Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hoá học và một số tác dụng sinh học của cây lược vàng callisia fragrans (lindl ) woodson

B ộ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC • • B ộ Y TẼ Dược HÀ NỘI • • HOÀNG THỊ DIỆU HƯƠNG NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIể M THựC VẬT, • • • y THÀNH PHẦN HĨA HỌC VÀ MỘT Số TÁC DỤNG SINH HỌC • • CỦA CÂY LƯỢC • VÀNG CALLISIA FRAGRANS (LINDL.) WOODSON LUẶN VĂN THẠC SỸ DƯỢC HỌC • • • • CHUYÊN NGÀNH: Dược LIỆU - Dược cổ TRUYỀN MÃ SỔ: 60.73.10 Người hướng dẫn khoa học: TS Trịnh Thị Điệp TRUỞNÍÌ ĐH DƯỢC HÀ NỘ T H Ư ViỆN Ngày tháng ^ "nărn 20.J.'( £ ố Đ K C b L c HÀ NỘI, 2010 LỜI CẢM ƠN Trong q trình nghiên cứu hồn thành luận văn này, nhận nhiều giúp đỡ quý báu thầy cô giáo, chuyên gia nhiều lĩnh vực đồng nghiệp, bạn bè gia đình Trước hết, với lòng kính trọng biết ơn sâu sắc, xin gửi lời cảm ơn chân thành tới TS T rịn h Thị Điệp, người tận tình hướng dẫn, hết lòng bảo, ln quan tâm tạo điều kiện thuận lợi cho tơi suốt q trình học tập nghiên cứu Tiếp theo xin cảm ơn giúp đỡ nhiệt tình chú, anh chị em K hoa Hóa thực v ật - Viện Dược liệu, nơi tạo điều kiện thuận lợi cho suốt q trình thực luận văn Tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới PGS.TS Chu Đình Kính - Viện Hóa học, Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam; PGS.TS Nguyễn Trọng Thông - Bộ môn Dược lý, Trường Đại học Y Hà Nội giúp đỡ đóng góp ý kiến quý báu để thực luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn Ban Giám hiệu, phòng Sau Đại học, thầy cô giáo, kỹ thuật viên Bộ môn Dược liệu, Dược học cổ truyền Thực vật Dược - Trường Đại học Dược Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi cho tơi q trình học tập nghiên cứu Cuối cùng, lời cảm ơn sâu sắc nhất, tơi muốn gửi tới gia đình, bạn bè, người ủng hộ động viên học tập sống Một lần nữa, xin cảm ơn tất giúp đỡ q báu đó! Hà Nội, tháng 12 năm 2010 Hồng Thị Diệu Hương MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẤT DANH MỤC CÁC BẢNG, BIỂU DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, Đ THỊ ĐẶT VẤN Đ Ề CHƯƠNG TỔNG Q U A N 1.1 v ề đăc điểm thưc v â• t • • 1.1.1 Vài nét chi Callỉsia Loefling ; 1.1.2 Loài Callỉsia fragrans (Lindl.) Woodson 1.2 v ề thành phần hóa học 1.2.1 Các hợp chất phenol 1.2.2 Saponin 1.2.3 Các acid hữu c 1.2.4 Dầu béo 1.2.5 Carbohydrat 1.2.6 Các acid am in 1.2.7 Các nguyên tố vô c 1.3 v ề tác dụng sinh học 1.3.1 Sử dụng chi Caỉlisia dân gian 1.3.2 Tác dụng chống oxy hóa 1.3.3 Tác dụng bảo vệ khả hoạt động 10 1.3.4 Tác dụng chống stress 10 1.3.5 Tácdụng hệ miễn d ịc h 11 1.3.6 Tác dụng chống v iru s 11 1.4 Tác dụng sinh học số chất có lược vàng