Nhận xét đặc điểm bịt ống ngà của một số loại varnish chống NCN

Trong đó, Varnish Fluoride điều trị nhạy cảmngà là phương pháp có nhiều ưu điểm, với kỹ thuật đơn giản, dễ dàng sửdụng, khả năng ngấm vào các ống ngà nhanh, tạo được lớp cách ly với nước

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ

TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI

HOÀNG THỊ PHƯƠNG GIANG

NHËN XÐT §ÆC §IÓM H×NH TH¸I GI¶I PHÉU

CñA èNG NGµ Vµ HIÖU QU¶ BÝT T¾C èNG NGµ CñA VARNISH

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ

TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI

HOÀNG THỊ PHƯƠNG GIANG

NHËN XÐT §ÆC §IÓM H×NH TH¸I GI¶I PHÉU CñA èNG NGµ Vµ HIÖU QU¶ BÝT T¾C èNG NGµ CñA VARNISH

Trong quá trình học tập và thực hiện đề tài, em đã nhận được sự giúp đỡ tậntình của các thầy giáo, cô giáo và các bạn sinh viên trường đại học Y Hà Nội

Em xin được bày tỏ lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc tới cô giáo, thạc sĩPhạm Thị Tuyết Nga, người cô đã tận tình hướng dẫn, giúp đỡ em trong suốtquá trình học tập và thực hiện khóa luận

Em xin được bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới các thầy giáo, cô giáo trong

bộ môn Nội nha, Răng trẻ em, Nha cơ sở, Nha cộng đồng, Viện đào tạo Rănghàm mặt, trường đại học Y Hà Nội, là những người đã cho em những ý kiếngóp ý vô cùng quí báu giúp em hoàn thành đề tài

Em cũng xin chân thành cảm ơn Ban Giám Hiệu trường Đại học Y HàNội, Viện đào tạo Răng Hàm Mặt đã cho phép và tạo điều kiện thuận lợi cho

em thực hiện và hoàn thành khóa luận

Xin cảm ơn các bệnh nhân đã đồng ý tham gia vào nghiên cứu của em Cuối cùng, xin được gửi lời cảm ơn sâu sắc tới gia đình, các anh chị, bạn

bè đã luôn ủng hộ, khích lệ, động viên và hỗ trợ em trong quá trình học tập vàhoàn thành khóa luận

Một lần nữa, em xin chân thành cảm ơn!

Hà Nội, ngày tháng năm 2014

Sinh viên thực hiện khóa luận

Hoàng Thị Phương Giang

LỜI CAM ĐOAN

Em xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của em dưới sự hướngdẫn của giáo viên hướng dẫn, chưa được công bố ở bất cứ đâu Các số liệutrong nghiên cứu đều là thật, được lấy 1 một cách nghiêm túc trên các đốitượng nghiên cứu

Sinh viên thực hiên khóa luận

Hoàng Thị Phương Giang

MỤC LỤC

MỤC LỤC

SE : ………Secondary Electrons (điện tử thứ cấp)

BSE : ……….Back Scattered Electrons (điện tử tán xạngược)

DANH MỤC HÌNH

……… 3

Hình 1.2 Ba thuyết về cảm nhận ngà……… 8

Hình 1.3 Ống ngà bình thường trên SEM……… 14

Hình 2.1 Fluor Protector (IvoclarVivadent)……… 21

Hình 2.2 Bis- Block (Bisco)………

Hình 3.3 Hình ảnh ống ngà bẻ dọc……… ……… 30

Hình 3.4 Bề mặt đĩa ngà được phủ varnish Fluoride tại thời điểm tứcthì…… 34

Hình 3.5 Hình ảnh lát cắt dọc qua mẫu có phủ Fluoride ở thời điểm tức thì….35

Hình 3.6 Bề mặt đĩa ngà phủ Fluoride sau 1 tháng………36

Hình 3.7 Hình ảnh lát cắt dọc của đĩa ngà răng phủ Fluoride sau 1 tháng… 38

ĐẶT VẤN ĐỀ

Điều trị nội nha là một trong những chuyên ngành cơ bản của răng hàmmặt Chất lượng cuộc sống ngày càng gia tăng thì nhu cầu điều trị nha khoacũng ngày một cao hơn Các bệnh lý, các vấn đề ảnh hưởng tới chất lượngcuộc sống trước đây không được chú trọng đang dần dần được quan tâm hơn.Khoa học kỹ thuật phát triển mạnh, các bác sỹ, các nhà nghiên cứu răng hàmmặt ngày càng hiểu sâu hơn về giải phẫu, cấu trúc mô học, các đặc điểm sinh

lý sinh hóa của mô răng, từ đó làm nền tảng cho các phương pháp điều trị, cácvật liệu điều trị mới tốt hơn, hiệu quả hơn

Ngà răng là thành phần cơ bản, chiếm phần lớn mô răng Ngà răng nằmsát tủy răng, là thành phần trung gian nằm giữa men và tủy răng, trở thành cầunối giữa răng và môi trường bên ngoài Một tổn thương mô cứng của răng sẽgây ảnh hưởng tới người bệnh từ khi ngà răng bị tổn thương, đó là các tìnhtrạng đau, ê buốt, hoặc bệnh lý tủy răng Sự ra đời của kính hiển vi đã giúpviệc nghiên cứu về hình thái, cấu trúc, thành phần mô học… của ngà răngđược sâu hơn Một bác sỹ răng hàm mặt cần có những hiểu biết cơ bản về môhọc răng nói chung và ngà răng nói riêng Những hiểu biết này là cơ sở đểgiải thích các bệnh lý, các tình trạng răng miệng, qua đó là để phục vụ choviệc điều trị có hiệu quả cao hơn

