Định lượng đồng thời paracetamol, clopheninamin maleat trong thuốc coldacmin và pacemin bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) và phương pháp quang phổ hấp thụ phân tử (UVVIS)

Phương pháp Vierordt Để xác định nồng độ của các cấu tử trong hỗn hợp, lần đầu tiên Vierordt đã đo độ hấp thụ quang của dung dịch hỗn hợp ở các bước sóng khác nhau, sau đó thiết lập hệ

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN

TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM

NGUYỄN THỊ THÙY THƯƠNG

, CLOPHENINAMIN MALEAT TRONG THUỐC COLDACMIN

HIỆU NĂNG CAO (HPLC) VÀ PHƯƠNG PHÁP QUANG PHỔ

LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC VẬT CHẤT

THÁI NGUYÊN - 2015

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN

TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM

NGUYỄN THỊ THÙY THƯƠNG

, CLOPHENINAMIN MALEAT TRONG THUỐC COLDACMIN

HIỆU NĂNG CAO (HPLC) VÀ PHƯƠNG PHÁP QUANG PHỔ

LỜI CAM ĐOAN

Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi Các số liệu, kết quả nêu trong luận văn là trung thực Những kết luận của luận văn chưa công bố trong bất kỳ công trình nào khác

Thái Nguyên, tháng 4 năm 2015

Tác giả luận văn

Nguyễn Thị Thùy Thương

LỜI CẢM ƠN

Trong quá trình học tập, nghiên cứu và thực hiện luận

- , tác giả đã nhận được nhiều sự quan tâm, động viên, hướng dẫn và giúp đỡ của các thầy giáo, cô giáo, bạn bè và gia đình

Tác giả bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới:

Cuối cùng tác giả xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến gia đình, bạn bè những người đã luôn bên tác giả, động viên và khuyến khích tác giả trong quá trình thực hiện đề tài nghiên cứu của mình

Trong quá trình thực hiện luận văn này,

, mặc dù tác giả

đã hết sức cố gắng nhưng không thể tránh khỏi những thiếu sót Tác giả rất mong nhận được các ý kiến đóng góp, xây dựng chân thành từ các thầy giáo, cô giáo và bạn đọc

Xin chân thành cảm ơn!

Thái Nguyên, tháng 4 năm 2015

Tác giả

Nguyễn Thị Thùy Thương

MỤC LỤC

Trang

LỜI CAM ĐOAN i

LỜI CẢM ƠN ii

MỤC LỤC iii

DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT iv

DANH MỤC CÁC BẢNG v

DANH MỤC CÁC HÌNH vi

MỞ ĐẦU 1

Chương 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2

1.1 Tổng quan về paracetamol và clopheninamin maleat 2

1.1.1 Paracetamol 2

1.1.2 Clopheninamin maleat 7

1.2 Các định luật cơ sở của sự hấp thụ ánh sáng 10

1.2.1 Định luật Bughe - Lămbe - Bia 10

1.2.2 Những nguyên nhân làm cho sự hấp thụ ánh sáng của dung dịch không tuân theo định luật Bughe - Lămbe - Bia 11

1.2.3 Định luật cộng tính 13

1.3 Một số phương pháp xác định đồng thời các cấu tử 14

1.3.1 Phương pháp Vierordt 14

1.3.2 Phương pháp phổ đạo hàm 16

1.3.3 Phương pháp lọc Kalman 18

1.4 Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao 19

1.4.1 Nguyên tắc của phương pháp HPLC 19

1.4.2 Các đại lượng đặc trưng của quá trình sắc kí 22

1.4.3 Sơ đồ máy HPLC 25

1.4.4 Kết quả xác định một số chất theo phương pháp HPLC 26

Chương 2 THỰC NGHIỆM 27

2.1 Nội dung nghiên cứu 27

2.1.1 Phương pháp HPLC 27

2.1.2 Phương pháp quang phổ hấp thụ phân tử 27

2.2 Phương pháp nghiên cứu 28

2.2.1 Phươ 28

2.2.2 Phương 28

2.3 Đánh giá độ tin cậy của quy trình phân tích 28

2.3.1 Giới hạn phát hiện (LOD) 28

2.3.2 Giới hạn định lượng (LOQ) 29

2.3.3 Đánh giá độ tin cậy của phương pháp 29

2.3.4 Đánh giá kết quả phép phân tích theo thống kê 30

2.4 Thiết bị, dụng cụ và hóa chất 31

2.4.1 Thiết bị 31

2.4.2 Dụng cụ 31

2.4.3 Hóa chất 31

u 32

Chương 3 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 34

3.1 Phương pháp HPLC 34

3.1.1 Xác định điều kiện tối ưu cho phép xác định PRC và CPM bằng phương pháp HPLC 34

3.1.2 Đánh giá phương pháp định lượng 37

3.1.3 Xác định PRC và CPM trong thuốc COLDACMIN 41

3.1.4 Xác định PRC và CPM trong thuốc PACEMIN 42

3.1.5 Khảo sát độ đúng của phép xác định PRC, CPM theo phương pháp thêm chuẩn 43

3.2 Phương pháp quang phổ hấp thụ phân tử 453.2.1 Khảo sát phổ hấp thụ phân tử của paracetamol và

clopheninamin maleat 453.2.2 Kiểm tra sự phụ thuộc độ hấp thụ quang của PRC và CPM

vào pH 463.2.3 Kiểm tra sự phụ thuộc độ hấp thụ quang của PRC và CPM theo

thời gian 463.2.4 Khảo sát sự phụ thuộc độ hấp thụ quang của PRC và CPM theo

nhiệt độ 473.2.5 Khảo sát khoảng tuyến tính tuân theo định luật Bughe - Lămbe

- Bia của PRC và CPM Xác định chỉ số LOD và LOQ 483.2.6 Khảo sát và đánh giá độ tin cậy của phương pháp nghiên cứu

trên các mẫu tự pha 523.2.7 Xác định hàm lượng PRC và CPM trong thuốc COLDACMIN

eo phương pháp thêm chuẩn 543.2.8 Xác định hàm lư

ương pháp thêm chuẩn 56

KẾT LUẬN 60 TÀI LIỆU THAM KHẢO 61

DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT

Clopheninamin maleat Chlorpheniramine maleate CPM

Phương pháp sắc ký lỏng hiệu

năng cao

High Performance Liquid

DANH MỤC CÁC BẢNG

Trang

Bảng 3.1 Giá trị các đại lượng đặc trưng 38

Bảng 3.2 Kết quả khảo sát thời gian lưu 38

Bảng 3.3 Kết quả khảo sát diện tích pic 38

Bảng 3.4 Mối tương quan giữa nồng độ và diện tích pic của PRC và CPM 39

Bảng 3.5 Kết quả khảo sát độ lặp lại 41

Bảng 3.6 Kết quả phân tích thuốc COLDACMIN 42

Bảng 3.7 Kết quả phân tích thuốc PACEMIN 43

Bảng 3.8 Kết quả khảo sát độ đúng 44

Bảng 3.9 Độ hấp thụ quang của PRC và CPM 46

Bảng 3.10 S PRC và CPM theo thời gian 47

Bảng 3.11 S 47

Bảng 3.12 ộ 49

Bảng 3.13 50

Bảng 3.14 S độ 51

Bảng 3.15 Kết quả tính LOD và LOQ của CPM 52

3.16 53

3.17 p 53

Bảng 3.18 Kết quả tính nồng độ, sai số PRC và CPM trong mẫu thuốc COLDACMIN 55

Bảng 3.19 Kết quả xác định độ thu hồi của PRC và CPM trong mẫu thuốc COLDACMIN 56

