Nghiên cứu xác định hàm lượng canxi trong huyết thanh phục vụ chuẩn đoán bệnh còi xương ở trẻ em

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM - HÀ CÔNG KHANH NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH HÀM LƢỢNG CANXI TRONG HUYẾT THANH PHỤC VỤ CHẨN ĐOÁN BỆNH CÒI XƢƠNG Ở TRẺ EM Chuyên ngành: Hóa phân tích Mã số: 60.44.01.18 LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: TS Vũ Đức Lợi Thái Nguyên – Năm 2013 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn LỜI CẢM ƠN Lời xin gửi tới TS Vũ Đức Lợi lời biết ơn chân thành sâu sắc Thầy người trực tiếp giao đề tài tận tình hướng dẫn suốt trình thực đề tài giúp hoàn thành luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn thầy cô, anh chị bạn Phòng phân tích Viện Hóa Học –Viện KHCN Việt Nam giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi cho suốt trình thực đề tài Tôi xin chân thành cảm ơn BS,TS Nguyễn Gia Bình, Bệnh viện Quân đội 108, BS Phạm Anh Hoa, Bệnh viện Nhi Trung ương, giúp đỡ nhiệt tình khâu lấy mẫu bảo quản mẫu Tôi xin chân thành cảm ơn đơn vị quan nơi công tác tạo điều kiện để học tập, nghiên cứu hoàn thành luận văn Cuối xin cảm ơn người thân yêu tôi, động viên, cổ vũ để hoàn thành tốt luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn! Thái Nguyên, ngày 20 tháng 05 năm 2013 Học viên Hà Công Khanh Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu riêng tôi, số liệu kết nghiên cứu nêu luận văn trung thực chưa công bố công trình khác Tác giả Hà Công Khanh XÁC NHẬN XÁC NHẬN CỦA KHOA HÓA HỌC CỦA CHỦ TỊCH HĐ CHẤM LUẬN VĂN TS Nguyễn Thị Hiền Lan PGS TS Lê Hữu Thiềng Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn i MỤC LỤC Trang Trang bìa phụ Lời cảm ơn Lời cam đoan Mục lục i Danh mục bảng ii Danh mục hình iii Danh mục kí hiệu, chữ viết tắt iv MỞ ĐẦU Chƣơng TỔNG QUAN 1.1.Khái niệm còi xương[9] 1.1.1 Khái niệm 1.1.2 Triệu chứng bệnh còi xương 1.1.3 Những yếu tố nguy bệnh còi xương[9] 1.1.3.1 Thiếu ánh sáng mặt trời 1.1.3.2 Chế độ ăn uống trẻ 1.1.3.3 Sữa mẹ 10 1.1.3.4 Tình trạng Vitamin D người mẹ 11 1.1.3.5 Tình trạng dinh dưỡng trẻ 12 1.1.3.6 Nhiễm sắc tố da 13 1.1.3.7 Bệnh nhiễm khuẩn 13 1.1.3.8 Yếu tố chủng tộc 14 1.1.3.9 Một số yếu tố khác 14 1.1.4 Tổng hợp kết qủa giới nghiên cứu bệnh còi xương[9] 16 1.2 Nguyên tố Canxi 19 1.2.1 Khái niệm hoá học 19 1.2.2 Nguồn lương thực nhu cầu 20 1.2.3 Hàm lượng canxi thể 21 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn ii 1.2.4 Chu trình Canxi 21 1.2.5 Vai trò Canxi 22 1.2.6 Ảnh hưởng thừa thiếu Canxi 22 1.3 Các phương pháp phân tích Canxi 23 1.3.1 Phương pháp xác định Ca2+ tự 23 1.3.1.1 Phương pháp vi điện cực chọn lọc ion Ca2+ 23 1.3.1.2 Phương pháp phát quang sinh học 24 1.3.1.3 Phương pháp tác nhân tạo phức với trình hấp thụ huỳnh quang phụ thuộc vào Ca2+ 24 1.3.2 Phương pháp xác định tổng Canxi 25 1.3.2.1 Phương pháp phổ electron phổ lượng electron 25 1.3.2.2 Phương pháp phát xạ tia X proton(PIXE) 26 1.3.2.3 Phương pháp dùng hiển vi điện tử ion 26 1.3.1.4.Phương pháp sắc kí lỏng 27 1.3.2.5 Phương pháp phổ hấp thụ nguyên tử 27 1.4 Các phương pháp xử lý mẫu huyết 28 1.4.1 Kỹ thuật vô hoá khô 29 1.4.2 Kỹ thuật vô hoá ướt áp suất khí 30 1.4.3 Vô hoá mẫu lò vi sóng áp suất cao 30 1.4.4 Kỹ thuật pha loãng thay đổi thành phần 31 