khảo sát sự hiện diện của escherichia coli sinh men ßlactamase phổ rộng trên gà khỏe tại huyện kế sách tỉnh sóc trăng

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG BỘ MÔN THÚ Y NGUYỄN MINH LUÂN KHẢO SÁT SỰ HIỆN DIỆN CỦA ESCHERICHIA COLI SINH MEN ß-LACTAMASE PHỔ RỘNG TRÊN GÀ KHỎE TẠI HUYỆN KẾ SÁCH TỈNH SÓC TRĂNG LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP NGÀNH THÚ Y Cần Thơ, 2015 TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG BỘ MÔN THÚ Y LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP NGÀNH THÚ Y KHẢO SÁT SỰ HIỆN DIỆN CỦA ESCHERICHIA COLI SINH MEN ß-LACTAMASE PHỔ RỘNG TRÊN GÀ KHỎE TẠI HUYỆN KẾ SÁCH TỈNH SÓC TRĂNG Giảng viên hướng dẫn Sinh viên thực ThS. BÙI THỊ LÊ MINH NGUYỄN MINH LUÂN MSSV: 3103034 Lớp: CN10Y4A1 i Khóa 36 TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG BỘ MÔN THÚ Y Đề tài “Khảo sát diện Escherichia coli sinh men β–lactamase phổ rộng gà khỏe huyện Kế Sách tỉnh Sóc Trăng” sinh viên Nguyễn Minh Luân thực Bộ môn Thú Y, khoa Nông Nghiệp & Sinh Học Ứng Dụng, trường Đại Học Cần Thơ từ tháng năm 2014 đến tháng 12 năm 2014. Cần Thơ, ngày….tháng… năm 2015 Cần Thơ, ngày….tháng… năm 2015 Duyệt Bộ Môn Giảng viên hướng dẫn ThS. Bùi Thị Lê Minh Cần Thơ, ngày….tháng… năm 2015 Duyệt Khoa Nông Nghiệp Sinh Học Ứng Dụng ii LỜI CẢM TẠ  Trong thời gian học tập rèn luyện mái trường Đại học Cần Thơ, thầy cô dành bao tâm huyết để truyền đạt kiến thức quý báu cho vững bước vào đời. Hôm ước mơ thành thật, với phấn đấu thân hoàn thành luận văn tốt nghiệp. Trong suốt trình học tập thời gian thực đề tài nhận giúp đỡ nhiều người. Trong giây phút nói lời cảm ơn chân thành đến người quan tâm, lo lắng giúp đỡ suốt thời gian qua. Xin chân thành cảm ơn: Cô Bùi Thị Lê Minh – người hết lòng lo lắng, bảo, động viên hoàn thành luận văn tốt nghiệp. Quý thầy cô Bộ môn Thú Y, Bộ môn Chăn Nuôi tận tình truyền đạt kiến thức, kinh nghiệm quý báu, lẫn nhận thức xã hội trình học tập trường. Cha mẹ – người nuôi nấng, dạy dỗ đặt niềm tin, hy vọng vào để có ngày hôm nay. Các anh chị cao học khóa 19, bạn bè lớp Dược Thú y Khóa 36, động viên, chia giúp đỡ suốt thời gian học tập thực đề tài. Chân thành cảm ơn! iii TÓM LƯỢC Đề tài “Khảo sát diện Escherichia coli sinh men β–lactamase phổ rộng gà khỏe huyện Kế Sách tỉnh Sóc Trăng” thực từ tháng 08 đến tháng 12 năm 2014 24 mẫu phân gà trạng thái khỏe, gồm có mẫu gà thịt tuần tuổi, mẫu gà thịt tháng tuổi 12 mẫu phân gà đẻ. Sau lấy mẫu xác định vi khuẩn E.coli sinh men ß-lactamase phương pháp đĩa kết hợp (CLSI, 2014) kiểm tra độ nhạy chủng E. coli ESBL phân lập kháng sinh. Kết phân tích cho thấy tỉ lệ E.coli ESBL dương tính phân gà 45,8%, tỉ lệ gà thịt 75% gà đẻ 16,7%. Kết kháng sinh đồ thu cho biết vi khuẩn E. coli ESBL nhạy cảm với kháng sinh amikacin (100%), tetracycline (75,9%), doxycycline (69%), fosfomycin (69%). Đề kháng mạnh với kháng sinh ampicillin (100%), streptomycin (100%), trimethoprim/sulfamethoxazole (100%) gentamycin (96,6%), cefalor (89,7%), cefuroxime kanamycin (86%), cefotaxime norfloxacin (82,8%). Xét tính đa kháng kháng sinh số vi khuẩn đề kháng lúc từ đến 13 loại kháng sinh khác nhau, số vi khuẩn đề kháng lúc 11 loại kháng sinh chiếm đến 31,04%, 10 loại kháng sinh chiếm 24,13%, loại kháng sinh 17,24%, 12 loại kháng sinh chiếm 10,34%, loại kháng sinh 6,9%, 13 loại kháng sinh chiếm 3,45%. iv MỤC LỤC Trang tựa i Trang duyệt . ii Lời cảm tạ . iii Tóm lược iv Mục lục .v Danh mục viết tắt vii Danh mục hình vii Danh mục bảng ix CHƯƠNG 1: ĐẶT VẤN ĐỀ .1 CHƯƠNG 2: CƠ SỞ LÝ LUẬN .2 2.1 Giới thiệu vi khuẩn E.coli .2 2.1.1 Đặc điểm hình thái 2.1.2 Đặc điểm nuôi cấy 2.1.3 Đặc điểm sinh hóa 2.1.4 Sự đề kháng tính gây bệnh E. coli .4 2.2 Sơ lược vi khuẩn E. coli ESBL .7 2.2.1 Giới thiệu vi khuẩn sinh men β –lactamase phổ rộng 2.2.2 Tình hình nghiên cứu vi khuẩn E. coli ESBL 2.2.3 Đề kháng kháng sinh vi khuẩn E. coli ESBL .9 2.2.4 Phương pháp phát diện E.coli ESBL .10 2.3 Kỹ thuật kháng sinh đồ Kirby- Bauer 11 2.3 Sơ lược số kháng sinh nghiên cứu đề tài 11 2.3.1 Kháng sinh nhóm β -lactam 11 2.3.2 Kháng sinh nhóm aminoglycoside 13 2.3.3 Kháng sinh nhóm tetracyclline .14 2.3.4 Kháng sinh nhóm quinolone .14 CHƯƠNG 3: PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 3.1 Phương tiện nghiên cứu .15 v 3.1.1 Thời gian, địa điểm, đối tượng nghiên cứu .15 3.1.2 Dụng cụ hóa chất 15 3.2 Phương pháp nghiên cứu 16 3.2.1 Phương pháp thu thập mẫu 16 3.2.2 Phương pháp nuôi cấy phân lập vi khuẩn E. coli ESBL .16 3.2.3 Phương pháp lập kháng sinh đồ 18 3.2.4 Phương pháp phân tích thống kê .19 CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .20 4.1 Kết Tỉ lệ E. coli ESBL dương tính gà thịt 20 4.2 So sánh tỉ lệ dương tính E. coli ESBL gà thịt gà đẻ .21 4.3 Kết kiểm tra độ nhạy cảm vi khuẩn với kháng sinh .22 4.4 Tính đa kháng vi khuẩn E.coli ESBL loại kháng sinh 25 CHƯƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ .27 5.1 Kết luận 27 5.2 Đề nghị 27 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ CHƯƠNG .31 vi DANH MỤC VIẾT TẮT CHỮ VIẾT TẮT CHỮ VIẾT ĐẦY ĐỦ CLSI Clinical Laboratory Standard Institute CFU Colony Forming Unit E. coli Escherichia coli ESBL Extended Spectrum ß-lactamase MC MacConkey Agar MHA Mueller - Hinton Agar NA Nutrient Agar vii DANH MỤC HÌNH Hình 2.1: Vi khuẩn E. coli kính hiển vi quang học ……………… Hình 2.2: Thể viêm ruột …………………………………… ………… .6 Hình 2.3: Túi lòng đỏ không tiêu……………………………… ……… Hình 2.4: Thể viêm rốn…………………………………………… …… .6 Hình 2.5: Viêm màng bao tim…………… ……………………………… .6 Hình 2.6: Viêm ống dẫn trứng, viêm buồng trứng…………………… … Hình 2.7: Thể viêm mắt………………………………………………… .7 Hình 2.8: Sơ đồ cấu trúc dạng vòng kháng sinh nhóm ß-lactam…… 12 Hình 2.9: Sơ đồ công ß-lactamase vào vòng ß-lactam cấu trúc kháng sinh nhóm ß-lactam…………………………………… 