phân lập vi khuẩn cố định đạm vùng rễ và nội sinh ở khoai lang (ipomoean batatas) trồng tại tỉnh vĩnh long

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ VIỆN NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ SINH HỌC LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC PHÂN LẬP VI KHUẨN CỐ ĐỊNH ĐẠM VÙNG RỄ VÀ NỘI SINH Ở KHOAI LANG (Ipomoean batatas) TRỒNG TẠI TỈNH VĨNH LONG CÁN BỘ HƯỚNG DẪN: SINH VIÊN THỰC HIỆN: NGUYỄN THỊ LIÊN PHẠM KIM NGÂN MSSV: 3102755 LỚP: CNSH K36 Cần Thơ, tháng 11/2013 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ VIỆN NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ SINH HỌC LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP NGÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC PHÂN LẬP VI KHUẨN CỐ ĐỊNH ĐẠM NỘI SINH VÀ Ở VÙNG RỄ KHOAI LANG (Ipomoean batatas) TRỒNG TẠI TỈNH VĨNH LONG CÁN BỘ HƯỚNG DẪN: SINH VIÊN THỰC HIỆN: NGUYỄN THỊ LIÊN PHẠM KIM NGÂN MSSV: 3102755 LỚP: CNSH K36 Cần Thơ, tháng 11/2013 PHẦN KÝ DUYỆT CÁN BỘ HƯỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN Nguyễn Thị Liên Phạm Kim Ngân DUYỆT CỦA HỘI ĐỒNG BẢO VỆ LUẬN VĂN ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………… Cần Thơ, ngày tháng năm 2013 CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG LỜI CẢM TẠ Sau thời gian học tập thực đề tài tốt nghiệp Đại học chuyên ngành Công nghệ sinh học viện NC&PT CNSH, nhận nhiều quan tâm từ gia đình, hướng dẫn dạy tận tình quý thầy cô với giúp đỡ nhiệt tình bạn bè để hoàn thành tốt luận văn tốt nghiệp này. Cảm ơn cô Nguyễn Thị Liên tận tâm hướng dẫn, bảo giúp đỡ suốt trình thực luận văn. Cảm ơn cô Trần Thị Xuân Mai, cô Nguyễn Thị Pha, cán phụ trách phòng thí nghiệm Công nghệ gen thực vật, trường Đại Học Cần Thơ tạo điều kiện tốt dụng cụ thí nghiệm trang thiết bị cần thiết để hoàn thành tốt để tài này. Xin gửi lời cảm ơn đến Ban lãnh đạo Viện NC&PT Công nghệ Sinh học tạo điều kiện để hoàn thành luận văn. Cảm ơn bạn phòng thí nghiệm Công nghệ gen thực vật sát cánh, nhiệt tình giúp đỡ để hoàn thành suôn sẻ luận văn mình. Cuối cùng, xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc cha mẹ ủng hộ phương diện, sức mạnh tinh thần giúp vươn qua khó khăn sống. Xin kính chúc quý thầy cô bạn dồi sức khỏe thành công sống. Xin chân thành cảm ơn! Phạm Kim Ngân Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 – 2013 Trường ĐHCT TÓM LƯỢC Đề tài phân lập 41 dòng vi khuẩn có khả cố định đạm từ đất vùng rễ từ giống khoai trồng huyện Bình Tân, tỉnh Vĩnh Long. Khuẩn lạc dòng vi khuẩn phân lập có màu trắng (24,39%), trắng đục (65,85%), trắng sữa vàng nhạt (9,76%); dạng tròn (82,93%) hay không (14,63%); bìa nguyên (100%); độ lài (65,85%) mô (34,15%). Tế bào vi khuẩn có dạng hình que (ngắn dài), 100% chúng thuộc Gram âm, có khả chuyển động nhiều. Kết đo đạm cho thấy dòng vi khuẩn VB35 có khả cố định đạm cao ngày thứ (3,036 mg/l NH4+) dòng vi khuẩn VB6 cố định đạm thấp ngày thứ (0,085 mg/l NH4+). Khảo sát diện gen nifH có dòng cho band có kích thước phù hợp dòng VB20, VB35, VB37, VB29, VB39, VB18, VB41 VB12. Giải trình tự dòng vi khuẩn VB35 sử dụng phần mềm BLAST N để so sánh với trình tự dòng vi khuẩn có GeneBank NCBI, kết cho thấy dòng VB35 có tỉ lệ đồng hình 100% với dòng Klebsialla sp. TS1, Klebsiella sp. Gp22, Klebsiella pneumoniae S001, Enterobacter sp. wengyuan07 Bacterium – (2013). Từ khóa: 16S rDNA, cố định đạm, gen nifH, giải trình tự, khoai lang, phân lập. Chuyên ngành Công nghệ Sinh học i Viện NC&PT Công nghệ sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 – 2013 Trường ĐHCT MỤC LỤC Trang PHẦN KÝ DUYỆT LỜI CẢM TẠ . TÓM LƯỢC i MỤC LỤC ii DANH SÁCH BẢNG . v DANH SÁCH HÌNH . vi CÁC TỪ VIẾT TẮT . viii CHƯƠNG 1. GIỚI THIỆU . 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu đề tài . CHƯƠNG 2. LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU . 2.1 Tổng quan đạm . 2.1.1. Vai trò đạm trồng 2.1.2. Chu trình nitơ tự nhiên . 2.1.3. Cơ chế cố định đạm sinh học 2.2 Sơ lược vi khuẩn cố định đạm sống nội sinh thực vật . 2.2.1. Vi khuẩn Azospirillum . 2.2.2. Gluconacetobacter diazotrophicus 2.2.3. Vi khuẩn Burkholderia 10 2.3 Sơ lược vi khuẩn cố định đạm sống tự đất . 