Chƣơng ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 32 2.1 Đối tượng nội dung nghiên cứu 32 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 32 2.1.2 Nội dung nghiên cứu 34 2.2 Lấy mẫu bảo quản mẫu 35 2.3 Trang thiết bị hoá chất 35 2.3.1 Trang thiết bị 35 2.3.2 Hoá chất dụng cụ 35 2.3.2.1 Hóa chất 35 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn iii 2.3.2.2 Dụng cụ 36 2.4 Phương pháp xử lý số liệu[10] 36 2.5 Phương pháp phổ hấp thụ AAS[5] 38 Chƣơng KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN 43 3.1 Xây dựng quy trình phân tích Canxi 43 3.1.1 Khảo sát điều kiện đo phổ hấp thụ nguyên tử Canxi 43 3.1.1.1 Lựa chọn kỹ thuật nguyên tử hóa 43 3.1.1.2 Khảo sát chọn bước sóng hấp thụ 43 3.1.1.3 Khảo sát khe đo 44 3.1.1.4 Khảo sát cường độ dòng đèn catot rỗng 45 3.1.2.Khảo sát ảnh hưởng yếu tố đến phép đo Canxi 47 3.1.2.1 Khảo sát ảnh hưởng nồng độ Natri 47 3.1.2.2 Khảo sát ảnh hưởng nồng độ Kali 48 3.1.2.3 Khảo sát ảnh hưởng nồng độ Magiê 49 3.1.2.4 Khảo sát ảnh hưởng photpho 51 3.1.2.5 Nghiên cứu loại trừ ảnh hưởng photpho 52 3.1.3 Xây dựng đường chuẩn xác định Canxi huyết 53 3.1.4 Đánh giá phương pháp phân tích 55 3.1.4.1 Giới hạn phát phương pháp 55 3.1.4.2 Độ xác phương pháp 56 3.1.4.3 Độ lặp lại phương pháp 56 3.3 Kết nghiên cứu 57 3.3.1 Kết nghiên cứu mẫu đối chứng 57 3.3.2 Kết nghiên cứu bệnh nhân còi xương 59 Chƣơng KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 61 KẾT LUẬN 61 KIẾN NGHỊ 62 TÀI LIỆU THAM KHẢO 63 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn ii DANH CÁC MỤC BẢNG Bảng 1.1: Sự thay đổi theo mùa địa dư nồng độ 25-OH-D huyết thanh.( ng/ml) Bảng 1.2: Nhu cầu Canxi cho thể 20 Bảng 2.1: Bảng quy hoạch thực nghiệm phân tích phương sai yếu tố 37 Bảng 2.2: Phân tích phương sai yếu tố 37 Bảng 3.1: Kết khảo sát bước sóng đặc trưng Canxi 44 Bảng 3.2: Kết khảo sát khe đo đặc trưng đo Canxi 45 Bảng 3.3: Kết khảo sát cường độ dòng đèn catot rỗng Canxi 46 Bảng 3.4: Các thông số tối ưu đo phổ Canxi 47 Bảng 3.5: Kết khảo sát ảnh hưởng Na đến độ hấp thụ Canxi 47 Bảng 3.6: Kết khảo sát ảnh hưởng K đến độ hấp thụ Canxi 49 Bảng 3.7: Kết khảo sát ảnh hưởng Mg đến độ hấp thụ Canxi 50 Bảng 3.8: Kết khảo sát ảnh hưởng photpho đến độ hấp thụ Canxi 51 Bảng 3.9: Kết khảo sát ảnh hưởng LaCl3 đến độ hấp thụ Canxi 52 Bảng 3.10: Kết đo Canxi để dựng đường chuẩn Canxi 54 Bảng 3.11: Kết phân tích mẫu chuẩn Canxi nồng độ 0,25 mg/l LaCl3 0,1% 55 Bảng 3.12: Kết phân tích mẫu chuẩn Canxi 56 Bảng 3.13: Kết đánh giá độ lặp lại phép đo Canxi 57 Bảng 3.14: Kết qủa phân tích hàm lượng Canxi huyết nhóm đối chứng 58 Bảng 3.15: Kết qủa phân tích hàm lượng Canxi huyết nhóm bệnh còi xương 60 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn iii DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1: Sinh bệnh học còi xương nhuyễn xương thiếu Canxi Hình 1.2: Hậu thiếu Vitamin D người mẹ, theo Elidrissy 12 Hình 1.3: Bệnh sinh bệnh còi xương dinh dưỡng trẻ 15 Hình 2.1: Đường chuẩn phổ hấp thụ AAS 40 Hình 2.2: Sơ đồ cấu tạo nguyên tắc máy đo phổ hấp thụ nguyên tử 42 Hình 3.1 : Đồ thị biểu diễn ảnh hưởng Natri đến độ hấp thụ Canxi 48 Hình 3.2 : Đồ thị biểu diễn ảnh hưởng K đến độ hấp thụ Canxi 49 Hình 3.3: Đồ thị biểu diễn ảnh hưởng Mg đến độ hấp thụ Canxi 50 Hình 3.4: Đồ thị ảnh