Nghiên cứu xác định oxalat trong mẫu thực phẩm bằng phương pháp điện di mao quản sử dụng detector đo độ dẫn không tiếp xúc

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - - TRẦN ĐĂNG TUẤN NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH OXALAT TRONG MẪU THỰC PHẨM BẰNG PHƢƠNG PHÁP ĐIỆN DI MAO QUẢN SỬ DỤNG DETECTOR ĐO ĐỘ DẪN KHÔNG TIẾP XÚC LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội – 2015 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - - TRẦN ĐĂNG TUẤN NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH OXALAT TRONG MẪU THỰC PHẨM BẰNG PHƢƠNG PHÁP ĐIỆN DI MAO QUẢN SỬ DỤNG DETECTOR ĐO ĐỘ DẪN KHÔNG TIẾP XÚC Chuyên ngành: Hóa phân tích Mã số: 60440118 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: TS NGUYỄN THỊ ÁNH HƢỜNG Hà Nội – 2015 MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu chung chất phụ gia thực phẩm 1.1.1 Giới thiệu chung phụ gia thực phẩm 1.1.2 Phân loại phụ gia thực phẩm 1.1.2.1 Phân loại theo nguồn gốc 1.1.2.2 Phân loại theo tác dụng 1.1.3 Lợi ích tác hại phụ gia thực phẩm 1.2 Thông tin chung oxalate, tartrate citrate 1.3 Ứng dụng tác hại oxalate, tartrate citrate 1.3.1 Oxalate 1.3.2 Tartrate 10 1.3.3 Citrate 10 1.4 Vấn đề sử dụng oxalate, tartrate citrate giới Việt Nam Error! Bookmark not defined 1.4.1 Vấn đề sử dụng oxalate, tartrate citrate giới Error! Bookmark not defined 1.4.2 Vấn đề sử dụng oxalate Việt Nam Error! Bookmark not defined 1.5 Các phƣơng pháp xác định oxalate, tartrate citrate Error! Bookmark not defined 1.5.1 Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) .Error! Bookmark not defined 1.5.2 Phương pháp Phương pháp sắc ký khí khối phổ (GC-MS) Error! Bookmark not defined 1.5.3 Phương pháp sắc ký ion Error! Bookmark not defined 1.5.4 Các phương pháp điện di mao quản Error! Bookmark not defined 1.6 Phƣơng pháp điện di mao quản Error! Bookmark not defined 1.6.1 Mao quản Error! Bookmark not defined 1.6.2 Dung dịch đệm pH pha động phương pháp điện di mao quản Error! Bookmark not defined 1.6.3 Nguồn điện cao Error! Bookmark not defined 1.6.4 Kỹ thuật bơm mẫu phương pháp điện di mao quản Error! Bookmark not defined 1.7 Phƣơng pháp điện di mao quản sử dụng detector đo độ dẫn không tiếp xúc Error! Bookmark not defined CHƢƠNG 2: THỰC NGHIỆM Error! Bookmark not defined 2.1 Mục tiêu nội dung nghiên cứu Error! Bookmark not defined 2.1.1 Mục tiêu nghiên cứu Error! Bookmark not defined 2.1.2 Nội dung nghiên cứu Error! Bookmark not defined 2.2 Phƣơng pháp xử lý mẫu Error! Bookmark not defined 2.3 Hóa chất thiết bị Error! Bookmark not defined 2.3.1 Hóa chất Error! Bookmark not defined 2.3.1.1 Chất chuẩn Error! Bookmark not defined 2.3.1.2 Hóa chất dung môi Error! Bookmark not defined 2.3.1.3 Chuẩn bị dung dịch hóa chất Error! Bookmark not defined 2.3.2 Thiết bị dụng cụ Error! Bookmark not defined 2.4 Các thông số đánh giá độ tin cậy phƣơng pháp phân tích Error! Bookmark not defined 2.4.1 Giới hạn phát giới hạn định lượng phương pháp phân tích Error! Bookmark not defined 2.4.2 Độ chụm phương pháp Error! Bookmark not defined 2.4.3 Độ phương pháp Error! Bookmark not defined CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Error! Bookmark not defined 3.1 Nghiên cứu khảo sát tối ƣu điều kiện phân tích .Error! Bookmark not defined 3.1.1 Khảo sát ảnh hưởng hệ đệm Error! Bookmark not defined 3.1.2 Khảo sát ảnh hưởng thời gian bơm mẫu chiều cao bơm mẫu Error! Bookmark