Bước đầu nghiên cứu tổng hợp và thiết lập tạp chuẩn captopril disulfid

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN BÌNH NGUYÊN BƯỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU TỔNG HỢP VÀ THIẾT LẬP TẠP CHUẨN CAPTOPRIL DISULFID LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC HÀ NỘI - 2015 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN BÌNH NGUYÊN BƯỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU TỔNG HỢP VÀ THIẾT LẬP TẠP CHUẨN CAPTOPRIL DISULFID LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH : KIỂM NGHIỆM THUỐC VÀ ĐỘC CHẤT MÃ SỐ : 60720410 Người hướng dẫn khoa học: GS.TS.Nguyễn Hải Nam Nơi thực đề tài: Bộ môn Hóa Dược – Trường Đại Học Dược Hà Nội HÀ NỘI - 2015 LỜI CẢM ƠN Trên thực tế thành công mà không gắn liền với hỗ trợ, giúp đỡ dù hay nhiều, dù trực tiếp hay gián tiếp người khác Trong suốt thời gian từ bắt đầu học tập giảng đường đại học đến nay, em nhận nhiều quan tâm, giúp đỡ quý Thầy Cô, gia đình bạn bè Với lòng biết ơn sâu sắc nhất, em xin gửi đến quý Thầy Cô Bộ môn Hóa Dược với tri thức tâm huyết để truyền đạt vốn kiến thức quý báu cho chúng em suốt thời gian học tập môn Em xin chân thành cảm ơn sâu sắc tới GS TS Nguyễn Hải Nam, ThS Trần Lan Hương tận tâm hướng dẫn em suốt trình học tập hướng dẫn khoa học Nếu lời hướng dẫn, dạy bảo thầy cô em nghĩ luận văn em khó hoàn thiện Một lần nữa, em xin chân thành cám ơn thầy cô Em xin cám ơn tới thầy Lê Xuân Kỳ - Bộ môn Hóa lý, anh chị kỹ thuật viên môn Hóa Phân tích, anh chị Khoa Hóa Pháp – Viện pháp y quốc gia, anh chị đồng nghiệp chuyên ngành kiểm nghiệm lớp cao học 19 giúp đỡ em suốt trình làm hoàn thiện luận văn Bài luận văn thực khoảng thời gian dài Bước đầu vào thực tế tìm hiểu lĩnh vự sáng tạo nghiên cứu khoa học, kiến thức em nhiều hạn chế nhiều bỡ ngỡ Do không tránh khỏi thiếu sót điều chắn, em mong nhận ý kiến đóng góp quý báu thầy cô để kiến thức em lĩnh vực hoàn thiện Sau cùng, em xin kính chúc quý Thầy Cô môn Hóa Dược GS.TS Nguyễn Hải Nam, ThS.Trần Lan Hương thật dồi sức khỏe, niềm tin để tiếp tục thực sứ mệnh cao đẹp truyền đạt kiến thức cho hệ mai sau Trân trọng cám ơn Hà Nội, ngày 19 tháng năm 2015 DANH MỤC BẢNG Trang Bảng 1.1: Các tạp chuẩn thiết lập sở nước Bảng 1.2: Một số chế phẩm có chứa Captopril Bảng 3.1: Sự phụ thuộc điện cực với lượng Iod thêm vào 33 Bảng 3.2: Mối tương quan lượng Iod thêm vào khối lượng cắn thu Bảng 3.3: Tương quan nồng độ thể tích Iod thêm vào với khối lượng cắn Bảng 3.4: Tương quan khối lượng cắn với pH đệm 38 Bảng 3.5: Tương quan khối lượng cân lượng dung môi thêm Vào Bảng 3.6: Thể tích dung môi cần thiết để hòa tan vừa đủ lượng chất tổng hợp Bảng 3.7: Kết đo phổ hồng ngoại 41 Bảng 3.8 : Kết đo phổ khối lượng 