Hội chứng nhạy cảm ngà là vấn đề đã được đề cập từ lâu tuy nhiên tớinhững năm gần đây nó mới được quan tâm đúng mức Tỷ lệ nhạy cảm ngàtrong cộng đồng rất cao, theo một số nghiên cứu tỷ lệ này lên tới 75% dân số,đối với người bị viêm quanh răng tỷ lệ này có thể lên tới 72,5 - 98% [1] Trước nhu cầu điều trị nhạy cảm ngà ngày càng tăng, các bác sỹ rănghàm mặt ngày càng quan tâm và đi sâu vào lĩnh vực điều trị, đồng thời vói đócác sản phẩm chống ê buốt điều trị nhạy cảm ngà cũng ngày một nhiều và

cũng ngày một hiêu quả hơn Trong đó, Varnish Fluoride điều trị nhạy cảmngà là phương pháp có nhiều ưu điểm, với kỹ thuật đơn giản, dễ dàng sửdụng, khả năng ngấm vào các ống ngà nhanh, tạo được lớp cách ly với nướcbọt nên ít bị hòa tan do đó đem lại hiệu quả lâu dài Theo các nhà nghiên cứutrên thế giới và nhà sản xuất các hợp chất này có tác dụng đóng kín ống ngànên chống nhạy cảm ngà hiệu quả Năm 2003, César Augusto Galvão Arraisnghiên cứu tỷ lệ bít tắc ống ngà khi chải răng với Sorriso (chứa Sodiummonofluoro - phosphate với 1500 ppm Fluoride) cho thấy tỷ lệ này lên tới98,83 ± 3.,31 % [2].

Tại Việt Nam, các nghiên cứu về nhạy cảm ngà và các phương pháp điềutrị chưa nhiểu Năm 2007, Hoàng Đạo Bảo Trâm, Hoàng Tử Hùng và cộng sựnghiên cứu về tác động của Fluoride trên SEM và đánh giá kết quả bằngphương pháp đo độ dẫn thủy lực cho thấy vật liệu Fluoride làm giảm đáng kểtính thấm của ngà răng sau 24h đến 76%, duy trì hơn 50% giá trị ban đầu sau

7 ngày [3] Ngoài ra chưa có nghiên cứu nào khác về hiệu quả của VarnishFluoride sau thời gian lâu hơn

Do vậy, chúng tôi tiến hành đề tài nghiên cứu: “ Nhận xét đặc điểm hình thái giải phẫu của ống ngà và hiệu quả bít tắc ống ngà của Varnish Fluoride ở răng hàm nhỏ trên thực nghiệm” với mục tiêu:

1 Nhận xét đặc điểm hình thái giải phẫu ống ngà của răng hàm nhỏ trên thực nghiệm.

2 Nhận xét đặc điểm bít ống ngà của Varnish Fluoride trên thực nghiệm

Chương 1

TỔNG QUAN

1.1 Đặc điểm sinh lý ngà răng:

Ngà răng có nguồn gốc từ nhú răng, được bao phủ bởi men ở thân răng vàcement ở chân răng, chiếm phần lớn thể tích của răng và bảo vệ tủy răng [4]

1.1.1 Cấu trúc ngà răng

Hình 1.1: Giải phẫu ngà răng

Ngà răng có nhiều ống ngà nhỏ chạy theo chiều dày ngà Tùy theođường kính to nhỏ và đường đi của các ống ngà mà chia thành 2 loại:

Ống ngà chính (ống ngà tiên phát): là những ống ngà xuất phát từ bề mặttủy rồi chạy theo suốt chiều dày ngà và tận cùng bằng một đầu chột ở gầnđường ranh giới men - ngà Tuy nhiên, không phải lúc nào chúng cũng chạytheo một đường thẳng mà có những đoạn gấp khúc, đặc biệt là vùng cổ răng

Số lượng ống ngà ở vùng thân răng nhiều hơn chân răng, ở vùng ngoại biênnhiều hơn vùng gần tủy Đường kính ống ngà ở vùng gần tủy khoảng 3 - 5

µm, ở vùng ranh giới men - ngà hẹp hơn, khoảng 1µm [4]

Ống ngà phụ (ống ngà thứ phát): là những nhánh bên hay nhánh tận cùngcủa ống ngà chính, có đường kính nhỏ hơn nhiều [4]

Ở trong ống ngà có dây Tome, là đuôi nguyên sinh chất kéo dài củanguyên bào tạo ngà Dây Tome là biểu hiện sống trong tổ chức ngà, đảm bảochức năng trao đổi chất và sửa chữa ngà [4] Chiều dài của dây Tome thường

là 2 - 3mm, có thể tới 5mm, đường kính giảm dần từ trong ra ngoài, 1 - 3µm

ở gần tủy, giảm còn 0,5 - 1µm ở xa tủy [5] Dây Tome có thể ngắn lại dần và

ở người trưởng thành dây Tome không nhất thiết phải đi tới đầu tận cùng củaống ngà Ống ngà có thể hẹp dần và tắc [4]

Khoảng quanh đuôi nguyên bào tạo ngà giữa dây Tome và thành ống ngà

có chứa dịch mô và các thành phần hữu cơ như các sợi collagen và chất khuôncủa ngà quanh ống, nó cũng có vai trò nâng đỡ sinh lý cho ngà răng [5]

1.1.2 Dây thần kinh ở ngà răng:

Thần kinh trong ống ngà gồm 2 sợi : sợi có myelin là sợi A và sợi không

có myelin là sợi C Các sợi thần kinh không myelin (sợi C) của dây tam thoa

từ tủy răng đi tới vùng tiền ngà và vào vùng ngà quanh tủy Các sợi này xuấtphát từ đám rối Raschkow ở vùng giàu tế bào dưới nguyên bào ngà, sau đóchạy trong ống ngà, song song với các đuôi nguyên bào ngà khoảng 0,2mm.Các sợi trục ở cả tiền ngà và ngà răng đều không có tiếp nối xi-náp với cácđuôi bào tương hay thân của các nguyên bào ngà Không có khớp kín haykhớp khe giữa sợi trục và nguyên bào ngà [5] Các sợi thần kinh có myelin(sợi A - delta) nằm chủ yếu ở ranh giới ngà -– tủy, có đường kính nhỏ hơn,tốc độ dẫn truyền chậm hơn các loại sợi A nhưng nhanh hơn sợi C Sợi Atruyền trực tiếp cảm giác đau đến đồi thị tạo cảm giác đau nhói Sợi A - delta

có vai trò quan trọng trong cơ chế nhạy cảm ngà [6]