not defined 3.1.3 Khảo sát ảnh hưởng tách Error! Bookmark not defined 3.1.4 Khảo sát chất ảnh hưởng Error! Bookmark not defined 3.2 Đánh giá phƣơng pháp phân tích Error! Bookmark not defined 3.2.1 Lập đường chuẩn Error! Bookmark not defined 3.2.2 Giới hạn LOD, LOQ phương pháp Error! Bookmark not defined 3.2.3 Đánh giá độ chụm (độ lặp lại) độ (độ thu hồi) Error! Bookmark not defined 3.3 Phân tích mẫu thực tế Error! Bookmark not defined 3.3.1 Phân tích mẫu bia Error! Bookmark not defined 3.3.2 Phân tích mẫu mì gói Error! Bookmark not defined 3.3.3 Phân tích mẫu trà túi lọc lipton (trà trái cây, vị dâu) Error! Bookmark not defined 3.3.4 Phân tích mẫu nước trà khô vỉa hè Error! Bookmark not defined 3.3.5 Phân tích đối chứng phƣơng pháp CE-C4D với phƣơng pháp HPLC Error! Bookmark not defined DANH MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO 11 MỞ ĐẦU Hiện nay, tình hình an toàn vệ sinh thực phẩm nƣớc ta đƣợc quan tâm, với nhiều vụ ngộ độc tập thể xảy hàng loạt nhiều khu vực khác Có nhiều nguyên nhân dẫn đến an toàn thực phẩm, có nguyên nhân xuất phát từ việc sử dụng chất phụ gia thực phẩm Gần đây, dƣ luận đặc biệt quan tâm đến xuất oxalate số sản phẩm thực phẩm nhƣ bia, mỳ tôm,…gây ảnh hƣởng xấu tới sức khỏe ngƣời sử dụng Theo nghiên cứu, oxalate tác nhân gây nên bệnh sỏi thận [12, 23] tạo kết tủa với ion kim loại nhƣ magie, canxi… (kết tủa chiếm tới 80% khối lƣợng sỏi thận) Cùng với oxalate, axit tƣơng ứng tartrate, citrate chất phụ gia thực phẩm thƣờng xuất đồng thời nhiều loại thực phẩm Sự xuất citrate đồng thời với oxalate làm giảm nguy hình thành sỏi thận citrate có khả ức chế trình kết tinh hình thành canxi oxlate [13] Vì vậy, việc phân tích, kiểm tra hàm lƣợng oxalate, quy trình kết hợp phân tích, kiểm tra xác định đồng thời hàm lƣợng tartrate citrate mẫu thực phẩm Có nhiều phƣơng pháp khác để xác định hàm lƣợng chất oxalate, tartrate, citrate nhƣ: sắc kí lỏng hiệu cao (HPLC), phƣơng pháp sắc ký khối phổ (GC-MS), sắc ký ion [13, 15], Các phƣơng pháp thƣờng đƣợc trang bị phòng thí nghiệm đại với chi phí lớn yêu cầu đội ngũ kỹ thuật cao Trong nghiên cứu này, với mục tiêu xây dựng phƣơng pháp phân tích nhanh, hiệu quả, đơn giản với chi phí thấp, hƣớng tới nhu cầu phân tích tuyến địa phƣơng, xây dựng, phát triển quy trình phân tích đồng thời chất oxalate, tartrate, citrate thực phẩm phƣơng pháp điện di mao quản sử dụng detector độ dẫn không tiếp xúc kết nối kiểu tụ điện (CE-C4D) sở hệ thiết bị tự chế, bán tự động CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu chung chất phụ gia thực phẩm 1.1.1 Giới thiệu chung phụ gia thực phẩm Chất phụ gia thực phẩm chất không đƣợc coi thực phẩm thành phần thực phẩm; Ít giá trị dinh dƣỡng; Bổ sung mục đích công nghệ trình sản xuất, chế biến… [3] Nhƣ vậy, PGTP thực phẩm mà đƣợc thêm vào nhằm đáp ứng yêu cầu định sản phẩm Việc sử dụng PGTP phải tuân theo quy định hành quan chức năng, Việt Nam Bộ Y tế 1.1.2 Phân loại phụ gia thực phẩm Tùy vào sở mà có nhiều cách phân loại phụ gia thực phẩm khác nhƣ: 1.1.2.1 Phân loại theonguồn gốc  Dạng tự nhiên: có nguồn gốc động vật thực vật  Dạng tổng hợp: Do ngƣời tạo 1.1.2.2 Phân loại theo tác dụng  Tác dụng trực tiếp: Bao gồm chất có tác dụng bảo quản (nhƣ chống lại trình oxy hóa, chống tác hại vi sinh vật, côn trùng, ký sinh gây hại…) tác dụng cảm quan (nhƣ tạo màu, tạo mùi, tăng thêm hƣơng vị tăng thêm vị ngọt, vị mặn, làm giảm bớt vị