hưởng LaCl3 đến phép đo Canxi 53 Hình 3.5: Đồ thị biểu diễn đường chuẩn Canxi 54 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn iv DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT 25 - 0H -D3 : 25-hydroxyvitamin D3 1,25 - (0H)2D3 :1,25-dihydroxyl vitamin D3 AAS : Atomic Absorption Spectrometry ICP-MS : Inductively Coupled Plasma – Mass Spectrometry F-AAS : Atomic Absorption Spectrometry HCL : Hollow Cathode Lamp EDL : Electrodeless Discharge Lamp EPMA : Electron probe micro-analyzer EDTA : Ethylendiamin teraaxetic Acid Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn MỞ ĐẦU Bệnh còi xương trẻ em có liên quan mật thiết với rối loạn chuyển hóa Canxi…Bệnh còi xương thường gặp trẻ nhỏ từ - 36 tháng tuổi, thời kỳ mà hệ thống xương phát triển mạnh Nguyên nhân còi xương trẻ thiếu Vitamin D làm cho thể không hấp thu đủ lượng Canxi ruột thiếu Canxi máu Do tượng thiếu Canxi máu thể có tự điều chỉnh cách huy động Canxi từ xương đưa vào máu làm cho xương thiếu Canxi gây nên còi xương, loãng xương Mắc bệnh còi xương trẻ chậm lớn, chậm biết đi, chậm mọc răng, đầu xương bẹp, xương ngực nhô ra, trẻ quấy khóc, thóp lâu kín, rụng tóc sau gáy, ngủ không yên giấc, hay mồ hôi vùng đầu ngủ kể mùa đông Nếu nặng xương chậu biến dạng, hẹp lại, chân vòng kiềng hình chữ X Trẻ em bụ bẫm còi xương nhu cầu Canxi cao trẻ bình thường Nguyên nhân bệnh còi xương chủ yếu thiếu Vitamin D chế độ ăn thiếu Canxi Vitamin D giúp tăng cường hấp thu Canxi Canxi thành phần cấu tạo xương Khi thiếu Canxi xương xốp, mô liên kết biến đổi, trình xảy trẻ em gây nên tình trạng còi xương Trên giới tỷ lệ trẻ em bị mắc bệnh còi xương cao đặc biệt nước nghèo phát triển Ở Việt Nam, tỷ lệ cao đặc biệt trẻ em tỉnh miền núi, hải đảo, vùng khó khăn Một nghiên cứu gần tiến hành 1263 trẻ em từ – 36 tháng tuổi xã thuộc tỉnh miền núi phía Bắc bao gồm Thái Nguyên, Hà Giang, Lạng Sơn, Sơn La, Hòa Bình Lai Châu, với dân tộc đặc thù cho khu vực Sán Dìu, Mông, Tày, Thái, Giấy, Mường, Kinh, nhằm xác định tỷ lệ mắc bệnh còi xương trẻ em Phương pháp nghiên cứu điều tra ngang, chọn ngẫu nhiên Kết quả: Tỷ lệ còi xương trẻ em 1- 36 tháng tuổi Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 53 Từ kết ta vẽ đồ thị minh họa mối quan hệ nồng độ LaCl3 độ hấp thụ Canxi sau: Hình 3.4: Đồ thị ảnh hưởng LaCl3 đến phép đo Canxi Từ kết cho thấy độ nhạy phép đo Ca có mặt LaCl3 ảnh hưởng phôt loại trừ, cụ thể nồng độ LaCl3 nằm khoảng từ 0,1 đến 1,0 % có tác dụng loại trừ ảnh hưởng phôt mà làm tăng độ nhạy phép đo Khi nồng độ tăng cao độ ổn định phép đo không ổn định hàm lượng muối cao Do tiến hành xác định hàm lượng Ca mẫu thực tế, thêm vào lượng LaCl thích hợp để dung dịch phân tích có nồng độ 0,1% LaCl3 3.1.3 Xây dựng đƣờng chuẩn xác định Canxi huyết Các kết nghiên cứu trước cho thấy nồng độ Canxi huyết nằm khoảng 88÷112 mg/l Do mẫu thực tế pha loãng 100 lần nên xây dựng đường chuẩn nguyên tố Canxi có nồng độ từ 0,1 ppm đến 2,0 ppm Dung dịch chuẩn Canxi thêm vào lượng LaCl3 thích hợp để dung dịch phân tích có nồng độ 0,1% LaCl3 Một số công trình có đề cập đến ảnh hưởng độ nhớt đến phép đo phổ hấp thụ nguyên tử canxi, nhiên mẫu pha loãng 100 lần độ nhớt mẫu không ảnh hưởng tới phép đo phổ Canxi[2] Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 54 Pha