45 Bảng 3.9: Kết đo phổ NMR Captopril Disulfid 46 Bảng 3.10: Kết xác định độ tinh khiết đo quét nhiệt vi sai 48 Bảng 3.11: Thông số sắc ký đồ Captopril Disulfid 53 Bảng 3.12: Thời gian lưu, diện tích pic, số đĩa lý thuyết chạy độ ổn định Bảng 3.13: Cách pha dãy dung dịch khảo sát độ tuyến tính 53 Bảng 3.14: Mối tương quan nồng độ diện tích pic 55 Bảng 3.15: Kết độ xác phương pháp 57 Bảng 3.16: Kết khảo sát tính phương pháp 58 Bảng 3.17: Kết định lượng Captopril Disulfid mẫu tổng hợp 61 40 41 42 44 55 DANH MỤC HÌNH Trang Hình 1.1: Phổ hồng ngoại Captopril chuẩn Hình 1.2: Kết sau chạy sắc ký Hình 1.3: Phân tích thông số sắc ký Hình 1.4: Phố khối lượng sản phẩm sau phản ứng với KBrO3 15 Hình 1.5: Cấu trúc cột LC-DB 22 Hình 1.6: Cấu trúc cột có gốc Isopropyl 23 Hình 3.1: Biểu đồ mối tương quan điện cực với lượng Iod thêm vào Hình 3.2: Sắc ký lớp mỏng chạy sản phẩm sau tổng hợp 33 Hình 3.3: Phân tích phổ khối lượng sản phẩm 35 Hình 3.4: Mối tương quan dE/dV với thể tích Iod thêm vào 36 Hình 3.5: Mối tương quan lượng Iod thêm vào khối lượng cắn Hình 3.6: Kết đo phổ khối lượng 39 Hình 3.7: Nhiệt độ nóng chảy điểm chảy 44 Hình 3.8: So sánh phổ hồng ngoại Captopril Disulfid với Captopril Hình 3.9: Sắc ký đồ thể tinh khiết hợp chất 45 Hình 3.10: Sắc ký đồ chạy DSC 47 Hình 3.11: Sắc ký đồ chạy theo dược điển anh 49 Hình 3.12: Sắc ký đồ sau thay đổi thể tích tiêm 49 Hình 3.13: Sắc ký đồ chạy hệ dung môi I 50 Hình 3.14: Sắc ký đồ chạy hệ dung môi II 50 Hình 3.15: Sắc ký đồ chạy hệ dung môi III 50 Hình 3.16: Sắc ký đồ chạy với tốc độ dòng 1,0 ml/min 51 Hình 3.17: Sắc ký đồ chạy với tốc độ dòng 1,2 ml/min 51 Hình 3.18: Sắc ký đồ chạy với bước sóng 52 34 42 47 Hình 3.19: Sắc ký đồ Captopril Disulfid 52 Hình 3.20: Sắc ký đồ dung môi pha mẫu – mẫu trắng 54 Hình 3.21: Sắc ký đồ mẫu chuẩn 54 Hình 3.22: Sắc ký đồ mẫu thử 54 Hình 3.23: Sự phụ thuộc nồng độ diện tích pic 56 Hình 3.24: Tương quan lượng thêm vào lượng tìm lại 59 Hình 3.25: Độ khối lượng làm khô 60 Mục lục ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG I : TỔNG QUAN 1.1 CHẤT CHUẨN VÀ TẠP CHUẨN DÙNG TRONG KIỂM NGHIỆM 1.1.1 Chất chuẩn dùng kiểm nghiệm [11] 1.1.2 Tạp chuẩn dùng kiểm nghiệm [9][10] 1.2 ĐẠI CƯƠNG VỀ CAPTOPRIL 1.1.1 Công thức, tính chất 1.1.2 Tác dụng, định, chống định : 1.3 KIỂM NGHIỆM NGUYÊN LIỆU CAPTOPRIL VÀ CÁC CHẾ PHẨM CHỨA CAPTOPRIL 1.3.1 Định tính 1.3.2 Định lượng 1.3.3 Tạp chất liên quan 1.4 ĐẠI CƯƠNG VỀ CAPTOPRIL DISULFID 1.4.1 Công thức, tính chất 1.4.2 Độc tính [18] [24] [42] [44] [45] 10 1.4.3 Các sản phẩm chuyển hóa Captopril Disulfid 10 1.5 MỘT SỐ PHƯƠNG PHÁP TỔNG HỢP LIÊN KẾT DISULFID 11 1.5.1 Phương pháp [27] 11 1.5.2 Phương pháp [32] 12 1.5.3 Phương pháp [37] 12 1.5.4 Tác nhân oxy