đắng, tạo vị chua…)  Tác dụng gián tiếp: Bao gồm loại axit, kiềm, dung môi chiết xuất, chất làm trong, làm lắng cặn, chất chống đông đặc, chất trao đổi ion, chất men sinh học, chất chống tạo bọt [2] Ngoài nhiều cách phân loại khác nhƣ phân loại theo sức khỏe ngƣời sử dụng, phân loại theo chức năng, phân loại theo nhóm chất… 1.1.3 Lợi ích tác hại phụ gia thực phẩm Nếu sử dụng loại, liều lƣợng, phụ gia thực phẩm có tác dụng tích cực, nhƣ: tạo đƣợc nhiều sản phẩm phù hợp với sở thích vị ngƣời tiêu dùng, giữ đƣợc chất lƣợng toàn vẹn thực phẩm sử dụng, tạo dễ dàng sản xuất, chế biến thực phẩm làm tăng giá trị thƣơng phẩm hấp dẫn thị trƣờng, kéo dài thời gian sử dụng thực phẩm,… Tuy nhiên, sử dụng phụ gia thực phẩm không liều lƣợng, chủng loại phụ gia không cho phép dùng thực phẩm gây tác hại cho sức khỏe nhƣ: Gây ngộ độc cấp tính dùng liều cho phép Gây ngộ độc mạn tính dù dùng liều lƣợng nhỏ, thƣờng xuyên, liên tục, số chất phụ gia thực phẩm tích lũy thể, gây tổn thƣơng lâu dài Nguy gây hình thành khối u, ung thƣ, đột biến gen, quái thai, chất phụ gia tổng hợp Nguy ảnh hƣởng tới chất lƣợng thực phẩm nhƣ phá huỷ chất dinh dƣỡng, vitamin [4] Vì vậy, Khi sử dụng chất PGTP phải tuân thủ quy định sử dụng dựa tiêu chuẩn cụ thể theo ISO (International Standard Organization) Hội đồng tiêu chuẩn thực phẩm CAC (Codex Alimentarius Commision) gồm 130 nƣớc thành viên, có Việt Nam Mỗi quốc gia qui định cụ thể chất PGTP đƣợc dùng cho nƣớc Tóm lại, Việt Nam, chất PGTP phải nằm danh mục cho phép sử dụng đảm bảo yêu cầu kĩ thuật, hàm lƣợng vệ sinh an toàn thực phẩm theo quy định Bộ Y tế ban hành 1.2 Thông tin chung oxalate, tartrate citrate Các chất oxalic, tartric citric số chất phụ gia thực phẩm nằm danh mục đƣợc phép sử dụng Việt Nam với hàm lƣợng định Bảng 1.1 Thông tin chung hợp chất oxalic, tartaric citric Tên chất Danh pháp Axit oxalic Axit tartaric Axit citric Axit etanedioic Axit 2,3- Axit 2- dihidroxibutandioic hydroxypropan- (IUPAC) 1,2,3-tricacboxylic Công thức phân tử C2H2O4 (khan) C4H6O6 C6H8O7 150,087 192,123 C2H2O4.2H2O(ngậm nƣớc) Công thức cấu tạo Khối lƣợng phântử (g/mol) 90,03 (khan) 126,07 g/mol(khan) (ngậm nƣớc) pKa(1;2;…) Độ tan nƣớc 1,23; 4,19 3,04; 4,37 3,15; 4,77; 6,40 0,143 1,33 1,33 (g/ml ở20°C) Nhiệt độ (L D-tartaric) 157 (thăng hoa) 171-174 (L D- 153 tartaric, tinh khiết) nóng chảy (oC) 1.3 Ứng dụng tác hại oxalate, tartrate citrate 1.3.1 Oxalate  Ứng dụng  Là chất hỗ trợ chế biến thực phẩm, phụ gia thực phẩm  Axit oxalic đƣợc sử dụng số sản phẩm hóa chất dùng gia đình, chẳng hạn số chất tẩy rửa hay việc đánh gỉ sét  Dung dịch axit oxalic đƣợc dùng để phục chế đồ gỗ  Axit oxalic chất đƣợc sử dụng trình nhuộm vải, phân bón  Tác hại  Ở liều cao, axit oxalic (muối oxalate) có khả gây ngô ̣ đ ộc cấ p tính, dẫn đến tử vong với hàm lƣợng 4-5g Liề u ng ộ độc (LD50) axit oxalic nguyên chất đƣợc ƣớc kho ảng 378 mg/kg thể trọng (khoảng 22,68 g/ngƣời 60 kg)  Sự kế t hơ ̣p của axit oxalic với canxi ta ̣o canxi oxalate, gây k ết tủa lắ ng đo ̣ng ta ̣o thành sỏi ở các quan tiế t niê ̣u, gan mâ ̣t, tụy… [9] 1.3.2 Tartrate  Ứng dụng  Phụ gia thực phẩm (ký hiệu: E334) với tác dụng chất điều vị, chống oxi hóa  Ứng dụng lĩnh vực dƣợc phẩm  Ứng dụng công nghiệp nông nghiệp  Tác hại  Khi sử dụng mức gây nhiều tác dụng phụ khó chịu nhƣ: nôn mửa, tiểu chảy gia tăng khả viêm đƣờng tiêu hóa 1.3.3 Citrate  Ứng dụng  Phụ gia thực phẩm (ký hiệu: E330): Điều