xác định độc lực ld50 của staphylococcus aureus và escherichia coli trên chuột bạch

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG -oOo- NGUYỄN VĂN NHÂN XÁC ĐỊNH ĐỘC LỰC LD50 CỦA STAPHYLOCOCCUS AUREUS VÀ ESCHERICHIA COLI TRÊN CHUỘT BẠCH LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP NGÀNH: THÚ Y Cần Thơ, 2013 TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG -oOo- LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP NGÀNH: THÚ Y Tên đề tài: XÁC ĐỊNH ĐỘC LỰC LD50 CỦA STAPHYLOCOCCUS AUREUS VÀ ESCHERICHIA COLI TRÊN CHUỘT BẠCH Giáo viên hướng dẫn: Sinh viên thực hiện: PGs.TS. HUỲNH KIM DIỆU NGUYỄN VĂN NHÂN MSSV: 3096886 LỚP: THÚ Y K35 Cần Thơ, 2013 TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG BỘ MÔN THÚ Y Đề tài: “Xác định độc lực LD50 Staphylococcus aureus Escherichia coli chuột bạch (Mus musculus domesticus)” sinh viên Nguyễn Văn Nhân, thực phòng thí nghiệm Dược lý (E009) phòng thí nghiệm Vi sinh Thú y (E209), môn Thú y, khoa Nông Nghiệp Sinh Học Ứng Dụng, trường Đại Học Cần Thơ, từ tháng 07/2013 đến tháng 11/2013. Cần Thơ, ngày tháng năm 2013. Cần Thơ, ngày…tháng….năm 2013. Duyệt Bộ Môn Giáo viên hướng dẫn Huỳnh Kim Diệu Cần Thơ, ngày….tháng….năm 2013. Duyệt Khoa Nông Nghiệp SHƯD i LỜI CẢM ƠN  Trong suốt trình học tập Trường Đại Học Cần Thơ, quý thầy cô dìu dắt, ân cần truyền đạt tri thức vô giá cho chúng tôi, tri thức hành trang cho vững bước vào đời. Hôm nay, ước mơ thành thật, với phấn đấu thân, hoàn thành luận văn tốt nghiệp. Sự dạy dỗ, động viên lo lắng cha mẹ người thân gia đình nguồn động lực thúc đẩy nổ lực phấn đấu. Trong tận đáy lòng xin chân thành cám ơn người thân yêu kính dâng lên cha mẹ lòng biết ơn sâu sắc, người dành trọn đời cho cất bước đến trường. Tôi muốn gửi đến lòng biết ơn vô hạn ghi nhớ công ơn cô Huỳnh Kim Diệu, người hết lòng bảo, khuyên răn, giúp đỡ động viên hoàn thành luận văn tốt nghiệp. Tôi xin gửi lòng biết ơn đến cô Nguyễn Thu Tâm tận tình hướng dẫn cho suốt thời gian học Đại học. Xin gửi lời chân thành đến quý Thầy Cô Bộ môn Thú y Bộ môn Chăn nuôi hết lòng truyền đạt kinh nghiệm kiến thức quý báo cho rèn luyện, học tập tốt suốt thời gian học Đại học. Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc đến chị Phan Thị Tư, chị Trần Thị Ngọc Thanh anh chị Cao học Thú y K18 giúp đỡ trình làm đề tài. Cám ơn tất bạn bè lớp Thú y K35, em sinh viên Dược Thú y K36 làm đề tài phòng thí nghiệm động viên, giúp đỡ chia vui buồn với suốt thời gian học Đại học thực đề tài. Tôi không quên kỷ niệm vui buồn bên người suốt năm học vừa qua. Cuối xin kính chúc người thật nhiều sức khỏe, hạnh phúc thành công! Nguyễn Văn Nhân ii MỤC LỤC Trang TRANG DUYỆT i LỜI CẢM ƠN .ii MỤC LỤC . iii DANH SÁCH BẢNG .v DANH SÁCH HÌNH . vi DANH SÁCH CHỮ VIẾT TẮT vii TÓM LƯỢC . viii CHƯƠNG1 ĐẶT VẤN ĐỀ .1 CHƯƠNG CƠ SỞ LÝ LUẬN . .2 2.1 GIỐNG STAPHYLOCOCCUS AUREUS . 2.1.1 Đặc điểm hình thái tính bắt màu 2.1.2 Đặc tính nuôi cấy 2.1.3 Đặc tính sinh hóa 2.1.4 Cấu trúc kháng nguyên . 2.1.5 Các loại độc tố 2.1.6 Các loại enzyme . 