hóa Na2 S4 O6 [28] 13 1.5.5 Tác nhân oxy hóa K (Fe(CN)6 ) [30] [38] 14 1.5.6 Tác nhân oxy hóa H O2 [47] 15 1.5.7 Với tác nhân oxy hóa Br2,KBrO3 [25] 15 1.6 CÁC PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC HỢP CHẤT HỮU CƠ [5] 16 1.6.1 Phổ IR 16 1.6.2 Phổ khối – Mass spectrum 17 1.6.3 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 17 1.7 TỔNG QUAN VỀ SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO [1][4][46] 18 1.7.1 Định nghĩa 18 1.7.2 Các thông số trình sắc ký 18 1.7.3 Nguyên tắc cấu tạo hệ thống máy HPLC 20 1.7.4 Cơ sở lý thuyết việc lựa chọn điều kiện sắc ký 21 1.7.5 Phương pháp định lượng HPLC 24 1.8 QUÉT NHIỆT VI SAI 25 1.9 THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH [10] 26 1.9.1 Yêu cầu chung 26 1.9.2 Các tiêu chí thẩm định phương pháp 26 CHƯƠNG II: NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 28 2.1 NGUYÊN LIỆU NGHIÊN CỨU 28 2.1.1 Hóa chất, thuốc thử 28 2.1.2 Thiết bị dụng cụ 28 2.2 NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 28 2.2.1 Phương pháp nghiên cứu 28 2.2.2 Nội dung nghiên cứu 29 2.2.3 Phương pháp xử lý đánh giá kết 32 CHƯƠNG III: THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 33 3.1 NGHIÊN CỨU BÁN TỔNG HỢP CAPTOPRIL DISULFID TỪ CAPTOPRIL Ở QUY MÔ PHÒNG THÍ NGHIỆM 33 3.1.1 Lựa chọn phương pháp khảo sát điều kiện tổng hợp Captopril Disulfid 33 3.1.2 Tinh chế Captopril Disulfid 42 3.1.3 Quy trình bán tổng hợp tinh chế Captopril Disulfid 43 3.2 XÂY DỰNG BỘ DỮ LIỆU NHẬN DẠNG VÀ XÁC ĐỊNH ĐỘ TINH KHIẾT CỦA CAPTOPRIL DISULFID 43 3.2.1 Đặc điểm cảm quan 43 3.2.2 Nhiệt độ nóng chảy - DSC 43 3.2.3 Kết đo phổ 44 3.2.4 Độ tinh khiết hợp chất 47 3.3 NGHIÊN CỨU THIẾT LẬP CHẤT CHUẨN ĐỐI CHIẾU 48 3.3.1 Xây dựng thẩm định phương pháp phân tích 48 3.3.2 Áp dụng phương pháp xây dựng tiến hành định lượng Capotpirl Disulfid mẫu tổng hợp 60 CHƯƠNG IV: BÀN LUẬN 62 CHƯƠNG V: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT……………………………………….66 ĐẶT VẤN ĐỀ Tạp chuẩn kiểm nghiệm dược phẩm chất chuẩn tạp chất liên quan nguyên liệu làm thuốc thuốc thành phẩm Các nguyên nhân dẫn đến xuất tạp chất liên quan: có sẵn nguyên liệu điều chế, tạo trình điều chế, xuất trình bảo quản nguyên liệu làm thuốc thuốc thành phẩm Thông thường giới hạn tạp chất liên quan kiểm soát cách so sánh đáp ứng (ví dụ: diện tích pic kỹ thuật HPLC) tạp chất so với đáp ứng hoạt chất điều kiện Tuy nhiên với tạp chất ảnh hưởng nhiều đến hiệu điều trị, tác dụng không mong muốn thường xuất với tỷ lệ lớn có yêu cầu định lượng hàm lượng tạp chất Việc định lượng bắt buộc phải có tạp chuẩn để so sánh Đối với hội đồng Dược Điển Anh, Mỹ, Nhật Bản tạp chuẩn cần thiết cung cấp phận chuyên trách thuộc hội đồng Dược Điển Trong Captopril Disulfid