dung dịch chuẩn có nồng độ Ca : 0; 0,25; 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 ppm Tiến hành đo mẫu thu kết sau: Bảng 3.10: Kết đo Canxi để dựng đường chuẩn Canxi STT Nồng độ Ca (mg/l) Nồng độ LaCl3 (%) Độ hấp thụ (A) 0,1% 0,001 0,25 0,1% 0,019 0,50 0,1% 0,032 1,00 0,1% 0,060 1,50 0,1% 0,089 2,00 0,1% 0,115 Sự phụ thuộc độ hấp thụ vào nồng độ Canxi minh họa hình 3.5 Hình 3.5: Đồ thị biểu diễn đường chuẩn Canxi Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 55 Đường chuẩn Hình 3.5 có hệ số tương quan 0,99880 độ dốc 0,0587 Khoảng tuyến tính đường chuẩn từ 0,1 ppm đến 2,0 ppm Hàm lượng Canxi huyết phân tích dựa đường chuẩn 3.1.4 Đánh giá phƣơng pháp phân tích 3.1.4.1 Giới hạn phát phƣơng pháp Giới hạn phát nồng độ thấp phát được, nồng độ lớn mẫu trắng với độ tin cậy 99% Trong nghiên cứu này, xác định giới hạn phát phương pháp đo lặp lại lần mẫu dung dịch chuẩn Canxi có nồng độ 0,25 mg/l, điều kiện xác định lập đường chuẩn, chấp nhận sai khác lập đường chuẩn mẫu trắng không đáng kể Kết đưa bảng sau: Bảng 3.11: Kết phân tích mẫu chuẩn Canxi nồng độ 0,25 mg/l LaCl3 0,1% STT Hàm lƣợng Ca (ppm) Độ thu hồi (%) 0,241 96,4 0,252 100,8 0,251 100,4 0,245 98,0 0,247 98,8 0,255 102,0 0,244 97,6 TB 0,248 99,1 Từ kết ta có: - Giá trị trung bình: 0,248 - Độ lệch chuẩn (S): 0,0049 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 56 - Bậc tự (n-1): - Giá trị t tra bảng với bậc tự độ tin cậy 99%: 3,143 - Giới hạn phát (GHPH): = S (x) t = 0,0049 x 3,143 = 0,015 mg/l 3.1.4.2 Độ chính xác phƣơng pháp Để đánh giá độ xác phương pháp, tiến hành phân tích mẫu chuẩn sau: Mẫu huyết chuẩn SRM 956a (Electrolytes in Frozen Human Serum) Kết phân tích đưa bảng sau: Bảng 3.12: Kết phân tích mẫu chuẩn Canxi Mẫu chuẩn SRM 956a Nguyên tố phân tích Canxi (Ca) Giá trị chứng Kết phân tích Độ thu hồi 102,8 0,64 mg/l 104,8 0,95 mg/l 101,9% Kết phân tích mẫu chuẩn cho thấy phương pháp có độ thu hồi cao, độ sai lệch phương pháp nhỏ 5%, sử dụng phương pháp quang phổ hấp thụ nguyên tử để phân tích nguyên tố Canxi mẫu sinh học 3.1.4.3 Độ lặp lại phƣơng pháp Độ lặp lại phương pháp phân tích Canxi huyết đánh giá mẫu huyết có hàm lượng Canxi khác Phép phân tích thực 10 lần mẫu để tính giá trị trung bình, độ lệch chuẩn hệ số biến động Kết bảng sau: Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 57 Bảng 3.13: Kết đánh giá độ lặp lại phép đo Canxi Loại mẫu Giá trị TB Độ lệch chuẩn Huyết 105,6 mg/l 3,72 Hệ số biến động (%) 3,52 Kết bảng cho thấy phương pháp phân tích có độ lặp lại tốt, hệ số biến động nhỏ phù hợp với phân tích Canxi huyết 3.3 Kết nghiên cứu 3.3.1 Kết nghiên cứu mẫu đối chứng Để xác định hàm lượng Canxi huyết người bình thường đánh giá khác biệt theo lứa tuổi, giới tính, tiến hành lấy mẫu theo nhóm đối tượng sau: Nhóm 1: Lứa tuổi từ đến 10 tuổi Nhóm 2: Lứa tuổi từ 11 đến 18 Nhóm 3: Lứa tuổi từ 18 đến 40 Nhóm 4: Lứa tuổi từ 41 đến 59 Nhóm 5: Lứa tuổi từ 60 trở lên Các đối tượng trẻ em, thiếu niên, cán công tác, sống làm việc Hà nội Các đối tượng sinh hoạt làm việc bình thường, biểu bệnh trình khám sức khỏe Các đối tượng lấy mẫu máu tĩnh mạch vào buổi sáng, lúc đói để định lượng Canxi huyết Tổng số đối tượng 475 người có 294 nam 181 nữ Lấy mẫu huyết bảo quản tủ lạnh, tiến hành phân tích rã đông tự nhiên, sau