 1-oxalate, 2-tartrate, 3-citrate mu bia lon Haliken Cn c vo din tớch pic thu c trờn in di , bng phng phỏp thờm chun mt ln s xỏc nh c nng oxalate, tartrate v citrate cú mu bia lon Haliken Kt qu thu c nh bng 3.1 Bng 3.1 Kt qu xỏc nh hm lng cỏc cht oxalate, citrate mt s mu bia Mu Oxalate (mg/100ml) Citrate (mg/100ml) Bia lon H Ni - 9,40 0,1 Bia lon Halida - 23,0 2,0 Bia lon Tiger - 17,0 1,0 Bia lon Haliken - 12,0 0,7 Bia chai H Ni 2,10 0,1 11,6 0,8 Bia chai Si Gũn 1,57 0,08 10,4 0,6 Trong cỏc mu bia c la chn, khụng cú mu no xut hin tartrate Ch xỏc nh c oxalate mu hai mu bia chai (bia chai H Ni v bia chai Si Gũn) vi hm lng oxalate trung bỡnh hai mu l 1,84 mg/ml Citrate xut hin tt c cỏc mu bia Hm lng citrate cao nht mu bia lon Halida v thp nht mu bia lon H Ni Hm lng citrate trung bỡnh cỏc mu bia c la chn l 13,9 mg/ml 3.2 Phõn tớch mu mỡ gúi Cỏc mu mỡ gúi sau pha loóng c phõn tớch bng thit b CEC4D Tin hnh phõn tớch oxalate, tartrate v citrate bng phng phỏp thờm chun in di phõn tớch mu m tụm Ba Min v mu m tụm Ho Ho cha thờm chun c th hin hỡnh 3.4 20mV Mỳ tôm Ba Miền Mỳ tôm Hảo Hảo 100 200 300 Thời gian di chuyển (giây) 400 500 Hỡnh 3.4 in di phõn tớch 1-oxalate, 2-tartrate, 3-citrate mu m tụm Ho Ho v mu m tụm Ba Min Cn c vo din tớch pic thu c trờn in di , bng phng phỏp thờm chun s xỏc nh c nng oxalate, tartrate v citrate cú mu mỡ gúi Ba Min Kt qu mu m tụm Ho Ho hm lng oxalate xỏc nh c l 22,0 2,0 mg/kg v hm lng citrate l 22,0 2,0 mg/kg Mu m tụm Ba Min hm lng oxalate xỏc nh c l 38,0 2,0mg/kg v hm lng citrate l 86,0 4,0 mg/kg Khụng phỏt hin tatrate cỏc mu m tụm c la chn Phõn tớch mu tr tỳi lc lipton (tr trỏi cõy, v dõu) Mu tr tỳi lc Lipton c xỏc nh lng trung bỡnh ca mt tỳi tr l 1,6gam La chn ngu nhiờn 01 tỳi tr, ngõm phỳt 150 ml nc deion ó un sụi (tng t quy trỡnh nh s dng) sau ú 45 phỳt nhit phũng Lc qua mng lc 0,45àm, pha loóng 20 ln v phõn tớch trờn thit b CE-C 4D Tin hnh phõn tớch oxalate, tartrate v citrate bng phng phỏp thờm chun Tin hnh phõn tớch in di vi cỏc iu kin ti u lp li ln ly kt qu trung bỡnh xỏc nh hm lng cỏc cht oxalate, tartrate v citrate cú mu 3.3 Phõn tớch mu nc tr khụ va hố Mu nc tr khụ va hố c lc qua mng lc 0,45àm sau ú pha loóng 20 ln trc thc hin phõn tớch trờn thit b CE-C 4D Tin hnh phõn tớch oxalate, tartrate v citrate bng phng phỏp thờm chun Kt qu in di ca mu phõn tớch v thờm chun c th hin hỡnh 3.5 3.4 20mV Trà khô vỉa hè Trà túi lọc Lipton 200 400 Thời gian di chuyển (giây) 600 Hỡnh 3.5 in di phõn tớch 1-oxalate, 2-tartrate, 3-citrate mu tr tỳi lc Lipton v mu tr khụ va hố Cn c vo din tớch pic thu c trờn in di , bng phng phỏp thờm chun s xỏc nh c nng oxalate, tartrate v citrate