2.1.7 Sức đề kháng 2.1.8 Sự kháng kháng sinh 2.1.9 Tính gây bệnh 10 2.1.10 Một số nhiễm khuẩn Staphylococcus aureus gây người 11 2.2 GIỐNG ESCHERICHIA COLI . 12 2.2.1 Đặc điểm hình thái 13 2.2.2 Đặc tính nuôi cấy . 13 2.2.3 Đặc tính sinh hóa . 14 2.2.4 Cấu trúc kháng nguyên vi khuẩn Escherichia coli . 14 2.2.5 Độc tố gây bệnh vi khuẩn Escherichia coli 17 iii 2.2.6 Sức đề kháng vi khuẩn 21 2.2.7 Khả gây bệnh 22 2.2.8 Cơ chế gây bệnh tiêu chảy 22 2.2.9 Triệu chứng bệnh tích . 23 CHƯƠNG PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP THÍ NGHIỆM .25 3.1 Thời gian, địa điểm đối tượng nghiên cứu 25 3.1.1 Thời gian địa điểm thực 25 3.1.2 Đối tượng thí nghiệm 25 3.2 Phương tiện nghiên cứu . 25 3.2.1 Dụng cụ, trang thiết bị thí nghiệm . 25 3.2.2 Hóa chất . 25 3.2.3 Động vật thí nghiệm 25 3.3 Phương pháp tiến hành thí nghiệm 26 3.3.1 Nuôi chuột . 26 3.3.2 Xác định liều gây chết 50% (LD50) chuột thí nghiệm 26 3.4 Chỉ tiêu theo dõi 27 3.5 Phương pháp xử lý số liệu . 27 CHƯƠNG KẾT QUẢ THẢO LUẬN .28 4.1 Kết thử nghiệm LD50 chủng Staphylococcus aureus chuột 28 4.1.1 Dấu hiệu lâm sàng sau thử nghiệm xác định liều LD50 28 4.1.2 Bệnh tích chuột thử nghiệm xác định liều LD50 31 4.2 Kết thử nghiệm LD50 chuột chủng Escherichia coli . 33 4.2.1 Dấu hiệu lâm sàng sau thử nghiệm xác định liều LD50 33 4.2.2 Bệnh tích chuột thử nghiệm xác định liều LD50 36 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ . .39 5.1 Kết luận 39 5.2 Đề nghị . 39 TÀI LIỆU THAM KHẢO . .40 PHỤ CHƯƠNG . .44 iv DANH SÁCH BẢNG Trang Bảng 2.1 Độc tố Staphylococcus aureus liều LD50 .7 Bảng 2.2 Mối liên quan vài kháng nguyên O vi khuẩn Escherichia coli đối tượng gây bệnh . 17 Bảng 4.1 Kết thử nghiệm liều LD50 chuột .28 Bảng 4.2 Kết mổ khám thử liều LD50 . 31 Bảng 4.3 Kết xác định liều LD50 gây chết Escherichia coli chuột bạch 34 Bảng 4.4 Kết mổ khám thử liều LD50 . 36 v DANH SÁCH HÌNH Trang Hình 2.1 Staphylococcus aureus Hình 2.2 Escherichia coli .13 Hình 4.1 Khuẩn lạc Staphylococcus aureus phân lập từ gan sau lần cấy chuyển 31 Hình 4.2 Khuẩn lạc Staphylococcus aureus phân lập từ thận lách 31 Hình 4.3 Khuẩn lạc Staphylococcus aureus phân lập từ phổi tim .31 Hình 4.4 Tích mủ thận gan 33 Hình 4.5 Tích mủ lách, xoang bụng gan nhạt màu .33 Hình 4.6 Triệu chứng tiêu chảy .37 Hình 4.7 Triệu chứng ủ rũ .37 Hình 4.8 Gan xuất huyết 38 Hình 4.9 Ruột mỏng .38 Hình 4.10 Dạ dày nhiều khí, mỏng 38 Hình 4.11 Manh tràng mỏng 38 Hình 4.12 Vi khuẩn Escherichia coli môi trường TBX từ phân 39 Hình 4.13 Vi khuẩn Escherichia coli phân lập từ ruột, dày, gan, thận 39 vi DANH SÁCH CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Giải thích CT Ctv DAEC DMSO EAEC EHEC EIEC ETEC EPEC GC-C KIA LD50 LPS LT MC MHA MR MRSA NA PCR PED ST Stx Stx1 Stx2 Stx2e TBX TNF TGE TSST VP VTs Cholarae toxin Cộng tác viên Diffusely Adhering Escherichia coli Dimethyl sulfoxide Enteroaggregative Escherichia coli Enterohaemorrhagic Escherichia coli Enteroinvasive Escherichia coli Enterotoxigenic Escherichia coli Enteropathogenic Escherichia coli Guanylate Cylase C Kligler Iron Agar Lethal dose 50% Lypopoly Saccharide Heat-labile enterotoxin MacConkey