mẫu pha loãng với nước cất theo tỷ lệ 1:100 có 0,1% LaCl3 Hàm lượng Canxi huyết xác định Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 58 phương pháp quang phổ hấp thụ nguyên tử với kỹ thuật lửa Kết phân tích đưa bảng 3.14 Bảng 3.14: Kết qủa phân tích hàm lượng Canxi huyết nhóm đối chứng Nhóm Lứa tuổi 1 - 10 11 - 18 18 - 40 41- 59 Trên 60 Tổng Hàm lƣợng Canxi Giới tính Số mẫu Nam 91 104,4 ± 7,93 Nữ 56 98,9 ± 6,26 Nam 58 104,7 ± 7,72 Nữ 35 99,6 ± 5,34 Nam 56 106,2 ± 8,31 Nữ 31 101,6 ± 6,27 Nam 53 108,7 ± 8,38 Nữ 35 102,8 ± 7,31 Nam 36 111,5 ± 7,39 Nữ 24 103,7 ± 6,51 Nam 294 107,1 ± 2,89 Nữ 181 101,3 ± 2,05 (mg/l) X ± SD Kết khảo sát hàm lượng Canxi huyết cho thấy: Giá trị trung bình nam 107,1 mg/l độ lệch chuẩn 2,89 mg/l, nữ 101,3 mg/l độ lệch chuẩn 2,05 Hàm lượng Canxi huyết nam thấp nữ có ý nghĩa thống kê với p < 0,05 có tăng hàm lượng Canxi theo lứa tuổi Kết phân tích hàm lượng Canxi huyết người bình thường cho thấy, hàm lượng Canxi huyết nam 107,1 ± 2,89 cao nữ 101,3 ± 2,05 có ý nghĩa thống kê với p < 0,01 Các kết phù hợp với nghiên cứu M Goldberg[31], tác giả nghiên cứu ảnh hưởng Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 59 tuổi giới tính đến hàm lượng bảy thành phần hóa học huyết bao gồm Ca, Mg, Ure, Uric axit, Cholesterol, phosphat tổng protein 519 người khỏe mạnh, kết tác giả cho thấy có khác hàm lượng Canxi nam nữ, hàm lượng Canxi nam 97 ± mg/l nữ 95 ± mg/l Sự khác hàm lượng canxi huyết nam nữ nhiều tác giả đề cập, kết nghiên cứu tác giả Mark A Goldstein [29] cho thấy có tái hấp thu photphat nữ giai đoạn tuổi từ 35 84 dẫn đến hàm lượng photphat nữ cao sau giai đoạn mãn kinh, hàm lượng photphat nam lại giảm dần từ giai đoạn trưởng thành 84 tuổi Sự tăng hàm lượng photphat huyết dẫn đến hàm lượng Canxi máu giảm Một kết nghiên cứu khác tác giả Arnold J Felsemfeld[15] photpho quy luật Canxi huyết tương chứng tăng tuyến cận giáp cho thấy, hàm lượng photphat huyết tương tỷ lệ nghịch với khả giải phóng Canxi từ xương dẫn đến hàm lượng Canxi máu thấp khả giải phóng canxi từ xương không đáp ứng Trong hàm lượng photphat nữ cao nam dẫn đến hàm lượng Canxi huyết tương nam cao nữ Các kết nghiên cứu khác khả hấp thu Canxi cho thấy phụ nữ sau giai đoạn mãn kinh thiếu hụt nội tiết tố estogen nên chức điều hòa hấp thu Canxi bị suy giảm Sự thiếu hụt estogen giảm hocmon cận giáp trạng làm tăng trình tiết Canxi qua đường nước tiểu làm suy giảm hoạt động men 25- OH, vitamin D1 anpha hydroxylase dẫn tới giảm hấp thu Canxi ruột tượng không xảy nam giới 3.3.2 Kết nghiên cứu bệnh nhân còi xƣơng Để tìm hiểu mối liên hệ hàm lượng Canxi với bệnh còi xương nghiên cứu 102 bệnh nhân số bệnh nhân nam 65 số bệnh Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 60 nhân nữ 37 Độ tuổi bệnh nhân nam nữ nằm khoảng từ đến 10 tuổi Các kết phân tích hàm lượng Canxi huyết đưa bảng sau: Bảng 3.15: Kết qủa phân tích hàm lượng Canxi huyết nhóm bệnh còi xương Độ tuổi Đối tƣợng Số mẫu Nam 65 79,4 ± 3,17 Nữ 37 76,5 ± 4,26 Nhóm Nam 91 104,4 ± 7,93 đối chứng Nữ 56 98,9 ± 6,26 Nhóm bệnh Từ đến 10 Hàm lƣợng Ca Giới tính (mg/l) X ± SD Kết phân tích hàm lượng Canxi bệnh nhân còi xương bảng 3.15 cho thấy, hàm lượng canxi huyết nhóm bệnh bao gồm nam nữ thấp so với nhóm đối chứng có ý nghĩa thống kê với p < 0,05 Hàm