1.1.3 Thành phần cấu tạo:

Thành phần hữu cơ của ngà răng chứa 91 - 92% collagen Phần lớn cáccollagen thuộc type I, chỉ có dưới 3% thuộc type V [5] Thành phần hữu cơtrong các lớp khác nhau và trong các loại ngà khác nhau có xu hướng biến đổi

đảo ngược so với thành phần khoáng: rất cao ở phần ngà vỏ và rất thấp ở ngàquanh ống [5].

Thành phần vô cơ chính là các tinh thể phosphate calci dạng apatite(Ca10(PO4)6(OH)2) chiếm 90% ngà quanh ống và 50% ngà gian ống, các tinhthể này có kích thước nhỏ hơn ở men răng nhưng hình thể và kích thướctương tự ở xương răng Trong thành phần của ngà răng còn có một lượng nhỏcarbon, Mg, F, Pb, Zn… với hàm lượng thay đổi [4] Ngoài ra, ngà răng cònchứa một số nguyên tố vết: fluor, chì , kẽm có nồng độ cao hơn ở gần tủy sovới vùng gần men Lượng fluor tăng lên theo tuổi, có thể là do sự hấp thụfluor sau khi răng đã mọc và fluor của ngà thứ phát [5]

1.1.4 Đặc tính của ngà răng:

Ngà răng mềm hơn men răng, nhưng cứng hơn xương và xương răng.Ngà răng tự nhiên có màu vàng nhạt, có độ đàn hồi cao Ngà răng xốp và cótính thấm Khả năng thẩm thấu tăng khi lớp ngà mỏng và đối với các phân tửkích thước nhỏ và giảm khi mức xơ hóa tăng Bề mặt ngà khi được sửa soạnbằng mũi khoan và đĩa kim cương thì ít thẩm thấu hơn so với bề mặt ngà bị

xử lý bằng acid Fluoride chỉ thâm nhập được vào một lớp ngà mỏng dochúng bám vào các thành ống ngà [5]

Đặc tính nổi bật nhất của ngà răng chính là các đuôi nguyên bào ngà vớimật độ cao và tổng chiều dài rất lớn Các nguyên bào tạo ngà là thành phầnchức năng quan trọng nhất của răng, cùng với tủy răng có phản ứng với nhiềukích thích từ bên ngoài [5]

1.2 Các phương pháp được sử dụng để làm bít tắc ống ngà (ứng dụng trong điều trị nhạy cảm ngà)

1.2.1 Laser:

Laser là một phương pháp điều trị nhạy cảm ngà đem lại kết quả khảquan, hiệu quả có thể đạt được tử 59 -– 100% phụ thuộc vào loại laser Có 2

loại laser dùng trong điều trị nhạy cảm ngà là laser năng lượng cao và lasernăng lượng thấp Laser năng lượng cao có bước sóng lớn nên có khả năngphân hủy các tinh thể hydroxyl apatite hoặc làm tan chảy các cấu trúc sợi, nên

có tác dụng trám bít kín các ống ngà Với laser năng lượng thấp, ánh sánglaser làm biến chất collagen trong ngà răng, do đó làm hẹp và tắc các ống ngà,giảm dòng chảy trong ống ngà Ngoài ra, cả hai loại laser đều được chứngminh là có tác dụng gây kích thích tạo lớp ngà thứ ba bảo vệ, do đó kết quảđiều trị nhạy cảm ngà được bền vững [7]

1.2.2 Các hợp chất hóa học:

Các hợp chất hóa học có tác dụng bít tắc ống ngà gồm những nhóm sau:Hợp chất Fluoride: làm giảm tính thấm của ngà răng trên in vitro do sựkết tủa của Calcium fluoride bên trong các ống ngà [8]

Hợp chất oxalate: Potassium oxalate 30% có thể làm giảm tính thấm củangà răng và bít kín ống ngà đến 98% [8]

Hợp chất Calcium phosphate: có tác dụng đóng các ống ngà trên in vitro

do sự kết tủa ion Ca2+ trong ống ngà [8]

Các Adhesive và nhự kết tinh (bonding, resin): những hợp chất này tạothành màng mỏng bảo vệ ngà răng khỏi các kích thích [8]

Trong đó, Fluoride là hợp chất hay được sử dụng nhất vì Fluoride khôngnhững làm bít tắc ống ngà trong điều trị nhạy cảm ngà mà còn là hợp chất cókhả năng phòng sâu răng đã được nghiên cứu và ứng dụng từ lâu

1.2.3 Fluoride:

1.2.3.1 Lược sử:

Nghiên cứu khởi đầu về Ffluoride được thực hiện năm 1901 khi Frederick McKay đến Colorado Springs, Colorado và phát hiện người dân ởđây xuất hiện những vệt màu trên răng Năm 1909, McKay cùng Black tiếnhành nghiên cứu về những đốm trắng do nhiễm fluoride có khả năng chống

sâu răng và nguyên nhân có thể do nguồn nước chứa fluoride Sau 15 năm từnăm 1945 - 1960, Trendley H Dean đã thành công với công trình nghiên cứufluoride hóa nước uống để phòng sâu răng sớm tại thành phố Grand Rapidscủa Mỹ cho gần 30 000 học sinh Gần 30 năm sau khi kết thúc nghiên cứufluoride tại Grand Rapids, florua tiếp tục là vũ khí chính của khoa học nhakhoa trong phòng ngừa sâu răng sớm Sự ra đời của kem đánh răng có chấtfluoride trong đầu những năm 1970 đã cung cấp một nguồn fluoride rất quantrọng [9] Năm 1994, Cục Quản lý Thực phẩm và Dược phẩm Hoa Kỳ (FDA)