Callisia fragrans (Lindl.) Woodson 11 1.5 Một số chế phẩm có chứa lược vàng 13 CHƯƠNG NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 2.1 Nguyên vật liệu nghiên cứu 14 2.1.1 Nguyên liệu nghiên cứu 14 2.1.2 Động vật thí nghiệm 14 2.1.3 Các hóa chất dùng nghiên u 14 2.2 Phương pháp nghiên u .15 2.2.1 Nghiên cứu thực vật 15 2.2.2 Nghiên cứu thành phần hóa h ọ c 15 2.2.3 Nghiên cứu tác dụng sinh h ọ c 17 2.2.3.1 Phương pháp thử độc tính c ấ p 17 2.2.3.2 Phương pháp thử tác dụng tăng cường miễn dịch 18 2.2.3.3 Phương pháp thử tác dụng chống oxy hóa ỉn vivo 22 2.2.4 Phương pháp xử lý số liệu 24 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN c ứ u 25 3.1 Kết nghiên cứu thực vật 25 3.1.1 Mô tả đặc điểm thực vật thẩm định tên khoa học 25 3.1.2 Xác định đặc điểm vi h ọ c 26 3.1.2.1 Đặc điểm vi p hẫu 26 3.1.2.2 Đặc điểm b ộ t 27 3.2 Kết nghiên cứu thành phần hóa học 29 3.2.1 Định tính nhóm chất hữu thân phụ lược v n g 29 3.2.2 Chiết xuất phân lập họp chất từ thân phụ lược vàng 30 3.2.3 Xác định cấu trúc chất phân lập từ thân phụ lược vàng 33 3.2.3.1 Chất LV H 53-56 33 3.2.3.2 C h ấ tL V E ló 36 3.2.4 Định lượng hợp chất phenol toàn phần lược vàng .41 3.3 Ket nghiên cứu tác dụng sinh học .43 3.3.1 Kết thử độc tính cấp 43 3.3.2 Kết thử tác dụng tăng cường miễn dịch 45 3.3.2.1 Nghiên cứu đánh giá tình trạng chung hệ miễn dịch 45 3.3.2.2 Nghiên cứu ảnh hưởng LVL LVT lên đáp ứng miễn dịch dịch thể với kháng nguyên 49 3.3.2.3 Nghiên cứu đánh giá đáp ứng miễn dịch qua trung gian tế b 52 3.3.3 Ket thử tác dụng chống oxy hóa in vivo 55 CHƯƠNG BÀN LU Ậ N 57 4.1 v ề thực vật 57 4.2 v ề thành phần hóa học .57 4.3 v ề tác dụng sinh học 60 KẾT LUẬN VÀ KIÉN NGHỊ 70 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT BC Bạch cầu BCMTT Bạch cầu múi trung tính br Rộng (broad) *^C-NMR Phổ cộng hưỏng từ hạt nhân cacbon 13 (Carbon-13 Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy) CCI4 Carbon tetraclorua cs Cộng CY Cyclophosphamid d Doublet dd Doublet of doublet DEPT Distortionless Enhancement by Polarisation Transfer DPPH 1,1 -diphenyl- -picrylhydrazyl 2D-NMR Phổ cộng hưởng từ hạt nhân hai chiều (Two-Dimensional NMR) ESI-MS Phổ khối lượng phun mù điện tử (Electron Spray Ionization Mass Spectrometry) HCC Hồng cầu cừu HMBC Heteronuclear Multiple Bond Coherence ’H-NMR Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton (Proton Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy) HPLC Sắc ký lỏng hiệu cao (High Performance Liquid Chromatography) HSQC Heteronuclear Single Quantum Coherence IL Interleukin IR Phổ hồng ngoại (Infrared Spectroscopy) LVL Cao đông khô dịch ép lược vàng LVT Cao chiết cồn 50% thân phụ lược vàng m Multiplet MDA Malonyl dialdehyd MS Phổ khối lượng (Mass Spectroscopy) NK Natural killer (diệt tự nhiên) q Quartet s Singlet SKC Sắc ký cột (Column Chromatography) SKLM Sắc ký lớp mỏng (Thin Layer Chromatography) t Triplet TBTHHMC xế bào lympho lách tạo hoa hồng mẫn cảm TBTQDH Tế bào lympho lách tạo quầng dung huyết TNF Yếu tố hoại tử khối u TT Thuốc thử (ppm) Độ dịch chuyển hóa học (parts per milion) DANH MỤC CÁC BẢNG, BIẺƯ Bảng 1.1 Tổng hợp tác dụng sinh học số chất có lược vàng Callisia fragrans 11 Bảng 3.1 Kết định tính nhóm chất hữu lược vàng 29 Bảng 3.2 Các liệu phổ NMR chất LV H 53-56 33 Bảng 3.3 Các liệu phổ NMR chất A .37 Bảng 3.4 Các liệu phổ NMR chất B .39 Bảng 3.5 Độ hấp thụ dung dịch acid gallictại bước sóng 760nm 41 Bảng 3.6 Kết định lượng họp chất phenol toàn phần l 42 Bảng 3.7 Kết định lượng hợp chất phenol toàn phần thân p h ụ 43 Bảng 3.8 Số liệu thử độc tính cấp cao đơng khơ lược vàng L V L 43 Bảng 3.9 Số liệu thử độc tính cấp cao chiết cồn 50% thân phụ lược vàng LVT 44 Bảng 3.10 Trọng lượng lách tương đối lơ thí nghiệm 45 Bảng 3.11 Trọng lượng tuyến ức tương đối lơ thí nghiệm 46 Bảng 3.12 Số lượng bạch cầu máu ngoại vi chuột lơ thí nghiệm 47 Bảng 3.13 Số lượng bạch cầu tuyệt đối máu ngoại v i 48 Bảng 3.14 Tỷ lệ tế bào lympho lách tạo HHMC với HCC lơ thí nghiệm 49 Bảng 3.15 Tỷ lệ tế bào lympho lách tạo QDH lơ thí nghiệm 50 Bảng 3.16 Tỷ lệ tế bào lympho BcDi9 lách phân lập lơ thí nghiệm 51 Bảng 3.17 Chỉ số phản ứng bì với kháng ngun OA lơ thí nghiệm 52 Bảng 3.18 Tỷ lệ tế bào lympho 53 TcD lách chuột lơ thí nghiệm Bảng 3.19 Nồng độ IL-2 tế bào lympho lách nuôi cấy lơ thí nghiệm .54 Bảng 3.20 Nồng độ TN F-a tế bào lympho lách nuôi cấy lơ thí nghiệm .54 Bảng 3.21 Hàm lượng MDA gan chuột tỷ lệ % giảm so với đối chứng gây bệnh lô thí nghiệm 56 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỊ THỊ Hình 2.1 Ảnh lược vàng .14 Hình 2.2 Ảnh thân phụ lược vàng 14 Hình 3.1 Ảnh lược vàng 25 Hình 3.2 Ảnh hoa lược vàng 25 Hình 3.3 Ảnh vi phẫu lược vàng 26 Hình 3.4 Ảnh vi phẫu thân phụ lược v n g 27 Hình 3.5 Ảnh bột lược v àn g 28 Hình 3.6 Ảnh bột thân phụ lược v àn g .28 Hình 3.7 Sơ đồ chiết xuất phân lập chất từ thân phụ lược v àn g 32 Hình 3.8 Cấu trúc hóa học chất LVH53-56 36 Hình 3.9 Cấu trúc hóa học chất A 39 Hình 3.10 Cấu trúc hóa học chất B 41 Hinh 3.11 Đường chuẩn acid gallic 42 ĐẶT VẤN ĐÈ • Cây lược vàng có nguồn gốc Mexico, du nhập vào nước ta năm gần Lược vàng có tên gọi khác lan vòi, địa lan vòi, lan rũ, bạch tuộc thường người dân trồng làm cảnh Nhưng thời gian gần đây, lược vàng dư luận nước quan tâm tác dụng chữa bệnh Theo kinh nghiệm dân gian Nga, lược vàng sử dụng để chữa