Bảng 3.20 Kết quả tính nồng độ, sai số PRC và CPM trong mẫu thuốc PACEMIN 57

Bảng 3.21 Kết quả xác định độ thu hồi của PRC và CPM trong mẫu thuốc PACEMIN 58

DANH MỤC CÁC HÌNH

1.1 Mô hình hoạt động của bộ lọc Kalman 18

Hình 1.2 Thời gian lưu của cấu tử phân tích 22

Hình 1.3 Hệ thống máy HPLC 25

Hình 3.1 Sắc ký đồ của PRC (325 µg/mL) 35

Hình 3.2 Sắc ký đồ của CPM (10 µg/mL) 35

Hình 3.3 Sắc ký đồ của CPM (1), PRC (2) 37

Hình 3.4 Đồ thị biểu diễn sự phụ thuộc tuyến tính giữa diện tích pic của PRC và nồng độ 40

Hình 3.5 Đồ thị biểu diễn sự phụ thuộc tuyến tính giữa diện tích pic của CPM và nồng độ 40

3.6 Phổ hấp thụ của các dung dịch chuẩn PRC (1), CPM (2) 45

Hình 3.7 Phổ hấp thụ quang của PRC ở các nồng độ 0,2 40,0 g/mL 48

3.8 49

Hình 3.9 Phổ hấp thụ quang của CPM ở các nồng độ 0,2 40 g/mL 50

Hình 3.10 Đường hồi quy tuyến tính biểu diễn sự phụ thuộc của độ hấp thụ quang A vào nồng độ CPM 51

MỞ ĐẦU

Trong những năm gần đây, cùng với sự phát triển mạnh mẽ của khoa học kỹ thuật, nghành công nghệ dược phẩm cũng phát triển một cách nhanh chóng Các nhà sản xuất dược phẩm đã áp dụng nhiều phương thức sản xuất

và chế biến tiên tiến để tổng hợp ra nhiều loại dược phẩm có tính năng vượt trội Các loại thuốc tân dược được bày bán rộng rãi và phổ biến trên thị trường Nhiều loại thuốc hỗn hợp như cảm cúm, sổ mũi, giảm đau, hạ sốt, nhức đầu, ho… với những thành phần khác nhau ngày càng được sản xuất và

sử dụng rộng rãi ở nước ta Việc định lượng các hoạt chất trong các loại thuốc hỗn hợp theo tiêu chuẩn nhà sản xuất là rất quan trọng vì chỉ cần thay đổi một lượng nhỏ thành phần hoạt tính của thuốc cũng có thể ảnh hưởng đến sức khỏe của hàng nghìn, hàng triệu người Do đó việc đánh giá đúng chất lượng sản phẩm một cách nhanh chóng, chính xác, an toàn và hiệu quả thì công tác kiểm nghiệm để xác định các thành phần của thuốc bằng các phương pháp hiện đại có độ chính xác cao ngày càng được quan tâm Nhiều phương pháp

có độ lặp và độ chính xác cao đã được ứng dụng như: phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) và phương pháp quang phổ hấp thụ phân tử (UV-VIS) Sử dụng phương pháp trắc quang dùng phổ toàn phần kết hợp với kỹ thuật tính toán và ứng dụng phần mềm máy tính đã bước đầu được nghiên cứu

và cho nhiều ưu điểm như độ nhạy, độ lặp, độ chính xác, độ tin cậy của phép phân tích, phân tích nhanh, tiện lợi

:

paracetamol, clopheninamin maleat trong thuốc Coldacmin và Pacemin

(HPLC) và phương pháp quang phổ hấp thụ phân tử (UV-VIS)"

Chương 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU

1.1 Tổng quan về paracetamol và clopheninamin maleat

1.1.1 Paracetamol

1.1.1.1 Giới thiệu chung

Paracetamol hay acetaminophen là thuốc có tác dụng hạ sốt và giảm đau, tuy nhiên không như aspirin nó không hoặc ít có tác dụng chống viêm So với các thuốc chống viêm không steroit (nonsteroidal antiinflammatory drugs - NSAIDs), paracetamol có rất ít tác dụng phụ với liều điều trị nên được cung cấp không cần kê đơn ở hầu hết các nước

Tên gọi acetaminophen và paracetamol được lấy từ tên hóa học của hợp chất: para-acetylaminophenol và para-acetylaminophenol [2,4]

- Tên IUPAC : N-(4-hydroxyphenyl) acetamit hoặc p-hydroxy acetanilit hoặc 4-hydroxy acetanilit

- Tên quốc tế: Paracetamol

- Tên khác: Acetaminophen

- Biệt dược: Panadol, Pradon, Efferalgan, Pandol

- Công thức phân tử: C8H9N O2

- Phân tử gam: 151,17g/mol

- Công thức cấu tạo:

- Chế phẩm tan ít trong nước, tan nhiều hơn trong nước sôi, khó tan trong ete, clorofom, etanol và các dung dịch kiềm dung dịch bão hòa trong nước có

pH khoảng 5,3÷5,6; pKa=9,51 [21]

Tính chất hóa học

paracetamol (PRC) d -OH, nhóm chức acetamit và tính chất của nhân thơm quyết định

c của paracetamol là một hệ thống liên kết đôi rộng rãi: cặp eclectron tự do của nguyên tử oxi trong nhóm OH, đám mây của vòng benzen, cặp electron tự do của nguyên tử nitơ chứa nhóm NH, quỹ đạo p trong nhóm CH3 và cặp electron tự do của nguyên tử C trong nhóm CO

Sự có mặt của hai nhóm hoạt tính cũng làm cho vòng benzen phản ứng lại với các chất thay thế có ái lực Khi các nhóm thay thế là đoạn mạch thẳng ortho và para đối với mỗi cái khác, tất cả các vị trí trong vòng đều

ít nhiều được hoạt hóa như nhau Sự liên kết cũng làm giảm đáng kể tính bazơ của oxi và nitơ, khi tạo ra các hydroxy có tính axit

muối sắt (III) cho màu tím

-, thêm nước thì không có kết tủa vì p-aminophenol tạo thành tan trong axit Thêm thuốc thử kali dicromat thì có kết tủa màu tím khác với phenacetin là không chuyển sang đỏ

Quá trình xảy ra chủ yếu là:

HO NHCOCH3 HCl

K2Cr2O7[O]

ượng PRC

Tổng hợp

Paracetamol được tổng hợp từ nguyên liệu đầu là phenol theo cách sau đây:

1 Phenol được nitrat hóa bởi axit sunfuric và natri nitrat (phenol là chất

có hoạt tính cao, sự nitrat hóa của nó chỉ đòi hỏi điều kiện thông thường trong khi hỗn hợp hơi axit axit sunfuric và axit nitric cần có nitrat benzen)

2 Chất đồng phân para được tách từ chất đồng phân ortho bằng thuỷ phân (sẽ có một ít meta, như OH là mạch thẳng ortho và para)

3 Chất 4-nitrophenol được biến đổi thành 4-aminophenol sử dụng một chất khử như natri borohydrit trong dung môi bazơ

4 4- aminophenol phản ứng với axetic anhydrit để cho paracetamol Đem kết tinh lại paracetamol trong hỗn hợp etanol-nước

1.1.1.3 Dược lý cơ chế tác dụng

Paracetamol là thuốc giảm đau - hạ sốt hữu hiệu, là chất chuyển hóa có hoạt tính của phenacetin, có thể thay thế aspirin; tuy vậy, khác với aspirin, paracetamol không có tác dụng chống viêm và thải trừ axit uric, không kích ứng tiêu hóa, không ảnh hưởng đến tiểu cầu và đông máu.Với liều ngang nhau tính theo gam, paracetamol có tác dụng giảm đau và hạ sốt tương tự như aspirin

Paracetamol làm giảm thân nhiệt ở người bệnh sốt, nhưng hiếm khi làm giảm thân nhiệt ở người bình thường Thuốc tác động lên vùng dưới đồi gây hạ nhiệt, tỏa nhiệt tăng do giãn mạch và tăng lưu lượng máu ngoại biên

Paracetamol với liều điều trị, ít tác động đến hệ tim mạch và hô hấp, không làm thay đổi cân bằng axit - bazơ, không gây kích ứng, xước hoặc chảy máu dạ dày như khi dùng salixylat, vì paracetamol không tác dụng trên xyclooxygenat (COX) toàn thân, chỉ tác động đến xyclooxygenat prostaglandin của hệ thần kinh trung ương Paracetamol không có tác dụng trên tiểu cầu hoặc thời gian chảy máu

Khi dùng quá liều paracetamol, một chất chuyển hóa là benzoquinonimin gây độc nặng cho gan Liều bình thường, paracetamol dung nạp tốt, không có nhiều tác dụng phụ như aspirin Tuy vậy, quá liều cấp tính (trên 10g) làm thương tổn gan gây chết người, những vụ ngộ độc và tự tử bằng paracetamol đã tăng lên một cách đáng lo ngại trong những năm gần đây

N-axetyl-Các phản ứng trong chuyển hóa paracetamol

Paracetamol hấp thu nhanh qua ống tiêu hóa, sinh khả dụng là 80-90%, hầu như không gắn vào protein huyết tương Chuyển hóa lớn ở gan và một phần nhỏ ở thận, cho các dẫn xuất glucuro thải trừ qua thận

Cũng như các thuốc chống viêm không chứa steroit khác, paracetamol

có tác dụng hạ sốt và giảm đau, tuy nhiên lại không có tác dụng chống viêm

và thải trừ axit uric, không kích ứng tiêu hóa, không ảnh hưởng đến tiểu cầu

Tuy nhiên, một số nghiên cứu cho biết dùng paracetamol liều cao (trên 2000 mg/ngày) có thể làm tăng nguy cơ biến chứng dạ dày Đôi khi xảy ra ban da và những phản ứng dị ứng khác Thường là ban đỏ hoặc ban mề đay, nặng hơn có thể kèm theo sốt do thuốc và thương tổn niêm mạc Người bệnh mẫn cảm với salixylat hiếm khi mẫn cảm với paracetamol và những thuốc có liên quan

Ở một số ít trường hợp riêng lẻ, paracetamol đã gây giảm bạch cầu trung tính, giảm tiểu cầu và giảm toàn thể huyết cầu

Sử dụng paracetamol trong năm đầu tiên của cuộc sống và sau đó trong thời kỳ thơ ấu có thể tăng nguy cơ bị hen, viêm mũi kết mạc mắt và eczema vào lúc 6 đến 7 tuổi, theo các kết quả của giai đoạn 3 của chương trình nghiên cứu quốc tế về hen và các bệnh dị ứng ở trẻ em

Với liều điều trị hầu như không có tác dụng phụ, không gây tổn thương đường tiêu hóa, không gây mất thăng bằng kiềm toan, không gây rối loạn đông máu Tuy nhiên, khi dùng liều cao (> 4g/ngày) sau thời gian tiềm tàng 24 giờ, xuất hiện hoại tử tế bào gan có thể tiến triển đến chết sau 5-6 ngày

1.1.1.4 Dạng thuốc

- Chế phẩm viên nén: Paracetamol, Panadol, Donodol…500mg

- Chế phẩm viên đạn: Efferalgan, Panadol80 mg, 150 mg, 300mg

- Chế phẩm viên sủi: Efferalgan codein, Donodol, Panadol 500mg

- Chế phẩm gói bột: Pacemin, Efferalgan 80 mg

- Chế phẩm dạng bột tiêm: Pro-Dafalgan 2g proparacetamol tương đương 1g Paracetamol

- Chế phẩm dạng dung dịch uống

- Các chế phẩm kết hợp với các thuốc khác:

Pamin viên nén gồm Paracetamol 400 mg và Clophenamin 2 mg

Decolgen, Typhi dạng viên nén gồm Paracetamol 400 mg, Phenyl Propanolamin 5 mg, Clophenamin 2 mg có tác dụng hạ sốt, giảm đau, giảm xuất tiết đường hô hấp để chữa cảm cúm

Efferalgan-codein, Paracetamol-codein, Codoliprane, Claradol-codein, Algeisedal, Dafagan-codein dạng viên sủi gồm Paracetamol 400-500 mg và Codein sulphat 20-30 mg có tác dụng giảm đau nhanh và mạnh, giảm ho

Di-Antalvic dạng viên nang trụ gồm Paracetamol 400 mg và propoxyphen hydrochloride 30 mg (thuộc nhóm opiat yếu) có tác dụng giảm đau mạnh

Dextro-1.1.2 Clopheninamin maleat

1.1.2.1 Giới thiệu chung

Clopheninamin maleat thường bán trên thị trường là thế hệ đầu tiên alkylamin kháng histamin được sử dụng trong dự phòng các triệu chứng của dị ứng các điều kiện như viêm mũi và nổi mề đay Tác dụng an thần của nó là tương đối yếu

so với các thuốc kháng histamin thế hệ đầu tiên Clopheninamin maleat là một trong những thuốc kháng histamin thường được sử dụng trong thực tế thú y động vật nhỏ Nói chung clopheninamin maleat không được chỉ định như một thuốc chống trầm cảm hoặc lo âu [22]