vị, chống oxi hóa  Giảm tác hại nƣớc cứng  Sử dụng công nghệ sinh học, hoạt hóa số dung dịch tẩy rửa, …  Tác hại Axit citric đƣợc hầu hết quốc gia tổ chức quốc tế công nhận an toàn để sử dụng thực phẩm Nó diện tự nhiên gần nhƣ dạng sống, lƣợng axit citric dƣ thừa dễ dàng trao đổi tiết khỏi thể Tuy nhiên, việc tiếp xúc với axit citric khô hay đậm đặc gây kích ứng da mắt, phải sử dụng trang bị bảo hộ lao động tiếp xúc với axit citric Việc sử dụng nhiều axit citric dễ làm tổn 10 DANH MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng việt Nguyễn Thị Ánh Hƣờng (2010), Nghiên cứu xác định dạng asen vô nước ngầm phương pháp điện di mao quản sử dụng detector độ dẫn không tiếp xúc, Luận án Tiến sĩ Hóa học, Trƣờng Đại học Khoa học Tự nhiên - ĐHQGHN Đào Mỹ Thanh (2012), Phụ gia thực phẩm sức khỏe người tiêu dùng, Trung tâm Y tế Dự phòng TP.HCM Tạ Thị Thảo (2010), Bài giảng chuyên đề thống kê hóa phân tích, ĐH Quốc gia Hà Nội Nguyễn Duy Thịnh(2004), Các chất phụ gia sử dụng thực phẩm, giảng cho học viên cao học chuyên ngành công nghiệp thực phẩm, ĐH Bách khoa Hà Nội Viện kiểm nghiệm ATVSTP Quốc Gia (2010), Thẩm định phương pháp phân tích hóa học vi sinh vật, Nhà xuất khoa học kỹ thuật Hà Nội Tiếng Anh Ali A Ensafi, S Abbasi, B Rezaei (2001) ―Kinetic spectrophotometric method for the determination of oxalic acid by its catalytic effect on the oxidation of safranine by dichromate‖, Spectrochimica Acta Part A, (57), 1833 – 1838 B.G Wolthers, W Koolstra, M Hayer, H Elzinga (1987), ―Development of a reference method for determining urinary oxalate by means of isotope dilution—mass spectrometry (ID-MS) and its usefulness in testing existing assays for urinary oxalate‖, Clinica Chimica Acta, 170:227-235 11 Corinne Rivasseau , Anne-Marie Boisson, Ga¨ elle Mong´ elard, Georgy Couram, Olivier Bastien, Richard Bligny (2006) ―Rapid analysis of organic acid in plant extracts by capillary electrophoresis with indirect UV detection Directed metabolic analyses metal during stress‖, Journal of Chromatography A, (112), 283–290 Curhan (1999), ―GC epidemiologische Hinweise für die Rolle des OxalatNierensteine spontan‖, J Endourol 13 (9): 629-31 10 Hoppe B, Kemper MJ, Hvizd MG, Sailer DE, Langman CB (1998), ―Simultaneous determination of oxalate, citrate and sulfate in children's plasma with ion chromatography‖, Kidney Int, 53(5):1348-52 11 Marián Masár et al (2003), Determination of oxalate in beer by zone electrophoresis on a chip with conductivity detection, Journal of seperation science, 26, 647-652 12 Michael Trevaskis, V Craige Trenerry (1996) ―An investigation into the determination of oxalic acid in vegetables by capillary electrophoresis‖, Food Chemisfry, (57), 323-330 13 Muhammad Iqbal Bhanger, M Hassan Khaskhali, F D Khand (1996), ―Simultaneous Determination of Oxalic acid and Citric acid in Urine by Higherformance Liquid Chromatogrphy‖, Journal of chromatography.B, Biomedical applications, 675(1), 147-51 14 M Hassan Khaskhali, M Iqbal Bhanger, F.D Khand (1996) ―Simultaneous determination of oxalic and citric acid in urine by high-performance liquid chromatography‖, Journal of Chromatography B, (675), 147-151 15 Nguyen Thi Anh Huong et al (2014), ―Simple semi-automated portable capillary electrophoresis instrument with contactless conductivity detection for the determination of β-agonists in pharmaceutical and pig-feed samples‖, Journal of Chromatography