lượng Canxi huyết nhóm bệnh nhân nam còi xương 79,4 mg/l thấp so với nhóm đối chứng 104,4 mg/l Trong nhóm bệnh nhân nữ hàm lượng Canxi 76,5 mg/l thấp so với nhóm đối chứng 98,9 mg/l Hàm lượng Canxi nhóm bệnh nhân còi xương thấp so với nhóm đối chứng có ý nghĩa thống kê với p < 0,05 Đây kết có ý nghĩa việc chẩn đoán bệnh còi xương từ có sở bổ sung dinh dưỡng điều trị bệnh cho trẻ Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 61 Chƣơng KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Từ kết đề tài “ Nghiên cứu xác định hàm lượng Canxi huyết phục vụ chẩn đoán bệnh còi xương trẻ em ” thu được, rút kết luận sau: Đã xây dựng quy trình phân tích xác hàm lượng Canxi huyết phương pháp quang phổ hấp thụ nguyên tử, phương pháp có độ nhạy, độ chọn lọc, độ lặp lại, độ xác cao Bước đầu thiết lập mối liên hệ hàm lượng Canxi huyết trẻ em bệnh còi xương Hàm lượng Canxi huyết người bình thường tuổi từ đến 60 tuổi nam 107,1 2,89 mg/l nữ 101,3 2,05 mg/l Hàm lượng Canxi nam cao nữ có ý nghĩa thống kê với p < 0,01 Hàm lượng Canxi huyết trẻ bị bệnh còi xương tuổi từ đến 10 tuổi , nam 79,4 ± 3,17 mg/l cao nữ 76,5 ± 4,26 mg/l có ý nghĩa thống kê với p < 0,01 Hàm lượng Canxi nhóm bệnh nhân còi xương thấp so với nhóm đối chứng có ý nghĩa thống kê với p < 0,05 Đây kết có ý nghĩa việc chẩn đoán bệnh còi xương từ có hướng điều trị bổ sung dinh dưỡng hợp lí cho trẻ Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 62 KIẾN NGHỊ Mặc dù tìm thấy mối liên hệ hàm lượng Canxi huyết bệnh còi xương trẻ em song tượng thiếu hụt Canxi xảy với người bình thường khỏe mạnh không bị bệnh Do nhiều yếu tố khác liên quan số lượng mẫu chưa đủ lớn, chế độ dinh dưỡng bệnh nhân khác nhau, thời gian mắc bệnh không thời điểm, giai đoạn bệnh khác Do cần có nghiên cứu để đánh giá xây dựng số sinh hóa Canxi chẩn đoán bệnh còi xương Hiện tượng hạ Canxi huyết có mối liên quan mật thiết đến số bệnh khác loãng xương, thoái hóa đốt sống, trẻ em viêm phổi, hen phế quản, thần kinh cần có nghiên cứu vấn đề liên quan Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 63 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng việt Vũ Đức Lợi, (2008) Nghiên cứu xác định số dạng thủy ngân mẫu sinh học môi trường Luận án tiến sĩ hóa học, viện hóa học - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Vũ Đức Lợi, Nguyễn Gia Bình (2010) “Nghiên cứu hàm lượng canxi, magie, kẽm bệnh nhân mắc bệnh nhồi máu tim“,Tạp chí Y học Việt Nam, tập 372(2), trang 168-173, 2010 Phạm Luận, (1999), Tài liệu xử lý mẫu, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên Đại học Quốc gia Hà Nội Phạm Luận, (2000), Phương pháp phổ hấp thụ nguyên tử, NXB- Đại Học Quốc Gia Hà Nội Phạm Luận, (2003), Phương pháp phân tích phổ hấp thụ nguyên tử, NXB Đại học Quốc gia Hà Nội Phạm Luận, (2005), Ví dụ điều kiện xác định số kim loại kĩ thuật phân tích phổ hấp thụ nguyên tử, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên - Đại học Quốc gia Hà Nội Phí Thị Phương, (2009), Nghiên cứu xác định hàm lượng Canxi, Magie, Kẽm huyết người có tuổi phục vụ chẩn đoán sớm bệnh nhồi máu tim, Luận văn thạc sỹ khoa học, Trường ĐH Khoa học Tự Nhiên – Đại học Quốc gia Hà Nội Nguyễn Văn Sơn, Đào Ngọc Diễn, Lê Nam Trà, (1997); Nghiên cứu số yếu tố nguy bệnh còi xương dinh dưỡng trẻ tuổi