Clopheninamin maleat (CPM) là một phần của một loạt các thuốc kháng histamin bao gồm pheninamin (Naphcon) và các dẫn xuất halogen hóa của nó và những chất khác bao gồm fluorpheninamin, dexclopheninamin (Polaramin), brompheninamin (Dimetapp), dexbrompheninamin (Drixoral), desclopheninamin, dipheninamin (còn gọi là triprolidin với tên thương mại Actifed ) và iotpheninamin

Clopheninamin maleat là một kháng histamin có rất ít tác dụng an thần Như hầu hết các kháng histamin khác, clopheninamin maleat cũng có tác dụng phụ chống tiết acetylcholin, nhưng tác dụng này khác nhau nhiều giữa các cá thể

Tác dụng kháng histamin của clopheninamin maleat thông qua phong bế cạnh tranh các thụ thể H1 của các tế bào tác động

Clopheninamin maleat có công thức phân tử là: C16H19ClN2.C4H4O4 Tên IUPAC: 3-(4-clorophenyl)- N , N -dimethyl- 3 - (4-clorophenyl) - N, N-dimethyl- 3-pyridin-2-yl-propan-1-amine 3-pyridin-2-YL-propan-1-amin

- Tên quốc tế: Chlorpheniramine

- Loại thuốc: thuộc đôi kháng thụ thể H1 histamin

- Biệt dược: Clopheninamin maleat

- Khối lượng mol: 390,87g/mol

- Công thức cấu tạo:

1.1.2.2 Tính chất

- Clopheninamin maleat là bột tinh thể trắng, không mùi

- Tan trong nước ở pH = 4-5; etanol 96 %, cloroform; ít tan trong ete, benzen

Clopheninamin maleat chuyển hóa nhanh và nhiều Các chất chuyển hóa gồm có desmethyl - didesmethyl - clopheninramin và một số chất chưa được xác định, một hoặc nhiều chất trong số đó có hoạt tính Nồng độ clopheninamin maleat trong huyết thanh không tương quan với tác dụng kháng histamin vì còn một chất chuyển hóa chưa xác định cũng có tác dụng

Thuốc được bài tiết chủ yếu qua nước tiểu dưới dạng không đổi hoặc chuyển hóa, sự bài tiết phụ thuộc vào pH và lưu lượng nước tiểu Chỉ một lượng nhỏ được thấy trong phân Thời gian bán thải là 12 - 15 giờ ở người bệnh suy thận mạn kéo dài tới 280 - 330 giờ Một số viên nén clopheninamin maleat

được bào chế dưới dạng tác dụng kéo dài, dưới dạng viên nén 2 lớp Lớp ngoài được hòa tan và hấp thu giống như viên nén thông thường Lớp trong chỉ được hấp thu sau 4 - 6 giờ Tác dụng của những viên nén kéo dài bằng tác dụng của hai viên nén thông thường, uống cách nhau khoảng 6 giờ

Hiện nay, clopheninamin maleat thường được phối hợp trong một số chế phẩm bán trên thị trường để điều trị triệu chứng ho và cảm lạnh Tuy nhiên, thuốc không có tác dụng trong điều trị triệu chứng nhiễm virus

Etanol hoặc các thuốc an thần gây ngủ có thể tăng tác dụng ức chế hệ thần kinh trung ương của clopheninamin maleat Clopheninamin maleat ức chế chuyển hóa phenytoin và có thể dẫn đến ngộ độc phenytoin

Clopheninamin maleat có thể làm tăng nguy cơ bí tiểu tiện do tác dụng phụ chống tiết acetylcholin của thuốc, đặc biệt ở người bị phì đạị tuyến tiền liệt, tắc đường niệu, tắc môn vị tá tràng và làm trầm trọng thêm ở người bệnh nhược cơ

Tác dụng an thần của clopheninamin maleat tăng lên khi uống rượu và khi dùng đồng thời với các thuốc an thần khác

Có nguy cơ biến chứng đường hô hấp, suy giảm hô hấp và ngừng thở, điều đó có thể gây rất rắc rối ở người bị bệnh tắc nghẽn phổi hay ở trẻ em nhỏ Phải thận trọng khi có bệnh phổi mạn tính, thở ngắn hoặc khó thở

Có nguy cơ bị sâu răng ở những người bệnh điều trị thời gian dài, do tác dụng chống tiết acetylcholin, gây khô miệng

Thuốc có thể gây ngủ gà, chóng mặt, hoa mắt, nhìn mờ và suy giảm tâm thần vận động trong một số người bệnh và có thể ảnh hưởng nghiêm trọng đến khả năng lái xe hoặc vận hành máy Cần tránh dùng cho người đang lái xe hoặc điều khiển máy móc

Tránh dùng cho người bệnh bị tăng nhãn áp như bị glôcôm

Dùng thuốc thận trọng với người cao tuổi (> 60 tuổi) vì những người này thường tăng nhạy cảm với tác dụng chống tiết acetylcholin

Liều gây chết của clopheninamin maleat khoảng 25 - 50 mg/kg thể trọng Những triệu chứng và dấu hiệu quá liều bao gồm: kích thích nghịch thường hệ thần kinh trung ương, loạn tâm thần, cơn động kinh, ngừng thở, co giật, tác dụng chống tiết axetylcholin, phản ứng loạn trương lực và trụy tim mạch, loạn nhịp

Ðiều trị triệu chứng và hỗ trợ chức năng sống, cần chú ý đặc biệt đến chức năng gan, thận, hô hấp, tim và cân bằng nước, điện giải

Khi gặp hạ huyết áp và loạn nhịp, cần được điều trị tích cực Có thể điều trị co giật bằng tiêm tĩnh mạch diazepam hoặc phenytoin và phải truyền máu trong những ca nặng

1.1.2.4 Dạng thuốc

- Chế phẩm viên nén: Codacmin, Panactol enfant, Tro-padol-Flu, Triam-Fort

- Chế phẩm viên đạn: Pacemin, Calmezin, Amecol C, Codacmin, Corypadol

- Chế phẩm siro: Dibigen

- Chế phẩm gói bột: ACE, Babyplex, Pamin

- Các chế phẩm kết hợp với thuốc khác

1.2 Các định luật cơ sở của sự hấp thụ ánh sáng

1.2.1 Định luật Bughe - Lămbe - Bia

chất màu

dung dịch và bề dày lớp dung dịch mà ánh sáng truyền qua

Phương trình toán học biểu diễn định luật Bughe - Lămbe - Bia

Trong đó:

A : độ hấp thụ quang của dung dịch ở bước sóng (A không có thứ nguyên) : hệ số hấp thụ mol phân tử của cấu tử tại bước sóng ,( phụ thuộc bản chất của chất hấp thụ ánh sáng và bước sóng của ánh sáng tới.)

b: bề dày cuvet (cm)

C: nồng độ của chất màu chứa cấu tử trong dung dịch (mol/lít)