đã phê duyệt sử dụng fluoride điều trị nhạy cảm ngà răng

1.2.3.2 Cơ chế tác dụng:

Thông thường, fluoride được sử dụng để phòng ngừa sâu răng do có khảnăng tái khoáng hóa men - ngà răng Tuy nhiên, các thử nghiệm lâm sàng cònchỉ ra fluoride còn có thể làm giảm nhạy cảm ngà Cơ chế chính của fluoride

để làm giảm nhạy cảm ngà là thông qua hình thành các kết tủa calciumphosphate cũng như canxi florua (CaF2) và fluorapatite (FAP) [10], [11].Fluoride tương tác với hydroxyapatite (HAP) tạo thành fluorapatite ít bị hòatan hơn:

Ca10(PO4)6(OH)2 + 2F- = Ca10(PO4)6F2

Fluoride còn làm giảm tính thấm của ngà bằng sự kết tủa các tinh thểCaF2 trong các ống ngà:

Ca10(PO4)6(OH)2 + 20F- = 10CaF2 + 6PO43- + 2OH- Các tinh thể CaF2 là thành phần không hòa tan trong nước bọt Quan sáttrên kính hiển vi điện tử quét (SEM) cho thấy các tinh thể này kết tủa trongcác ống ngà

Ngoài ra, fluoride có tác dụng giảm sinh acide, làm giảm yếu tố kíchthích lên răng

Có nhiều hợp chất Ffluoride được ứng dụng trong điều trị nhạy cảm ngàbao gồm: Sodium fluoride (NaF), Stannous fluoride (SnF2), sodium mono fluoro - phosphate (Na2PO3F), các hợp chất của fluorosilicate (SiF6 ) và2-phương pháp điện di fluoride Trong đó, hợp chất NaF hay được sử dụng dokhả năng dễ phóng thích ion fluoride NaF được sử dụng trong kem đánh răng

có nồng độ 2% hay dạng varnish Tuy nhiên, các kết tủa được hình thành bởiNaF có thể được loại bỏ do tác động của nước bọt hay tác động cơ học Do

đó, việc bổ sung thêm acid vào NaF sẽ tạo kết tủa sâu bên trong ống ngà [12].Một số tác giả đưa ra đề xuất sử dụng phương pháp điện di sodium fluoride[13] Dòng điện sẽ làm tăng sự khuếch tán các ion SnF2 cũng tác dụng nhưNaF là hình thành CaF2 trong ống ngà Ngoài ra, các nghiên cứu trên SEMcũng chỉ ra rằng bản thân SnF2 cũng tạo thành kết tủa trong các ống ngà mà nótiếp xúc Các hợp chất fluorosilicate hoạt động bằng cách hình thành các kếttủa calcium phosphate từ nước bọt Ammonium hexafluorosilicate[(NH4)2SiF6] hoạt động thông qua sự kết tủa hỗn hợp calcium fluoride vàfluorapatite [12] Các kết tủa là fluorapatite ổn định lắng đọng sâu trong cácống ngà, không bị tác động bởi hoạt động của nước bọt, đánh răng hay quátrình ăn nhai [12]

1.2.3.3 Varnish Fluoride:

Các hợp chất chứa Fluoride có nhiều dạng như kem đánh răng, gel,varnish Tuy nhiên, dạng varnish thường được sử dụng nhiều hơn trong điềutrị nhạy cảm ngà vì dễ sử dụng, đòi hỏi ít dụng cụ [14], không cần máng nên

có thể áp dụng trên bênh nhân nhạy cảm dễ nôn, sử dụng với một lượng nhỏnên giảm số lượng fluoride bị nuốt vào [15] Varnish Fluoride dễ dàng chảyvào các cấu trúc phức tạp, khả năng ngấm vào các ống ngà nhanh hơn, tạomột lớp cách ly với nước bọt, khô nhanh chóng, bám dính tốt trên răng trongvài giờ [16] và có thể đưa vào vùng nhạy cảm sâu dưới lợi, kẽ răng

Một số varnish Fluoride thường được dùng trên lâm sàng nhưDuraphat®, Fluor Protector, Duraflor®, Cavity ShieldTM Trong nghiên cứunày, chúng tôi dùng Fluor Protector chứa 0,1% fluoride Mỗi 1ml varnishchứa 1mg ion fluor (1000ppm) Đây là loại varnish Fluoride có độ nhớt thấpnên dễ thâm nhập sâu hơn vào trong các ống ngà tạo kết tủa CaF2 làm tăngthời gian duy trì kết quả điều trị

1.3 Kính hiển vi điện tử quét ( Scanning Electron Microscope - SEM )

1.3.1 Giới thiệu chung:

Kính hiển vi điện tử quét được McMullan trình bày đầu tiên năm 1948.Đây là phương tiên hữu hiệu để quan sát bề mặt mẫu với độ phóng đại

10 -– 500 000 lần Do đó, trên mẫu vật là ngà răng ta có thể quan sát rõ nétcấu trúc ngà răng và sự hiện diện của các kết tủa của vật liệu trong òng ốngngà

SEM sử dụng một chùm hội tụ của các điện tử năng lượng cao để tạo ramột loạt các tín hiệu ở bề mặt của mẫu vật rắn Những tín hiệu xuất phát từ sựtương tác điện tử - mẫu cho những thông tin về mẫu bao gồm hình thái bênngoài (kết cấu), thành phần hóa học và cấu trúc tinh thể và định hướng của vậtliệu chiếm mẫu