A, Vol 1360, pp 305-311 12 16 Nguyen Thi Anh Huong, Pavel Kubánˇ, Viet Hung Pham, Peter C Hauser (2007), ‖ Study of the determination of inorganic arsenic species by CE with capacitively coupled contactless conductivity detection‖, Electrophoresis 2007, (28), 3500–3506 17 Petr Kubáňet al (2014), ―Separation of oxalate, formate and glycolate in human body fluid samples by capillary electrophoresis with contactless conductometric detection‖, Journal of Chromatography A, 1325, 241–24 18 Ph Puig, M Arellano, J Andrianary, F Dedieu, F Couderc (1997), ―Method development and validation for the simultaneous determination of organic and inorganic acid by capillary zone electrophoresis‖, Journal of Chromatography A, 765, 321–328 19 Ruben Rellan-Alvarez (2011), ―Development of a new high-performance liquid chromatography-electrospray ionization time-of-flight mass spectrometry method for the determination of low molecular mass organic acid in plant tissue extracts‖, J.Agric Food Chem, 59, 6864-6870 20 United States Department of Agriculture (1984), Informationsdienst Human Nutrition, Landwirtschaftliches Handbuch Nr 8-11 21 Verónica Galli, Coral Barbas∗ (2004), ―Capillary electrophoresis for the analysis of short-chain organic acid in coffee‖, Journal of Chromatography A, 1032: 299–304 22 Xiumei Geng , Sufang Zhang , Qian Wang , Zongbao (Kent) Zhao (2008), ―Determination of organic acid in the presence of inorganic anions by ion chromatography with suppresse d conductivity detection‖, Journal of Chromatography A, 1192 : 187–190 23 Fengwu Wu, Zhike He, Qingyao Luo, Yun'e Zeng (1999), ―HPLC determination of oxalic acid using tris(1,10-phenanthroline) 13 ruthenium (II) chemiluminescence application to the analysis of spinach‖, Food Chemistry, (65),543-546 24 H.Z.Liana, L.Mao, X.L.Ye, J.Miao (1999), ―Simultaneous determination of oxalic, fumaric, maleic and succinic acid in tartaric and malic acid for pharmaceutical use by ion-suppression reversed-phase high performance liquid chromatography‖, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, (19), 621-625 25 J G March, B M Simonet, F Gráses, J A Muñoz, M Valiente (2003), ―Determination of trace amounts of oxalate in renal calculi and related samples by gas chromatography-mass spectrometry‖, Journal of Chromatography A,57(11), 811-817 26 Thanh Duc Mai, Peter C Hauser (2012), ―Simultaneous separations of cations and anions by capillary electrophoresis with contactless conductivity detection employing a sequential injection analysis manifold for flexible manipulation of sample plugs‖, Journal of Chromatography A, 1267, 266– 272 27 Thanh Duc Mai, Peter C Hauser (2011), ―Anion separations with pressureassisted capillary electrophoresis using a sequential injection analysis manifold and contactless conductivity detection‖, Electrophoresis, 32, 3000– 3007 28 Virginia Garcı´a-Can˜as, Miguel Herrero, Carolina Simo, Alejandro Cifuentes (2010), ―Recent advances in the application of capillary electromigration methods for food analysis and Foodomics‖, Electrophoresis, (31), 205–22 14 [...]