Định luật Bughe - Lămbe - Bia là sự tổ hợp của hai định luật thứ nhất và thứ hai của sự hấp thụ ánh sáng

1.2.2 Những nguyên nhân làm cho sự hấp thụ ánh sáng của dung dịch không tuân theo định luật Bughe - Lămbe - Bia

Xuất phát từ biểu thức của định luật Bughe - Lămbe - Bia A= f( , b, C) nghĩa là độ hấp thụ quang A là hàm số của ba biến:

), b (bề dày cuvet hay bề dày ) hay A = f( , b, C) Dựa vào hàm A = f( , b, C) Tại một bước sóng xác định và đo bằng 1 cuvet có bề dày b không đổi thì A = f(C) là hàm bậc nhất Đường biểu diễn sự phụ thuộc của A vào C phải là một đường thẳng Khoảng nồng độ tuân theo định luật Bughe - Lămbe - Bia là khoảng nồng độ mà đường biểu diễn A theo C phải tuyến tính Tuy nhiên, trong thực tế với những khoảng nồng độ quá loãng hoặc quá đặc, đường biểu diễn không còn là một đường thẳng nữa mà bị cong đi, đó là khoảng nồng độ mà sự hấp thụ ánh sáng của chất màu không tuân theo định luật Bughe - Lămbe - Bia

Do đó mọi sự sai lệch của các tham số này đều có thể đưa đến làm sai lệch quy luật hấp thụ quang, gây sai số cho phép đo

chất, bao gồm:

sáng tới có cường độ I0 không phải là tia đơn sắc mà là một chùm tia Giả sử có

3 tia I01; I02 và I03 thì I0 = I01+ I02 + I03 Nếu chất màu chỉ hấp thụ I02 còn I01 và

I03 không bị hấp thụ Khi đó ánh sáng ra khỏi dung dịch có cường độ sáng là

I = I01+ I2 + I03 và 0 01 02 03

+ + =

- Các điều kiện đo quang như: bề dày cuvet, độ trong suốt của bề mặt cuvet không thật đồng nhất, bề mặt cuvet gây các hiện tượng quang học phụ như tán xạ, hấp thụ

- Sự có mặt của các chất điện giải lạ trong dung dịch màu làm biến dạng các phần tử hoặc các ion phức màu làm ảnh hưởng đến sự hấp thụ ánh sáng của các tiểu phân hấp thụ ánh sáng

- Hiệu ứng solvat hóa: sự solvat hóa (hay hydrat hóa) làm giảm nồng độ các phần tử dung môi tự do, do đó làm thay đổi nồng độ của dung dịch màu và làm ảnh hưởng đến sự hấp thụ ánh sáng của dung dịch màu

- Hiệu ứng liên hợp: trong một số trường hợp có sự tương tác củ a chính các tiểu phân hấp thụ ánh sáng để tạo ra các tiểu phân polime làm thay đổi nồng độ hợp chất màu

- Ảnh hưởng pH của dung dịch: Đa số các thuốc thử dùng trong phân tích trắc quang là những muối của axit hay bazơ

X + HR  XR + H+Như vậy, một trong những điều kiện cần (tuy chưa đủ) để chuyển hết X thành phức màu là giá trị pH của dung dịch (H+

)

Sự thay đổi nồng độ của ion H+ (tức thay đổi pH) của dung dịch sẽ ảnh hưởng đến sự hình thành phức màu và không tuân theo định luật Bughe - Lămbe - Bia theo các trường hợp sau:

+ Thuốc thử có đặc tính axit: sự thay đổi nồng độ ion H+

làm chuyển dịch cân bằng tạo thành chất màu

+ Thay đổi pH kéo theo sự thay đổi thành phần hợp chất màu

+ Khi tăng pH phức màu có thể bị phân hủy do sự tạo thành phức hydroxo + Dưới ảnh hưởng của ion H+

trạng thái tồn tại và màu của dung dịch cũng thay đổi

- Ảnh hưởng của sự pha loãng dung dịch phức màu: Sự phân ly của phức màu XR như sau: XR  X + R Trong đó X và R không hấp thụ ánh sáng

Giả sử dung dịch có nồng độ XR là C (mol/lít), đo độ hấp thụ quang của dung dịch với cuvet có bề dày là b (cm) được giá trị A1 Nếu pha loãng dung

Bản chất của định luật cộng tính là sự độc lập của đại lượng độ hấp thụ quang của một chất riêng biệt khi có mặt của các chất khác có sự hấp thụ ánh sáng riêng

Biểu diễn tính cộng tính về độ hấp thụ quang của dung dịch hỗn hợp chứa n cấu tử tại bước sóng bằng phương trình toán học:

A i, : độ hấp thụ ánh sáng của cấu tử thứ i ở bước sóng

n: là số cấu tử hấp thụ ánh sáng có trong hỗn hợp; với i = 1 n

Từ (1.1) có thể viết lại phương trình (1.2) như sau:

n

i=1

A = ε b.C +ε b.C + +ε b.C = ε b.C (1.6) Định luật cộng tính được phát biểu như sau: “Ở một bước sóng đã cho độ hấp thụ quang của một hỗn hợp các cấu tử không tương tác hóa học với nhau bằng tổng độ hấp thụ quang của các cấu tử riêng biệt ở cùng bước sóng này”

1.3 Một số phương pháp xác định đồng thời các cấu tử

1.3.1 Phương pháp Vierordt

Để xác định nồng độ của các cấu tử trong hỗn hợp, lần đầu tiên Vierordt đã

đo độ hấp thụ quang của dung dịch hỗn hợp ở các bước sóng khác nhau, sau đó thiết lập hệ phương trình bậc nhất mà số phương trình bằng số ẩn số (số cấu tử trong hỗn hợp), giải hệ phương trình này sẽ tính được nồng độ của các cấu tử Điều kiện

để áp dụng phương pháp này là các cấu tử trong hỗn hợp phải tuân theo định luật Bughe - Lămbe - Bia và thỏa mãn tính cộng tính của độ hấp thụ quang

Với hỗn hợp chứa n cấu tử ta cần phải lập hệ n phương trình n ẩn Hệ phương trình này được thiết lập bằng cách đo độ hấp thụ quang của hỗn hợp ở

n bước sóng khác nhau

A( 1) = 11C1b + 21C2b + + i1Cib + + n1Cnb

A( 2) = 12C1b + 22C2b + + i2Cib + + n2Cnb

A( n) = 1nC1b + 2nC2b + + inCib + + nnCnb (1.7) Trong đó : A( 1), A( 2), , A( n): độ hấp thụ quang của hỗn hợp ở bước sóng 1, bước sóng 2, , và bước sóng n

in: hệ số hấp thụ mol phân tử của cấu tử i tại bước sóng n (được xác định bằng cách đo độ hấp thụ quang của dung dịch chỉ chứa cấu tử i ở bước sóng n )

b: bề dày lớp dung dịch (cm)