1.3.2 Nguyên tắc hoạt động:

SEM bao gồm các loại tín hiệu: các điện tử thứ cấp ( secondary electrons

- SE), điện tử tán xạ ngược ( back scattered electrons - BSE), tia X(characteristic X- rays), ánh sáng (cathodoluminescence - CL)

Trong SEM, một chùm tia điện tử tập trung vào một khối lượng của mẫuvật, làm vận chuyển năng lượng ngay tại chỗ đó Các điện tử bắn ra được gọi

là các điện tử chính, bật các electron từ mẫu Các electron bật ra gọi là cácđiện tử thứ cấp (SE), chúng được tập hợp lại thành chùm điện tử tán xạ ngược(BSE) từ đó chuyển thành tín hiệu SE cho thấy hình thái và địa hình trên

mẫu, BSE cung cấp sự tương phản trong thành phần mẫu Tia X được sảnxuất bởi các va chạm không đàn hồi của các electron tự do với các electrontrong vỏ của các nguyên tử trong mẫu Các electron bị kích thích trở lại mangnăng lượng thấp hơn Phân tích SEM được coi là "không phá hủy", vì chụp X-quang được tạo ra bởi sự tương tác điện tử không dẫn đến mất khối lượng củamẫu, do đó, nó có thể phân tích các vật liệu tương tự nhiều lần.

SEM có thể tạo ra hình ảnh có độ phân giải rất cao của một bề mặt mẫu,cho thấy chi tiết có kích thước nhỏ hơn 1nm Do tia điện tử rất hẹp, SEM cóthể cho hình ảnh 3D thấy được chiều sâu của mẫu

SEM có khả năng thực hiện các phân tích về vị trí điểm được lựa chọntrên mẫu; phương pháp này đặc biệt hữu ích trong chất lượng hoặc bán địnhlượng xác định thành phần hóa học, cấu trúc tinh thể, và định hướng tinh thể

Hình 1.2 : Kính hiển vi điện tử quét S-4800 (FE-SEM, Hitachi)

1.3.3 Chuẩn bị mẫu sinh học:

Đối với SEM, yêu cầu mẫu hoàn toàn khô, từ buồng mẫu phải là chânkhông cao Vật liệu cứng, khô như gỗ, xương, lông, côn trùng khô hoặc vỏ cóthể được kiểm tra khi ít can thiệp điều trị, nhưng các tế bào sống và các mô vàsinh vật thân mềm thường đòi hỏi cố định hóa học để duy trì và ổn định cấutrúc của chúng Cố định thường bằng cách ủ trong một chất đệm hãm hóa học,

chẳng hạn như glutaraldehyde, đôi khi kết hợp với formaldehyde [17] và chấtkìm hãm khác, hoặc postfixation với osmium tetroxide Các mô cố địnhthường mất nước do không khí khô Có thể thay thế nước trong các tế bào vớicác dung môi hữu cơ như ethanol hay acetone và thay thế các dung môi lầnlượt với một chất lỏng chuyển đổi như cacbon dioxide lỏng Cacbon dioxidesau đó bị loại bỏ nên không có trong mẫu vật khô

1.3.4 Ưu nhược điểm:

1.3.4.1 Ưu điểm:

- Ưu điểm nổi bật của SEM là độ phóng đại lớn, có thể gấp 500.000 lần

- Dễ hoạt động, nhiều ứng dụng chỉ cần chuẩn bị mẫu tối thiểu

- Nhiều ứng dụng, thu thập dữ liệu nhanh ( <5 phút/ 1 hình ảnh)

- Các dữ liệu được định dạng bằng kỹ thuật số

1.3.4.2 Nhược điểm:

- Mẫu phải phù hợp và đặt vững trong buồng mẫu

- Kích thước tối đa chiều ngang là 10cm, chiều dọc hạn chế hơn là 4cm

- Mẫu ướt không thích hợp cho SEM

- Dò EDS của SEM không phát hiện được các yếu tố rất nhẹ (H, He, Li…)

- Mẫu cách điện phải được phủ một lớp dẫn điện, trừ khi thiết bị này cóthể hoạt động trong một chế độ chân không thấp

1.3.5 Dung dịch cố định sử dụng trong quan sát trên SEM

Định hình các mô là bước quan trọng nhất trong việc chuẩn bị mô để quansát trên kính hiển vi điện tử Cố định bao gồm hai bước: sự chấm dứt chức năngcuộc sống bình thường trong các mô (giết chết) và ổn định cấu trúc của các mô(bảo quản) Mục tiêu của cố định là để bảo vệ cấu trúc như một cách trung thựcnhất có thể so với trạng thái sống Ba thông số quan trọng nhất khi cố định là: (1)giữ cho thời gian từ lúc mô bị chết đến lúc cố định là ngắn nhất, (2) giữ cho kíchthước của mô càng nhỏ càng tốt mà không bị mất thông tin hay phá hủy các mô,(3) giữ biến dạng mô mức tối thiểu bằng cách sử dụng các dụng cụ sắc nét vàthực hiên hiện thao tác cần thiết tối thiểu với vật mẫu

Một số dung dịch cố địinh hay được sử dụng như Osmium tetroxide,Formaldehyde, Glutaraldehyde Trong đó, Glutaraldehyde hoặc dialdehydeglutaric (CHO-(CH2)3-CHO) có 2 nhóm aldehyde ở hai đầu của phân tử có khảnăng phản ứng với các nhóm hóa chất tương tự như formaldehyde Chúng sẽtạo liên kết với các peptit liền kề theo chiều không gian Mô cố định trongglutaraldehyde sẽ rộng hơn so với liên kết ngang mô cố định trongformaldehyde và có một số nhóm aldehyde không tham gia phản ứng [18] Cácnhóm aldehyde không tham gia phản ứng này không thể rửa sạch ra khỏi các

mô Glutaraldehyde sẽ từ từ phân hủy để tạo thành axit glutaric và tham giaphản ứng polymerise để tạo thành các hợp chất theo chu kỳ và oligomeric [19]