... Nguyễn Thị Ánh Hƣờng (2010), Nghiên cứu xác định các dạng asen vô cơ trong nước ngầm bằng phương pháp điện di mao quản sử dụng detector độ dẫn không tiếp xúc, Luận án Tiến sĩ Hóa học, Trƣờng Đại học Khoa học Tự nhiên - ĐHQGHN 2 Đào Mỹ Thanh (2012), Phụ gia thực phẩm và sức khỏe người tiêu dùng, Trung tâm Y tế Dự phòng TP.HCM 3 Tạ Thị Thảo (2010), Bài giảng chuyên đề thống kê trong hóa phân tích, ĐH Quốc... Bài giảng chuyên đề thống kê trong hóa phân tích, ĐH Quốc gia Hà Nội 4 Nguyễn Duy Thịnh(2004), Các chất phụ gia sử dụng trong thực phẩm, bài giảng cho học viên cao học chuyên ngành công nghiệp thực phẩm, ĐH Bách khoa Hà Nội 5 Viện kiểm nghiệm ATVSTP Quốc Gia (2010), Thẩm định phương pháp trong phân tích hóa học và vi sinh vật, Nhà xuất bản khoa học kỹ thuật Hà Nội Tiếng Anh 6 Ali A Ensafi, S Abbasi,... by capillary electrophoresis with indirect UV detection Directed metabolic analyses metal during stress‖, Journal of Chromatography A, (112), 283–290 9 Curhan (1999), ―GC epidemiologische Hinweise für die Rolle des OxalatNierensteine spontan‖, J Endourol 13 (9): 629-31 10 Hoppe B, Kemper MJ, Hvizd MG, Sailer DE, Langman CB (1998), ―Simultaneous determination of oxalate, citrate and sulfate in children's... its catalytic effect on the oxidation of safranine by dichromate‖, Spectrochimica Acta Part A, (57), 1833 – 1838 7 B.G Wolthers, W Koolstra, M Hayer, H Elzinga (1987), ―Development of a reference method for determining urinary oxalate by means of isotope dilution—mass spectrometry (ID-MS) and its usefulness in testing existing assays for urinary oxalate‖, Clinica Chimica Acta, 170:227-235 11 8 Corinne... H.Z.Liana, L .Mao, X.L.Ye, J.Miao (1999), ―Simultaneous determination of oxalic, fumaric, maleic and succinic acid in tartaric and malic acid for pharmaceutical use by ion-suppression reversed-phase high performance liquid chromatography‖, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, (19), 621-625 25 J G March, B M Simonet, F Gráses, J A Muñoz, M Valiente (2003), ―Determination of trace amounts of oxalate... detection‖, Electrophoresis 2007, (28), 3500–3506 17 Petr Kubáňet al (2014), ―Separation of oxalate, formate and glycolate in human body fluid samples by capillary electrophoresis with contactless conductometric detection‖, Journal of Chromatography A, 1325, 241–24 18 Ph Puig, M Arellano, J Andrianary, F Dedieu, F Couderc (1997), ―Method development and validation for the simultaneous determination... DE, Langman CB (1998), ―Simultaneous determination of oxalate, citrate and sulfate in children's plasma with ion chromatography‖, Kidney Int, 53(5):1348-52 11 Marián Masár et al (2003), Determination of oxalate in beer by zone electrophoresis on a chip with conductivity detection, Journal of seperation science, 26, 647-652 12 Michael Trevaskis, V Craige Trenerry (1996) ―An investigation into the determination... spectrometry method for the determination of low molecular mass organic acid in plant tissue extracts‖, J.Agric Food Chem, 59, 6864-6870 20 United States Department of Agriculture (1984), Informationsdienst Human Nutrition, Landwirtschaftliches Handbuch Nr 8-11 21 Verónica Galli, Coral Barbas∗ (2004), ―Capillary electrophoresis for the analysis of short-chain organic acid in coffee‖, Journal of Chromatography... Muhammad Iqbal Bhanger, M Hassan Khaskhali, F D Khand (1996), ―Simultaneous Determination of Oxalic acid and Citric acid in Urine by Higherformance Liquid Chromatogrphy‖, Journal of chromatography.B, Biomedical applications, 675(1), 147-51 14 M Hassan Khaskhali, M Iqbal Bhanger, F.D Khand (1996) ―Simultaneous determination of oxalic and citric acid in urine by high-performance liquid chromatography‖, Journal