Ci: nồng độ của cấu tử thứ i trong hỗn hợp (mol/lít) Với i, j = 1 n

Giải hệ n phương trình với n ẩn số là C1, C2 Cn sẽ tìm được nồng độ của các cấu tử Khi số cấu tử trong hỗn hợp ít thì việc giải hệ n phương trình tuyến tính khá đơn giản Tuy nhiên khi số cấu tử lớn thì việc giải hệ phương trình phức tạp hơn

Phương pháp Vierordt chủ yếu được vận dụng để tìm cách giải hệ phương trình như: giải bằng đồ thị, giải bằng phép ma trận vuông, phương pháp khử Gauss, để xác định nồng độ của mỗi cấu tử

Một số tác giả sử dụng phương pháp Vierordt để xác định đồng thời paracetamol và clopheninamin maleat trong thuốc viên nén bằng cách đo độ hấp thụ quang ở các bước sóng 242 và 264 nm, còn một số tác giả khác đã xác định đồng thời axit salixylic và chloramphenilcol bằng cách đo độ hấp thụ quang ở các bước sóng 278 và 297 nm [2]

Phương pháp Vierordt đơn giản, dễ thực hiện nhưng chỉ áp dụng được khi số cấu tử trong dung dịch hỗn hợp ít, phổ hấp thụ quang phân tử xen phủ nhau không nhiều, tính chất cộng tính độ hấp thụ quang được thoả mãn nghiêm ngặt, thiết bị đo quang tốt thì phương pháp cho kết quả khá chính xác Đối với hệ nhiều cấu tử, đặc biệt là khi phổ của các cấu tử xen phủ nhau

nhiều, tính chất cộng tính độ hấp thụ quang không được thoả mãn nghiêm ngặt, thiết bị đo có độ chính xác không cao thì phương pháp không chính xác

và có sai số lớn [1] Bởi vậy mặc dù phương pháp Vierordt tuy ra đời đã lâu, nhưng ứng dụng trong thực tế còn rất ít Tuy nhiên đây là cơ sở lý thuyết cơ bản nhất, đặt nền móng cho các nhà khoa học sau này phát triển, cải tiến để xây dựng nên các phương pháp mới

1.3.2 Phương pháp phổ đạo hàm

Độ hấp thụ quang của các cấu tử là hàm của độ dài bước sóng của ánh sáng tới A = f( ) Phổ đạo hàm của độ hấp thụ quang theo bước sóng được biểu diễn bằng phương trình toán học:

Đạo hàm bậc 1 của độ hấp thụ quang: 1 ,

A = a0 + a1 + a2 2 + + ak k (1.11) Các hệ số a0, a1 ak tại mỗi bước sóng tương ứng là các giá trị đạo hàm bậc 0, 1, 2 k Để có phổ đạo hàm đối với tập số liệu phổ bậc không, đầu tiên

ta phải sử dụng phương pháp hồi quy bình phương tối thiểu để tìm được hàm hồi quy là đa thức bậc cao Sau đó lấy đạo hàm của hàm này ta sẽ được các phổ đạo hàm

Đối với phổ đạo hàm bậc 0, 1 n ta thấy có những đặc điểm như sau: đỉnh của phổ đạo hàm bậc n là điểm uốn của phổ đạo hàm bậc (n - 1), còn tại đỉnh của phổ đạo hàm bậc (n-1) thì phổ đạo hàm bậc n có giá trị bằng 0 Số đỉnh của phổ đạo hàm bậc n nhiều hơn số đỉnh của phổ đạo hàm bậc (n - 1)

Như vậy, dùng phương pháp phổ đạo hàm ta có thể tách phổ gần trùng nhau thành những phổ mới và khi đó ta có thể chọn được những bước sóng mà tại đó chỉ có duy nhất 1 cấu tử hấp thụ quang còn các cấu tử khác không hấp thụ, nhờ đó mà có thể xác định được từng chất trong hỗn hợp Bằng toán học, người ta xây dựng được phần mềm khi đo phổ của dung dịch hỗn hợp có thể ghi ngay được phổ đạo hàm các bậc của phổ đó Căn cứ vào các giá trị phổ đạo hàm ta lựa chọn được bước sóng xác định đối với từng cấu tử

Ở nước ta, một số tác giả đã sử dụng phương pháp phổ đạo hàm xác định đồng thời các vitamin tan trong nước cũng như xác định đồng thời các chế phẩm dược dụng khác Các kết quả thu được có sai số trong khoảng 1,7 5% [13, 14, 19]

Trên thế giới, phương pháp phổ đạo hàm được ứng dụng để phân tích các chế phẩm dược dụng cũng như hỗn hợp các chất vô cơ, hữu cơ Hầu hết các kết quả đều cho thấy phương pháp có độ tin cậy cao Tuy nhiên phương pháp phổ đạo hàm chỉ được áp dụng khi số cấu tử trong dung dịch ít và phổ hấp thụ quang phân tử của chúng không trùng nhau [7, 10]

1.3.3 Phương pháp lọc Kalman

Thuật toán lọc Kalman đầu tiên được nghiên cứu trong vật lý vô tuyến nhằm loại bỏ các tín hiệu "nhiễu" và sau đó được ứng dụng vào hoá học trắc quang Thuật toán lọc Kalman hoạt động trên cơ sở các file dữ liệu phổ ghi được của từng cấu tử riêng rẽ và của hỗn hợp các cấu tử, xác định sự đóng góp về phổ của từng cấu tử trong hỗn hợp tại các bước sóng Khi chương trình chạy, những kết quả tính toán liên tiếp sẽ càng tiến gần đến giá trị thực Trong thực tế, người ta

sử dụng phương pháp bình phương tối thiểu để giảm sai số giữa phổ của hỗn hợp với phổ nhân tạo được dự đoán bởi phương pháp lọc Kalman Kết quả tính toán là

lý tưởng khi phổ của hỗn hợp trừ đi phổ nhân tạo được tính bởi lọc Kalman sẽ tạo

ra một đường thẳng có độ lệch không đáng kể Độ đúng của phép xác định phụ thuộc vào độ nhiễu của nền, vào việc tách các đỉnh phổ hấp thụ của các cấu tử và

sự tương tác giữa các cấu tử Hỗn hợp có càng ít cấu tử, các đỉnh hấp thụ càng cách xa nhau thì sai số của phép tính toán sẽ càng nhỏ

Việc tính toán sẽ được thực hiện trên toàn bộ khoảng bước sóng được chọn Nếu kết thúc quá trình tính toán, độ lệch chuẩn tương đối của giá trị nồng

độ các cấu tử trong hỗn hợp vẫn lớn hơn giá trị sai số cho phép thì nồng độ của cấu tử đó sẽ phải xác định lại Khi đó, cần phải tăng giá trị sai số mặc định hoặc giảm số giá trị nồng độ mặc định để tính giá trị nồng độ trung bình.