Ở nghiên cứu này, chúng tôi sử dụng glutaraldehyde 2,.5%.Glutaraldehyde 2,5% trong đệm Cacodylate 0,1M pH 7,2 - 7,4 cố định trongthời gian 2 - 24 giờ (thường là 2 - 3 giờ) Cố định thường được bắt đầu tạinhiệt độ phòng trong 15 - 30 phút sau đó tiếp tục ở 4°C (nếu cắt mẫu địnhhình, mẫu định hình tươi) Cố định ở 4°C làm chậm quá trình tự phân hủy vàlàm giảm co rút mô [20] Rửa trong đệm Cacodylate 0,1M đã được điều chỉnh

về độ thẩm thấu của mẫu để ngăn chặn tổn thương mô

1.3.6 Một số nghiên cứu trước về đặc điểm hình thái ống ngà

Năm 2009, Murilo Baena Lopes và cộng sự nghiên cứu đường kính và

mật độ ống ngà ở 3 độ sâu khác nhau của răng người trên SEM cho kết quả:đường kính ống ngà ở bề mặt (2,42 µm) nhỏ hơn đáng kể (p < 0,05) so vớiđường kính ống lượn ngà răng lớp sâu (2,99 µm) và đường kính ngà răng ở

vị trí trung gian (2,94 µm), mà không khác biệt đáng kể với nhau (p> 0,05)

Số lượng ống ngà/mm2 trên răng người ở vùng sâu (30,595 ± 12,247) nhiềuhơn vùng trung gian (21,006 ± 7,473) và bề mặt (15,385 ± 5,309), lần lượt sựkhác nhau có ý nghĩa thống kê (p<0,05) [21]

Năm 2000, Reinhard Schilke và cộng sự nghiên cứu ở răng hàm lớn thứ ba củangười trên SEM cho kết quả số ống ngà/mm ± SD ở lớp trung gian là 18.781 ± 5855 2

và trung tâm là 21.343 ± 7290 và đường kính ống ngà trung bình ở lớp trung gian /trung tâm ± SD) tương ứng là 2.65 ± 0.19 µm/ 2.90 ± 0.22 µm [22]

1.3.7 Một số nghiên cứu trước về tác động bít kín ống ngà của varnish Fluoride

Nghiên cứu của Hoàng Đạo Bảo Trâm, Hoàng Tử Hùng và cộng sự năm

2008, sử dụng Shellac F, Duraphat và Isodan bôi lên bề mặt ngà răng, quansát dưới SEM và đo độ dẫn thủy lực thấy các vật liệu làm giảm tính thấmđáng kể từ 60% - 76% sau 24h, và sau 7 ngày vẫn còn duy trì kết quả này hơn50% [3]

Năm 2003, César Augusto Galvão Arrais, Carolina Diniz Micheloni vàcộng sự đã dùng SEM để đánh giá khả năng bít tắc ống ngà của ba loại kemđánh răng: Sensodyne (chứa Strontium chloride 10%), Emoform (chứaPotassium nitrate) và Sorriso (chứa Sodium monofluoro - phosphate với 1500ppm Fluoride), cả 3 loại kem này đều chứa calcium carbonate Tỷ lệ ống ngàtắc giảm dần theo thứ tự: chải răng với Sorriso (98,83 ± 3.31 %), chải răngvới Emoform (96.02 ± 5,24 %), chải răng với Sensodyne (80,12 ± 24.65%),không chải răng (37.31 ± 24,22%) ; chải răng không có kem đánh răng (22.92

± 15,19 %) Ba loại kem đánh răng được kiểm tra có tỷ lệ ống ngà tắc tăng sovới nhóm chứng (p = 0,05), nhưng tỷ lệ ống ngà tắc giữa chúng thì tươngđương nhau [2]

Năm 2004, nghiên cứu của César Augusto Galvão Arrais đánh giá khảnăng bít tắc ống ngà của 3 chất: chất cơ bản là kali oxalat / Oxa - Gel ( OX ),chất cơ bản là HEMA và glutaraldehyde / Gluma Desensitizer (GD) và chất

cơ bản là phosphate fluoride / Nupro Gel (AF) Hình ảnh trên SEM thu được

là tất cả các chất này đều có thể đóng các ống ngà OX làm tắc ống ngà bằng

các tinh thể lắng đọng trong lòng của ống Trong khi GL tạo ra một lớp mỏngtrên bề mặt ngà răng còn AF tạo các kết tủa làm đóng các ống ngà [23].

Năm 2009, Shelon Cristina S Pinto và cộng sự đã nghiên cứu in vitrotrên 21 con chuột, cho 84 răng: 36 răng in vitro và 48 răng in vivo Nhóm 1:2% nitrate potassium cộng với 2% sodium fluoride dạng gel Nhóm 2: 2%sodium fluoride dạng vanish Nhóm 3: 3% hydroxyethylcellulose dạng gel.Kết quả 2% nitrate potassium cộng với 2% sodium fluoride gel và 2% sodiumfluoride varnish làm giảm tính thấm ngà thông qua bít tắc các ống ngà Tuynhiên, chúng chỉ mới gây bít tắc được một phần ống ngà trong thời giannghiên cứu 4 ngày Nếu sử dụng lặp đi lặp lại sẽ có thể làm giảm tính thấm,nâng cao hiệu quả lâm sàng trong việc bịt kín ống ngà [24]

Hình 1.3: Hình ảnh trên SEM sau 7 ngày bôi Shellac F (phóng đại 5000x):

(a) bề mặt ống ngà được bịt kín;

