thử nghiệm khả năng điều trị bệnh của lá lược vàng (callisia fragrans lindl.) trên chuột bạch (mus musculus domesticus)

2011a; 2011b; 2011c đã nghiên cứu tác dụng chống viêm, giảm đau và chống oxy hóa của lá và thân bồ của cây Lược vàng, tác dụng kích thích miễn dịch của lá và thân bồ Lược vàng trên chuộ

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG

NGUYỄN KIM DUNG

THỬ NGHIỆM KHẢ NĂNG ĐIỀU TRỊ BỆNH

CỦA LÁ LƯỢC VÀNG (Callisia fragrans Lindl.) TRÊN CHUỘT BẠCH (Mus musculus

domesticus)

LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP NGÀNH THÚ Y

Cần Thơ, 2013

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG

LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP NGÀNH THÚ Y

Tên đề tài:

THỬ NGHIỆM KHẢ NĂNG ĐIỀU TRỊ BỆNH

CỦA LÁ LƯỢC VÀNG (Callisia fragrans

Lindl.) TRÊN CHUỘT BẠCH (Mus musculus domesticus)

MSSV: 3096876 Lớp: Thú Y K35

Cần Thơ, 2013

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ SINH HỌC ỨNG DỤNG

BỘ MÔN THÚ Y

Đề tài : “Thử nghiệm khả năng điều trị bệnh của lá Lược vàng

(Callisia fragrans Lindl.) trên chuột bạch (Mus musculus domesticus)” do

sinh viên Nguyễn Kim Dung thực hiện tại bộ môn Thú Y, khoa Nông Nghiệp

& Sinh Học Ứng Dụng, trường Đại Học Cần Thơ từ tháng 07 năm 2013 đến tháng 11 năm 2013

Cần Thơ, ngày tháng năm 201… Cần Thơ, ngày tháng năm 201…

Huỳnh Kim Diệu

Cần Thơ, ngày tháng năm 201…

Duyệt Khoa Nông Nghiệp & SHƯD

Con xin dâng lên ông bà, cha mẹ, người đã sinh ra con, nuôi con khôn lớn với bao khó nhọc, gian lao lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc nhất

Xin chân thành cảm ơn cô Huỳnh Kim Diệu, người đã hết lòng chỉ dạy, động viên và giúp đỡ tôi trong suốt quá trình làm luận văn để tôi có thể hoàn thành khóa luận tốt nghiệp này

Xin chân thành cảm ơn cô Nguyễn Thu Tâm trong suốt 5 năm qua đã luôn quan tâm, giúp đỡ, động viên tôi để tôi có thể đạt được như ngày hôm nay

Tôi xin chân thành cảm ơn quý thầy cô Bộ môn Thú Y, Bộ môn Chăn Nuôi đã tận tình truyền đạt kiến thức, kỹ năng vô cùng quý báu cho tôi trong suốt thời gian dưới mái trường Đại học

Xin cảm ơn chị Phan Thị Tư lớp cao học Thú y khóa 18 cùng các chị thực hiện đề tài tại phòng thí nghiệm Dược lý Các bạn Nguyễn Văn Nhân, Võ Hữu Vui, Nguyễn Thị Kim Cúc, các em lớp Thú y khóa 36 cùng tất cả các bạn trong và ngoài lớp đã động viên, giúp đỡ và chia sẽ khó khăn với tôi trong suốt thời gian học tập và thực hiện luận văn

Trong thời gian thực hiện đề tài tốt nghiệp, mặc dù đã có rất nhiều cố gắng, tuy nhiên do thời gian có hạn và kiến thức còn hạn chế nên không tránh được những sai sót Rất mong được sự quan tâm, góp ý của thầy cô để bài luận hoàn thiện hơn

Xin chân thành cảm ơn !