1.1 Mô hình hoạt động của bộ lọc Kalman

Một số tác giả đã sử dụng thuật toán lọc Kalman để xác định các cấu tử trong hỗn hợp bằng phương pháp trắc quang Kết quả cho thấy sai số của phép xác định với hỗn hợp 2 cấu tử nhỏ hơn 1%, với hỗn hợp 3 cấu tử có sai số nhỏ hơn 2% [ 10, 18, 19]

kalman

Tín hiệu thu được

1.4 Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao

Phương pháp này ra đời từ năm 1970 trên cơ sở phát triển và cải tiến từ phương pháp sắc ký cột cổ điển Khi đó nó có tên gọi là phương pháp sắc ký lỏng áp suất cao, ngày nay gọi là phương pháp sắc lý lỏng hiệu năng cao (HPLC) Hiện nay phương pháp HPLC ngày càng phát triển và hiện đại hoá cao nhờ sự phát triển nhanh chóng của ngành chế tạo máy phân tích Nó áp dụng rất nhiều trong các ngành kiểm nghiệm đặc biệt là ứng dụng cho ngành kiểm nghiệm thuốc, máy phân tích HPLC là công cụ đắc lực trong phân tích các thuốc đa thành phần cho phép định tính và định lượng Phương pháp này ngày càng được sử dụng rộng rãi và phổ biến vì nhiều lý do: có độ nhạy cao, khả năng định lượng tốt, thích hợp tách các hợp chất khó bay hơi hoặc dễ phân hủy nhiệt

1.4.1 Nguyên tắc của phương pháp HPLC

Sắc ký lỏng hiệu năng cao là một phương pháp phân tích hóa lý, quá trình tách chủ yếu dựa trên lực tương tác giữa chất phân tích với pha tĩnh và pha động

- Pha tĩnh là pha không di chuyển thường nạp vào cột sắc ký, có tác dụng lưu giữ chất phân tích

- Pha động có nhiệm vụ chuyển chất phân tích dọc theo cột sắc ký với tốc độ thích hợp

Chất phân tích bị lưu giữ trên pha tĩnh phụ thuộc ái lực của chúng

Do ái lực hấp thu và giải hấp thu khác nhau của các hợp phần có trong mẫu phân tích với pha tĩnh và pha động mà chúng di chuyển dọc theo pha tĩnh (cột sắc ký) tốc độ khác nhau nên lần lượt đi ra khỏi cột

Quá trình sắc ký là quá trình cân bằng động được thiết lập liên tục từ đầu đến cuối cột, hợp phần có ái lực hấp thu mạnh đẩy hợp phần có ái lực hấp thu yếu, dần dần chúng tách ra khỏi nhau

Nguyên tắc của quá trình sắc ký trong cột:

Trong phương pháp HPLC các kỹ thuật tách thường sử dụng: Sắc ký

hấp phụ pha thường; sắc ký hấp phụ pha đảo; sắc ký trao đổi ion, sắc ký ion, sắc ký cặp ion và sắc ký rây phân tử

- Sắc ký hấp phụ pha thường: Pha tĩnh hạt xốp, phân cực, pha động

dung môi không phân cực hay ít phân cực, kỵ nước Phương pháp được sử dụng tách các hợp chất hữu cơ không phân cực và ít phân cực có trong dung môi kỵ nước

- Sắc ký hấp phụ pha đảo: Pha tĩnh là loại không phân cực, kỵ nước, pha

động dung môi phân cực Phương pháp sử dụng tách và phân tích các chất không phân cực, ít phân cực và phân cực

- Sắc ký trao đổi ion: Pha tĩnh có cấu tạo ion, phân cực, pha động dung

dịch axít, bazơ, dung dịch đệm Phương pháp sử dụng tách các chất dạng ion hoặc phân ly thành ion Cơ chế tách theo phản ứng trao đổi ion

- Sắc ký rây phân tử: Pha tĩnh loại mạng lưới phân tử có kích thước lỗ

xác định, pha động dung môi hữu cơ Phương pháp sử dụng trong lĩnh vực sinh học phân tử y sinh học, tách các chất theo kích thước phân tử

+ Pha tĩnh trong kỹ thuật tách HPLC cũng giữ vai trò như kỹ thuật tách

áp suất thường, nhưng về cấu tạo và kích thước khác nhiều Pha tĩnh HPLC là loại hạt rắn, xốp, kích thước hạt rất nhỏ 3-10 m, thậm chí hiện nay đã xuất hiện loại nhỏ hơn 1,7 m, diện tích bề mặt 50-500m2

/g

* Yêu cầu đối với pha tĩnh:

- Phải trơ và bền vững với các điều kiện môi trường sắc ký và chất phân tích, pha động

- Có khả năng tách chọn lọc một hỗn hợp chất phân tích

- Có bề mặt ổn định, đặc biệt độ xốp, không thay đổi hay biến dạng trong quá trình sắc ký

- Cân bằng động học xẩy ra nhanh và lặp lại tốt

- Cỡ hạt phải đồng đều, sai lệch cỡ hạt nhỏ nhất và bé nhất không quá 15%

Thể tích xốp 0,5-2mL/g, diện tích bề mặt 80-500m2

/g

+ Để rửa rải chất phân tích ra khỏi cột, ta cần có một pha động

Pha động là dung môi để rửa giải các chất phân tích ra khỏi cột sắc ký thực hiện quá trình tách Pha động có thể một dung môi hữu cơ như metanol, axetonitril, bezen, hay hỗn hợp nước-dung môi hữu cơ Có thể dung dịch nước axit, bazơ, dung dịch đệm, chất tạo phức Pha động yếu tố thứ hai quyết định hiệu quả tách sắc ký Hai yếu tố quyết định quá trình tách sắc ký là pha tĩnh

và pha động

*Pha động phải thỏa mãn các yêu cầu sau:

- Pha động phải trơ đối với pha tĩnh, không làm hỏng pha tĩnh, không tương tác phụ với pha tĩnh để sinh ra những sản phẩm khác làm phức tạp quá trình tách

- Pha động phải hòa tan được chất mẫu để mẫu được vận chuyển tốt từ đầu cột tách đến cuối cột tách

- Pha động phải bền vững theo thời gian, có thành phần khống chế được trong quá trình sắc ký Không bị phân hủy khi chạy sắc ký

- Pha động phải có độ tinh khiết cao để đảm bảo không làm nhiễm bẩn mẫu phân tích, gây sai số

- Pha động phải nhanh chóng đạt cân bằng trong quá trình sắc ký

- Pha động phải phù hợp với detector, không làm hư hại tế bào dòng chảy của detector

+ Nếu nạp mẫu phân tích gồm hỗn hợp chất phân tích A, B, C vào cột phân tích, kết quả là các chất A, B, C sẽ được tách ra khỏi nhau sau khi

đi qua cột

1.4.2 Các đại lượng đặc trưng của quá trình sắc kí

1.4.2.1 Thời gian lưu và thể tích lưu

Thời gian lưu của một chất là thời gian tính từ lúc tiêm mẫu vào cột đến khi chất đó ra khỏi cột đạt giá trị nồng độ cực đại và cho ra pic trên sắc kí đồ