(a’) ống ngà cắt theo chiều dọc thấy được độ sâu bít tắc của vật liệu [3]

Chương 2

ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 Đối tượng nghiên cứu:

Đối tượng trong nghiên cứu là 20 chiếc răng hàm nhỏ thứ nhất vĩnh viễnhàm trên được nhổ do chỉ định chỉnh nha trong độ tuổi 18 - 25

2.1.1 Tiêu chuẩn lựa chọn mẫu răng:

- Răng được nhổ theo chỉ định chỉnh nha đã đóng chóp, chưa được gắnmắc cài trước đó

- Răng khỏe mạnh, không bị chấn thương trước đó

- Răng không có tổn thương sâu, mối hàn hay nứt vỡ

- Răng không bị bệnh lý tủy hay bệnh lý cuống

- Răng không mang phục hình

- Răng không dị dạng, không có bất thường trong quá trình phát triển răng

- Quá trình nhổ răng bằng kìm lắc đều với lực vừa phải, không dùng bẩy

để tránh tổn thương cổ răng, răng sau nhổ không bị rạn nứt hay vỡ

2.1.2 Tiêu chuẩn loại trừ:

Răng không đạt các tiêu chuẩn trên

2.2 Phương pháp nghiên cứu

Nghiên cứu thực nghiệm theo phương pháp mù đôi, so sánh đối chứng

2.2.1 Cỡ mẫu :

20 răng hàm nhỏ vĩnh viễn

2.2.2 Phương tiện nghiên cứu:

2.2.2.1 Dụng cụ:

- Bộ khay khám: gương, kẹp gắp, thám châm

- Bông gòn vô khuẩn

- Cốc

- Tay khoan nhanh, mũi khoan tròn nhỏ, mũi khoan chóp ngược, mũikhoan trụ

- Tay khoan chậm, đĩa cắt

- Dao Stainless Steel Bladess (GEM® Single Edge)

- Bàn chải kẽ

Hình 2.1: Bàn chải kẽ

2.2.2.2 Vật liệu:

- Varnish Fluoride: Fluor Protector của Vivodent

Hình 2.21.: Fluor Protector (IvoclarVivadent)

- Dung dịch nước bọt nhân tạo

- Bàn chải kẽ

Hình 2.2 Bàn chải kẽ

Nhóm 1: 10 răng nghiên cứu về đặc điểm hình thái ống ngà.

Nhóm 2: 10 răng nghiên cứu về đặc điểm bít ống ngà của varnish Fluoride

Các răng thuộc nhóm 1 tiến hành các bước sau:

Bước 1: Dùng bút đánh dấu một vùng kích thước 2 x 3mm ở cổ răng mặt ngoài Dùng đĩa cắt chia cắt thân – chân răng và chia đôi thân răng theo chiềugần- xa , giữ lại phần thân răng phía ngoài Lấy bỏ tủy răng sót lại ở mẫurăng Dùng đĩa cắt cắt bỏ 2/3 thân răng phía trên, giữa lại mẫu là 1/3 cổ răng

Bước 2: Chia đôi thân răng theo chiều gần -– xa, cắt bỏ chân răng bằng

đĩa cắt, giữ lại phần thân răng được đánh dấu Lấy bỏ tủy răng còn sót lại ởmẫu răng

Bước 3: Mỗi mẫu răng cắt tạo một đĩa men - ngà có kích thước lớn hơn

vùng đánh dấu 1mm theo cả chiều trên -– dưới và gần -– xa bằng đĩa cắt cótưới nước

Bước 4: Dùng đĩa cắt có tưới nước tạo một rãnh sâu 1mm ở mặt ngoài,

phía trên và dưới của đĩa men -– ngà sao cho 3 rãnh này tạo thành một rãnh

liên tục và đi qua tủy răng

Bước 5: Sau đó, tiến hành cố định và xử lý mẫu:

- Cố định mẫu bằng 2,5% Glutaraldehyde trong đệm Cacodylate 0,1M,

pH 7,2- 7,4 (trong 1 giờ hoặc qua đêm ở nhiệt độ 40 C)

- Rửa mẫu bằng dung dịch Cacodylate 0,1M (5 phút/1 lần x3 lần)

- Cố định mẫu bằng OsO4 1% trong Cacodylate 0,1M trong 1 giờ ở nhiệt

độ phòng

- Rửa mẫu bằng dung dịch Cacodylate 0,1M (5 phút/1 lần x 2 lần)

- Hút nước trong mẫu bằng ethanol các nồng độ 50 , 700 , 800 0 , 900 ,1000 (5 phút/1 lần x 2 lần)

Bước 6: Đặt dao Stainless Steel Bladess vào rãnh tạo ở bước 4, dùng lực

đủ mạnh để tách đôi đĩa ngà Mẫu là ½ đĩa men -– ngà vừa tạo

Bước 7: Gắn mẫu lên đế Phủ mẫu bằng một lớp dẫn điện Pt- Pd.

Mẫu được quan sát trên SEM để đánh giá đặc điểm hình thái giải phẫucủa ống ngà vùng cổ răng của răng hàm nhỏ thứ nhất hàm trên

Các răng thuộc nhóm 2 được xử lý theo các bước sau:

Bước 1: Dùng bút đánh dấu ở cổ răng mặt ngoài một vùng có kích thước

2,5 x 4,5mm

Bước 2: Dùng mũi khoan tròn nhỏ đường kính 1mm tạo “ cửa sổ men”

sâu 1mm, mũi khoan chóp ngược tạo đáy bằng và mũi khoan trụ tạo thànhphẳng ở vùng đã đánh dấu Luôn tưới nước trong khi khoan để giảm mùn ngàgây tắc ống ngà