Agar Muller Hinton Agar Methyl Red Methicillin Resistant Staphylococcus aureus Nutrient Agar Polymerase chain reaction Porcine Epidemic Diarrhea Heat-stable enterotoxin Shiga toxin Shiga toxin Shiga toxin Shiga toxin 2e Tryptone Bile X-Glucuronide Tumor Necrosis Facter Transmissible Gastro Enteritis Toxic Shock Syndrome Toxin Voges Prauskauer Vero toxin vii TÓM LƯỢC Để xác định độc lực chủng vi khuẩn Staphylococcus aureus Escherichia coli, tiến hành kiểm tra độc lực LD50 chủng vi khuẩn chuột bạch phương pháp tiêm truyền động vật thí nghiệm từ tháng 07 đến tháng 10 năm 2013, thí nghiệm bố trí hoàn toàn ngẫu nhiên, nhân tố với mức độ gây nhiễm Staphylococcus aureus (NT1: 108 cfu/ml; NT2: 109 cfu/ml; NT3: 1010 cfu/ml; NT4: 1011 cfu/ml) Escherichia coli (NT1: 1x109 cfu/ml; NT2: 2,5x109 cfu/ml; NT3: 5x109 cfu/ml, NT4: 1x1010 cfu/ml), lần lặp lại, 12 đơn vị thí nghiệm tiến hành tiêm xoang bụng chuột, với thể tích tiêm ml nghiệm thức. Kết kiểm tra cho thấy: Khi tiêm vi khuẩn vào thân nhiệt tăng, bỏ ăn uống, hoạt động kém, chạy xung quanh co giật trước chết. Chủng Staphylococcus aureus giết chết 50% chuột thí nghiệm nồng độ 3,74x109 cfu/ml, giết chết chuột 100% nồng độ 1011cfu/ml sau tiêm giờ, 73,33% nồng độ 1010 cfu/ml sau tiêm thấp 18,75% nồng độ 109cfu/ml sau tiêm giờ. Bệnh tích ghi nhận thí nghiệm từ nồng độ cao xuống thấp là: tích mủ nội tạng 75,00%, 77,78%, 16,67%, hoại tử vùng tiêm 75%, 11,11%, 00,00%, gan thận sưng nhạt màu, lách sưng 100%, 77,78%, 25,00%. Chủng Escherichia coli giết chết 50% chuột thí nghiệm nồng độ 2,29x109 cfu/ml giết chết 100% chuột nồng độ 1x1010 cfu/ml sau tiêm vòng giờ, 66,67% nồng độ 5x109 cfu/ml sau tiêm thấp 17,65% nồng độ 2,5x109 cfu/ml sau tiêm giờ. Bệnh tích ghi nhận từ nồng độ cao xuống thấp thí nghiệm bụng chướng hơi, dày ruột nhiều khí tỷ lệ 83,33%, 66,67, 50,00%, 25,00%; niêm mạc ruột mỏng, gan sưng tụ huyết ruột xuất huyết tỷ lệ 91,67%, 75,00%, 58,33%, 16,67%. Từ khóa: xác định độc lực chủng vi khuẩn Staphylococcus aureus Escherichia coli. viii 6.00 6.000 6.00 6.000 12 6.00 6.000 6.00 6.000 12 Total 12 12 24 Chi-Sq = 24.000, DF = 1, P-Value = 0.000 Bảng So sánh tỉ lệ chết nồng độ 109 cfu/ml 1010 cfu/ml. Nồng độ (cfu) Chết Sống Tổng hàng 109 12 10 10 12 Tổng 11 13 24 Chi-Square Test: chet, song Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts chet 6.00 6.000 song 12 6.00 6.000 Total 12 12 6.00 6.000 6.00 6.000 12 Total 12 12 24 Chi-Sq = 24.000, DF = 1, P-Value = 0.000 Chi-Square Test: chet, song Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts chet 5.50 1.136 song 6.50 0.962 Total 12 5.50 1.136 6.50 0.962 12 Total 11 13 24 Chi-Sq = 4.196, DF = 1, P-Value = 0.041 Bảng So sánh tỉ lệ chết nồng độ 109 cfu/ml 1011 cfu/ml Nồng độ (cfu) Chết Sống Tổng hàng 10 12 1011 12 12 Tổng 15 24 45 Trị số Chi Bình Phương Độ Tự P (Ho) = 0.0004 12.3222 ** Bảng So sánh tỉ lệ chết nồng độ 1010 cfu/ml 1011 cfu/ml. Nồng độ (cfu/ml) Chết Sống Tổng hàng 1010 12 11 10 12 12 Tổng 20 24 H0 : PA =PB EPT = Kết : 0.046584 * 2. Kết so sánh bệnh tích thử LD50 2.1 Tích mủ nội tạng Bảng 10 So