sản phẩm oxy hóa Captopril Trong chuyên luận dược điển nguyên liệu dạng bào chế Captopril thường có tiêu yêu cầu định lượng tạp chất Captopril Disulfid Lý tạp chất thường xuất với tỷ lệ cao, ảnh hưởng đến độ tinh khiết hóa học thuốc Hiện tại, tạp chuẩn Captopril Disulfid nhiều tạp chuẩn khác phải mua từ nước với giá cao Vì vậy, định thực đề tài: “Bước đầu nghiên cứu tổng hợp thiết lập tạp chuẩn Captopril Disulfid” Mục tiêu đề tài: Nghiên cứu bán tổng hợp Captopril Disulfid từ Captopril quy mô phòng thí nghiệm Thiết lập số tiêu chí tạp chuẩn Captopril Disulfid dùng kiểm nghiệm CHƯƠNG I : TỔNG QUAN CHẤT CHUẨN VÀ TẠP CHUẨN DÙNG TRONG KIỂM NGHIỆM 1.1 1.1.1 Chất chuẩn dùng kiểm nghiệm [11] Hiện nay, theo dược điển Việt Nam IV hầu phương pháp kiểm nghiệm chế phẩm phải sử dụng chất chuẩn để so sánh đối chiếu Gồm có dạng: Dạng nguyên chất - neat : ưu điểm loại có hạn dài, pha loại nồng độ khác Tuy nhiên dạng đòi hỏi trình độ pha chế chuẩn, số chất chuẩn đòi hỏi pha chế điều kiện tiêu chuẩn Aflatoxin, Asen, đồng vị phóng xạ Dạng pha chế sẵn - ready to use : ưu điểm có nồng độ tin cậy, nhiên đặt cần đặc biệt ý dung môi chất chuẩn Các dung môi nên gần với dung môi pha mẫu Thông thường dung môi nước, Methanol, Aceton, Acetonitril, n-Hexan, Dichloromethan, acid HCl, HNO3 Hỗn hợp chuẩn - Mix hỗn hợp chất chuẩn pha loại dung môi có nồng độ biết trước hỗn hợp chuẩn có ưu điểm dùng phân tích đa thành phần với yếu tố ảnh hưởng Người sử dụng quan sát thời gian lưu, cường độ tín hiệu tương đối cấu tử tài liệu kèm chất chuẩn Mẫu chuẩn - Reference certified material : Gần hỗn hợp chuẩn thành phần nồng độ cấu tử mô mẫu có thật tự nhiên ví dụ mẫu nước thải, mẫu bùn thải, mẫu ngô nhiễm nấm, mẫu thép 1.1.2 Tạp chuẩn dùng kiểm nghiệm [9][10] Theo dược điển Việt Nam có 20 chuyên luận dạng bào chế có yêu cầu bắt buộc phải sử dụng tạp chuẩn Trên thực tế sở nước đáp ứng số tạp chuẩn bảng sau: PHỔ HSQC CỦA CAPTOPRIL DISULFID (TIẾP) PHỔ HMBC CỦA CAPTOPRIL DISULFID PHỔ HMBC CỦA CAPTOPRIL DISULFID (TIẾP) PHỔ HMBC CỦA CAPTOPRIL DISULFID (TIẾP) PHỤ LỤC SẮC KÝ ĐỒ CỦA XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG CAPTOPRIL (1) SẮC KÝ ĐỒ CỦA ĐỘ ĐẶC HIỆU (2) SẮC KÝ ĐỒ CỦA KHẢO SÁT KHOẢNG TUYẾN TÍNH SẮC KÝ ĐỒ CỦA ĐỘ ĐẶC HIỆU (1) MẪU TRẮNG (2) MẪU CAPTOPRIL CHUẨN GỐC (3) MẪU THỬ SẮC KÝ ĐỒ KHẢO SÁT KHOẢNG TUYẾN TÍNH (1) NỒNG ĐỘ 50% (2) NỒNG ĐỘ 70% (3) NỒNG ĐỘ 100% (4) NỒNG ĐỘ 130% (5) NỒNG ĐỘ 150% NỒNG ĐỘ 50% NỒNG ĐỘ 70% 10 NỒNG ĐỘ 100% 11 NỒNG ĐỘ 130% 12 NỒNG ĐỘ 150% 13 PHỤ LỤC ĐỘ MẤT KHỐI LƯỢNG DO LÀM KHÔ VÀ ĐỘ TINH KHIẾT ĐỘ TINH KHIẾT ĐỘ MẤT KHỐI LƯỢNG DO LÀM KHÔ [...]... 