... trình nhân nhanh hoa Lily kỹ thuật nuôi cấy lớp mỏng tế bào 2.2 Nhiệm vụ nghiên cứu - Tạo vật liệu khởi đầu từ đế hoa bầu nhụy loại noãn hoa Lily - Tái sinh củ in vitro từ lớp mỏng đế hoa Lily... 88 ngày [4] 1.6 Nuôi cấy mô tế bào thực vật ứng dụng công tác nhân giống 1.6.1 Khái niệm nuôi cấy mô tế bào Nuôi cấy mô tế bào thực vật phạm trù khái niệm chung cho tất loại nuôi cấy từ nguyên... trƣờng nuôi cấy tế bào thay đổi tùy theo loại thực vật, loại tế bào, mô, quan đƣợc nuôi cấy, giai đoạn sinh trƣởng, phát triển mẫu cấy nhƣ mục đích nuôi cấy Tuy nhiên môi trƣờng nuôi cấy mô tế bào
TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM HÀ NỘI KHOA SINH - KTNN =====***===== NGUYỄN THỊ HỒNG HẠNH NHÂN NHANH GIỐNG CÂY HOA LILY BẰNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY LỚP MỎNG TẾ BÀO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Chuyên ngành: Sinh lý học thực vật Ngƣời hƣớng dẫn khoa học PGS.TS Lê Văn Sơn HÀ NỘI - 2015 Trường Đại học Sư phạm Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp LỜI CẢM ƠN Trƣớc hết em xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành sâu sắc đến thầy giáo PGS.TS Lê Văn Sơn– Viện Công nghệ Sinh học tận tình hƣớng dẫn, bảo tạo điều kiện giúp đỡ em suốt trình thực đề tài Em xin chân thành cảm ơn ban Lãnh đạo trƣờng Đại học Sƣ phạm Hà Nội 2, Ban chủ nhiệm khoa Sinh – KTNN trƣờng học Sƣ phạm Hà Nội 2, tạo điều kiện cho em học tập hồn thành khóa luận Trong thời gian thực đề tài em nhận đƣợc giúp đỡ tận tình thầy ThS La Việt Hồng Mai Thị Hồng- phịng thí nghiệm Sinh lí thực vật, thầy Ong Xuân Phong- Trung tâm Hỗ trợ Nghiên cứu Khoa học Chuyển giao Công nghệ, nhân em xin chân thành cảm ơn Em chân thành cảm ơn tập thể cán Phòng Nuôi cấy mô tế bào thực vật, Trung tâm Hỗ trợ Nghiên cứu Khoa học Chuyển giao Công nghệ, Phịng thí nghiệm sinh lí thực vật, khoa Sinh- KTNN, trƣờng Đại học Sƣ phạm Hà Nội nhiệt tình giúp đỡ tạo điều kiện suốt trình em thực đề tài Cuối tơi xin cảm ơn ngƣời thân bạn bè động viên, tạo điều kiện giúp đỡ suốt thời gian tơi học tập nhƣ hồn thành khóa luận Mặc dù cố gắng nhƣng điều kiện thời gian trình độ chun mơn cịn nhiều hạn chế nên khơng tránh khỏi thiếu sót, em mong nhận đƣợc góp ý thầy để khóa luận em hồn thiện Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng năm 2015 Sinh viên thực Nguyễn Thị Hồng Hạnh Nguyễn Thị Hồng Hạnh K37A - Sinh Trường Đại học Sư phạm Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan kết nghiên cứu đề tài: Nhân nhanh giống hoa Lily kỹ thuật nuôi cấy lớp mỏng tế bào.” kết nghiên cứu riêng PGS.TS Lê Văn Sơn hƣớng dẫn không trùng lặp với kết tác giả khác Hà Nội, ngày tháng năm 2015 Sinh viên thực Nguyễn Thị Hồng Hạnh Nguyễn Thị Hồng Hạnh K37A - Sinh Trường Đại học Sư phạm Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT α – NAA α - Napthalene acelic acid Agar Thạch BAP - benzyl amino purin CT Công thức ĐC Đối chứng IAA - indole - acetic acid IBA Indode - - butyric acid H2O2 Hydro peroxide (nƣớc oxy già) HgCl2 Thủy ngân Clorua MS Murashige and Skoog, 1962 Nguyễn Thị Hồng Hạnh K37A - Sinh Trường Đại học Sư phạm Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp DANH MỤC BẢNG Bảng 1.3.1: Sự sinh trƣởng số giống hoa Lily 11 Bảng 1.3.2: Thời gian sinh trƣởng hoa Lily 12 Bảng 1.3.3: Đặc điểm hoa số giống Lily 13 Bảng 2.3.1: Các thiết bị sử dụng nuôi cấy mô thực vật 36 Bảng 2.6.1: Các cơng thức thí nghiệm tạo vật liệu in vitro 39 Bảng 2.6.2: Các công thức tái sinh chồi 40 Bảng 2.6.3: Công thức nhân nhanh củ nhỏ Lily 41 Bảng 2.6.4: Công thức tạo củ to Lily 42 Bảng 2.6.5: Công thức nghiên cứu ảnh hƣởng 2,4-D& α-NAA đến hình thành rễ Lily ………………………………………………………… 42 Bảng 3.1: Hiệu khử trùng cơng thức thí nghiệm…………………… 44 Bảng 3.2: Ảnh hƣởng số chất điều hòa sinh trƣởng lên tái sinh mô sẹo mẫu Lily nuôi cấy 47 Bảng 3.3: Ảnh hƣởng số cơng thức thí nghiệm lên nhân nhanh củ nhỏ Lily…………………………………………………………………… … 52 Bảng 3.4 Ảnh hƣởng hàm lƣợng saccarozơ bổ sung vào môi trƣờng ni cấy đến kích thƣớc củ Lily in vitro 55 Bảng 3.5 Ảnh hƣởng 2,4- D α- NAA tới hình thành rễ hoa Lily in vitro 58 Nguyễn Thị Hồng Hạnh K37A - Sinh Trường Đại học Sư phạm Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp DANH MỤC HÌNH Hình 2.6.1 Sơ đồ nghiên cứu 38 Hình 3.1.1 Biểu đồ thể ảnh hƣởng chất khử trùng lên mẫu Hoa Lily 44 Hình 3.1.2 Quy trình tạo vật liệu khởi đầu in vitro từ đế hoa hoa Lily 46 Hình 3.2.1 Biểu đồ thể ảnh hƣởng chất điều hịa sinh trƣởng lên tái sinh mơ sẹo Lily nuôi cấy 48 Hình 3.2.2 Ảnh hƣởng số cơng thức thí nghiệm tới hình thành mô sẹo Lily 51 Hình 3.3.1 Sự tạo củ mơi trƣờng MS bổ sung 2,4-D 0,8 53 Hình 3.3.2 Sự tái sinh chồi tạo củ môi trƣờng MS bổ sung BAP 1,5+ 2,4-D 1,0 54 Hình 3.3.3 Sự tái sinh chồi tạo củ môi trƣờng MS bổ sung BAP 0,25 + 2,4-D 1,0 54 Hình 3.4.1 Biểu đồ thể ảnh hƣởng hàm lƣợng đƣờng tới khối lƣợng củ Lily nuôi cấy 55 Hình 3.4.1 Biểu đồ thể ảnh hƣởng hàm lƣợng đƣờng tới khối lƣợng củ Lily nuôi cấy 55 Hình 3.4.2 Ảnh hƣởng hàm lƣợng đƣờng saccarozơ tới kích thƣớc củ Lily in vitro 57 Hình 3.5.1 Ảnh hƣởng 2,4- D α- NAA tới khả rễ Lily in vitro 59 Hình 3.5.2 Sự rễ Lily in vitro 61 Hình 3.6 Lily đƣa môi trƣờng tự nhiên 63 Nguyễn Thị Hồng Hạnh K37A - Sinh Trường Đại học Sư phạm Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 Lí chọn đề tài Mục đích nhiệm vụ nghiên cứu 2.1 Mục đích nghiên cứu 2.2 Nhiệm vụ nghiên cứu Ý nghĩa lí luận ý nghĩa thực tiễn NỘI DUNG CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu hoa Lily 1.1.1 Nguồn gốc hoa Lily 1.1.2 Vị trí phân loại 1.1.3 Đặc điểm thực vật học sinh thái hoa Lily 1.1.3.1 Đặc điểm thực vật học 1.1.3.2 Đặc điểm sinh thái hoa Lily 1.2 Giá trị kinh tế hoa Lily 1.3 Đặc tính sinh trƣởng hoa Lily 1.4 Tình hình sản xuất tiêu thụ hoa Lily giới Việt Nam 13 1.4.1 Tình hình sản xuất tiêu thụ hoa Lily giới 13 1.4.2 Tình hình sản xuất tiêu thụ hoa Lily Việt Nam 14 1.5 Tình hình nghiên cứu hoa Lily giới Việt Nam lĩnh vực nuôi cấy mô tế bào 15 1.5.1 Tình hình nghiên cứu hoa Lily giới 15 1.5.2 Tình hình nghiên cứu hoa Lily Việt Nam 16 1.6 Nuôi cấy mô tế bào thực vật ứng dụng công tác nhân giống 22 Nguyễn Thị Hồng Hạnh K37A - Sinh Trường Đại học Sư phạm Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp 1.6.1 Khái niệm ni cấy mô tế bào 22 1.6.2 Cơ sở khoa học nuôi cấy mô tế bào thực vật 22 1.6.2.1 Tính tồn tế bào thực vật 22 1.6.2.2 Sự phân hóa phản phân hóa tế bào 25 1.7 Các yếu tố ảnh hƣởng đến q trình ni cấy mơ tế bào thực vật 23 1.7.1 Vật liệu nuôi cấy 23 1.7.2 Môi trƣờng nuôi cấy 24 1.7.3 Ảnh hƣởng điều kiện nuôi cấy 28 1.8 Các nguyên tắc kỹ thuật nhân giống in vitro 31 1.9 Ứng dụng nuôi cấy in vitro sản xuất 30 CHƢƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 33 2.1 Vật liệu thực vật 33 2.2 Thời gian địa điểm nghiên cứu 33 2.3 Dụng cụ thiết bị thí nghiệm 33 2.3.1 Thiết bị 33 2.3.2 Dụng cụ 34 2.4 Môi trƣờng nuôi cấy 34 2.5 Điều kiện nuôi cấy 34 2.6 Phƣơng pháp nghiên cứu 35 2.6.1 Phƣơng pháp bố trí thí nghiệm 38 2.6.2 Phƣơng pháp xử lí số liệu 43 3.1 Tạo vật liệu in vitro 44 3.2.Tái sinh củ in vitro từ lớp mỏng tế bào đế hoa bầu nhụy loại noãn hoa Lily 46 3.3 Nhân nhanh củ nhỏ Lily điều kiện tối 50 Nguyễn Thị Hồng Hạnh K37A - Sinh Trường Đại học Sư phạm Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp 3.4 Ảnh hƣởng hàm lƣợng saccarozơ bổ sung vào mơi trƣờng ni cấy đến kích thƣớc củ Lily in vitro 55 3.5 Tạo củ Lily hoàn chỉnh………………………………………………….58 3.6 Rèn luyện in vitro tự nhiên 61 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 64 Kết luận 64 Kiến nghị 65 TÀI LIỆU THAM KHẢO Error! Bookmark not defined.65 PHỤ LỤC 7070 Nguyễn Thị Hồng Hạnh K37A - Sinh Trường Đại học Sư phạm Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp MỞ ĐẦU Lí chọn đề tài Từ ngàn xƣa ông cha ta chơi hoa, yêu hoa coi nhƣ ăn tinh thần vơ giá, ngƣời bạn tâm giao Ngày nay, với tiến phát triển xã hội hoa tiếp tục đƣợc khai thác sử dụng nhiều lĩnh vực phục vụ ngƣời nhƣ y học làm thuốc, nghiên cứu khoa học, sản xuất nƣớc hoa… Cùng với đời sống ngƣời ngày cao nhu cầu hoa tăng lên Thị hiếu vậy, song song với loài hoa truyền thống nhƣ Cúc, Hồng, Cẩm chƣớng… loài hoa cao cấp nhƣ Lan, Lily đƣợc ƣa chuộng giới Việt Nam Trong lồi hoa cao cấp hoa Lily lồi hoa có giá trị cao đƣợc yêu chuộng vẻ đẹp lạ thƣờng, chất lƣợng hoa cao, hƣơng thơm quyến rũ, màu sắc đa dạng, trang nhã Tuy nhiên, Lily thể lồi hoa khó trồng, cần kỹ thật phức tạp sinh trƣởng, phát triển chúng phụ thuộc nhiều vào điều kiện thời tiết Hơn nữa, thực tế cho thấy hầu hết giống hoa Lily Việt Nam đƣợc nhập từ nƣớc ngồi với giá thành cao (7- 10.000đ/củ), chất lƣợng khơng đảm bảo dễ bị thối hóa nấm, vi khuẩn, virus…Vì suất thấp, chất lƣợng hoa Lily giảm, việc sản xuất hoa Lily nhiều phụ thuộc Đây hạn chế trồng sản xuất hoa Lily mà nƣớc ta cần phải khắc phục Xuất phát từ thực trạng trên, nhằm góp phần vào phát triển mạnh quy mô trồng Lily nhƣ hạ giá thành tạo nguồn giống bệnh cung cấp cho thị trƣờng, tiến hành nghiên cứu đề tài: “Nhân nhanh giống hoa Lily phƣơng pháp nuôi cấy lớp mỏng tế bào thực vật” Nguyễn Thị Hồng Hạnh K37A - Sinh Trường Đại học Sư phạm Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp Trên giống Lily nghiên cứu, tỉ lệ tạo củ 100% cơng thức thí nghiệm, tăng nồng độ đƣờng saccarozơ ảnh hƣởng rõ rệt tới khả tạo củ tăng khối lƣợng củ Trong phạm vi thí nghiệm, nồng độ đƣờng cao q trình tích lũy chất dinh dƣỡng vào củ in vitro mạnh mẽ, đặc biệt điều kiện tối hoàn toàn Điều thể qua hệ số nhân củ, kích thƣớc khối lƣợng củ lớn tăng nồng độ đƣờng, đặc biệt công thức 90g đƣờng/l MS Khi tiếp tục tăng nồng độ đƣờng lên 120g/l mơi trƣờng có tƣợng mẫu bị héo tạo môi trƣờng ƣu trƣơng so với nồng độ đƣờng củ Tuy nhiên, tích lũy dinh dƣỡng vào củ nhiều so với công thức 90g đƣờng Vì vậy, để có tỉ lệ phát sinh kích thƣớc củ lớn, tiết kiệm ngun liệu sử dụng 90g đƣờng/l MS pha mơi trƣờng cho thí nghiệm khác Nguyễn Thị Hồng Hạnh 56 K37A - Sinh Trường Đại học Sư phạm Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp 30g đƣờng 60g đƣờng 90g đƣờng 120g đƣờng Hình 3.4.2 Ảnh hưởng hàm lượng đường saccarozơ tới kích thước củ Lily in vitro Nguyễn Thị Hồng Hạnh 57 K37A - Sinh Trường Đại học Sư phạm Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp 3.5 Tạo củ Lily hoàn chỉnh Bảng 3.5 Ảnh hƣởng 2,4- D α- NAA tới hình thành rễ hoa Lily in vitro Số rễ tạo CT Số mẫu thành Chiều dài rễ Thời gian hình thành rễ mẫu (cm) (ngày) 3,33 1,5 23 2,75 3,5 10 3 2,33 1,3 25 10,00 2,0 20 7,14 1,3 21 6 5,17 2,1 21 6,66 2,0 19 Nguyễn Thị Hồng Hạnh 58 K37A - Sinh Trường Đại học Sư phạm Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp 10 10 số rễ mẫu 7,14 6,66 5,17 3,33 2,75 2,33 CT1 CT2 CT3 CT4 CT5 CT6 CT7 3,5 3,5 chiều dài rễ 2,5 2 1,5 CT6 CT7 1,3 1,3 1,5 2,1 0,5 CT1 25 CT2 CT3 CT4 thời gian hình thành rễ 25 23 CT5 20 20 21 21 19 15 10 10 CT1 CT2 CT3 CT4 CT5 CT6 CT7 Hình 3.5.1 Ảnh hưởng 2,4- D α- NAA tới khả rễ Lily in vitro Nguyễn Thị Hồng Hạnh 59 K37A - Sinh Trường Đại học Sư phạm Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp Phân tích bảng số liệu hình 3.5.1 cho thấy, dƣới tác dụng hormon nhóm auxin tất mẫu rễ công thức nghiên cứu Tuy nhiên thời gian số theo dõi hình thành rễ có khác biệt cơng thức: Sự tạo thành rễ CT3 (2,3 rễ/ mẫu) thời gian hình thành rễ dài Cơng thức tạo rễ tốt CT4 (α- NAA 0,1) - tạo nhiều rễ (10 rễ/ mẫu) Cũng cho rễ nhanh CT2 (2,4-D 0,8) rễ sau 10 ngày Tuy nhiên tạo rễ công thức phụ thuộc nhiều yếu tố: lƣợng hormon nội sinh, ánh sáng, tuổi mẫu đặc điểm di truyền mẫu Quá trình nghiên cứu cho thấy rằng, tuổi mẫu lớn thời gian tạo rễ nhanh; tƣơng tự mẫu nhiều lá, để sáng có tổng hợp auxin nội sinh rễ tạo thành nhanh so với mẫu khác có cơng thức Nhƣ vậy, sử dụng CT2 (2,4-D 0,8) CT4 (α- NAA 0,1) giai đoạn tạo rễ Lily in vitro Nguyễn Thị Hồng Hạnh 60 K37A - Sinh Trường Đại học Sư phạm Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp 2,4- D 0,8 α-NAA 0,1 Hình 3.5.2 Sự rễ Lily in vitro Nguyễn Thị Hồng Hạnh 61 K37A - Sinh Trường Đại học Sư phạm Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp 3.6 Rèn luyện tự nhiên Đây giai đoạn khó khăn nhân giống vơ tính Lily in vitro đƣợc nghiên cứu điều kiện ổn định dinh dƣỡng, ánh sáng, nhiệt độ độ ẩm; chuyển đất (điều kiện tự nhiên hoàn toàn khác): dinh dƣỡng thiếu, ánh sáng mạnh, nhiệt độ cao, ẩm độ thấp nên dễ nƣớc khơ héo Vì vậy, vƣờn ƣơm phải đảm bảo tránh đƣợc yếu tố bất lợi (nhiệt độ mát mẻ, ánh sáng, độ ẩm phù hợp) Hơn nữa, Lily lồi hoa khó tính u cầu chăm sóc, ni dƣỡng Chúng cần chế độ đinh dƣỡng cao, thích hợp trồng điều kiện nhiệt độ thấp (20- 25oC) Đối với Lily, cần rèn luyện dần để thích nghi với nhiệt độ bên ngồi, tránh tƣới q nhiều nƣớc củ Lily dễ bị thối Trƣớc chuyển nên rửa agar sau nhúng vào dung dịch Daconil (10g/10 lít nƣớc) 15 phút để tránh nấm mốc cho mẫu Trong thí nghiệm tơi kiểm tra sức sống Lily in vitro đƣa môi trƣờng bƣớc đầu rèn luyện in vitro Kết thu đƣợc với giá thể trên, thử nghiệm với 30 mẫu, ban đầu nhận thấy sinh trƣởng mạnh, rễ nhanh Tuy nhiên, sau tuần 50% số sống sót; sau 16 ngày số lại chiếm 20%; sau tuần cịn lại 10% số Qua quan sát tìm hiểu nhận nguyên nhân chủ yếu nhƣ sau: Thứ nhất, đƣa môi trƣờng đất chƣa agar bám rễ, chƣa xử lí qua chất chống nấm mốc nên trồng vào đất nấm mốc vi khuẩn từ đất, khơng khí xâm nhập gây thối rễ xuất mốc quanh gốc Thứ hai, Lily khó tính nhu cầu dinh dƣỡng tƣới nƣớc nên tƣới nhiều, đất ƣớt dễ gây thối rễ Lily Nguyễn Thị Hồng Hạnh 62 K37A - Sinh Trường Đại học Sư phạm Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp Hình 3.6 Lily đƣa mơi trƣờng tự nhiên Nguyễn Thị Hồng Hạnh 63 K37A - Sinh Trường Đại học Sư phạm Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Trên sở kết thực nghiệm, bƣớc đầu rút kết luận sau: Sử dụng hóa chất NaOCl 5% 12 phút cho hiệu khử trùng bầu nhụy đế hoa Lily cao Chế độ tối hoàn toàn phù hợp cho việc hình thành mơ sẹo tạo củ từ đế hoa bầu nhụy hoa Lily Môi trƣờng MS có bổ sung BAP 0,25+ 2,4D 1,0 mơi trƣờng thích hợp cho hình thành mơ sẹo đồng tất mẫu, môi trƣờng nhân nhanh củ nhỏ tốt Môi trƣờng MS với 90g đƣờng giúp hình thành củ có kích thƣớc khối lƣợng củ Để tạo hồn chỉnh cho Lily rễ môi trƣờng chứa 0,1 mg/l α- NAA tạo rễ nhanh công thức 2,4-D 0,8 mg/l Đề nghị Tiếp tục nghiên cứu môi trƣờng nuôi cấy khác đến khả nhân nhanh tạo củ to Lily, ảnh hƣởng α- NAA nồng độ lớn 0,5mg/l tới khả tạo rễ Lily in vitro Nghiên cứu thêm giai đoạn sau nuôi cấy in vitro nhƣ giai đoạn vƣờn ƣơm với giá thể khác để biết khả sinh trƣởng loại giá thể Nguyễn Thị Hồng Hạnh 64 K37A - Sinh Trường Đại học Sư phạm Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Nguyễn Thị Lý Anh, Nguyễn Thị Hƣơng, Nguyễn Quang Thạch, 2005, Nghiên cứu tạo củ in vitro sinh trưởng Lily trồng từ củ in vitro Tạp chí nơng nghiệp phát triển nông thôn (kỳ 1, tr.33- 35) Vũ Lan Anh, 2006, Hồn thiện quy trình nhân nhanh hoa Lilium Topgum phương pháp nuôi cấy lát mỏng vảy củ nhân giống in vitro, Báo cáo khóa luận tốt nghiệp Lê Trần Bình, Hồ Hữu Nhị, Lê Thị Muội (1997), Công nghệ sinh học thực vật cải tiến giống trồng, (Giáo trình cao học nơng nghiệp), Nxb Nông nghiệp Hà Nội Đặng Văn Đông, Đinh Thế Lộc, 2004, Công nghệ trồng hoa cho thu nhập cao- Cây hoa Lily, NXB Lao động – xã hội Hà Nội Dƣơng Thị Thu Hƣơng, 2001, Nghiên cứu nhân nhanh giống hoa Loa kèn chịu nhiệt Lilium formolongo phương pháp nuôi cấy in vitro Trần Lan Hƣơng, Trần Tuấn Anh, Phạm Thanh Hƣơng (2006), Tìm hiểu giới thực vật, Nxb Giáo dục Dƣơng Công Kiên (2002), Nuôi cấy mô thực vật, Nxb Đại học Quốc gia TP Hồ Chí Minh Dƣơng Cơng Kiên (2003), Nuôi cấy mô thực vật II, Nxb Đại học Quốc gia TP Hồ Chí Minh Nguyễn Quý Khang, Kiều Đức Thành (1993), Giáo trình tin học sở, tập 1, Trƣờng ĐHSP Hà Nội 10 Nguyễn Quý Khang, Kiều Đức Thành (1993), Giáo trình tin học sở, tập 2, Trƣờng ĐHSP Hà Nội Nguyễn Thị Hồng Hạnh 65 K37A - Sinh Trường Đại học Sư phạm Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp 11 Nguyễn Xuân Linh, Nguyễn Thị Kim Lý (2005), Ứng dụng công nghệ sản xuất hoa, Nxb Lao động 12 Mai Xuân Lƣơng, 1993, Ứng dụng nuôi cấy mô nhân giống hoa Huệ tây, NXB Nông nghiệp 13 Lƣơng Văn Mạnh, 2002, Nghiên cứu phương pháp chuyển gen Agrobacterium tumefaciens vào hoa Lily 14 Trần Văn Minh (1995), Ni cấy mơ tế bào thực vật, Giáo trình Đại học, Viện Đại học mở bán công TP Hồ Chí Minh 15 Nguyễn Văn Mã, La Việt Hồng, Ong Xuân Phong, Phương pháp nghiên cứu sinh lý học thực vật Giáo trình Đại học, trƣờng ĐHSP Hà Nội 16 Dƣơng Tấn Nhựt, 1994, Nhân giống hoa Huệ tây phương pháp ni cấy vảy củ, Tạp chí sinh học 17 Dƣơng Tấn Nhựt, Trần Ngọc Thủy Tiên, Mai Thị Ngọc Hƣơng, Nguyễn Thị Thanh Hiền, Phan Xuân Huyền, Bùi Văn Lệ, Đỗ Năng Vịnh, Một số nghiên cứu hạt nhân tạo hoa Lily (Lilium spp), Tạp chí cơng nghệ sinh học 2,3,tr.359- 370 18 Đỗ Minh Phú, Đồn Thị Thùy Vân, Đặng Văn Đơng, Trịnh Khắc Quang “ Nghiên cứu hồn thiện quy trình cơng nghệ nhân giống hoa Lily phương pháp in vitro” 19 Hoàng Thị Sản, 2006, Phân loại học thực vật, NXB giáo dục 20 Hà Minh Tâm, Bài giảng phân loại học thực vật, trƣờng Đại học Sƣ phạm Hà Nội 21 Nguyễn Quang Thạch, Nguyễn Thị Lý Anh, Nguyễn Thị Phƣơng Thảo (2005), Giáo trình cơng nghệ sinh học Nông nghiệp, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội 22 Nguyễn Quang Thạch, Nguyễn Thị Lý Anh, Nguyễn Xuân Trƣờng (1998), "Thử nghiệm dung dịch dinh dưỡng cho việc trồng Nguyễn Thị Hồng Hạnh 66 K37A - Sinh Trường Đại học Sư phạm Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp số rau kĩ thuật trồng dung dịch", Tạp chí nơng nghiệp cơng nghiệp thực phẩm 23 Nguyễn Nghĩa Thìn (2006), Thực vật có hoa, Nxb Đại học Quốc gia Hà Nội 24 Ths Nguyễn Văn Tính (2008), Viện Rau Việt Nam, “Quy trình kỹ thuật trồng hoa Lily áp dụng cho tỉnh Thái Nguyên” 25 Nguyễn Quang Thạch, Nguyễn Thị Nhẫn, Nguyễn Thị Phƣơng Thảo, Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy mô nhân giống hoa Loa kèn 26 Cao Thị Huyền Trang, Đỗ Năng Vịnh, Vũ Văn Vụ, 2006, Nghiên cứu tạo mơ sẹo phơi hóa, phơi vơ tính từ lát cắt bầu nhụy vòi nhụy vòi nhụy giống Lilium Oriental sorbonne Tạp chí nơng nghiệp phát triển nông thôn (kỳ 1, tháng năm 2006, tr.39- 41) 27 Vũ Văn Vụ (1999), Sinh lý thực vật ứng dụng, Nxb Giáo dục Tài liệu tiếng Anh 28 Anderson, N.O (1987), “Reclassification of genus Chrysanth emum’’, Horticultural science, Euphytica, 313 - 314 29 Fukai, S.; Goi, M and Tanaka, M (1991), Cryopreservation of shoot tips of chrysanthemum morifolium, Euphytica, 54: 210 - 204 30 Gamborg, L.; Murashige, T.; Thorpe T.A.; Vasil I.K.; (1968), Plant Tissue Culture Media In vitro, 12: 473 - 478 31 Haberlandt, G.; (1902), Culturversuche mit isolierten Pflanzenzellen, Sitz-Ber Mat Nat Kl Kais Akad Wiss Wien, 111: 69 92 32 Langton, F.A (1989), “Inheritance in chrysanthemum morifolium Ramat”, Heredity, 419 - 423 Nguyễn Thị Hồng Hạnh 67 K37A - Sinh Trường Đại học Sư phạm Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp 33 Linsmainer, E.M and Skoog, F (1965), "Organic growth factor requirements of tobacco tissue culture", Physiol Plant, 18: 100 - 127 34 Lu, C.Y.; Nugent, G.; Watdley T (1990), “Efficient direct plant regeneration from stem segments of chrysanthemum (Chrysanthemum morifolium Ramat cv Royal Purple)”, Plant Cell Rep, 8: 733 - 736 35 Murashige, T (1974), “Plant propagartion through tissue cultures”, Ann Rev Physiol Plant, 25: 135-166 36 Murashige T and Skoog F (1962), “A revised medium for rupid growth and bioassays with tobacco tissue culture”, Physiol Plant 15: 473 – 479 37 Roberts; Smith, E.F.; Horan, I.; Walker, S.; Matthews D and Mottley J (1994), “Stage III techniques for improving water relations and autotrophy in micropropagarted plant” In: Lumsdem, P.J., JR Nicolas and W.T Davies (eds), Physiology 38 Takhtajan, A.L (1987), Sysyema Magnoliophytorum, Leningrad Nauka 38.2 Joong Suklee, Young A Kim Huyn Jin Wang (1996), “effect of vermalization on the growith and flowering of Asiatic hibrid lily" acta 114 ISHS Pzz9-234 Tài liệu Internet 39 http://www.rauhoaquavietnam.vn 40.http://favri.org.vn/vi/san-pham-khcn/san-pham-khcn/hoa-va-caycanh/quy-trinh-ky-thuat/271-quy-trinh-ky-thuat-trong-hoa-Lily-o-cac-tinhphia-bac.htm 41.http://hoaly.vn/sinh-truong-va-phat-trien-cua-hoa-ly-hay-hoaLilyhoa/ 42 http://d3.violet.vn/uploads/previews/49/1451590/preview.swf Nguyễn Thị Hồng Hạnh 68 K37A - Sinh Trường Đại học Sư phạm Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp 43.http://tai-lieu.com/tai-lieu/nghien-cuu-anh-huong-cua-do-cao-mamcu-den-nang-suat-chat-luong-hoa-Lily-sorbonne-trong-chau-vu-dong-xuan2010-2011-tai-1063/ 44 http://d.violet.vn/uploads/previews/558/1172132/preview.swf 45 http://tai-lieu.com/tai-lieu/nghien-cuu-anh-huong-cua-do-cao-mamcu-den-nang-suat-chat-luong-hoa-lily-sorbonne-trong-chau-vu-dong-xuan2010-2011-tai-1063/ Nguyễn Thị Hồng Hạnh 69 K37A - Sinh Trường Đại học Sư phạm Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp PHỤ LỤC Thành phần mơi trƣờng dinh dƣỡng MS (Murashige and Skoog, 1962) STT Tên khoa học Nồng độ sử dụng (mg/l) I Các nguyên tố đa lƣợng KNO3 1900 NH4NO3 1650 MgSO4.7H2O 370 KH2PO4 170 CaCl2.2H2O 440 II Các nguyên tố vi lƣợng H3BO3 6,2 MnSO4.4H20 22,3 ZnSO4.4H2O 8,6 KI 0,83 Na2MoO4.2H2O 0,25 CuSO4.5H2O 0,025 CoCl2.6H2O 0,025 III Các vitamin Nicotinic acid 0,5 Thiamin 0,5 Pyridoxin 0,5 Glycine 2,0 Inositol 100 IV NaFeEDTA Na2 - EDTA 37,3 FeSO4.7H2O 27,8 Nguyễn Thị Hồng Hạnh 70 K37A - Sinh