sánh tỉ lệ tích mủ nội tạng nồng độ 108 cfu/ml, 109 cfu/ml 1011 cfu/ml. Nồng độ (cfu/ml) Có Không Tổng hàng 108 10 12 10 1010 Tổng 12 13 25 Trị số Chi Bình Phương Độ Tự P (Ho) = 0.0384 6.51994 * Bảng 11 So sánh tỉ lệ tích mủ nội tạng nồng độ 108 cfu/ml 109 cfu/ml. Nồng độ (cfu/ml) Có Không Tổng hàng 10 10 12 109 Tổng 12 21 Trị số Chi Bình Phương Độ Tự P (Ho) = 0.0135 6.10822 * 46 Bảng 12 So sánh tỉ lệ tích mủ nội tạng nồng độ 108 cfu/ml 1010 cfu/ml. Nồng độ (cfu/ml) 108 1010 Tổng H0 : PA =PB EPT = Kết : Có Không 10 11 Tổng hàng 12 16 0.06044 NS Bảng 13 So sánh tỉ lệ tích mủ nội tạng nồng độ 109 cfu/ml 1010 cfu/ml. Nồng độ (cfu/ml) Có Không Tổng hàng 109 10 10 Tổng 10 13 H0 : PA =PB EPT = Kết : 0.503497 NS 2.2 Hoại tử vùng tiêm Bảng 14 Hoại tử vùng tim. Nồng độ (cfu/ml) Có 108 10 1010 Tổng Trị số Chi Bình Phương Độ Tự P (Ho) = 0.0211 Không 12 21 Tổng hàng 12 25 7.71362 * Bảng 15 So sánh tỉ lệ hoại tử vùng tiêm nồng độ 108 cfu/ml 109 cfu/ml. Nồng độ (cfu/ml) Có Không Tổng hàng 10 12 12 109 Tổng 21 21 47 H0 : PA =PB EPT = Kết : 0.063158 NS Bảng 16 So sánh tỉ lệ hoại tử vùng tiêm nồng độ 108 cfu/ml 1010 cfu/ml. Nồng độ (cfu/ml) Có Không Tổng hàng 10 12 12 1010 Tổng 13 16 H0 : PA =PB EPT = Kết : 0.007143 ** Bảng 17 So sánh tỉ lệ hoại tử vùng tiêm nồng độ 109 cfu/ml 1010 cfu/ml. Nồng độ (cfu/ml) Có Không Tổng hàng 10 1010 Tổng 13 H0 : PA =PB EPT = Kết : 0.05035 NS 2.3 Gan thận sưng nhạt màu, lách sưng Bảng 18 So sánh tỉ lệ gan thận sưng, nhạt màu, lách sưng nồng độ 108 cfu/ml, 109 cfu/ml 1010cfu/ml. Nồng độ (cfu/ml) Có Không Tổng hàng 10 12 109 10 10 4 Tổng 15 10 25 Trị số Chi Bình Phương Độ Tự P (Ho) = 0.0386 6.51046 * 48 Bảng 19 So sánh tỉ lệ gan thận sưng nhạt màu, lách sưng nồng độ 108 cfu/ml 109 cfu/ml. Nồng độ (cfu/ml) Có Không Tổng hàng 108 12 10 Tổng 11 10 21 Trị số Chi Bình Phương Độ Tự P (Ho) = 0.0371 4.34489 * Bảng 20 So sánh tỉ lệ gan thận sưng nhạt màu, lách sưng nồng độ 108 cfu/ml 1010 cfu/ml. Nồng độ (cfu/ml) Có Không Tổng hàng 108 12 10 10 4 Tổng 16 H0 : PA =PB EPT = Kết : 0.019231 * Bảng 21 So sánh tỉ lệ gan thận sưng nhạt màu, lách sưng nồng độ 109 cfu/ml 1010 cfu/ml. Nồng độ (cfu/ml) Có Không Tổng hàng 109 10 10 4 Tổng 11 13 H0 : PA =PB EPT = Kết : 0.461538 NS Kết thống kê số chuột bệnh tích mủ Bảng 22 So sánh tỉ lệ chuột bệnh tích mủ nồng độ 10 cfu/ml, 109 cfu/ml 1010 cfu/ml. Nồng độ (cfu/ml) không bệnh tích Có bệnh tích Tổng hàng 108 10 12 10 9 1010 4 Tổng 10 15 25 49 Trị số Chi Bình Phương Độ Tự P (Ho) = 0.0009 Bảng 23 So sánh tỉ chứng. Nồng độ (cfu/ml) 108 DC Tổng H0 : 14 ** lệ chuột bệnh tích nồng độ 10 cfu/ml so với đối không bệnh tích 10 12 22 PA =PB EPT = Kết : Có bệnh tích 2 Tổng hàng 12 12 24 0.23913 NS B. ESCHERICHIA COLI 1. Kết thống kê so sánh tỉ lệ sống, chết thí nghiệm thử LD50. Bảng 24 So sánh tỉ lệ chết nồng độ 1x109 cfu/ml, 2,5x109 cfu/ml, 5x109 cfu/ml x 1010 cfu/ml. Nồng độ (cfu) Chết Sống Tổng hàng x 109 12 12 2,5 x 10 12 x 109 12 10 x 10 12 12 Tổng 22 26 48 Chi-Square Test: chet, song Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts chet 5.50 5.500 song 12 6.50 4.654 