Bước 3: Dùng đĩa cắt đường kính 0,3mm cắt bỏ phần thân và chân răng

cách “cửa cổ men” 1mm, sau đó chia dọc phần răng còn lại theo hướng gần

xa, giữ lại nửa răng phía ngoài, lấy bỏ tủy răng sót lại

Bước 4: Dùng đĩa cắt tạo một rãnh chia đôi vùng “cửa sổ men” theo

hướng trên dưới sâu khoảng 2mm dưới tia nước liên tục Lúc này, “cửa sổmen” được chia làm 2 phần dính vào nhau Dùng bút đánh dấu ½ “cửa sổmen” để phân biệt với nửa còn lại

Bước 5: Dùng bàn chải nhỏ chải vùng “cửa sổ men” dưới tia nước muối

sinh lý dạng truyền tĩnh mạch bơm mạnh liên tục 5 phút để cuốn trôi mùn ngàbít tắc

Bước 6: Etching vùng “cửa sổ men” bằng acid photphoric 37% trong 10s

để loại bỏ mùn ngà, bộc lộ ống ngà Sau đó, rửa trôi acid bằng nước muốisinh lý và ngâm răng vào bể rung siêu âm trong 20 phút để loại bỏ mùn ngà

và cặn bẩn còn lại

Bước 7: Xì khô bề mặt răng Dùng lá thép matrix đặt tại rãnh chia đôi

“cửa sổ men” để ngăn varnish Fluoride không lan sang nửa bên cạnh Sau đó,dùng tăm bông bôi 1 lớp varnish Fluoride lên ½ “cửa sổ men” đã được đánhdấu, ½ còn lại để nguyên Xì khô nhẹ bề mặt và để khô trong 1 phút Sau đó,lấy bỏ lá matrix, ngâm mẫu vào trong nước bọt nhân tạo Hàng ngày, chải đĩangà răng 1 lần, trong thời gian 1 phút/1 răng với 2 bàn chải riêng biệt chotừng phần và có lá chắn matrix Tia nước muối sinh lý được tưới hướng từrãnh ra ngoại vi Thay nước bọt hàng ngày

Bước 8: Sau 7 ngày, lấy mẫu ra và xì khô bề mặt “cửa sổ men” Dùng lá

thép matrix để cách ly 2 nửa Dùng tăm bông bôi 1 lớp varnish Fluoride lên ½

“cửa sổ men” được đánh dấu Xì khô nhẹ bề mặt trong 1 phút Sau đó lấy bỏ

lá matrix và ngâm mẫu trong nước bọt nhân tạo

Bước 9: 7 ngày tiếp theo, thực hiện lại như bước 8 Xì khô, bôi varnish

Fluoride ½ “cửa sổ men” đã được đánh dấu Hàng ngày, chải răng như trênbước 7 Thay nước bọt nhân tạo hàng ngày

Bước 10: Sau khi thực hiện xong bước 9, lấy 5 răng bất kỳ xì khô nhẹ bề

mặt trong 1 phút Mẫu răng được cố định và xử lý mẫu như bước 5 của nhóm

1 để soi bề mặt, đánh giá hiệu quả bít ống ngà tức thì của Fluoride

Mẫu răng sau khi soi bề mặt được tạo rãnh sâu 1mm ở phía trên và dưới

“cửa sổ men” theo trục dọc của mẫu răng ở cả hai nửa Đặt dao Stainless SteelBladess tại rãnh vừa tạo, dùng lực tách “cửa sổ men” thành 3 phần Chọn 2phần: 1 nửa của bên có bôi Fluoride và 1 nửa không bôi Fluoride Sau đó gắn

2 phần của một mẫu lên đế, phủ lớp dẫn điện và quan sát trên SEM để đánhgiá sự xâm nhập của vanish Fluoride vào ngà răng.

Bước 11: 5 mẫu răng còn lại vẫn ngâm trong nước bọt nhân tạo và tiếp

tục được chải răng 1 lần/ ngày, mỗi nửa được chải bằng bàn chải riêng biệttrong vòng 1 phút trong 4 tuần tiếp theo như bước 7 Thay nước bọt nhân tạohàng ngày

Bước 12: Sau 4 tuần, tiến hành xử lý mẫu như bước 10 và soi trên SEM

để đánh giá kết quả sau 4 tuần ở bề mặt Sau khi soi bề mặt, đĩa ngà răngđược bẻ dọc để quan sát lát cắt dọc đánh giá sự tạo nút CaF2 trong ống ngà.Chụp lại hình ảnh sau mỗi lần soi trên SEM

2.2.4 Ghi nhận kết quả nghiên cứu

2.2.4.1 Đánh giá kết quả của nhóm 1:

Hình ảnh ống ngà trên lát cắt dọc được quan sát tại 3 vùng: ngoại vi ( phíagần men răng), trung gian, và trung tâm (sát tủy) Trên mỗi mẫu, chụp 5 ảnh/1vùng, mỗi vùng đo kích thước của 5 ống ngà bất kỳ và 5 khoảng gian ngà ởmức phóng đại 2000 lần

2.2.4.2 Đánh giá kết quả của nhóm 2:

- Mẫu soi bề mặt phần không bôi Fluoride được chụp 10 ảnh ở mức phóng đại2000x, ghi nhận mật độ ống ngà trên một đơn vị diện tích bề mặt Tại vitrường có mức phóng đại 2000x, diện tích bề mặt bề mặt đo được là:

S= 64 µm x 47 µm = 3008 µm2 Công thức tính số lượng ống ngà là:

(số ống ngà/ mm2 )Với xx là số lượng ống ngà ống ngà trung bình

- Mẫu soi bề mặt phần bôi varnish Fluoride được chụp 5 ảnh ngẫu nhiên ở độ phóng đại 2000 lần tại 2 thời điểm tức thì và sau 1 tháng Đếm số lượng ống ngà được bít hoàn toàn, bán phần và không được bít Tính tỷ lệ phần trăm ốngngà mỗi loại tại 2 thời điểm