Nếu gọi là thời gian lưu trữ của một chất thì:

Hình 1.2 Thời gian lưu của cấu tử phân tích

t : là thời gian chết (thời gian không lưu trữ)

Trong cùng một điều kiện sắc kí đã chọn, thời gian lưu của mỗi chất là hằng định và các chất khác nhau thì thời gian lưu khác nhau tùy thuộc vào bản chất, cấu tạo vào tính chất của chất đó Vì vậy thời gian lưu là đại lượng định tính các chất

Khi pha động chảy qua cột với một tốc độ không đổi thì thời gian lưu có thể thay thế bằng thể tích lưu Thể tích lưu là thể tích pha động thu được sau cột trong khoảng thời gian tương ứng với thời gian lưu

1.4.2.2 Hệ số phân bố

Trong quá trình sắc kí luôn có sự phân bố của chất tan giữa pha động và pha tĩnh Sự phân bố này đặc trưng bởi cân bằng phân bố với hệ số phân bố

K = (1.13) Trong đó : là nồng độ của chất phân tích tương ứng trong pha tĩnh

và pha động ở thời điểm cân bằng

1.4.2.3 Thừa số dung lượng

Thừa số dung lượng là đại lượng biểu thị khả năng phân bố của chất tan trong hai pha cộng với sức chứa của cột, tức là tỉ số giữa lượng chất tan trong pha tĩnh và lượng chất tan trong pha động ở thời điểm cân bằng

1.4.2.5 Số đĩa lý thuyết và chiều cao đĩa lý thuyết

Hiệu lực cột thường biểu thị qua hai thông số: Số đĩa lý thuyết (N) hoặc chiều cao đĩa lý thuyết (H) Cột sắc ký được coi như có N tầng lý thuyết, ở mỗi tầng sự phân bố chất tan vào 2 pha lại đạt đến một trạng thái cân bằng mới Mỗi tầng được giả định như một lớp pha tĩnh có chiều cao H Đĩa lý thuyết được định nghĩa như một khu vực của hệ thống phân tách mà trong đó thiết lập một cân bằng nhiệt động giữa nồng độ trung bình của chất tan trong pha tĩnh và trong pha động

Số đĩa lý thuyết N được tính theo các công thức:

N = 16× hoặc 5,54× (1.16)

Trong đó: W là chiều rộng pic ở đáy pic

là chiều rộng pic đo ở nửa chiều cao của pic

Chiều cao của đĩa lý thuyết được tính theo công thức:

H=

N

L

(1.17)

Trong đó: L là chiều cao cột sắc kí

Với một điều kiện sắc kí nhất định, chiều cao đĩa lý thuyết (H) và số đĩa

lý thuyết (N) là hằng định đối với mỗi chất phân tích

1.4.2.6 Độ phân giải ( R S )

Độ phân giải là đại lượng biểu thị độ tách của các chất ra khỏi nhau trong điều kiện sắc kí đã cho Độ phân giải của hai pic cạnh tranh được tính theo 1 trong 3 công thức sau:

=

(1.18) Trong đó:

, : thời gian lưu tương ứng của chất A, chất B

, : Chiều rộng pic đo ở nửa chiều cao pic của chất A, chất B , : Chiều rộng pic ở đáy pic

Trong đó: W x là độ rộng đáy pic đo ở 1/20 chiều cao của pic

A là khoảng cách từ đường vuông góc hạ từ cực đại của pic

4 Bộ tiêm mẫu: tiêm vào cột một thể tích mẫu nhất định

5 Cột tách (pha tĩnh): Chiều dài dao động từ 10-30cm, đường kính 5mm Có thể xem cột sắc ký như trái tim của qúa trình sắc ký, yếu tố quyết định quá trình tách một hỗn hợp

2-6 Detector: đây là thiết bị chuyển tín hiệu không điện thành tín hiệu điện

7 Máy ghi tín hiệu hoặc máy vi tính: ghi kết quả dạng pic

1.4.4 Kết quả xác định một số chất theo phương pháp HPLC

Hiện nay ở nước ta, phương pháp HPLC được ứng dụng nhiều trong phân tích các chế phẩm về dược cũng như hỗn hợp các chất vô cơ, hữu cơ Các

kết quả đều cho thấy phương pháp có độ tin cậy cao

Phương pháp định lượng đồng thời paracetamol và axit mefenamic: phương pháp có độ chính xác cao (sai số tương đối 0,51% - 1,42%), độ đúng tốt (tỷ lệ thu hồi 98,16% - 99,16%) [16]

Phương pháp định tính và định lượng đồng thời paracetamol và ibuprofen: phương pháp có độ lặp lại tốt (sai số tương đối 0,81% - 1,03%), độ đúng cao (tỷ lệ thu hồi 98,0% - 98,4%) [16]

Phương pháp định lượng đồng thời paracetamol và cafein: phương pháp

có độ lặp lại tốt (sai số tương đối 0,54% - 1,07%), độ đúng cao (tỷ lệ thu hồi 98,9% - 99,5%) [16]

Phương pháp định lượng đồng thời paracetamol, phenylpropanolamin hidroclorit và clorphenylamin maleat: phương pháp có độ lặp lại cao (sai số tương đối của paracetamol là 0,47%; phenylpropanolamin hidroclorid là 0,67% và clophenylamin maleat là 1,19%), độ đúng cao (tỷ lệ thu hồi 99,61% - 100,65%) [16]

Chương 2 THỰC NGHIỆM

2.1 Nội dung nghiên cứu

Áp dụng phương pháp sắc khí lỏng hiệu năng cao (HPLC) và phương pháp quang phổ hấp thụ phân tử (UV-VIS) để xây dựng quy trình xác định đồng thời PRC, CPM trong thuốc COLDACMIN và PACEMIN trên thị trường

Khảo sát để lựa chọn các điều kiện sắc ký:

- Bước sóng thích hợp để phát hiện đồng thời 2 chất

- Pha động: thành phần, tỷ lệ pha động, tốc độ dòng

Đánh giá quy trình sắc ký đã xây dựng được:

- Khảo sát tính thích hợp của hệ thống

- Khảo sát khoảng tuyến tính giữa nồng độ và diện tích pic của các chất

- Khảo sát độ chính xác của phương pháp

- Khảo sát độ đúng của phương pháp

Xác định đồng thời PRC, CPM trong thuốc COLDACMIN và PACEMIN theo phương pháp HPLC

2.1.2 Phương pháp quang phổ hấp thụ phân tử

- Khảo sát trên toàn phổ từ 200 nm đến 300

PRC và CPM

- Tiến hành kiểm tra phổ hấp thụ phân tử của PRC và CPM trong các

- Kiểm tra sự ổn định độ hấp thụ quang của PRC và CPM theo thời gian, nhiệt độ để lựa chọn khoảng thời gian và nhiệt độ thíc