Total 12 5.50 1.136 6.50 0.962 12 5.50 0.409 6.50 0.346 12 12 5.50 7.682 6.50 6.500 12 Total 22 26 48 Chi-Sq = 27.189, DF = 3, P-Value = 0.000 50 Bảng 25 So sánh tỉ lệ chết nồng độ 1x109 cfu/ml, 2,5x109 cfu/ml 5x109 cfu/ml. Nồng độ (cfu) Chết Sống Tổng hàng 1x109 12 12 2,5x10 12 5x109 12 Tổng 10 26 36 Trị số Chi Bình Phương Độ Tự P (Ho) = 0.0233 7.52115 * Bảng 26 So sánh tỉ lệ chết nồng độ 2,5x109 cfu/ml, 5x109 cfu/ml 1x1010 cfu/ml. Nồng độ (cfu) Chết Sống Tổng hàng 2,5 x 10 12 x 109 12 10 x 10 12 12 Tổng 22 14 36 Trị số Chi Bình Phương Độ Tự P (Ho) = 0.0036 11.2679 ** Bảng 27 So sánh tỉ lệ chết nồng độ 1x109 cfu/ml 2,5x109 cfu/ml. Nồng độ (cfu) Chết Sống Tổng hàng 1x10 12 12 2,5x109 12 Tổng 21 24 H0 : PA =PB EPT = Kết : 0.108696 NS Bảng 28 So sánh tỉ lệ chết nồng độ 1x109 cfu/ml 5x109 cfu/ml. Nồng độ (cfu) Chết Sống Tổng hàng 1x10 12 12 5x109 12 Tổng 17 24 Trị số Chi Bình Phương 7.64286 51 Độ Tự P (Ho) = 0.0057 ** Bảng 29 So sánh tỉ lệ chết nồng độ 1x109 cfu/ml 1x1010 cfu/ml. Nồng độ (cfu) Chết Sống Tổng hàng 1x10 12 12 1x1010 12 12 Tổng 12 12 24 Chi-Square Test: chet, song Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts chet 6.00 6.000 song 12 6.00 6.000 Total 12 12 6.00 6.000 6.00 6.000 12 Total 12 12 24 Chi-Sq = 24.000, DF = 1, P-Value = 0.000 Bảng 30 So sánh tỉ lệ chết nồng độ 2,5x109 cfu/ml 5x109 cfu/ml. Nồng độ (cfu) 2,5 x 109 x 109 Tổng Chết 10 Sống 14 Tổng hàng 12 12 24 Chi-Square Test: chet, song Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts chet 5.00 0.800 song 7.00 0.571 Total 12 5.00 0.800 7.00 0.571 12 Total 10 14 24 Chi-Sq = 2.743, DF = 1, P-Value = 0.098 52 Bảng 31 So sánh tỉ lệ chết nồng độ 2,5x109 cfu/ml 1x1010 cfu/ml. Nồng độ (cfu) 2,5x109 1x1010 Tổng Chết 12 15 Trị số Chi Bình Phương Độ Tự P (Ho) = 0.0004 Sống 9 Tổng hàng 12 12 24 12.3222 ** Bảng 32 So sánh tỉ lệ chết nồng độ 5x109 cfu/ml 1x1010 cfu/ml. Nồng độ (cfu) Chết Sống Tổng hàng 5x109 12 10 1x10 12 12 Tổng 17 24 Trị số Chi Bình Phương Độ Tự P (Ho) = 0.0262 4.94211 * 2. Kết so sánh bệnh tích thử LD50 Bảng 33 So sánh tỉ lệ bụng chứng hơi, dày ruột nhiều 1x109 cfu/ml, 2,5x109 cfu/ml, 5x109 cfu/ml 1x1010 cfu/ml. Nồng độ (cfu) Chết Sống x 10 12 2,5 x109 9 5x10 1x1010 12 Tổng 22 26 khí nồng độ Tổng hàng 12 12 12 12 48 Chi-Square Test: co, khong Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts co 6.75 2.083 khong 5.25 2.679 Total 12 6.75 0.083 5.25 0.107 12 6.75 5.25 12 53 0.231 0.298 10 6.75 1.565 5.25 2.012 12 Total 27 21 48 Chi-Sq = 9.058, DF = 3, P-Value = 0.029 Bảng 34 So sánh tỉ lệ bụng chứng hơi, dày ruột nhiều 1x109 cfu/ml, 2,5x109 cfu/ml 5x109 cfu/ml. Nồng độ (cfu) Chết Sống x 10 2,5 x 109 6 x 10 Tổng 17 19 khí nồng độ Tổng hàng 12 12 12 36 Chi-Square Test: co, khong Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts co 5.67 1.255 khong 6.33 1.123 Total 12 5.67 0.020 6.33 0.018 12 5.67 0.961 6.33 0.860 12 Total 17 19 36 Chi-Sq = 4.235, DF = 2, P-Value = 0.120 Bảng 35 So sánh tỉ lệ bụng chứng hơi, dày ruột nhiều 2,5x109 cfu/ml, x 109 cfu/ml x 1010 cfu/ml. Nồng độ (cfu) Chết Sống 2,5 x 10 6 x 109 x 1010 10 