11 2.3.1. Vi khuẩn Azotobacter 11 2.3.2. Vi khuẩn Clostridium 12 2.3.3. Vi khuẩn Klebsiella . 12 2.4 Giới thiệu sơ lược khoai lang . 13 2.4.1. Phân loại khoa học 13 2.4.2. Giới thiệu 13 2.4.2. Nguồn gốc tình hình sản xuất . 14 2.5 Phương pháp phân lập vi khuẩn 16 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học ii Viện NC&PT Công nghệ sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 – 2013 Trường ĐHCT 2.6 Sơ lược gen nif 17 2.7 Giới thiệu kỹ thuật PCR . 18 2.8 Kỹ thuật điện di DNA . 20 2.9 Giải trình tự DNA . 20 2.9.1. Giải trình tự gen 16S rDNA hệ thống tự động . 21 2.9.2. So sánh trình tự đoạn gen 16S rDNA với sở liệu . 21 CHƯƠNG 3. PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU . 23 3.1 Phương tiện . 23 3.1.1. Địa điểm thực 23 3.1.2. Thời gian thực . 23 3.1.3. Nguyên liệu 23 3.1.4. Trang thiết bị . 23 3.1.5. Hóa chất 24 3.2 Phương pháp . 24 3.2.1. Phân lập vi khuẩn nội sinh vùng rễ khoai lang môi trường LGIP không đạm. 24 3.2.2. Khảo sát khả cố định đạm dòng vi khuẩn phân lập 27 3.2.3. Khảo sát diện gen nifH . 30 3.2.4. Nhận diện vi khuẩn giải trình tự gen 16S rDNA 32 CHƯƠNG 4. KẾT QUẢ, THẢO LUẬN . 34 4.1 Kết phân lập vi khuẩn vùng rễ nội sinh khoai lang môi trường LGIP không đạm . 34 4.1.1. Đặc tính vi khuẩn phân lập môi trường LGIP 34 4.1.2. Đặc điểm tế bào dòng vi khuẩn phân lập 38 4.2 Khả cố định đạm dòng vi khuẩn phân lập . 41 4.3 Sự diện gen nifH số dòng vi khuẩn. 44 4.4 Kết giải trình tự vùng gen 16S rDNA . 46 CHƯƠNG 5. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ . 51 5.1 Kết luận . 51 5.2 Đề nghị . 51 TÀI LIỆU THAM KHẢO . 52 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học iii Viện NC&PT Công nghệ sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 – 2013 Trường ĐHCT PHỤ LỤC…………………………………………………………………………………………… Phụ lục 1: Các hình ảnh Phụ lục 2: Các phương pháp phân tích Phụ lục 3: Các kết Phụ lục 4: Kết thống kê Chuyên ngành Công nghệ Sinh học iv Viện NC&PT Công nghệ sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 – 2013 Trường ĐHCT DANH SÁCH BẢNG Bảng 1. Sự diện vi khuẩn Azospirillum số loại hoa màu Bảng 2. Vị trí diện Glucoacetobacter diazotrophicus loại khác nhau. Bảng 3. Thành phần dãy đường chuẩn NH4+ . 28 Bảng 4. Mô tả giá trị đường chuẩn NH4+ . 29 Bảng 5. Thành phần phản ứng PCR 31 Bảng 6. Thành phần phản ứng PCR khuếch đại gen 16S rDNA 32 Bảng 8. Kết nhuộm Gram đặc điểm tế bào 41 dòng vi khuẩn . 38 Bảng 9. Kết khảo sát khả cố định đạm 41 dòng vi khuẩn 42 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học v Viện NC&PT Công nghệ sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 – 2013 Trường ĐHCT DANH SÁCH HÌNH Hình 1. Chu trình nitơ tự nhiên Hình 2. Sơ đồ giả thuyết đường trình cố định N2 . Hình 3. Cấu trúc enzyme nitrogenase . Hình 4. Vi khuẩn Azospirillum Hình 5. Vi khuẩn Gluconacetobacter diazotrophicus Hình 6. Vi khuẩn Burkholderia . 10 Hình 7. Vi khuẩn Klebsiella 12 Hình 8. Cây khoai lang 13 Hình 9. Bản đồ gen nif vai trò chúng vi khuẩn Klebsiella pneumoniae 17 Hình 10. Phản ứng PCR 19 Hình 11. Quy trình khử trùng bề mặt mẫu khoai lang 25 Hình 12. Chu kỳ nhiệt phản ứng khuếch đại gen nifH . 31 Hình 13. Chu kỳ nhiệt phản ứng khuếch đại 16S rDNA 33 Hình 14. Sự phát triển vi khuẩn vi hiếu khí tạo vòng pellicle cách mặt môi trường - mm 34 Hình 15. Nguồn gốc dòng vi khuẩn phân lập 35 Hình 16. Thống kê đặc điểm hình thái dòng vi khuẩn phân lập . 37 Hình 17. Hình dạng khuẩn lạc môt số dòng vi khuẩn quan sát thời điểm hai ngày sau cấy 38 Hình 18. Hình dạng tế bào vi khuẩn kính hiển vi độ phóng đại 400 lần 40 Hình 19. Tế bào vi khuẩn bắt màu hồng thuốc nhuộm Fushin kính hiển vi độ phóng đại 1000 lần 40 Hình 20. Vi khuẩn phát triển môi trường Burk’s không đạm 41 Hình 21. Biểu đồ đường chuẩn đạm từ - 2,5 mg/l 42 Hình 22. Hàm lượng đạm trung bình qua 2,4 ngày nuôi 10 dòng vi khuẩn. . 44 Hình 23. Vi khuẩn phát triển môi trường LB sau ngày nuôi cấy 44 Hình 24. Hình gel điện di sản phẩm PCR với cặp mồi nifH . 45 Hình 25. Kết tra cứu BLAST N dòng VB35 47 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học vi Viện NC&PT Công nghệ sinh học 4. Hình điện di sản phẩm PCR 1500bp Hình 35. Kết kiểm tra sản phẩm PCR khuếch đại vùng 16S rDNA dòng VB35 (giếng 1) gel agarose 1,5%. Phụ lục 2: Các phương pháp phân tích 1. Một số môi trường dùng thí nghiệm Bảng 10. Môi trường LB (Luria Broth) Thành phần Liều lượng (Trong 1lít nước cất) Tryptone 10g Yeast extract 5g NaCl 10g Agar 18g (Cao Ngọc Điệp. 2011. Vi khuẩn nội sinh thực vật (Endophytic bacteria), Nxb. ĐHCT, trang 39) Bảng 11. Môi trường LGIP không đạm (Cavalcante Dobereiner, 1988) Thành phần Liều lượng (Trong 1lít nước cất) Đường Sucrose 100g K2HPO4 0,2g KH2PO4 0,6g MgSO4.7H2O 0,2g CaCl2.2H2O 0,02g Na2MO4.2H2O 0,002g FeCl3.6H2O 0,01g Bromophenol blue 0,5% 0,2M KOH 0,5ml Agar Đặc: 18g Bán đặc: 1,8g pH = 5,5 (Cao Ngọc Điệp. 2011. Vi khuẩn nội sinh thực vật (Endophytic bacteria), Nxb. ĐHCT, trang 35) Bảng 12. Môi trường Burk không đạm (Park et al., 2005) Thành phần Liều lượng (Trong 1lít nước cất) Đường Sucrose 10g K2HPO4 0,41g K2HPO4 0,52g CaCl2 0,2g MgSO4.7H2O 0,1g FeSO4 .7H2 O 0,005 Na2MO4.2H2O 0,0025g Agar Đặc: 18g Bán đặc: 1,8g pH = 7,0 (Cao Ngọc Điệp. 2011. Vi khuẩn nội sinh thực vật (Endophytic bacteria), Nxb. ĐHCT, trang 35) Phụ lục 3: Các kết 1. Kết phân lập vi khuẩn Bảng 13a. Nguồn gốc dòng vi khuẩn hiếu khí (H) vi hiếu khí (V) phân lập từ mẫu đất khoai lang trồng huyện Bình Tân, tỉnh Vĩnh Long. STT Dòng vi khuẩn Giống khoai Vị trí phân lập VB1 Trắng giấy Lá VB2 Trắng giấy Lá VB3 Trắng giấy Thân VB4 Trắng giấy Thân VB5 Trắng giấy Rễ VB6 Khoai đỏ Rễ VB7 Khoai đỏ Thân VB8 Khoai đỏ Thân VB9 Khoai đỏ Rễ 10 VB10 Khoai đỏ Rễ 11 VB11 Khoai đỏ Rễ 12 VB12 Khoai đỏ Rễ 13 VB13 Khoai đỏ Rễ 14 VB14 Khoai đỏ Thân 15 VB15 Khoai đỏ Lá 16 VB16 Khoai tím Rễ 17 VB17 Khoai tím Rễ 18 VB18 Khoai tím Rễ 19 VB19 Khoai tím Lá 20 VB20 Khoai tím Lá 21 VB21 Khoai tím Lá 22 VB22 Khoai tím Thân Bảng 13b. Nguồn gốc dòng vi khuẩn hiếu khí (H) vi hiếu khí (V) phân lập từ mẫu đất khoai lang trồng huyện Bình Tân, tỉnh Vĩnh Long. STT Dòng vi khuẩn Giống khoai Vị trí phân lập 23 VB23 Khoai tím Thân 24 VB24 Khoai sữa Rễ 25 VB25 Khoai sữa Rễ 26 VB26 Khoai sữa Rễ 27 VB27 Khoai sữa Thân 28 VB28 Khoai sữa Thân 29 VB29 Khoai sữa Thân 30 VB30 Khoai sữa Thân 31 VB31 Khoai sữa Lá 32 VB32 Khoai sữa Lá 33 VB33 Khoai trắng Rễ 34 VB34 Khoai trắng Thân 35 VB35 Khoai trắng Đất 36 VB36 Khoai trắng Đất 37 VB37 Khoai đỏ Đất 38 VB38 Khoai đỏ Đất 39 VB39 Khoai sữa Đất 40 VB40 Khoai tím Đất 41 VB41 Khoai tím Đất 2. Kết khảo sát khả cố định đạm 41 dòng vi khuẩn NGÀY Nồng độ đạm 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 OD 0,022 0,030 0,043 0,064 0,082  Phương trình đường chuẩn: y = 0,0314 + 0,001. R2 = 0,9847 Giá trị OD (636nm) 0.1 y = 0.0314x + 0.001 R² = 0.9847 0.08 0.06 0.04 0.02 0 0.5 1.5 2.5 Nồng độ NH4+ (mg/l) Hình 36. Biểu đồ đường chuẩn ngày Bảng 14a. Kết đo OD bước sóng 636nm giá trị nồng độ đạm tính dựa vào đường chuẩn 41 dòng vi khuẩn sau ngày nuôi Dòng Nồng độ NH4+ (mg/l) Giá trị OD VK ĐC 0,003 0,001 0,003 0,064 0,000 0,064 VB1 0,005 0,005 0,006 0,063 0,127 0,095 VB2 0,017 0,016 0,018 0,446 0,478 0,477 VB3 0,057 0,052 0,055 1,719 1,624 1,656 VB4 0,042 0,045 0,047 1,242 1,401 1,401 VB5 0,019 0,013 0,017 0,509 0,382 0,446 VB6 0,005 0,003 0,006 0,063 0,064 0,095 VB7 0,036 0,033 0,036 1,051 1,019 1,051 VB8 0,034 0,028 0,030 0,987 0,892 0,860 VB9 0,064 0,060 0,063 1,942 1,879 1,911 VB10 0,010 0,009 0,010 0,223 0,255 0,223 VB11 0,006 0,008 0,009 0,095 0,223 0,191 VB12 0,016 0,018 0,014 0414 0,541 0,350 VB13 0,040 0,055 0,051 1,178 1,720 1,528 VB14 0,076 0,071 0,072 2,325 2,229 2,197 VB15 0,015 0,016 0,013 0,382 0,478 0,318 VB16 0,022 0,020 0,019 0,605 0,605 0,509 VB17 0,010 0,012 0,010 0,223 0,350 0,223 VB18 0,051 0,047 0,052 1,528 1,465 1,560 VB19 0,008 0,006 0,007 0,159 0,159 0,127 Bảng 14b. Kết đo OD bước sóng 636nm giá trị nồng độ đạm tính dựa vào đường chuẩn 41 dòng vi khuẩn sau ngày nuôi Dòng Nồng độ NH4+ (mg/l) Giá trị OD VK VB20 0,040 0,059 0,048 1,178 1,847 1,433 VB21 0,024 0,022 0,022 0,668 0,669 0,605 VB22 0,007 0,013 0,010 0,127 0,382 0,223 VB23 0,018 0,013 0,013 0,477 0,382 0,318 VB24 0,044 0,041 0,049 1,305 1,274 1,465 VB25 0,039 0,033 0,039 1,146 1,019 1,146 VB26 0,007 0,006 0,007 0,127 0,159 0,127 VB27 0,009 0,006 0,007 0,191 0,159 0,127 VB28 0,003 0,004 0,004 0,000 0,096 0,032 VB29 0,015 0,017 0,015 0,382 0,510 0,382 VB30 0,046 0,042 0,043 1,369 1,306 1,274 VB31 0,030 0,035 0,033 0,860 1,083 0,955 VB32 0,051 0,059 0,058 1,528 1,847 1,751 VB33 0,015 0,018 0,014 0,382 0,541 0,350 VB34 0,038 0,043 0,041 1,114 1,338 1,210 VB35 0,100 0,095 0,097 3,089 2,994 2,993 VB36 0,053 0,057 0,060 1,592 1,783 1,815 VB37 0,026 0,028 0,029 0,732 0,860 0,828 VB38 0,044 0,050 0,053 1,305 1,561 1,592 VB39 0,044 0,047 0,044 1,305 1,465 1,305 VB40 0,051 0,054 0,056 1,528 1,688 1,688 VB41 0,086 0,083 0,078 2,643 2,611 2,388 NGÀY Nồng độ đạm 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 Giá trị OD 0,015 0,035 0,057 0,072 0,091  Phương trình đường chuẩn: y = 0,037 - 0,0013. R2 = 0,9974 Giá trị OD (636nm) 0.1 y = 0.037x - 0.0013 R² = 0.9974 0.08 0.06 0.04 0.02 0 0.5 1.5 2.5 Nồng độ NH4+ (mg/l) Hình 37. Biểu đồ đường chuẩn ngày Bảng 15a. Kết đo OD bước sóng 636nm giá trị nồng độ đạm tính dựa vào đường chuẩn 41 dòng vi khuẩn sau ngày nuôi Dòng Nồng độ NH4+ (mg/l) Giá trị OD VK ĐC 0,001 0,002 0,001 0,062 0,089 0,062 VB1 0,015 0,018 0,014 0,379 0,433 0,352 VB2 0,040 0,040 0,048 1,054 1,027 1,270 VB3 0,052 0,057 0,051 1,379 1,487 1,352 VB4 0,014 0,014 0,034 0,352 0,325 0,892 VB5 0,024 0,022 0,024 0,622 0,541 0,622 VB6 0,011 0,010 0,009 0,270 0,216 0,216 VB7 0,020 0,025 0,023 0,514 0,622 0,595 VB8 0,026 0,025 0,027 0,676 0,622 0,703 VB9 0,012 0,016 0,015 0,297 0,379 0,379 VB10 0,014 0,015 0,016 0,352 0,352 0,406 VB11 0,027 0,028 0,025 0,703 0,703 0,649 VB12 0,082 0,085 0,084 2,189 2,243 2,243 VB13 0,027 0,020 0,024 0,703 0,487 0,622 VB14 0,014 0,016 0,014 0,352 0,379 0,352 VB15 0,032 0,032 0,034 0,838 0,811 0,892 VB16 0,009 0,010 0,010 0,216 0,216 0,243 VB17 0,011 0,014 0,012 0,270 0,325 0,297 VB18 0,086 0,089 0,084 2,297 2,352 2,243 VB19 0,013 0,019 0,014 0,324 0,460 0,352 VB20 0,042 0,047 0,049 1,108 1,216 1,297 VB21 0,040 0,042 0,044 1,054 1,081 1,162 VB22 0,058 0,053 0,054 1,541 1,379 1,433 Bảng 15b. Kết đo OD bước sóng 636nm giá trị nồng độ đạm tính dựa vào đường chuẩn 41 dòng vi khuẩn sau ngày nuôi Nồng độ NH4+ (mg/l) Giá trị OD Dòng VK VB23 0,048 0,049 0,044 1,270 1,270 1,162 VB24 0,046 0,045 0,044 1,216 1,162 1,162 VB25 0,009 0,008 0,007 0,216 0,162 0,162 VB26 0,062 0,066 0,064 1,649 1,730 1,703 VB27 0,050 0,052 0,054 1,324 1,352 1,433 VB28 0,008 0,007 0,006 0,189 0,135 0,135 VB29 0,079 0,078 0,078 2,108 2,054 2,081 VB30 0,004 0,010 0,004 0,081 0,216 0,081 VB31 0,021 0,024 0,020 0,541 0,595 0,514 VB32 0,006 0,006 0,004 0,135 0,108 0,081 VB33 0,066 0,067 0,064 1,757 1,757 1,703 VB34 0,037 0,040 0,039 0,973 1,027 1,027 VB35 0,108 0,106 0,109 2,892 2,811 2,919 VB36 0,027 0,026 0,028 0,703 0,649 0,730 VB37 0,070 0,071 0,072 1,865 1,865 1,919 VB38 0,014 0,015 0,014 0,352 0,352 0,352 VB39 0,067 0,069 0,064 1,784 1,811 1,703 VB40 0,040 0,038 0,035 1,054 0,973 0,919 VB41 0,025 0,027 0,024 0,649 0,676 0,622 NGÀY Nồng độ đạm 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 Giá trị OD 0,020 0,039 0,050 0,072 0,099  Phương trình đường chuẩn: y = 0,0378 - 0,0006. R2 = 0,9876 Giá trị OD (636nm) 0.12 0.1 y = 0.0378x - 0.0006 R² = 0.9876 0.08 0.06 0.04 0.02 0 0.5 1.5 + Nồng độ NH4 (mg/l) 2.5 Hình 38. Biểu đồ đường chuẩn ngày Bảng 16a. Kết đo OD bước sóng 636nm giá trị nồng độ đạm tính dựa vào đường chuẩn 41 dòng vi khuẩn sau ngày nuôi Dòng Nồng độ NH4+ (mg/l) Giá trị OD VK ĐC 0,003 0,002 0,001 0,095 0,069 0,042 VB1 0,023 0,027 0,025 0,529 0,661 0,635 VB2 0,003 0,006 0,004 0,000 0,106 0,080 VB3 0,022 0,023 0,026 0,503 0,555 0,662 VB4 0,009 0,005 0,007 0,159 0,079 0,159 VB5 0,004 0,006 0,006 0,027 0,106 0,133 VB6 0,011 0,012 0,013 0,212 0,264 0,318 VB7 0,015 0,017 0,015 0,318 0,397 0,371 VB8 0,000 0,001 0,000 0,000 0,000 0,000 VB9 0,001 0,002 0,003 0,000 0,000 0,053 VB10 0,009 0,003 0,007 0,159 0,026 0,159 VB11 0,025 0,023 0,028 0,582 0,555 0,715 VB12 0,075 0,079 0,079 1,905 2,037 2,064 VB13 0,022 0,022 0,023 0,503 0,529 0,582 VB14 0,004 0,006 0,003 0,027 0,106 0,053 VB15 0,035 0,031 0,036 0,847 0,767 0,926 VB16 0,028 0,025 0,024 0,662 0,608 0,609 VB17 0,007 0,006 0,009 0,106 0,106 0,212 VB18 0,015 0,013 0,013 0,318 0,291 0,318 VB19 0,023 0,018 0,021 0,529 0,423 0,529 VB20 0,074 0,072 0,074 1,879 1,852 1,932 Bảng 16b. Kết đo OD bước sóng 636nm giá trị nồng độ đạm tính dựa vào đường chuẩn 41 dòng vi khuẩn sau ngày nuôi Nồng độ NH4+ (mg/l) Giá trị OD Dòng VK VB21 0,024 0,024 0,028 0,556 0,582 0,715 VB22 0,023 0,022 0,025 0,529 0,529 0,635 VB23 0,023 0,024 0,027 0,529 0,582 0,688 VB24 0,046 0,043 0,046 1,138 1,084 1,191 VB25 0,012 0,014 0,016 0,238 0,317 0,397 VB26 0,024 0,023 0,023 0,556 0,555 0,582 VB27 0,024 0,023 0,024 0,556 0,555 0,609 VB28 0,040 0,042 0,038 0,979 1,058 0,979 VB29 0,022 0,026 0,023 0,503 0,635 0,582 VB30 0,011 0,012 0,011 0,212 0,264 0,265 VB31 0,002 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 VB32 0,020 0,026 0,025 0,450 0,635 0,635 VB33 0,043 0,048 0,046 1,058 1,217 1,191 VB34 0,030 0,029 0,024 0,715 0,714 0,609 VB35 0,018 0,012 0,014 0,397 0,264 0,344 VB36 0,005 0,005 0,004 0,053 0,079 0,080 VB37 0,019 0,013 0,016 0,424 0,291 0,397 VB38 0,004 0,004 0,006 0,027 0,053 0,133 VB39 0,024 0,020 0,025 0,556 0,476 0,635 VB40 0,011 0,018 0,012 0,212 0,423 0,291 VB41 0,012 0,009 0,011 0,238 0,185 0,265 Phụ lục 4: Kết phân tích thống kê Kết khảo sát khả cố định đạm 41 dòng vi khuẩn NGÀY Bảng 17. Thống kê tóm tắt hàm lượng đạm thời điểm ngày sau chủng vi khuẩn Summary Statistics Count Average VB1 0.105667 VB2 0.477667 VB3 1.677 VB4 1.35867 VB5 0.456333 VB6 0.0846667 VB7 1.051 VB8 0.923667 VB9 1.92133 VB10 0.244333 VB11 0.180333 VB12 0.445667 VB13 1.486 VB14 2.261 VB15 0.403333 VB16 0.583667 VB17 0.276 VB18 1.52833 VB19 0.159 VB20 1.49667 VB21 0.658 VB22 0.254667 VB23 0.403 VB24 1.35867 VB25 1.11433 VB26 0.148333 VB27 0.169667 VB28 0.0533333 VB29 0.435333 VB30 1.327 VB31 0.976667 VB32 1.71933 VB33 0.435 VB34 1.23133 VB35 3.036 VB36 1.74067 VB37 0.817333 VB38 1.49667 VB39 1.369 VB40 1.64533 VB41 2.558 Total 123 0.977268 Standard deviation 0.0184752 0.0315013 0.0800687 0.0800021 0.0973259 0.0483356 0.0554256 0.0840972 0.0662143 0.0184752 0.0488808 0.0635007 0.247443 0.084664 0.0488808 0.0488808 0.0363731 0.0840972 0.032 0.303741 0.0363731 0.0955004 0.0917987 0.128873 0.110274 0.0184752 0.0488808 0.0184752 0.0369504 0.066053 0.0800021 0.138911 0.066053 0.0805316 0.0800687 0.111859 0.0488808 0.146206 0.0554256 0.0805316 0.128791 0.740517 Coeff. of variation 17.4844% 6.59483% 4.77452% 5.88828% 21.3278% 57.0893% 5.27361% 9.10471% 3.44627% 7.56148% 27.1058% 14.2485% 16.6516% 3.74454% 12.1192% 8.37478% 13.1786% 5.50254% 20.1258% 20.2945% 5.52782% 37.5002% 22.7788% 9.48528% 9.89595% 12.4552% 28.8099% 34.641% 8.48784% 4.97762% 8.19134% 8.07937% 15.1846% 6.54019% 2.63731% 6.42619% 5.98052% 9.76881% 4.04862% 4.89454% 5.03481% 75.7741% Minimum 0.095 0.446 1.592 1.274 0.35 0.032 0.987 0.86 1.847 0.223 0.127 0.382 1.21 2.197 0.35 0.541 0.255 1.433 0.127 1.21 0.637 0.159 0.35 1.242 0.987 0.127 0.127 0.032 0.414 1.274 0.892 1.56 0.382 1.146 2.962 1.624 0.764 1.337 1.337 1.56 2.42 0.032 Maximum 0.127 0.509 1.751 1.433 0.541 0.127 1.083 1.019 1.974 0.255 0.223 0.509 1.688 2.357 0.446 0.637 0.318 1.592 0.191 1.815 0.7 0.35 0.509 1.497 1.178 0.159 0.223 0.064 0.478 1.401 1.051 1.815 0.509 1.306 3.121 1.847 0.86 1.624 1.433 1.72 2.675 3.121 Range 0.032 0.063 0.159 0.159 0.191 0.095 0.096 0.159 0.127 0.032 0.096 0.127 0.478 0.16 0.096 0.096 0.063 0.159 0.064 0.605 0.063 0.191 0.159 0.255 0.191 0.032 0.096 0.032 0.064 0.127 0.159 0.255 0.127 0.16 0.159 0.223 0.096 0.287 0.096 0.16 0.255 3.089 Stnd. skewness 1.22474 -0.0336666 -0.428896 -0.404138 -0.673265 -0.649163 -1.22474 1.02828 -0.929723 -1.22474 -0.6613 -0.0167027 -0.866492 1.03086 -0.6613 0.6613 1.22474 -1.02828 0.0 0.328134 1.22474 -0.0111062 1.22474 0.519845 -1.22474 -1.22474 0.6613 -1.22474 1.22474 0.909382 -0.404138 -1.15203 0.909382 -0.41407 0.428896 -0.291438 -0.6613 -0.669275 1.22474 -0.41407 -0.505045 3.23768 Bảng 18. Phân tích ANOVA hàm lượng đạm thời điểm ngày sau chủng vi khuẩn. ANOVA Table Source Between groups Within groups Total (Corr.) Sum of Squares 66.1327 0.767831 66.9005 Df 40 82 122 Mean Square 1.65332 0.00936379 F-Ratio 176.56 P-Value 0.0000 Bảng 19. Kiểm định khác biệt trung bình hàm lượng đạm cố định dòng vi khuẩn thời điểm ngày sau chủng vi khuẩn Multiple Range Tests Method: 95.0 percent LSD Count Mean VB28 0.0533333 VB6 0.0846667 VB1 0.105667 VB26 0.148333 VB19 0.159 VB27 0.169667 VB11 0.180333 VB10 0.244333 VB22 0.254667 VB17 0.276 VB23 0.403 VB15 0.403333 VB33 0.435 VB29 0.435333 VB12 0.445667 VB5 0.456333 VB2 0.477667 VB16 0.583667 VB21 0.658 VB37 0.817333 VB8 0.923667 VB31 0.976667 VB7 1.051 VB25 1.11433 VB34 1.23133 VB30 1.327 VB24 1.35867 VB4 1.35867 VB39 1.369 VB13 1.486 VB20 1.49667 VB38 1.49667 VB18 1.52833 VB40 1.64533 VB3 1.677 VB32 1.71933 VB36 1.74067 VB9 1.92133 VB14 2.261 VB41 2.558 VB35 3.036 Homogeneous Groups X X XX XXX XXX XXX XXX XX XXX XX XX XX XX XX XX XX XX XX X X XX XX XX XX XX X XX XX XX XX XXX XXX XXX XXX XX X X X X X X NGÀY Bảng 20. Thống kê tóm tắt hàm lượng đạm thời điểm ngày sau chủng vi khuẩn Summary Statistics Count Average VB1 0.388 VB2 1.117 VB3 1.406 VB4 0.523 VB5 0.595 VB6 0.234 VB7 0.577 VB8 0.667 VB9 0.351667 VB10 0.37 VB11 0.685 VB12 2.225 VB13 0.604 VB14 0.361 VB15 0.847 VB16 0.225 VB17 0.297333 VB18 2.29733 VB19 0.378667 VB20 1.207 VB21 1.099 VB22 1.451 VB23 1.234 VB24 1.18 VB25 0.18 VB26 1.694 VB27 1.36967 VB28 0.153 VB29 2.081 VB30 0.126 VB31 0.55 VB32 0.108 VB33 1.739 VB34 1.009 VB35 2.874 VB36 0.694 VB37 1.883 VB38 0.352 VB39 1.766 VB40 0.982 VB41 0.649 Total 123 0.939748 Standard deviation 0.0412432 0.133188 0.0714353 0.319848 0.0467654 0.0311769 0.056205 0.0412432 0.0473427 0.0311769 0.0311769 0.0311769 0.109119 0.0155885 0.0412432 0.0155885 0.0275015 0.0545008 0.0718146 0.0948209 0.056205 0.0824864 0.0623538 0.0311769 0.0311769 0.0412432 0.0566068 0.0311769 0.027 0.0779423 0.0412432 0.027 0.0311769 0.0311769 0.056205 0.0412432 0.0311769 0.0 0.056205 0.0679485 0.027 0.68946 Coeff. of variation 10.6297% 11.9237% 5.08075% 61.1565% 7.85973% 13.3235% 9.7409% 6.18339% 13.4624% 8.42619% 4.55137% 1.40121% 18.0661% 4.31813% 4.86932% 6.9282% 9.24939% 2.37235% 18.9651% 7.85591% 5.11419% 5.68479% 5.05298% 2.64211% 17.3205% 2.43466% 4.13289% 20.3771% 1.29745% 61.859% 7.49876% 25.0% 1.79281% 3.08988% 1.95564% 5.94282% 1.6557% 0.0% 3.18262% 6.9194% 4.16025% 73.3665% Minimum 0.352 1.027 1.352 0.325 0.541 0.216 0.514 0.622 0.297 0.352 0.649 2.189 0.487 0.352 0.811 0.216 0.27 2.243 0.324 1.108 1.054 1.379 1.162 1.162 0.162 1.649 1.324 0.135 2.054 0.081 0.514 0.081 1.703 0.973 2.811 0.649 1.865 0.352 1.703 0.919 0.622 0.081 Maximum 0.433 1.27 1.487 0.892 0.622 0.27 0.622 0.703 0.379 0.406 0.703 2.243 0.703 0.379 0.892 0.243 0.325 2.352 0.46 1.297 1.162 1.541 1.27 1.216 0.216 1.73 1.433 0.189 2.108 0.216 0.595 0.135 1.757 1.027 2.919 0.73 1.919 0.352 1.811 1.054 0.676 2.919 Range 0.081 0.243 0.135 0.567 0.081 0.054 0.108 0.081 0.082 0.054 0.054 0.054 0.216 0.027 0.081 0.027 0.055 0.109 0.136 0.189 0.108 0.162 0.108 0.054 0.054 0.081 0.109 0.054 0.054 0.135 0.081 0.054 0.054 0.054 0.108 0.081 0.054 0.0 0.108 0.135 0.054 2.838 Stnd. skewness 0.6613 1.16836 1.03086 1.21493 -1.22474 1.22474 -0.914531 -0.6613 -1.22474 1.22474 -1.22474 -1.22474 -0.510608 1.22474 0.6613 1.22474 0.0385617 0.0194607 1.01864 -0.299299 0.914531 0.6613 -1.22474 1.22474 1.22474 -0.6613 0.896349 1.22474 0.0 1.22474 0.6613 0.0 -1.22474 -1.22474 -0.914531 -0.6613 1.22474 -1.73205 -0.914531 0.41407 0.0 3.98392 Bảng 21. Phân tích ANOVA hàm lượng đạm thời điểm ngày sau chủng vi khuẩn. ANOVA Table Source Between groups Within groups Total (Corr.) Sum of Squares 57.5549 0.438357 57.9933 Df 40 82 122 Mean Square 1.43887 0.00534582 F-Ratio 269.16 P-Value 0.0000 Bảng 22. Kiểm định khác biệt trung bình hàm lượng đạm cố định dòng vi khuẩn thời điểm ngày sau chủng vi khuẩn Multiple Range Tests Method: 95.0 percent LSD Count Mean VB32 0.108 VB30 0.126 VB28 0.153 VB25 0.18 VB16 0.225 VB6 0.234 VB17 0.297333 VB9 0.351667 VB38 0.352 VB14 0.361 VB10 0.37 VB19 0.378667 VB1 0.388 VB4 0.523 VB31 0.55 VB7 0.577 VB5 0.595 VB13 0.604 VB41 0.649 VB8 0.667 VB11 0.685 VB36 0.694 VB15 0.847 VB40 0.982 VB34 1.009 VB21 1.099 VB2 1.117 VB24 1.18 VB20 1.207 VB23 1.234 VB27 1.36967 VB3 1.406 VB22 1.451 VB26 1.694 VB33 1.739 VB39 1.766 VB37 1.883 VB29 2.081 VB12 2.225 VB18 2.29733 VB35 2.874 Homogeneous Groups X XX XX XXX XXX XXX XXX XX XX X X X X X XX XXX XXX XXX XX XX X X X X XX XXX XXX XX XX X X X X X X XX X X X X X NGÀY Bảng 23. Thống kê tóm tắt hàm lượng đạm thời điểm ngày sau chủng vi khuẩn Summary Statistics Count Average VB1 0.677 VB2 0.130667 VB3 0.642 VB4 0.201 VB5 0.157333 VB6 0.333333 VB7 0.430667 VB8 0.0246667 VB9 0.0686667 VB10 0.183333 VB11 0.686 VB12 2.07067 VB13 0.606667 VB14 0.130667 VB15 0.915333 VB16 0.695 VB17 0.21 VB18 0.377667 VB19 0.562333 VB20 1.95633 VB21 0.686333 VB22 0.633 VB23 0.668333 VB24 1.20633 VB25 0.386 VB26 0.633 VB27 0.642 VB28 1.074 VB29 0.642 VB30 0.315667 VB31 0.0336667 VB32 0.642 VB33 1.224 VB34 0.748 VB35 0.403667 VB36 0.139333 VB37 0.439333 VB38 0.139667 VB39 0.624333 VB40 0.377333 VB41 0.298 Total 123 0.56135 Standard deviation 0.053 0.0406981 0.0552449 0.053 0.0305996 0.0265016 0.0305996 0.0150111 0.0265016 0.0809588 0.0669552 0.0611991 0.0150111 0.0406981 0.0699238 0.0552449 0.0402616 0.0305996 0.0664254 0.0305996 0.0611991 0.0402616 0.0550848 0.046188 0.053 0.0155885 0.0155885 0.053 0.0552449 0.0150111 0.0305996 0.0850823 0.0669552 0.0850823 0.0809588 0.0150111 0.0795005 0.0305996 0.0699238 0.100152 0.0402616 0.44708 Coeff. of variation 7.82866% 31.1465% 8.60513% 26.3682% 19.4489% 7.95047% 7.10516% 60.8558% 38.5945% 44.1594% 9.76023% 2.95553% 2.47436% 31.1465% 7.63916% 7.94891% 19.1722% 8.10227% 11.8125% 1.56413% 8.91682% 6.36045% 8.24211% 3.82879% 13.7306% 2.46263% 2.42811% 4.93482% 8.60513% 4.75537% 90.8898% 13.2527% 5.4702% 11.3746% 20.0559% 10.7735% 18.0957% 21.909% 11.1997% 26.5419% 13.5106% 79.6437% Minimum 0.624 0.095 0.598 0.148 0.122 0.307 0.413 0.016 0.042 0.095 0.624 2.0 0.598 0.095 0.836 0.651 0.175 0.36 0.492 1.921 0.651 0.598 0.624 1.153 0.333 0.624 0.624 1.021 0.598 0.307 0.016 0.545 1.153 0.651 0.333 0.122 0.36 0.122 0.545 0.307 0.254 0.016 Maximum 0.73 0.175 0.704 0.254 0.175 0.36 0.466 0.042 0.095 0.254 0.757 2.106 0.624 0.175 0.968 0.757 0.254 0.413 0.624 1.974 0.757 0.677 0.73 1.233 0.439 0.651 0.651 1.127 0.704 0.333 0.069 0.704 1.286 0.81 0.492 0.148 0.519 0.175 0.677 0.492 0.333 2.106 Range 0.106 0.08 0.106 0.106 0.053 0.053 0.053 0.026 0.053 0.159 0.133 0.106 0.026 0.08 0.132 0.106 0.079 0.053 0.132 0.053 0.106 0.079 0.106 0.08 0.106 0.027 0.027 0.106 0.106 0.026 0.053 0.159 0.133 0.159 0.159 0.026 0.159 0.053 0.132 0.185 0.079 2.09 Stnd. skewness 0.0 0.646876 0.926697 0.0 -1.22474 0.0400162 1.22474 1.22474 -0.0400162 -0.6613 0.419988 -1.22474 1.22474 0.646876 -1.03701 0.926697 0.67575 1.22474 -0.408093 -1.22474 1.22474 0.67575 0.902123 -1.22474 0.0 1.22474 -1.22474 0.0 0.926697 1.22474 1.22474 -1.08745 -0.419988 -1.08745 0.6613 -1.22474 0.0133413 1.22474 -1.03701 1.13254 -0.67575 7.4877 Bảng 24. Phân tích ANOVA hàm lượng đạm thời điểm ngày sau chủng vi khuẩn. ANOVA Table Source Between groups Within groups Total (Corr.) Sum of Squares 24.1519 0.233461 24.3854 Df 40 82 122 Mean Square 0.603798 0.00284708 F-Ratio 212.08 P-Value 0.0000 Bảng 25. Kiểm định khác biệt trung bình hàm lượng đạm cố định dòng vi khuẩn thời điểm ngày sau chủng vi khuẩn Multiple Range Tests Method: 95.0 percent LSD Count Mean VB8 0.0246667 VB31 0.0336667 VB9 0.0686667 VB14 0.130667 VB2 0.130667 VB36 0.139333 VB38 0.139667 VB5 0.157333 VB10 0.183333 VB4 0.201 VB17 0.21 VB41 0.298 VB30 0.315667 VB6 0.333333 VB40 0.377333 VB18 0.377667 VB25 0.386 VB35 0.403667 VB7 0.430667 VB37 0.439333 VB19 0.562333 VB13 0.606667 VB39 0.624333 VB26 0.633 VB22 0.633 VB29 0.642 VB27 0.642 VB3 0.642 VB32 0.642 VB23 0.668333 VB1 0.677 VB11 0.686 VB21 0.686333 VB16 0.695 VB34 0.748 VB15 0.915333 VB28 1.074 VB24 1.20633 VB33 1.224 VB20 1.95633 VB12 2.07067 Homogeneous Groups X X XX XX XX XX XX X X X X X XX XXX XXXX XXXX XXX XX X X X XX XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX XX X X X X X X X [...]... do trong đất, trong vùng rễ hoặc nội sinh trong cây mang lại lợi ích cho cây (Bashan và de-Bashan, 2005) Đặc biệt, nhiều loài vi khuẩn nội sinh như Azospirillum, Glucoacetobacter, Herbaspirillum, Klebsiella,…đang được quan tâm nghiên cứu rộng rãi khắp nơi trên thế giới Đề tài Phân lập vi khuẩn cố định đạm nội sinh và ở vùng rễ khoai lang (Ipomoean batatas) trồng tại tỉnh Vĩnh Long được thực hiện... chọn một số dòng vi khuẩn sống nội sinh hay tự do trong đất có khả năng cố định đạm cao để làm cơ sở sản xuất ra những loại phân bón sinh học, giúp cân bằng lại lượng phân hóa học bón vào cây, giảm chi phí sản xuất và hạn chế ô nhiễm môi trường sống 1.2 Mục tiêu đề tài Phân lập, khảo sát khả năng cố định đạm của một số dòng vi khuẩn nội sinh và vi khuẩn sống ở vùng rễ của cây khoai lang và khảo sát sự... nội sinh thực vật Dobereiner và Ruschel (1958) phân lập được loài vi khuẩn Beijerinckia fluminensis cố định nitơ sống ở vùng rễ cây mía trồng ở vùng nhiệt đới đã cho thấy một tiềm năng cố định nitơ ở cây họ hòa bản Những năm gần đây người ta phát hiện nhiều nhóm vi khuẩn sống trong vùng rễ, trong rễ cây, thân cây và các lá cây không thuộc họ đậu như lúa, bắp, mía, sorghum, và một số loại cỏ Các vi khuẩn. .. thang chuẩn 100bp 3.2 Phương pháp 3.2.1 Phân lập vi khuẩn nội sinh và ở vùng rễ khoai lang trên môi trường LGIP không đạm a Phân lập vi khuẩn  Khử trùng bề mặt mẫu: Đối với mẫu khoai lang thu về - Rửa thật sạch bùn đất, để ráo tự nhiên (để riêng từng bộ phận) Nếu chưa phân lập ngay thì để riêng các bộ phận trong túi nylon buộc chặt và bảo quản trong tủ lạnh ở 5oC - Khử trùng nước cất, bình tam giác... (http://doc.edu.vn/tai-lieu/tieu-luan-tim-hieu-ve -khoai- lang- va-quy-trinh-sanxuat-tinh-bot -khoai- lang- 11454/, ngày 02/08/2013) 2.5 Phương pháp phân lập vi khuẩn Phân lập vi khuẩn là quá trình tách riêng các loài vi sinh vật từ quần thể ban đầu và đưa về dạng thuần khiết Đây là một khâu có ý nghĩa rất quan trọng trong vi c nghiên cứu và ứng dụng vi sinh vật Vi sinh vật ở dạng thuần khiết là giống vi sinh vật được tạo ra từ một tế bào ban đầu Trong... thụ bởi G diazotrophicus nên vi khuẩn sẽ tự tạo ra enzyme ngoại bào có thể thủy phân sucrose thành fructose và glucose Bảng 2 Vị trí hiện diện của Glucoacetobacter diazotrophicus trong các loại cây khác nhau Nguồn Vị trí Mía Rễ, thân, lá, nước mía Cỏ Cameroon Rễ, thân Khoai lang Rễ, thân, củ Cà phê Rễ, vùng rễ, thân Kê Rễ, vùng rễ, thân Khóm Trái, rễ, thân, lá Bắp Vùng rễ Cà rốt Rễ Xoài Trái Chuối Vùng. .. Muthukumarasamy et al., 2002) Gần đây, Prabudoss và Stella (2009) phân lập Gluconacetobacter diazotrophicus từ rễ, thân, chồi, lá ở mía đường, khoai lang, khóm; vi khuẩn này có khả năng cố định đạm mạnh mẽ làm tăng sản lượng mía đường, khóm, khoai lang (Nguyễn Hữu Hiệp và Cao Ngọc Điệp, 2012) 2.2.3 Vi khuẩn Burkholderia  Giới thiệu Vi khuẩn Burkholderia là vi khuẩn Gram âm, hình que, có đường kính khoảng... trình cố định đạm sinh học Tuy nhiên, ở vi khuẩn lam, quá trình cố định đạm không phải xảy ra ở bất kì tế bào nào mà chỉ có thể xảy ra ở dị bào (Desnoues et al., 2003) Các loài vi khuẩn cố định đạm sử dụng nitrogenase của chúng nhằm phá vỡ dần liên kết cộng hóa trị bậc III của nitơ (dạng rất bền) bằng cách gắn thêm dần dần những proton H+ vào chúng (N≡N) (Sadara et al., 2003) Quá trình cố định nitơ phân. .. hiển vi điện tử vi khuẩn Glucnoacetobacter diazotrophicus ở dạng tế bào đơn, đôi hoặc dây dài do các tế bào nối lại mà không có nội bào tử Vi khuẩn này phát triển ở nồng độ sucrose cao (10%) và pH thấp, đặc biệt có khả năng cố định đạm ở điều kiện ít O2 Nguồn carbon tốt nhất cho sự phát triển của vi khuẩn là sucrose ở nồng độ cao 10% và thậm chí ở nồng độ cao hơn (30%) vi khuẩn vẫn có thể phát triển Bởi... và con đường oxy hóa Qua hai con đường đó người ta thu được kết quả: Chuyên ngành Công nghệ Sinh học 5 Vi n NC & PT Công nghệ sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 – 2013 Trường ĐHCT - Nếu nồng độ oxy nhiều sẽ ức chế quá trình cố định nitơ phân tử - Hiệu suất cố định nitơ phân tử của những vi sinh vật kỵ khí thường cao hơn những vi sinh vật hiếu khí 2.2 Sơ lược về vi khuẩn cố định đạm sống nội . Đề tài Phân lập vi khuẩn cố định đạm nội sinh và ở vùng rễ khoai lang (Ipomoean batatas) trồng tại tỉnh Vĩnh Long được thực hiện với mục đích tuyển chọn một số dòng vi khuẩn sống nội sinh hay. Phân lập, khảo sát khả năng cố định đạm của một số dòng vi khuẩn nội sinh và vi khuẩn sống ở vùng rễ của cây khoai lang và khảo sát sự hiện diện của gen nifH ở một số dòng có khả năng cố định. Phương pháp 24 3.2.1. Phân lập vi khuẩn nội sinh và ở vùng rễ khoai lang trên môi trường LGIP không đạm. 24 3.2.2. Khảo sát khả năng cố định đạm của các dòng vi khuẩn phân lập được 27 3.2.3.