MỤC LỤC

TRANG TỰA i

TRANG DUYỆT ii

LỜI CẢM TẠ iii

MỤC LỤC iv

DANH MỤC VIẾT TẮT vi

DANH MỤC BẢNG viii

DANH MỤC HÌNH ix

TÓM LƯỢC x

CHƯƠNG 1 ĐẶT VẤN ĐỀ 1

CHƯƠNG 2 CƠ SỞ LÝ LUẬN 2

2.1 Tình hình nghiên cứu trong và ngoài nước 2

2.1.1 Tình hình nghiên cứu trong nước 2

2.1.2 Tình hình nghiên cứu ngoài nước 2

2.2 Giới thiệu về cây Lược vàng 3

2.2.1 Thực vật học 3

2.2.2 Nguồn gốc và phân bố 4

2.2.3 Mô tả cây 4

2.2.4 Một số thành phần hóa học có trong cây Lược vàng 5

2.2.5 Vitamin và khoáng dưỡng 11

2.2.6 Một số chế phẩm từ cây Lược vàng 11

2.2.7 Công dụng chữa bệnh của cây Lược vàng 12

2.3 Vi khuẩn Staphylococcus aureus 13

2.3.1 Lịch sử phát hiện 13

2.3.2 Hình thái, đặc điểm sinh hóa 14

2.3.3 Điều kiện tăng trưởng và sự phân bố 16

2.3.4 Các yếu tố độc lực của Staphylococcus aureus 17

2.3.6 Tính kháng thuốc kháng sinh 20

CHƯƠNG 3 PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22

3.1 Thời gian và địa điểm 22

3.1.1 Thời gian 22

3.1.2 Địa điểm 22

3.2 Nội dung nghiên cứu 22

3.3 Phương tiện nghiên cứu 22

3.3.1 Nguyên liệu 22

3.3.2 Dụng cụ, hóa chất chính 22

3.4 Phương pháp nghiên cứu 23

3.4.1 Chọn dòng và lấy mẫu Lược vàng 23

3.4.2 Điều chế cao thô 23

3.4.3 Nuôi chuột 25

3.4.4 Pha vi khuẩn 25

3.4.5 Bố trí thí nghiệm 25

3.4.6 Chỉ tiêu theo dõi 26

3.4.7 Phương pháp xử lý số liệu 26

CHƯƠNG 4 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 27

4.1 Biểu hiện lâm sàng trên chuột khi thử nghiệm điều trị 27

4.2 Kết quả mổ khám chuột sau quá trình điều trị 29

CHƯƠNG 5 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 34

5.1 Kết luận 34

5.2 Đề nghị 34

TÀI LIỆU THAM KHẢO 35

PHỤ CHƯƠNG 42

DANH MỤC VIẾT TẮT

STT Chữ viết tắt Giải thích

11 MIC Minimum Inhibitory Concentration

12 MRSA Methicillin ressitant Staphylococcus aureus

17

PBS Phosphate buffered saline

18 PCR Polymerase chain reaction

19 RAPD Random Amplified Polymorphic DNA

21 SE Staphylococcal enterotoxin

22 S aureus Staphylococcus aureus

24 UCLA University of California, Los Angeles

25 VRSA Vancomycin Resistant Staphylococcus

aureus

DANH MỤC BẢNG

1 Bố trí thí nghiệm điều trị bệnh nhiễm khuẩn của cao Lược vàng 26

2 Số chuột còn sống sau khi điều trị 29

3 Kết quả bệnh tích trên chuột thí nghiệm sau quá trình điều trị 30

9 Staphylococcus aureus trên môi trường Paird Parker 16

10 Bệnh tích hoại tử vùng tiêm trước và sau khi điều trị 31

TÓM LƯỢC

Thử nghiệm trên chuột bạch được thực hiện để đánh giá khả năng trị bệnh của cây Lược vàng do nhiễm vi khuẩn Staphylococcus aureus Thí nghiệm được bố trí hoàn toàn ngẫu nhiên gồm 4 nghiệm thức: 3 nghiệm thức điều trị (NT1, NT2, NT3) và nghiệm thức đối chứng (NT4) Mỗi nghiệm thức 5 chuột với 3 lần lặp lại Tất cả các chuột đều được gây nhiễm với vi khuẩn Staphylococcus aureus nồng độ 10 9 cfu /ml, liều 1 ml/con bằng đường tiêm xoang bụng Chuột ở các nghiệm thức điều trị 10 phút sau khi tiêm vi khuẩn bắt đầu cho uống cao Lược vàng (0,2 ml/con) nghiệm thức 1 với liều 0,32 g/kg thể trọng, nghiệm thức 2 liều 0,64 g/kg thể trọng, nghiệm thức 3 liều 0,96 g/kg thể trọng Nghiệm thức đối chứng cho chuột uống nước sinh lý với liều 0,2 ml/con Kết quả thu được: sau khi gây nhiễm tất cả các chuột ở nghiệm thức điều trị đều còn sống nhưng nghiệm thức đối chứng có 20% chuột bị chết Sau

10 ngày, tiến hành mổ khám chúng tôi ghi nhận được: 83,3% bệnh tích có mủ

ở gan, thận, lách ruột, dạ dày và xoang bụng, ở các nghiệm thức điều trị không thể hiện các bệnh tích này 20% chuột tích mủ dưới da ở các nghiệm thức điều trị và ở nghiệm thức đối chứng là 16,7% Bệnh tích hoại tử chiếm 25% ở nghiệm thức đối chứng và không thể hiện ở nghiệm thức điều trị Ở nghiệm thức điều trị 60% chuột có gan, thận sưng, nhạt màu, lách sưng trong khi đó ở nghiệm thức đối chứng là 66,7% Trong số 3 liều được sử dụng để điều trị thì liều 0,96 g/kg thể trọng có hiệu quả nhất với 26,7% số chuột tăng trọng 1-3 g sau điều trị, tất cả các chuột ăn uống và hoạt động nhanh nhẹn hơn so với liều 0,32 g/kg thể trọng và liều 0,64 g/kg thể trọng

Từ khóa : cây Lược vàng, điều trị, Staphylococcus aureus

CHƯƠNG 1 ĐẶT VẤN ĐỀ

Nước ta nằm trong vùng khí hậu nhiệt đới, được sự ưu đãi của thiên nhiên nên thuận lợi cho sự phát triển của nhiều loại thảo mộc Từ ngàn xưa, con người đã biết tìm cây cỏ trong tự nhiên để chữa bệnh và tăng cường sức khỏe Ông cha ta đã biết cách sử dụng nhiều loại thảo mộc khác nhau để chữa một số bệnh, vừa không tốn nhiều tiền vừa có thể dể dàng tìm thấy ở vườn nhà

Qua trải nghiệm cuộc sống, kho tàng cây dược liệu của con người ngày càng phong phú, đa dạng và trở thành một phần không thể thiếu trong cuộc sống con người Vào năm 2007 đến nay dân gian xem cây Lược vàng như một

“thần dược” trị bách bệnh như: viêm răng, lợi, viêm họng, mụn nhọt, dị ứng,… đến những bệnh nan y như ung thư, tiểu đường, tim mạch,…

Tuy nhiên, cho đến nay ngoài những bản dịch về kinh nghiệm chữa trị của cây Lược vàng từ tiếng Nga sang tiếng Việt thì ở Việt Nam chỉ có một vài tài liệu công bố về kết quả nghiên cứu thành phần hóa học của cây Lược vàng

Song song đó, vi khuẩn Staphylococcus aureus (S aureus) được biết đến

như một vi khuẩn sinh mủ điển hình, là loại vi khuẩn thường hay gặp, hiện diện rất phổ biến trong môi trường chăn nuôi, kháng nhiều loại kháng sinh gây thiệt hại không nhỏ cho ngành chăn nuôi

Với bối cảnh hiện nay, trong điều trị bệnh kháng sinh tân dược có khả năng ức chế vi khuẩn mạnh, hiệu quả điều trị cao nhưng khi dùng thuốc một thời gian dài, không đúng liều lượng, đường cấp, không đúng liệu trình điều trị… tạo điều kiện cho vi khuẩn lờn và kháng với nhiều loại kháng sinh (Essawi and Srour, 2000)

Những năm gần đây xu hướng sử dụng thảo dược trong chữa trị bệnh trên động vật được xem như một giải pháp có biên độ an toàn cao trong bảo quản, điều trị bệnh gây ra trên động vật

Với những lý do trên, trong điều kiện cho phép chúng tôi tiến hành

nghiên cứu đề tài “Thử nghiệm khả năng điều trị bệnh của lá Lược vàng

(Callisia fragrans Lindl.) trên chuột bạch (Mus musculus domesticus)”

Mục tiêu của đề tài :

Xác định hiệu quả điều trị nhiễm khuẩn S aureus của cao lá Lược vàng

CHƯƠNG 2

CƠ SỞ LÝ LUẬN

2.1 Tình hình nghiên cứu trong và ngoài nước

2.1.1 Tình hình nghiên cứu trong nước

Trịnh Thị Điệp và ctv (2008) bước đầu nghiên cứu về thành phần hóa học và tác dụng sinh học của cây Lược vàng (Callisia fragrans Lindl.)

Nguyễn Minh Khởi và ctv (2011a; 2011b; 2011c) đã nghiên cứu tác

dụng chống viêm, giảm đau và chống oxy hóa của lá và thân bồ của cây Lược vàng, tác dụng kích thích miễn dịch của lá và thân bồ Lược vàng trên chuột gây suy giảm miễn dịch bằng tia xạ, nghiên cứu độc tính và tác dụng sinh học của cây Lược vàng

Vừa qua, với chức năng bảo vệ sức khỏe cộng đồng một số nhà khoa học đầu ngành dược học (TS Nguyễn Minh Khởi, TS Nguyễn Duy Thuần, TS Trịnh Thị Điệp, TS Trần Công Khánh …) và Viện dược liệu, thuộc Bộ Y tế đã tiến hành nghiên cứu thành phần các hoạt chất của cây Lược vàng khẳng định chưa thấy hoạt chất trị ung thư, cũng chưa đủ luận cứ khoa học để khẳng định cây Lược vàng trị hàng loạt bệnh như nhiều bài báo cáo đăng tải lâu nay Cuối cùng, Bộ Y tế cũng đã khuyến cáo người dân nên thận trọng, dè dặt khi dùng cây Lược vàng, trong khi chờ đợi kết quả nghiên cứu tiếp theo Đồng thời, các nhà khoa học và Bộ Y tế cũng khẳng định lại rằng, chẳng có một loại dược phẩm hay dược thảo nào có khả năng trị tất cả các bệnh chứng với một liều chung chung cho mọi dạng cơ thể như thông tin truyền đi lâu nay

Các công trình khoa học về cây thuốc đáng tin cậy ở trong nước như

“Những cây thuốc và vị thuốc Việt Nam” của Đỗ Tất Lợi (2004) “Từ điển cây thuốc Việt Nam” của Võ Văn Chi (1997) Dược điển Việt Nam (2009) của Bộ

Y tế cũng chưa từng nhắc tới loài cây này

2.1.2 Tình hình nghiên cứu ngoài nước

Một số tài liệu về thực vật học và cây thuốc trên thế giới chỉ công bố rất khiêm tốn về tác dụng của cây Lược vàng Một số tài liệu cũng cho rằng nó chỉ có khả năng chữa trị một vài bệnh liên quan đến rối loạn chức năng hệ miễn dịch viêm nhiễm ngoài da Tuy nhiên, cũng có một số tài liệu của Canada và Mỹ công bố kết quả nghiên cứu thành phần hóa học của nó Chẳng hạn như:

- Tạp chí Chemistory of Natural Compounds, xuất bản ở New York, cho thấy các nhà khoa học Mỹ đã xác định được các lipid trung tính bao gồm cả glycolipid, phospholipid và thành phần acid béo của chúng Đồng thời cũng đã xác định được hàm lượng acid ascorbic, các acid hữu cơ khác, diệp lục tố (chlorophyll) và sắc tố carotenoid trong các bộ phận khác nhau của cây Lược vàng

- Một số công trình khoa học của Mỹ và Canada đã công bố kết quả nghiên cứu các hoạt chất sinh học trong cây Lược vàng bao gồm nhóm flavonoid, steroid, các vitamin C, B2 (riboflavin), B3 (acid nicotinic), B5 (acid pantothenic) và các vi khoáng như đồng, sắt, niken… Trong số đó, nhóm flavonoid có tác dụng trị bệnh cao hơn cả Nhóm flavonoid có trong cây Lược vàng bao gồm hoạt chất quercetin và kaempferol Đây là hai hoạt chất được phát hiện ở nhiều loại thực vật khác nhau, đã được nghiên cứu tác dụng dược học từ lâu Dựa vào tính chất hóa học và công dụng của chúng, khi chỉ cần phát hiện nó trong cây Lược vàng, nhiều người cũng khẳng định cây Lược vàng có khả năng điều trị những bệnh mà quercetin và kaempferol có được, mặc dù chưa nghiên cứu cụ thể hàm lượng, cũng chưa thực nghiệm y học trên

cơ thể người đối với cây Lược vàng

- Ngoài ra, cũng theo các tài liệu trên, cây Lược vàng còn chứa sitosterol có tác dụng giảm lượng cholesterol trong máu, làm sạch và săn chắc thành mạch máu, được dùng điều trị chứng xơ vữa động mạch, bệnh rối loạn biến dưỡng, hệ nội tiết, viêm tiền liệt tuyến

beta-2.2 Giới thiệu về cây Lược vàng

2.2.1 Thực vật học

Cây Lược vàng có tên khoa học: Callisia fragrans (Limdl.)

Do nhà khoa học người Mỹ R.E Woodson xác định từ năm 1942

Giới: Thực vật – Plantae

Ngành: Ngọc lan-Maggnoliophyta

Lớp: Hành – Liliopsida

Bộ: Rau trai – Commelinales

Họ: Thài Lài - Commelinaceace

Chi (Giống): Callisia

Loài: Callisia fragrans (Lindl) Wood

Tên thường gọi: Lược vàng

Tên khác: Ở Việt Nam, Lược vàng còn được gọi bằng những tên khác nhau như: Lan vòi, Địa lan vòi, cây Bạch tuột, Giả khóm, … ở Nga, cây cũng

có nhiều tên gọi như: Ka-li-di-a thơm, Sâm nhà, Vệ nữ, Bác sĩ gia đình, … Tại Nga, cây có tên thông dụng là “Dôlôtôi us” có nghĩa là “Sợi râu vàng”

Hình 1 Cây Lược vàng

(http://zeleniydrug.ru/kalliziya-callisia/)

Năm 1993, trong công trình “Cây cỏ Việt Nam”, Phạm Hoàng Hộ đã

công bố họ Commelinacea gồm 13 chi với 60 loài Năm 2005, trong công

trình “Danh mục các loài thực vật Việt Nam”, Viện Sinh thái và Tài nguyên Sinh vật thuộc Viện Khoa học và Công nghệ Việt Nam cùng Trung tâm Nghiên cứu tài nguyên và môi trường, thuộc Đại học Quốc gia Hà Nội đã công

bố 15 chi, 58 loài

2.2.2 Nguồn gốc và phân bố

Cây Lược vàng vốn có nguồn gốc từ Trung và Nam Mỹ, bắt đầu được trồng làm cảnh ở Nga từ hơn 100 năm trước Năm 2007, Lược vàng di thực từ Nga sang Việt Nam dưới hình thức là cây cảnh, lúc đầu ở Thanh Hóa, giờ đây cây Lược vàng đã nhanh chóng lan ra các tỉnh thành khác trong cả nước

2.2.3 Mô tả cây

Cây Lược vàng là cây thảo một lá mầm, sống lâu năm Thân đứng cao từ 15-40 cm, có thân bò ngang trên mặt đất Thân ngắn, tích nhiều nước và chia đốt, có nhánh Đốt ở phía thân dài từ 1-2 cm, ở nhánh có thể dài tới 10 cm Lá đơn, mọc so le, phiến lá thuôn hình ngọn giáo, nhẵn, mặt trên xanh đậm hơn mặt dưới và mọng nước Bẹ lá ôm khít lấy thân Do có kiểu tái sinh dinh dưỡng bằng những cầu sinh dưỡng (stolons), mọc ra từ những nách lá ở đoạn

thân gần gốc, trông tựa những vòi của loài mực và bạch tuộc, thân và lá của cây lại gần giống như một loại địa lan

Hình 2 Lược vàng ra hoa

(http://www.flickr.com/photos/scottzona/9016394625/)

Hoa mọc thành từng cặp xim trên một trục dài 40-50 cm, mỗi cặp xim được ôm bởi 3 lá bắc dài 1-1,5 cm; đài trắng trong suốt, khô xác, hình trám, dài 5-6 mm; tràng trắng trong, bóng nhẵn, mỏng, rũ vào buổi trưa, hình trứng hẹp, dài 6 mm

Cây chỉ ra hoa trong điều kiện sinh thái tối ưu, đặc biệt là ở nơi có che bóng một phần Trong điều kiện khô hạn, thời gian chiếu sáng trong ngày dài, cường độ ánh sáng cao, cây không ra hoa

Trồng trên đất tơi xốp, có đủ ánh sáng, bẻ các chồi của cây hoặc cắt khúc các thân cây dài 6-7 cm sau đó giâm xuống đất hoặc trong nước, chờ cho các khúc thân đâm rễ thì có thể đem trồng được, cây sinh trưởng phát triển tốt trong điều kiện đất giàu dinh dưỡng, thoát nước tốt, đủ ẩm, độ ẩm không khí thấp từ 45-60%, nhiệt độ tối thích 20-250C

Lược vàng là loại cây rất dễ trồng và có khả năng thích ứng với điều kiện khí hậu tốt nên có thể xanh tốt quanh năm khi được chăm sóc cẩn thận Tất cả các bộ phận của cây đều được sử dụng vào các mục đích làm thuốc như: lá Lược vàng có thể dùng để ăn sống, thân và rễ được dùng để ngâm rượu, ngọn Lược vàng được sử dụng lại làm giống để trồng

2.2.4 Một số thành phần hóa học có trong cây Lược vàng

Đây là một loài lạ trong khu hệ thực vật Việt Nam, chưa được các nhà thực vật học Việt Nam nghiên cứu nhiều Hầu như danh tính của loài này chưa

được công bố trong những công trình nghiên cứu khu hệ thực vật trong nước

từ trước tới nay

Kết quả nghiên cứu từ những năm 1980 ở Đại học Y khoa Irkyt (Nga) cho thấy cây Lược vàng có các hoạt chất sinh học thuộc nhóm flavonoid, steroid, nhiều vitamin và các khoáng chất chứa sắt, đồng, crom những nguyên tố có tác dụng quan trọng đối với hoạt động sống của cơ thể

Theo nghiên cứu của Trịnh Thị Điệp và ctv (2008) lá và thân cây Lược

vàng có chứa flavonoid, carotenoid, phytosterol, acid hữu cơ, acid béo, polysaccharide và đường tự do

2.2.4.1 Flavonoid

Hai chất flavonoid được phát hiện là quercetin và kaemferol:

 Quercetin có công thức phân tử là C15H10O7, khối lượng phân tử là 286,23 g/mol, điểm nóng chảy là 276-2780C

Hình 3 Cấu trúc quercetin

( http://en.wikipedia.org/wiki/Quercetin)

Có hoạt tính giống như vitamin P, là chất chống oxy hóa, có tác dụng lợi tiểu và chống co giật Quercetin được sử dụng để điều trị bệnh viêm, viêm khớp và thoái hóa, hen phế quản, da dị ứng, xuất huyết nội, vỡ mao mạch, thấp khớp, bệnh của hệ tuần hoàn máu (Trịnh Thị Điệp, 2008)

Theo Hiệp hội Ung thư Mỹ (The American Cancer Society), quercetin

có khả năng chống bệnh phổ rộng (lây nhiễm, viêm khớp, hen phế quản, dị ứng da và những bệnh màng nhày, tim mạch, đái tháo đường) bao gồm cả ung thư Đã có những thí nghiệm trên tế bào ở phòng thí nghiệm về các chuyển chất khác nhau của quercetin bao gồm chuyển chất chặn đứng ung thư, nhưng những nghiên cứu này chưa tiến hành trên cơ thể động vật và người

 Kaempferol có công thức phân tử là C15H10O8 (chỉ khác quercetin 1 phân tử oxy), khối lượng phân tử là 286,23 g/mol, điểm nóng chảy là 276-

2780C

Thành phần của màng tế bào có các chất lipid dễ bị peroxyd hóa, tạo ra những sản phẩm làm rối loạn sự trao đổi chất làm cho tế bào bị hủy hoại Khi các chất chống oxy hóa như flavonoid vào cơ thể nhằm bảo vệ tế bào giúp ngăn ngừa các nguy cơ như xơ vữa động mạch, lão hóa, tổn thương do bức xạ, thoái hóa gan… Flavonoid cùng với các acid ascorbic tham gia trong quá trình hoạt động của enzyme hyaronidase làm tăng tính thấm của mao mạch Khi thừa hyaronidase gây ra hiện tượng xuất huyết dưới da mà y học gọi là bệnh thiếu vitamin P Hợp lực cùng với các acid ascorbic, flavonoid được dùng trong các trường hợp rối loạn chức năng tĩnh mạch, tĩnh mạch bị suy yếu, giãn tĩnh mạch, chảy máu do đặt vòng phụ khoa, các bệnh về mắt như rối loạn tuần hoàn võng mạc và sung huyết kết mạc Bên cạnh đó, flavonoid còn làm giảm tổn thương gan, bảo vệ được chức năng gan bằng tác dụng chống độc tố khi các chất độc được đưa vào cơ thể động vật thí nghiệm như: benzene, ethanol, quinine, novarsenol…

2.2.4.2 Hợp chất saponin steroid có trong cây Lược vàng

Saponin còn gọi là saponosid do chữ la-tinh sapo (xà phòng – vì tạo bọt như xà phòng) là một nhóm glycosid lớn

Saponin có một số tính chất đặc biệt sau:

- Làm giảm sức căng bề mặt, tạo bọt nhiều khi lắc với nước, có tác dụng nhũ hóa và tẩy sạch

- Làm vỡ hồng cầu ngay ở những nồng độ rất loãng

- Độc với cá vì saponin làm tăng tính thấm của biểu mô đường hô hấp nên làm mất các chất điện giải cần thiết Ngoài ra, saponin còn có tác dụng diệt các loài thân mềm như giun, sán, ốc sên

- Kích ứng niêm mạc gây hắc hơi, đỏ mắt, có tác dụng long đờm, lợi tiểu, liều cao gây nôn mửa

- Có thể tạo phức với cholesterol hoặc với các chất 3-β-hydroxysteroid khác

Tuy vậy một vài tính chất trên không thể hiện ở một vài saponin Ví dụ: sarsaparillosid thì không có phá huyết cũng như tính tạo phức với cholesterol

- Saponin đa số có vị đắng trừ một số như glycyrrhizin có trong cam thảo

bắc, abrusosid trong cam thảo dây, oslandin trong cây Polypodium vulgare có

vị ngọt

- Saponin tan trong nước, alcol, rất ít tan trong aceton, ether, hexan do

đó người ta dùng 3 dung môi này để tủa saponin Saponin có thể bị tủa bởi chì acetat, bari hydroxyd, ammoni sulfat

- Saponin khó bị thẩm tích, người ta dựa vào tính chất này để tinh chế saponin trong quá trình chiết suất

Các steroid trong thực vật có hoạt tính tương tự nội tiết tố sinh dục, có tác dụng diệt khuẩn, chống xơ vữa động mạch và kiềm chế sự phát triển của các khối u Chúng có thể được dùng trong điều trị một số dạng ung thư, cũng như các bệnh tuyến tiền liệt, bệnh nội tiết và rối loạn chuyển hóa

- Nhóm solanidan: solanin có trong mầm khoai tây thuộc nhóm này Ở đây 2 vòng E và F cùng chung 1C và 1N

Saponin steroid có tác dụng kiểm soát các quá trình sinh học, kích thích các tế bào trong cơ thể tổng hợp protein, góp phần vào sự đổi mới của các tế bào mô cơ Trong thành phần của cây Lược vàng còn có các chất hoạt động mạnh như: beta-sitostirola, giúp làm giảm mức cholesterol trong máu, tăng cường và làm sạch thành của các mạch máu

Tác dụng và công dụng:

-Saponin steroid có tác dụng long đờm, chữa ho Saponin steroid là hoạt chất chính trong các dược liệu chữa ho như viễn chí, cát cánh, cam thảo, thiên môn, bạch môn

- Một số dược liệu chứa saponin steroid có tác dụng thông tiểu như rau

má, tỳ giải, thiên môn, bạch môn

- Saponin steroid có mặt trong một số vị thuốc bổ như nhân sâm, tam thất

và một số cây thuốc họ sâm khác

- Saponin steroid làm tăng tính thấm của tế bào, sự có mặt của saponin steroid sẽ làm cho các hoạt chất khác dễ hòa tan và hấp thụ, ví dụ như trường hợp digitonin trong lá digital

- Một số saponin steroid có tác dụng chống viêm Một số có tác dụng kháng khuẩn, kháng nấm, ức chế virus

- Nhiều saponin steroid có tác dụng diệt các loài thân mềm (nhuyễn thể)

- Spogenin steroid dùng làm nguyên liệu để bán tổng hợp các thuốc steroid

- Digitonin dùng để định lượng cholesterol

- Một số nguyên liệu chứa saponin steroid dùng để pha nước gội đầu, giặt len dạ, tơ lụa

2.2.4.3 Hợp chất isoorientin chiết từ cây Lược vàng

Các nhà khoa học tại trường Đại học Bách Khoa Hà Nội, Viện Hóa học các Hợp chất Thiên nhiên đã phân lập được hợp chất isoorientin, một flavon C-glucosid mang nhiều hoạt tính sinh học lý thú

Hợp chất isoorientin (3’,4’,5,7-tetrahydroxyflavone-6-C- β-D glucopyranoside) là một flavon có mặt trong một số loài thực vật bậc cao Nhiều nghiên cứu cho thấy hợp chất này thể hiện nhiều hoạt tính sinh học có

giá trị trong các thí nghiệm in vitro và in vivo bao gồm hoạt tính chống oxy

hóa, kháng viêm, kháng sinh, bảo vệ gan, chống tiểu đường, chống đường máu Một nghiên cứu trên chuột cho thấy isoorientin được hấp thụ kém qua

đường ruột nhưng lại được chuyển hóa thành các sản phẩm khác nhờ các vi sinh vật đường ruột đồng thời thời gian lưu trữ trong ruột khá dài (khoảng 12 giờ) đủ để các hợp chất này thể hiện tác dụng sinh học

Hợp chất isoorientin thể hiện hoạt tính kháng sinh yếu trên các chủng vi khuẩn và nấm với giá trị MIC trong khoảng 100-200 g/ml Trong một số nghiên cứu mặc dù dịch chiết với các mẫu thực vật có chứa isoorientin ức chế mạnh sự phát triển các chủng vi sinh vật kiểm định nhưng khi được phân lập

ra, hoạt tính của isoorientin lại có giá trị thấp hơn dịch chiết ban đầu Ngoài những hoạt tính sinh học kể trên, isoorientin còn thể hiện nhiều tác dụng khác như bảo vệ gan, thận, chống tụ máu, ức chế enzyme acetylcholinesterase và butyrylcholinesterase vốn có liên quan đến các bệnh về thần kinh

Hiện nay, người ta đã tìm được khoảng gần 6000 ankaloid và chủ yếu là các chất ít tan trong nước nhưng dễ tan trong các dung môi hữu cơ, nhiều chất

có hoạt tính sinh học cao như: quinin, ephedrin, codeine…

Hình 5 Cấu trúc ephedrin

(http://www.giftpflanzen.com/ephedra_distachya.html)

Một số ankaloid tiêu biểu:

- Ankaloid loại imidazole có tác dụng chống tăng nhãn áp và làm co hẹp con ngươi mắt

- Ankaloid loại piperidin: đại diện cho loại này là conoiin và piperin Rất độc, gây tê liệt thần kinh và hô hấp Piperin là ankaloid chính có vị cay mạnh của hạt hồ tiêu

- Ankaloid loại piridin: có nicotin là ankaloid chính của lá thuốc lá, là chất lỏng không màu, trong không khí chuyển nhanh sang màu nâu Với lượng

ít, nicotin kích thích thần kinh và làm tăng huyết áp Với lượng cao nicotin phá hủy niêm mạc của hệ hô hấp gây tử vong

- Ankaloid loại tropan: có nhiều nhóm như: atropine, nhóm cocain, nhóm granatapfen,

- Ankaloid loại quinolin: tiêu biểu là quinine, chất rắn nóng chảy ở nhiệt

độ 1770C, vị đắng, có tác dụng chống sốt rét

2.2.5 Vitamin và khoáng dưỡng

Ngoài các chất đã nêu ở trên thì trong cây Lược vàng còn có nhiều loại vitamin và khoáng chất như vitamin C (acid ascorbic), vitamin B2 (riboflavin), vitamin B5 (pantothenic acid), vitamin RR (nicotine acid), đồng, sắt, niken,…

Hình 6 Sản phẩm từ cây Lược

vàng ở Nga

(http://www.aptekastore.com/ru/z

olotoi-sabelinikom-p-1775.html)

2.2.7 Công dụng chữa bệnh của cây Lược vàng

Tác dụng kháng khuẩn, nhất là những chủng vi khuẩn đường hô hấp Tác dụng tăng cường miễn dịch Tác dụng chống oxy hóa Lược vàng có tác dụng chống viêm mạn và giảm đau ngoại biên

Lược vàng không có tác dụng giảm đau theo cơ chế thần kinh trung ương, không gây hạ huyết áp

Ngăn ngừa và hỗ trợ trong việc điều trị ung thư, các khối u ác tính Theo kết quả nghiên cứu của các nhà khoa học Mỹ và Canada, dịch ép từ cây Lược vàng rất giàu các chất kích thích sinh học có tác dụng ngăn ngừa sự phát triển của nhiều loại tế bào ung thư

Tuy nhiên, các nhà khoa học Nga còn nhận thấy, cây Lược vàng cũng là

vị thuốc dễ gây tác dụng phụ như: gây tổn thương thanh quản, dị ứng nổi ban

đỏ, phù nề tứ chi, phù toàn thân Các phản ứng phụ đó hay gặp nhất ở những người có khả năng miễn dịch yếu và có cơ địa dị ứng Chính những nhược điểm đó đã hạn chế sự mở rộng ứng dụng Lược vàng trên lâm sàng Và cây thuốc này không thấy đề cập trong các sách y học dân tộc hay các sách tra cứu lớn về thảo dược ở Nga, xuất bản trong thời Liên Xô cũ Mặc dù cây lược

Hình 7 Trà Lược vàng

Luoc-Vang-tui-loc-117-5.aspx)

(http://www.tratiphashop.com/Tra-tạp chí khoa học Do vậy các thông tin về cây này (thành phần hóa học, công dụng chữa bệnh) phần lớn chỉ được tham khảo qua các tài liệu phổ biến khoa

học ( Nguyễn Văn Đậu và ctv., 2011)

2.3 Vi khuẩn Staphylococcus aureus

Staphylococcus aureus do Robert Koch (1843-1910) phát hiện vào năm

1878, phân lập từ mủ ung nhọt và Louis Pasteur (1880) đều nghiên cứu tụ cầu khuẩn từ thời kì đầu của lịch sử ngành vi sinh vật học

Năm 1926, Julius von Daranyi là người đầu tiên phát hiện mối tương quan giữa sự hiện diện của hoạt động men coagulase huyết tương của vi khuẩn với khả năng gây bệnh của nó Tuy nhiên mãi đến năm 1948 phát hiện này mới được chấp nhận rộng rãi

2.3.2 Hình thái, đặc điểm sinh hóa

S aureus hiếu khí hay hiếu khí không bắt buộc Trong điều kiện kị khí

sự phát triển của vi khuẩn cần có thêm uracil và các nguồn carbon S aureus

phát triển tốt nhất ở điều kiện hiếu khí, nhiệt độ tối thích cho sự phát triển là

350C, nhưng có thể phát triển được trong khoảng nhiệt độ 10 – 450C, khoảng

pH có thể phát triển 4,5 – 9,3, nhưng pH tối thích khoảng 7,0 – 7,5

Nước thịt peptone: sau 12 – 24 giờ đục đều, không kết cụm, không có màng, lắng cặn nhiều, màu trắng rồi từ từ chuyển sang vàng

Thạch: sau 12 -24 giờ có khuẩn lạc tròn, đường kính 2- 4 mm, màu trắng, vàng, vàng chanh, hơi ướt

S aureus cho phản ứng đông huyết dương tính do chúng tiết ra enzyme coagulase Đây được xem là tính chất đặc trưng của S aureus, là tiêu chuẩn để phân biệt S aureus với các tụ cầu khác

Ngoài ra, chúng còn cho phản ứng DNAse, phosphatase dương tính, có khả năng lên men và sinh acid từ manitol, trehalose, sucrose Tất cả các dòng

S aureus đều nhạy với novobiocin, có khả năng tăng trưởng trong môi trường

chứa đến 15% muối NaCl (Trần Linh Thước, 2002)

Một số dòng S aureus có khả năng gây tan máu trên môi trường thạch

máu, vòng tan máu phụ thuộc vào từng chủng nhưng chúng đều có vòng tan

máu hẹp hơn so với đường kính khuẩn lạc Hầu hết các dòng S aureus đều tạo

sắc tố vàng, nhưng các sắc tố này ít thấy khi quá trình nuôi cấy còn non mà thường thấy rõ sau 1-2 ngày nuôi cấy ở nhiệt độ phòng Sắc tố được tạo ra nhiều hơn trong môi trường có hiện diện lactose hay các nguồn hidrocacbon khác mà vi sinh vật này có thể bẻ gãy và sử dụng

Trên môi trường BP (Paird Parker), khuẩn lạc đặc trưng của S aureus có

màu đen nhánh, bóng, lồi, đường kính 1-1,5 mm, quanh khuẩn lạc có màu sáng rộng 2-5 mm ( do khả năng khử potassium tellurite K2TeO3 và khả năng

thủy phân long đỏ trứng của lethinase) (Rosamund và et al., 1995; Mary et al.,

2002 Trên môi trường MSA (Manitol salt agar) hay còn gọi là môi trường Chapman, khuẩn lạc tròn, bờ đều và lồi, màu vàng nhạt đến vàng đậm và làm

vàng môi trường xung quanh khuẩn lạc (do lên men đường manitol) (Mary et al., 2002)

Hình 9 Staphylococcus aureus trên môi trường Paird Parker

(http://in110262864.trustpass.alibaba.com/product/110999363-0/BAIRD_PARKER_AGAR_BASE.html)

Đa số các dòng S aureus có thể tổng hợp một hay nhiều enterotoxin

trong môi trường nhiệt độ trên 150C, nhiều nhất khi chúng tăng trưởng ở nhiệt

độ 35-370C (Trần Linh Thước, 2002)

2.3.3 Điều kiện tăng trưởng và sự phân bố

S aureus phân bố rộng rãi trong tự nhiên có nhiều trong các thực phẩm

như: thịt, trứng, sữa và trên da, tóc, lông của người và động vật

S aureus lây nhiễm từ người chế biến, động vật bị nhiễm bệnh, được xếp

vào nhóm vi khuẩn cơ hội vì nó có mặt rộng rãi và thường xuyên trong mô chờ đợi điều kiện thuận lợi để xâm nhập

Trên động vật, vi khuẩn hiện diện trên các sản phẩm động vật như thịt,

sữa chưa được tiệt trùng (Werckenthin et al., 2001) Theo điều tra của El-jakee

et al (2008), trong số 409 mẫu điều tra, chủng S aureus hiện diện trên người

36%, trên chó 28%, bò 24%, thực phẩm 14,7% và trên gà 12% Đối với gia

cầm bệnh viêm khớp trên gà do S aureus được phát hiện đầu tiên năm 1800

và gây thiệt hại đáng kể ở nhiều quốc gia trên thế giới Những nghiên cứu gần

đây của Lizeng (1997) và Skeeles (1998) cho thấy tỉ lệ viêm khớp do S aureus trên đàn gà thịt là trên 3% tuy nhiên trong một số trường hợp có thể lên

tới 20% Mặt khác, theo Rasheed (2011) trong số 60 gà từ 30-55 ngày tuổi có triệu chứng viêm khớp, kết quả phân lập có 26 con (60%) có sự hiện diện của

vi khuẩn S aureus

Nhu cầu dinh dưỡng cho sự phát triển của S aureus thay đổi tùy thuộc vào từng dòng S aureus có khả năng phát triển trong khoảng nhiệt độ rất

rộng, từ 7-480C, với nhiệt độ cực thuận là 30-450C; khoảng pH 4,2-9,3, với độ

pH cực thuận là 7-7,5; và trong môi trường chứa trên 15% NaCl Tụ cầu bền vững khi có nồng độ đường cao, nhưng bị ức chế bởi nồng độ 60%; nồng độ

từ 33-35%, tụ cầu vẫn phát triển, trong khi các vi khuẩn khác như Shigella và Salmonella bị ức chế Ngoài ra, chúng còn có khả năng bám dính tốt trên

nhiều loại tế bào và máy móc thiết bị giúp gia tăng tính kháng của tụ cầu với

sự sấy khô và lọc thấm Chính nhờ những đặc điểm trên giúp S aureus có sự

phân bố rộng, chủ yếu được phân lập từ da, màng nhày, tóc và mũi của người

và động vật máu nóng S aureus được cho là vi khuẩn khá mạnh có thể sống

tốt bên ngoài ký chủ Vi khuẩn này có mặt trong không khí, bụi và trong nước

dù chúng thiếu tính di động và rất nhạy với thuốc kháng sinh và chất diệt

khuẩn Tuy nhiên, S aureus cũng khá nhạy với nhiệt độ, bị diệt ở 600C từ 2-50 phút tùy từng loại thực phẩm và là vi sinh vật cạnh tranh yếu, dễ bị các vi sinh

vật khác ức chế (Bremer et al., 2004)

Có 10-50% dân số vẫn sống khỏe mạnh dù mang S aureus (Bremer et al., 2004) Tuy nhiên khả năng nhiễm vào thực phẩm và gây bệnh của S aureus cũng rất lớn do chúng phân bố ở khắp nơi và có khả năng sinh độc tố

đoạn tiếp xúc trực tiếp với người Sự hiện diện với mật độ cao của S aureus

trong thực phẩm cho thấy điều kiện vệ sinh của quá trình chế biến kém, kiểm soát nhiệt độ trong các công đoạn chế biến không tốt Tuy nhiên, điều đó không đủ bằng chứng để cho rằng thực phẩm đó sẽ gây độc, nó chỉ xảy ra khi

S aureus được phân lập tạo độc tố Ngược lại, chỉ với một lượng nhỏ S aureus tạo độc tố cũng có thể gây độc (Reginald et al., 2001)

2.3.4 Các yếu tố độc lực của S aureus

S aureus có thể phát triển gây bệnh lên đến 90% trên da, lông chó và một nghiên cứu khác về hệ vi sinh trên da và lông chó đã tìm ra S aureus (Krogh HV et al, 1976)

S aureus là loại gây bệnh thường hay gặp nhất, nó có vai trò và ý nghĩa quan trọng đối với y học và thú y học Khoảng 30% người khỏe mạnh mang S aureus ở trên da và niêm mạc, khi có những tổn thương ở da và niêm mạc hoặc những rối loạn về chức năng thì các nhiễm trùng do S aureus dễ dàng

xuất hiện Nó là nguyên nhân gây viêm xoang, viêm amygdale, viêm vú cho người (Trần Thị Phận, 2004)

S aureus là vi khuẩn sinh mủ điển hình, có thể phân lập được từ phân

heo, da, khoang miệng, hệ hô hấp trên, nếp gấp âm vật, âm đạo và ruột của

heo khỏe S aureus truyền qua đường không khí, tiếp xúc, ăn uống Giao phối

có thể giúp S aureus gây nhiễm trùng đường sinh dục Viêm vú, viêm âm đạo,

viêm tử cung và là hậu quả của nhiễm trùng diễn tiến Sự sẩy thai có liên quan đến sự hiện diện kháng thể trong huyết thanh với chủng dung huyết alpha ở heo nái (Taylor, 1992)

S aureus gây ra nhiều bệnh nhiễm trùng, tạo mủ Thường xảy ra ở

những chỗ xây xước trên bề mặt da như nhọt, gây ra nhiều bệnh nhiễm nghiêm trọng như viêm phổi, viêm vú, viêm tĩnh mạch, viêm màng não, nhiễm trùng tiểu và những bệnh nguy hiểm khác như viêm xương tủy, viêm màng trong

tim S aureus cũng là nguyên nhân chủ yếu của việc nhiễm trùng vết mổ S aureaus còn gây ngộ độc thực phẩm do tạo độc tố ruột enterotoxin trong thực

phẩm (Kenneth Todar, 2005)

S aureus tạo nhiều yếu tố độc lực:

- Protein bề mặt: thúc đẩy việc bám dính vào tế bào chủ Ngoài ra, hầu hết các dòng đều tạo protein gắn kết fibrinogen và fibronetin làm kích thích sự kết dính các khối máu và mô bị chấn thương Các protein gắn kết chất tạo keo cũng thường gặp ở những dòng gây bệnh viêm xương tủy và viêm khớp

- Yếu tố xâm lấn:

Hemolysin: α – toxin (α-hemolysin): đây là độc tố khử màng mạnh nhất

của S aureus β–toxin: đây là một mạch enzyme phân hủy màng giàu lipid,

γ-toxin: là một độc tố có peptide nhỏ, có thể phân hủy một số dạng tế bào khác nhau

Leukocidin: độc tố này gây độc cho bạch cầu người và thỏ, không gây độc cho bạch cầu động vật khác, làm hoại tử da thỏ

Hyaluronidase: làm giảm chất gian bào của tế bào chủ và có thể giúp tụ cầu lan rộng sang các vùng xung quanh

Coagulase: coagulase là một enzyme ngoại bào sẽ gắn với prothrombin trong tế bào chủ hình thành phức hợp staphylothrombin Coagulase là một chỉ

thị thường dùng để phát hiện S aureus ở các phòng thí nghiệm (Kenneth

Todar, 2005)

Staphylokinase: đây là yếu tố phân giải fibrin Một phức hợp sẽ được hình thành giữa staphylokinase và plasminogen kích hoạt hoạt tính phân giải protein giúp phân hủy fibrin

- β-lactamase: enzyme này được biết đến như một độc tố giúp vi khuẩn kháng lại kháng sinh

Một số enzyme: TNase: là enzyme kháng nhiệt, có khả năng hidro hóa DNA và RNA của tế bào chủ; DNase, protease, lipase: cung cấp chất dinh dưỡng cho vi khuẩn; FAME: là enzyme rất quan trọng ở những chỗ bị áp xe,

đó là nơi chúng có thể biến đổi những lipid kháng khuẩn và kéo dài sự sống của vi khuẩn

Các loại độc tố khác nhau sẽ tác động và gây bệnh ở mức độ khác nhau

Liben et al (2012), khi phân lập vi khuẩn S aureus trên người và bò bị viêm

vú với chủng S aureus enterotoxin A liều gây chết 50% số động vật thí

nghiệm là 2x109 cfu/ml

Eunice (1983), liều gây chết 50% số động vật thí nghiệm khác nhau tùy theo nguồn gốc của chủng vi khuẩn và phụ thuộc vào loại độc tố

S aureus sinh ra những độc tố như: coagulase, hyaluronidase,

hemolysine, leukocidine, exfoliatine Năm độc tố ruột (Enterotoxin A, B, C,

D, E) bền với nhiệt Các độc tố này đóng vai trò quan trọng trong ngộ độc thực phẩm

Trong số các loại độc tố, enterotoxin của S aureus (SE) đóng vai trò