YHTT – Kỷ yếu công trình NCKH Viện BVSKTE Nguyễn Văn Sơn, (2004), Đánh giá điều trị bệnh còi xương dinh dưỡng Vitamin D liều thấp trẻ còi xương Luận án tiến sĩ Y khoa, Đại học Y Hà Nội Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 64 10 Tạ Thị Thảo, (2005) Bài giảng chuyên đề thống kê hóa phân tích NXB Đại Học Quốc Gia Hà Nội 11 Lê Nam Trà(1994), Bệnh còi xương – Bách khoa thư bệnh học - tập Trung tâm quốc gia biên soạn từ điển bách khoa Việt Nam Tài liệu Tiếng anh 12 Aiken C.G, Sherwood R.A, Lenney W “Role of plasma phosphate measurements in deticting rickets of prematurity and in monitoring treatment” Ann – Clin – Biochem 1993, 30, 469 – 475 13 Amin T Haj – Hussein, Gary D.Christian(1986) “Multicomponent flow injection analysis using spectrophotometric detection with reagent spectral overlap: Application to determination of calcium and magnesium in blood serum using Eriochrome Black T” Microchemical Journal, Volume 34, Issue 1, August, Pages 67-75 14 Arnaud C.D “Biochemistry and physiology of paraphyroid hormone” Glorieux F.H, eds Rickets, New York 1991, 47-61 15 Arnold J Felsemfeld (1980) “Age and sexrelated reference ranges for eight plasma constituents derived from randomly selectd adults in Scottish new town” Journal Clinica Pathol Volume 33, Pages 380-385 16 Belton N.R “ Ricket – not only the English disease” Acta Pediatr Scand 1986, Suppl 323, 68-75 17 Bhattacharyya A.K “ Nutritional rickets in the tropics in: Simopoulos A.P, eds Nutritional triggers for health and in diesease” World Rev Nutr Diet Basel, Karger 1992, 67, 140 – 197 18 Bhimma , Pettifor J.M., Coovadia H.M., et al “ Rickets in black children beyond infancy in Natal’’ S – Afr – Med – J 1995, 85(7), 668 – 672 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 65 19 Burns , Paterson C.R “ Single dose vitamin D treatment for osteomalacia in the elderly.” British medical journal 1985, 290, 281 – 282 20 Chan, Mileur L., and Hansen J.W “ Effects of increased calcium and phophorous formulas and Human milk on bone mineralization in preterm infants” Journal of pediatric gastroenterology and nutrition 1986,5, 444 – 449 21 Cooke R.J “ Rickets in a very low birth weight infant.” Journal of pediatric gastroenterology and nutrition 1989, , 397 – 399 22 Elidrissy A.T.H “ Vitamin D – deficiency rickets in Saudi Arabia” In: Glorieux F.H, eds.Ricket New York, 1991, 223 – 231 23 Ghai O.P., and Koul P B “ Ricket in India In: Glorieux F.H, eds Rickets New York” 1991, 247 – 252 24 John Pybus, Fredric J Feldman, and George N.Bowers, Jr “ Measurement of total calcium in serum by atomic absorption spectrophotometry, with Use of a strontium Internal reference” Clinical chemistry, vol 16, no 12, 1970 25 Koo W.W.K., Krugwispe S., Neylan M “ Effect of three levels of vitamin D intake in priterm infants receiving high mineral containing milk.” Gastroenterol Nutr 1995, 21, 182 – 189 26 Lawson D.E.M., Cole T.J., Salem S.I., et al Aetiology of rickets in Egyptian children Human nutrition: Clinical nutrition 1987, 41c, 199 – 208 27 Le Lan Anh Vu Duc Loi Pham Gia Mon and Nguyen Le Phu Nguyen Gia Binh Dang Minh Ngoc Phan Tuy Philip Hartemann (2001) Determination of Lead and Mercury in clinical samples during work and accidental exposure in Vietnam