nhiều chứng bệnh khác thấy có hiệu như: viêm đường hô hấp, viêm đường tiết niệu, viêm lợi, bệnh dày, đau xương khóp đến bệnh tim mạch, huyết áp, chí u bướu Việt Nam, lược vàng đối tưọng hồn tồn chưa có tên tài liệu thuốc nào, chí chưa có tài liệu thực vật học đề cập đến Việc sử dụng lược vàng để chữa bệnh người dân chủ yếu theo kinh nghiệm dân gian Trên giới có cơng bố khoa học đặc điểm thực vật, thành phần hóa học tác dụng sinh học lược vàng, Nga có số kết nghiên cứu thành phần hóa học nghiên cứu tác dụng sinh học lược vàng Mặc dù vậy, lược vàng ứng dụng rộng rãi để chữa bệnh dày - ruột, bệnh túi mật, lách; bệnh đường hô hấp ho, viêm họng, viêm phế quản, hen phế quản; bệnh đường tiết niệu; bệnh da viêm da, zona, chàm, làm thuốc giảm đau, chống nóng rát, giúp vết thương chóng lành Các sách báo lược vàng, loại thuốc chữa bệnh, thực phẩm chức lược vàng dược liệu xuất ngày nhiều [101], [102], [105\ Nhìn chung, lược vàng dùng theo kinh nghiệm dân gian, chưa nghiên cứu đầy đủ mặt dược liệu học Đe góp phần TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI B ộ MÔN THựC VẬT PHIẾU GIÁM ĐỊNH TÊN KHOA HỌC S ố : M ẩu do: HOÀNG THỊ DIỆU HƯƠNG Địa chỉ: Lớp Cao học khóa 13 Trường ĐH Dược Hà Nội Lấy ngày: 29/07/2010 Địa điểm thu mẫu: Yên Dũng, Bắc Giang M ang đến: Bộ môn Thực vật - Trường ĐHDược Hà Nội Gồm có: mẫu (khơng cổ phận sinh sản) Yêu cầu: Giám định tên khoa học K ết giám định: Căn vào tài liệu có trường ĐH Dược Hà Nội, thực vật giới đặc điểm phận mẫu gửi xác định mẫu cỏ: - Tên khoa học: Callỉsia fragrans (Lindl.) Woodson - Họ: Commelinaceae - Tên thường gọi; Lược vàng, Lan vòi Các tiêu lưu tại: Phòng tiêu Bộ môn Thực vật Trường Đại học Dược Hà Nội (HNIP), Mã tiêu bản: -f+NlP Hà Nội, ngày /4 thángAị năm 2010 Người giám định TRẦN VĂN ƠN TRƯỜNG ĐẠI HỌC D ợ c HÀ NỘI BỘMƠNTHựCVẬT T ^v PHỊNG TIÊU BẢN CÂY THUỐC (HNIP) GIẤY CHỨNG NHẬN MÃ s ố TIÊU BẢN ]^n mí u 'ĩc a học: Callisỉa fragrans (Lindl.) Woodson, Commelinaceae 'mg dùng: Lược vàng, Lan vòi - Tên địa phương: - Sỗ mẫu: 03 Nguồn gốc: Yên Dũng Bắc Giang Ngày thu mẫu: 29/07/2010 Ngày nộp mẫu: 22/11/2010 Ngưòi thu mẫu: Hồng Thị Diệu Hưomg Cơ quan: CH 13, ĐHD HN Ngưòi nộp mẫu: Hồng Thị Diệu Hương Cơ quan; CH 13, ĐHD HN Số hiệu phòng tiêu bản: HNIP/17702/10 Người giám định tên khoa học: TS Trần Văn ơn Người nộp mẫu Người nhận mẫu Hoàng Thị Diệu Hương ThS Nguyễn Quốc Huy PHỤ LỤC 2: PHỎ CỦA CHẤT LVH53-56 p h ổ ’h -n m r PHỔ '^C-NMR PH Ô H SQ C PHÔ HMBC PHỔ KHỐI PHÂN GIẢI CAO PHỒ ESI-MS LVH5356/4350-CDCl3&MeOD-lH fOu^oư^(^^^ư^voa\oư^vo^u^t^^^Jư>^ooo^oví)r^c^c^ư^o(NOơ\ơ^r^ưì’ ^CNOơìTHCNư?^^:i'rororocNookDo ^r-.íX)-^HtHOr4ơ^CC>CO'; !0 ‘^ Tandem : n >= 15 M ass A ccuracy: