3. Ý nghĩa lí luận và ý nghĩa thực tiễn
1.8.Các nguyên tắc kỹ thuật về nhân giống in vitro
Giai đoạn 1: Khử trùng mô nuôi cấy
Đây là giai đoạn tối quan trọng, thậm chí quyết định toàn bộ quy trình nhân giống in vitro. Mục đích của giai đoạn này là tạo ra đƣợc nguyên liệu thực vật vô trùng để đƣa vào nuôi cấy in vitro. Khử trùng mô thực vật, ngƣời ta thƣờng dùng một số chất hoá học nhƣ HgCl2, Ca(OCl)2, NaOCl, H2O2. Tùy thuộc vào từng loại mô thực vật mà lựa chọn nồng độ và thời gian xử lý hoá chất thích hợp.
Nguyễn Thị Hồng Hạnh 32 K37A - Sinh
Toàn bộ quá trình nhân giống in vitro xét cho cùng là nhằm mục đích tạo ra hệ số nhân cao nhất. Chính vì vậy giai đoạn này đƣợc xem là giai đoạn then chốt của quá trình.
Để tăng hệ số nhân ngƣời ta thƣờng phải đƣa thêm vào môi trƣờng dinh dƣỡng nhân tạo các chất điều hòa sinh trƣởng (auxin, xytokynin, gibberellin,...). Các chất bổ sung khác nhƣ nƣớc Dừa, nƣớc chiết nấm men, dịch thủy phân Casein,… kết hợp với các yếu tố nhiệt độ, ánh sáng thích hợp. Tùy thuộc vào từng đối tƣợng nuôi cấy ngƣời ta có thể nhân nhanh bằng kích thích sự hình thành các cụm chồi (nhân cụm chồi), hay kích thích sự phát triển của chồi nách (vi giâm cành) hoặc thông qua việc tạo cây từ phôi vô tính.
Giai đoạn 3: Tạo cây hoàn chỉnh
Khi đạt kích thƣớc nhất định các chồi đƣợc chuyển từ môi trƣờng ở giai đoạn 2 sang môi trƣờng tạo rễ. Thƣờng sau từ 1 - 2 tuần, từ những chồi riêng lẻ này sẽ xuất hiện rễ và trở thành cây hoàn chỉnh. Ở giai đoạn này, ngƣời ta thƣờng bổ sung vào môi trƣờng nuôi cấy các auxin vì auxin là hoocmon thực vật quan trọng có chức năng tạo rễ phụ từ mô nuôi cấy. Trong nhóm này, các chất IAA, IBA, - NAA và 2,4 - D đƣợc sử dụng, nghiên cứu nhiều nhất.
Giai đoạn 4: Đƣa cây ra đất
Giai đoạn đƣa cây hoàn chỉnh (có đủ thân, rễ, lá) từ ống nghiệm ra đất là bƣớc cuối cùng của quá trình nhân giống in vitro và là bƣớc quyết định khả năng ứng dụng quá trình này trong thực tiễn sản xuất. Cây lấy ra từ ống nghiệm phải đƣợc rửa sạch agar bám trên bề lặt rễ để tránh sự xâm nhập của côn trùng và nấm mốc.
Đây là giai đoạn chuyển cây con từ trạng thái sống dị dƣỡng sang sống hoàn toàn tự dƣỡng. Do đó, để đảm bảo cho cây có tỷ lệ sống cao thì
Nguyễn Thị Hồng Hạnh 33 K37A - Sinh
cần phải đƣa cây ra vƣờn ƣơm, ƣơm trên các giá thể thích hợp từ 10 - 15 ngày. Lúc này rễ mới đƣợc sinh ra, lá non bắt đầu hình thành. Sau đó chuyển cây ra đất với chế độ chăm sóc bình thƣờng.