Tổng 24 12 Trị số Chi Bình Phương Độ Tự P (Ho) = 0.4234 1.71875 NS 54 khí.giữa nồng độ Tổng hàng 12 12 12 36 Bảng 36 So sánh tỉ lệ bụng chứng hơi, dày ruột nhiều khí nồng độ 1x109 cfu/ml 2,5x109 cfu/ml. Nồng độ (cfu) x 109 2,5 x 109 Tổng Chết Trị số Chi Bình Phương Độ Tự P (Ho) = 0.3488 Sống 15 Tổng hàng 12 12 24 0.87778 NS Bảng 37 So sánh tỉ lệ bụng chứng hơi, dày ruột nhiều 1x108 cfu/ml 5x1010 cfu/ml. Nồng độ (cfu) Chết Sống x 109 9 x 10 Tổng 11 13 khí nồng độ Tổng hàng 12 12 24 Chi-Square Test: co, khong Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts co 5.50 1.136 khong 6.50 0.962 Total 12 5.50 1.136 6.50 0.962 12 Total 11 13 24 Chi-Sq = 4.196, DF = 1, P-Value = 0.041 Bảng 38 So sánh tỉ lệ bụng chứng hơi, dày ruột nhiều 1x109 cfu/ml 1x1010 cfu/ml. Nồng độ (cfu) Chết Sống 1x109 10 1x10 10 Tổng 13 11 khí nồng độ Tổng hàng 12 12 24 Chi-Square Test: co, khong Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts 55 co 6.50 1.885 khong 5.50 2.227 Total 12 10 6.50 1.885 5.50 2.227 12 Total 13 11 24 Chi-Sq = 8.224, DF = 1, P-Value = 0.004 Bảng 39 So sánh tỉ lệ bụng chứng hơi, dày ruột nhiều khí nồng độ 2,5x109 cfu/ml 5x109 cfu/ml. Nồng độ (cfu) Chết Sống Tổng hàng 2,5x10 6 12 5x109 12 Tổng 14 10 24 Trị số Chi Bình Phương 0.32143 Độ Tự P (Ho) = 0.5708 NS Bảng 40 So sánh tỉ lệ bụng chứng hơi, dày ruột nhiều 2,5 x109 cfu/ml 1x1010 cfu/ml. Nồng độ (cfu) Chết Sống 2,5x10 6 1x1010 10 Tổng 16 Trị số Chi Bình Phương 2.125 Độ Tự P (Ho) = 0.1449 NS khí nồng độ Bảng 41 So sánh tỉ lệ bụng chứng hơi, dày ruột nhiều 5x1010 cfu/ml 1x1010 cfu/ml. Nồng độ (cfu/ml) Chết Sống 5x10 1x1010 10 Tổng 18 khí nồng độ Trị số Chi Bình Phương Độ Tự P (Ho) = 0.4920 0.47222 NS 56 Tổng hàng 12 12 24 Tổng hàng 12 12 24 Bảng 42 So sánh tỉ lệ niêm mạc ruột mỏng, gan sưng tụ huyết ruột xuất huyết nồng độ 1x109 cfu/ml, 2,5x109 cfu/ml, 5x109 cfu/ml 1x1010 cfu/ml. Nồng độ (cfu) 1x109 2,5 x109 5x109 1x1010 Tổng Chết 12 22 Trị số Chi Bình Phương Sống 12 26 Tổng hàng 12 12 12 12 48 12.1089 Độ Tự P (Ho) = 0.0070 ** Bảng 43 So sánh tỉ lệ niêm mạc ruột mỏng, gan sưng tụ huyết ruột xuất huyết nồng độ x109 cfu/ml, 2,5x109 cfu/ml, 5x109 cfu/ml. Nồng độ (cfu) Chết Sống Tổng hàng 1x10 10 12 2,5x109 12 5x10 12 Tổng 18 18 36 Chi-Square Test: co, khong Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts co 6.00 2.667 khong 10 6.00 2.667 Total 12 6.00 0.167 6.00 0.167 12 6.00 1.500 6.00 1.500 12 Total 18 18 36 Chi-Sq = 8.667, DF = 2, P-Value = 0.013 57 Bảng 44 So sánh tỉ lệ niêm mạc ruột mỏng, gan sưng tụ huyết ruột xuất huyết nồng độ 2,5x109 cfu/ml, 5x109 cfu/ml 1x1010 cfu/ml. Nồng độ (cfu) 2,5x109 5x109 1x1010 Tổng Chết 11 27 Sống Trị số Chi Bình Phương Tổng hàng 12 12 12 36 2.02778 Độ Tự P (Ho) = 0.3628 NS Bảng 45 So sánh tỉ lệ niêm mạc ruột mỏng, gan sưng tụ huyết ruột xuất huyết nồng độ 1x109 cfu/ml, 2,5x109 cfu/ml. Nồng độ (cfu) Chết Sống Tổng hàng 1x109 10 12 2,5x10 12 Tổng 15 24 Trị số Chi Bình Phương 3.14444 Độ Tự P (Ho) = 0.0762 NS Bảng 46 So sánh tỉ lệ niêm mạc ruột mỏng, gan sưng tụ huyết ruột xuất huyết nồng độ 1x109 cfu/ml 5x109 cfu/ml. Nồng độ (cfu) Chết Sống Tổng hàng 1x109 10 12 5x10 12 Tổng 11 13 24 Chi-Square Test: co, khong Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts co 5.50 2.227 khong 10 6.50 1.885 Total 12 5.50 2.227 6.50 1.885 12 Total 11 13 24 Chi-Sq = 8.224, DF = 1, P-Value = 0.004 58 Bảng 47 So sánh tỉ lệ niêm mạc ruột mỏng, gan sưng tụ huyết ruột xuất huyết nồng độ 1x109 cfu/ml 1x1010 cfu/ml. Nồng độ (cfu) Chết Sống Tổng hàng 1x109 10 12 11 1x10 11 12 Tổng 13 11 24 Chi-Square Test: co, khong Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts co 6.50 3.115 khong 10 5.50 3.682 Total 12 11 6.50 3.115 5.50 3.682 12 Total 13 11 24 Chi-Sq = 13.594, DF = 1, P-Value = 0.000 Bảng 48 So sánh tỉ lệ niêm mạc ruột mỏng, gan sưng tụ huyết ruột xuất huyết nồng độ 2,5x109 cfu/ml 5x109 cfu/ml. Nồng độ (cfu) Chết Sống Tổng hàng 2,5x109 12 5x10 12 Tổng 16 24 Trị số Chi Bình Phương 0.375 Độ Tự P (Ho) = 0.5403 NS Bảng 49 So sánh tỉ lệ niêm mạc ruột mỏng, gan sưng tụ huyết ruột xuất huyết nồng độ 2,5x109 cfu/ml 1x1010 cfu/ml. Nồng độ (cfu) Chết Sống Tổng hàng 2,5x109 12 10 1x10 11 12 Tổng 18 24 Trị số Chi Bình Phương 2.58333 Độ Tự P (Ho) = 0.1080 NS 59 Bảng 50 So sánh tỉ lệ niêm mạc ruột mỏng, gan sưng tụ huyết ruột xuất huyết nồng độ 5x109 cfu/ml 1x1010 cfu/ml. Nồng độ (cfu/ml) Chết 5x10 1x1010 11 Tổng 19 Trị số Chi Bình Phương 0.675 Độ Tự P (Ho) = 0.4113 NS Sống 60 Tổng hàng 12 12 24 [...]... tra độc lực của các chủng vi khuẩn tìm được trên động vật thí nghiệm để xác định chính xác khả năng gây bệnh của các loài vi khuẩn này là điều cần thiết Xuất phát từ tình hình thực tế, chúng tôi tiến hành thực hiện đề tài Xác định độc lực LD50 của Staphylococcus aureus và Escherichia coli trên chuột bạch (Mus musculus domesticus)” Mục tiêu đề tài: Xác định độc lực của vi khuẩn Staphylococcus aureus và. .. Enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC) đã được nhiều tác giả trên thế giới thống nhất là một trong những tác nhân thường gặp và quan trọng gây bệnh tiêu chảy ở heo con Tỷ lệ các chủng Escherichia coli phân lập từ heo con tiêu chảy có độc lực mạnh và các yếu tố gây bệnh cũng cao hơn rất nhiều (Trương Quang, 2005) Vì vậy nghiên cứu xác định các yếu tố độc lực của Staphylococcus aureus và Escherichia coli gây bệnh,... khuẩn vào dưới da cho chuột bạch, chuột lang, thỏ có thể gây viêm cục bộ, nếu tiêm với liều lớn có thể gây bại huyết, giết chết con vật (Nguyễn Vĩnh Phước, 1977) Thật vậy, để xác định vai trò của 1 chủng vi khuẩn Escherichia coli gây ra một bệnh nào đó, cần kiểm tra độc lực và các yếu tố gây bệnh mà chủng Escherichia coli đó có được Do vậy, kết quả những nghiên cứu về độc lực, yếu tố gây bệnh của Escherichia. .. 