Analytical Sciences; 17: 38a 28 Linda M Thienpont, Jean E Van Nuwenborg, Hans Reinauer, Dietmar Stockl (1996) “Validation of candidate reference methods based on ion chromatography for determination of total sodium, potassium, calcium and magnesium in serum througt comparison with flame atomic emission and Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 66 absorption spectrometry” Clinical Biochemistry, Volume 29, Issue 6, Pages 501-508 29 Mark A Goldstein (2008) “Age, Renal Tubular Phosphate Reabsorption, and Serum Phosphate Levels in Adults” The New England Journal of Medical, Pages 864-866 30 M Angelova, S Asenova, ,V Nedkova, R Koleva-Kolarova (2011) copper in the human organism, Trakia Journal of Sciences, Vol 9, No 1, pp 88-98 31 M Goldberg (1973) “Influence of Demographic Factor on Serum Concentrations of seven chemistry constituets in Healthy Human Subjects” Clincal Chemistry, Volume 19,No Issue 2,Pages 395 - 402 32 Michelle Spelch, Brnard Bousquet and Guy Nicolas (1980) “Concentrations of Magnesium, Calcium, Potassium, and sodium in Human heart Muscle after Acute Myocardial Infarction” Clincal Chemistry 26/12, pages 1662 – 1665 33 Norio Teshima, Shingo Gotoh, Kazunori Ida, Tadao Sakai (2006) “One – shot flow injection spectrophotometric simultaneous determination of copper iron and zinc in patients sera with newly developed multicompartment flow cell” Analytica Chimica Acta, Volume 557, Issues 1-2, 31 Pages 387-392 34 Susumu Matsushita (1985) “Determination of protein – free and protein- bound calcium and magnesium in biological samples by use of ultrafiltration and ion chromatography” Analytica Chimica Acta, Volume 172 Pages 249-255 35 Ugursay Kiziltepe, Zeynep Bastuzel Eyilten, Mustafa Sirlak, Refik Tasoz, Atilla Aral, Neyyir Tuncay Eren, Adnan Uysalel, Hakki Akalin (2003) “Antiarrhythmic effect of magnesium sufate after open heart sugery: effect of blood levels ” International Journal of Cardiology 89, p 153 – 158 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 67 36 Valfredo A.Lemos Geisiane dos S Novaes.Anaildes L.de Carvalho Ednilton M.gama Aldenor G.santos (2009) Determination of copper in biological samples by flame atomic absorption spectrometry after precipitation with Me-BTAP, Environ Monit Assess,148, 245-253 37 Yves Claude Guillaume, Christiane Guinchard and A Berthelot (2000) “Affinity chromatography study of magnesium and calcium binding to human serum albumin: pH and temperature variations” Talanta, Volume 53, Issue 3, Pages 561 – 569 38 Zhou ( 1993) Nutritionnal ricket: Thought about pathogennessis Ann Med, 25(4), 379 – 384 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn ... thận, còi xương ruột, còi xương mật đời Sau này, nhờ thành tựu nghiên cứu chuyển hoá Vitamin D mà nhiểu chế bệnh sinh bệnh còi xương Ở Việt Nam có nhiều công trình nghiên cứu bệnh còi xương tác... với trẻ không suy dinh dưỡng (9,4%) Do phát sớm phòng chống bệnh còi xương trẻ em vấn đề cần xã hội quan tâm Vì lí trên, lựa chọn đề tài luận văn “ Nghiên cứu xác định hàm lượng Canxi huyết phục. .. tuổi trở lên, bắt đầu xuất cân thiếu Canxi (lượng Canxi tiêu hao lớn lượng Canxi thu được) gây tổn hao lượng Canxi xương năm 1%, 50 tuổi trở lên lượng Canxi xương giảm 30%, sau 70 tuổi lượng Canxi