cú mu tr tỳi lc Lipton v mu nc tr khụ va hố Phng phỏp xỏc nh c hm lng oxalate mu tr tỳi lc Lipton l 66,0 3,0 mg/kg, mu nc tr khụ va hố l 8,60 0,5 mg/kg v hm lng citrate mu tr tỳi lc Lipton l 0,94 0,05 mg/kg mu nc tr khụ va hố l 117 9,0 mg/kg Nh vy, s ba cht nghiờn cu, khụng phỏt hin tartrate bt c mu no, nhng phỏt hin citrate hoc ng thi oxalate v citrate mt s mu 3.4 Phõn tớch i chng phng phỏp CE-C4D vi phng phỏp HPLC kim chng kt qu phõn tớch bng phng phỏp CE-C 4D, chỳng tụi ó la chn 02 mu cú thnh phn phc nht l m tụm (nhón hiu Ho Ho v Ba Min) gi sang phõn tớch i chng ch tiờu quan trng l oxalate vi phng phỏp tiờu chun Sc ký lng hiu nng cao (HPLC) ti Vin Kim nghim an ton v sinh thc phm quc gia Cỏc kt qu ny c trỡnh by bng 3.2 Bng 3.2 So sỏnh kt qu phõn tớch i chng hm lng oxalate, citrate v tartrate mu m tụm Hm lng Oxalate (mg/kg) M tụm Ho Ho M tụm Ba Min T kt qu bng 3.2 cho thy, sai s gia hai phng phỏp di 15% iu ny chng t hm lng ca oxalate thu c theo hai phng phỏp khỏ phự hp Nh vy, cú th s dng phng phỏp CE-C 4D xỏc nh hm lng ca oxalate mu m tụm, bia, tr, v m rng nghiờn cu cho cỏc i tng mu khỏc KT LUN Nh vy, quy trỡnh xỏc nh ng thi ba cht oxalate, tartrate v citrate mu thc phm bng phng phỏp in di mao qun s dng detector dn khụng tip xỳc ó c nghiờn cu phỏt trin vi nhng kt qu sau: ó ti u c cỏc iu kin tỏch ng thi ba cht oxalate, tartrate v citrate bng phng phỏp CE - C4D Cỏc iu kin ti u bao gm: detector: CE - C4D; dung dch din ly: m His 50mM MES 30mM (pH = 6,3), CTAB 25àM; Th tỏch: -15kV; S dng mao qun silica trn, tng chiu di 60 cm, chiu di hiu dng 50cm, ng kớnh 75àm; Thi gian bm mu: 30s; Phng phỏp bm mu: thy ng lc hc kiu xiphụng, h = 25cm Th t cỏc cht tỏch c vi mao qun silica l: oxalate, tartrate, citrate ó nghiờn cu nh hng ca mt s cht cú th xut hin cỏc nn mu nghiờn cu, ú chloride, formate cú nh hng ỏng k v xut bin phỏp khc phc ỏnh giỏ c phng phỏp phõn tớch: xõy dng ng chun xỏc nh cht khong nng 2,5 10-4M, tớnh tuyn tớnh (cỏc giỏ tr R2 u ln hn 0,999), lp li (cỏc giỏ tr RSD nh hn 3), ỳng (hiu sut thu hi ca oxalate, tartrate v citratet khong 99% 99,5%), gii hn phỏt hin (LOD) ca oxalate, tartrate l 2,5.10-6M v ca citrate l 5,0.10-6M; gii hn nh lng (LOQ) ca oxalate, tartrate l 8,3.10-6M v ca citrate l 16,7.10-6M Quy trỡnh ó c ỏp dng phõn tớch mt s mu thc phm (bia, mỡ gúi, tr) ó tin hnh phõn tớch i chng ch tiờu oxalate mu mỡ tụm vi phng phỏp tiờu chun HPLC Vin Kim nghim An ton thc phm thc hin cho kt qu ỏng tin cy Phng phỏp ny cho thy u im n gin, nhanh, d s dng, cú th hng ti mc tiờu ỏp dng ti cỏc phũng thớ nghim tuyn a phng nhm gúp phn kim tra mt s ch tiờu an ton thc phm, ỏp ng nhu cu thc t ca Vit Nam 10