2.0x109 Ghi chú: NDe (không xác định) , -d (không xác định đặc tính) Trong số các loại độc tố enterotoxin của Staphylococcus aureus (SE) khác nhau đóng vai trò quan trọng trong các vụ ngộ độc thực phẩm (Yves et al., 2002) Sự phân loại dựa vào tính kháng nguyên, 5 loại độc tố SE đầu tiên được tìm thấy đó là: độc tố A (SEA), độc tố B (SEB), độc tố C (SEC), độc tố D (SED) và độc tố E (SEE) Trong đó, SEC... những yếu tố độc lực quan trọng của vi khuẩn Escherichia coli gây bệnh tiêu chảy ở heo con Độc tố đường ruột làm thay đổi nước, chất điện giải ở ruột non và dẫn tới tiêu chảy (Gyles and Fairbrother, 2010) * Độc tố đường ruột của vi khuẩn Enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC) Có 2 loại độc tố đường ruột của vi khuẩn thuộc nhóm ETEC được xác định là độc tố không chịu nhiệt (LT) và độc tố chịu nhiệt... aureus và Escherichia coli 1 CHƯƠNG 2 CƠ SỞ LÝ LUẬN 2.1 GIỐNG STAPHYLOCOCCUS AUREUS Staphylococcus aureus thuộc họ Micrococcaceae, giống Staphylococcus gồm có: Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus staprophyticus (Nguyễn Như Thanh và ctv., 1997) 2.1.1 Đặc điểm hình thái và tính bắt màu Hình 2.1 Staphylococcus aureus Nguồn: http://vi.wikipedia.org/wiki /Staphylococcus_ aureus. .. receptor của LT-II là GD1 còn của LTI là GM1, tuy nhiên như đề cập ở trên thì không có bằng chứng cho thấy LT-II gây độc cho tế bào của người và động vật (Nataro and Kaper, 1998) Những loại độc tố LTs được sản sinh trên người và heo do ETEC được ký hiệu là LTs và LTp dựa trên sự khác nhau các gen mã hóa của độc tố (Fairbrother, 1992) · Cơ chế tác động của độc tố (LT) Sau khi bám lên các thụ thể tiếp nhận của. .. khuẩn lạc có màu trắng, vàng thẩm hay vàng chanh Màu sắc khuẩn lạc là do vi khuẩn sinh ra, sắc tố này không tan trong nước, căn cứ vào màu sắc khuẩn lạc, Nguyễn Vĩnh Phước (1976) và Taylor (1990) cho rằng chỉ có khuẩn lạc của Staphylococcus aureus có màu vàng thẩm là có độc lực và có khả năng gây bệnh cho động vật, còn khuẩn lạc màu vàng chanh và màu trắng không có độc lực và không gây bệnh Môi trường... dành riêng cho chuột Tất cả chuột thí nghiệm được nuôi dưỡng và chăm sóc trong cùng điều kiện 3.3.2 Xác định liều gây chết 50% (LD50) ở chuột thí nghiệm Thí nghiệm LD50 được tiến hành nhằm xác định độc lực của vi khuẩn có khả năng gây chết 50% ở chuột thí nghiệm Bố trí thí nghiệm: thí nghiệm được bố trí hoàn toàn ngẫu nhiên (bảng 3.3), 1 nhân tố với 4 mức độ gây nhiễm đối với Staphylococcus aureus là (NT1:... vi khuẩn Escherichia coli trong ruột lên men tạo ra làm cho ruột căng lên, sức căng của ruột và quá trình viêm ruột kích thích hệ thần kinh thực vật ở ruột tạo nên những cơn nhu động ruột mạnh đẩy nước và phân ra ngoài gây tiêu chảy (Lê Văn Tạo, 2006) 2.2.9 Triệu chứng và bệnh tích Triệu chứng Tiêu chảy do vi khuẩn Escherichia coli phụ thuộc vào yếu tố độc lực của vi khuẩn Escherichia coli và tuổi cũng . Xác định độc lực LD 50 của Staphylococcus aureus và Escherichia coli trên chuột bạch (Mus musculus domesticus)”. Mục tiêu đề tài: Xác định độc lực của vi khuẩn Staphylococcus aureus và Escherichia. TÓM LƯỢC Để xác định độc lực của 2 chủng vi khuẩn Staphylococcus aureus và Escherichia coli, chúng tôi tiến hành kiểm tra độc lực LD 50 của 2 chủng vi khuẩn này trên chuột bạch bằng phương. NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG BỘ MÔN THÚ Y Đề tài: Xác định độc lực LD 50 của Staphylococcus aureus và Escherichia coli trên chuột bạch (Mus musculus domesticus)” do sinh viên Nguyễn Văn