50 20.01 10 90 25.00 10 90 Dung dịch phù hợp: 0.50 mg/mL of USP Captorpril RS trong hệ dung môi pha loãng Dung dịch chuẩn : 2.0µg/ml của USP Captopril RS, USP Captopril Disulfid RS, tạp USP Captopril B RS, tạp USP Captopril C RS, tạp USP Captopril D RS, tạp USP Captopril E RSvà tạp USP Captopril J RS trong hệ dung môi pha loãng Dung dịch mẫu : 2.0 mg/mL của Captopril trong hệ dung môi pha loãng Điều...Bảng 1.1- Các tạp chuẩn đã được thiết lập bởi các cơ sở trong nước Tên Tạp Chuẩn STT 1 Acid 7-ADCA 2 4-Aminophenol Hoạt chất Các Cephalosporin Paracetamol Nguồn gốc tạp Nguyên liệu tổng hợp Nguyên liệu tổng hợp Sản phẩm phụ trong 3 4-Chloroacetanilid Paracetamol quá trình tổng hợp hoạt chất 2-amino-1-(44 nitrophenyl) propan-1,3- Cloramphenicol Sinh... ở bước sóng 220 nm Tốc độ dòng: 1,0 ml/phút Thể tích tiêm: 20 l Cách tiến hành: Tiêm dung dịch chuẩn Phép thử chỉ có giá trị, khi hệ số phân giải giữa pic Captopril và pic Captopril Disulfid trong sắc ký đồ thu được ít nhất là 2,0 Tiêm riêng biệt dung dịch chuẩn và dung dịch thử Tính hàm lượng Captopril, C9H15NO3S, trong viên dựa vào diện tích (hay chiều cao) pic Captopril thu được của dung dịch chuẩn, ... cung cấp nên giá thành của tạp chuẩn thường cao gấp nhiều lần so với chất chuẩn dược chất Đặc biệt khác với chất chuẩn dược chất, một số tạp chuẩn thường không có sẵn ở nhà máy, mặt khác giá thành chất chuẩn của tạp chất là cao dẫn đến khó khăn triển khai các tiêu chuẩn này trên thực tế, khó tuân thủ các tiêu chuẩn dược điển của nguyên liệu và thành phẩm 1.2 ĐẠI CƯƠNG VỀ CAPTOPRIL 1.1.1 Công thức,... chứa Captopril Biệt dược Lopril Ecazide Captopril STADA®25 DH-CaptoHasan 1.3 Nồng độ/Hàm lượng Captopril 25 mg Captopril 50 mg Captopril 50 mg + Hydroclothiazid 25mg Captopril 25 mg Captopril 25 mg Dạng thuốc Viên nén Hãng sản xuất Bristol-myers Ssquibb Bristrol-myers Ssquibb Stadapharm GmnH Hasan KIỂM NGHIỆM NGUYÊN LIỆU CAPTOPRIL VÀ CÁC CHẾ PHẨM CHỨA CAPTOPRIL 1.3.1 Định tính 1.3.1.1 Nguyên liệu Captopril. .. phản ứng mới nhanh chóng và hoàn toàn, trong khi ở pH=7 thì ảnh hưởng đến độ bền của liên kết amid của Captopril và Captopril Disulfid, mặt khác nếu để giữ độ bền của Captopril và Captopril Disulfid thì cần pH ... nhiều tạp chuẩn khác phải mua từ nước với giá cao Vì vậy, định thực đề tài: Bước đầu nghiên cứu tổng hợp thiết lập tạp chuẩn Captopril Disulfid Mục tiêu đề tài: Nghiên cứu bán tổng hợp Captopril. ..BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN BÌNH NGUYÊN BƯỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU TỔNG HỢP VÀ THIẾT LẬP TẠP CHUẨN CAPTOPRIL DISULFID LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC... tổng hợp Captopril Disulfid từ Captopril quy mô phòng thí nghiệm Thiết lập số tiêu chí tạp chuẩn Captopril Disulfid dùng kiểm nghiệm CHƯƠNG I : TỔNG QUAN CHẤT CHUẨN VÀ TẠP CHUẨN DÙNG TRONG KIỂM