13 Hình 3.1: Qui trình phân lập vi khuẩn E. coli ESBL……… .18 Hình 4.1: Kết kháng sinh đồ mẫu E. coli ESBL phân lập……… .24 Hình 4.2: Kết kháng sinh đồ…………………………………………… .24 Hình 1: Khuẩn lạc E. coli môi trường MC……………………… 32 Hình 2: Sinh hóa khẳng định vi khuẩn E. coli .32 Hình 3: Đĩa kết hợp khẳng định E. coli ESBL……………………… 32 Hình 4: Khuẩn lạc E. coli môi trường NA .32 viii DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1: Tiêu chuẩn đường kính vòng kháng khuẩn số kháng sinh 19 Bảng 4.1: Tỉ lệ E. coli ESBL dương tính gà thịt 21 Bảng 4.2: Kết tỉ lệ E. coli ESBL dương tính gà thịt gà đẻ .22 Bảng 4.3: Kết tính nhạy cảm E. coli ESBL với kháng sinh .23 Bảng 4.3: Kết kiểm tra tính đa kháng chủng E. coli ESBL phân lập 25 ix - Môi trường Simmons citrate dùng để kiểm tra khả sử dụng citrate thay nguồn carbon vi khuẩn. Trên môi trường này, vi khuẩn cho kết dương tính màu môi trường chuyển từ xanh lục sang xanh dương, không thay đổi màu vi khuẩn âm tính. Mẫu phân (Swab) Môi trường MC bổ sung Ceftazidime 2mg/l 37oC, 24 Chọn 10 khuẩn lạc E. coli điển hình cấy lên NA 37oC, 24 Cấy khuẩn lạc từ NA lên môi trường sinh hóa 37oC, 24 Kết kiểm tra sinh hóa Citrate (-) VP (-) MR (+) Indol (+) Khẳng định E. coli So độ đục với ống Macfarland 0,5 1x108 CFU/ml Phương pháp đĩa kết hợp gồm đĩa Đĩa 1: Ceftazidime (30μg), Đĩa 2: Ceftazidime + clavulanic acid (30/10μg) Đĩa 3: Cefotaxime (30μg), Đĩa 4: Cefotaxime + clavulanic acid (30/10μg) 37oC, 16-18 Khẳng định E. coli ESBL chênh lệch đường kính đĩa đĩa ≥ 5mm và, đường kính đĩa đĩa ≥ 5mm Giữ giống. Hình 3.1: Qui trình phân lập vi khuẩn E. coli ESBL 17 Sau khẳng định E. coli dùng phương pháp đĩa kết hợp để xác định vi khuẩn E. coli ESBL. Theo CLSI (2014) phương pháp đĩa kết hợp sử dụng đồng thời cặp đĩa kháng sinh bao gồm loại đĩa Đĩa 1: Ceftazidime (30μg), Đĩa 2: Ceftazidime + clavulanic acid (30/10μg), Đĩa 3: Cefotaxime (30μg), Đĩa 4: Cefotaxime + clavulanic acid (30/10μg). Khẳng định E. coli ESBL chênh lệch đường kính đĩa đĩa ≥ 5mm và, đường kính đĩa đĩa ≥ 5mm. 3.2.3 Phương pháp lập kháng sinh đồ Phương pháp lập kháng sinh đồ thực theo tiêu chuẩn CLSI (2014). Bảng 3.1: Tiêu chuẩn đường kính vòng kháng khuẩn số kháng sinh (CLSI, 2014) Tên kháng sinh Kết đường kính vòng Hàm lượng kháng sinh kháng khuẩn (mm) Nhạy Trung gian Kháng Ampicillin 10 μg ≥ 17 14 - 16 ≤ 13 Ceftazidime 30 μg ≥ 21 18 - 20 ≤ 17 Cefuroxime 30 μg ≥ 18 15 - 17 ≤ 14 Cefotaxime 30 μg ≥ 26 23 - 25 ≤ 22 Cefaclor 30 μg ≥ 18 15 - 17 ≤ 14 Gentamicin 10 μg ≥ 15 13 - 14 ≤ 12 Streptomycin 10 μg ≥ 15 12 - 14 ≤ 11 Kanamycin 30 μg ≥ 18 14 - 17 ≤ 13 Amikacin 30 μg ≥ 17 15 - 16 ≤ 14 Tetracycline 30 μg ≥ 15 12–14 ≤ 11 Doxycycline 30 μg ≥ 14 11–13 ≤ 10 Norfloxacin 10 μg ≥ 17 13 - 16 ≤ 12 Ofloxacin μg ≥ 16 13 - 15 ≤ 12 200 μg ≥ 16 13 - 15 ≤ 12 ≥ 16 11–15 ≤ 10 Fosfomycin Trimethoprim + Sulfamethoxazole 1,25/ 23,75 μg 18 Chuẩn bị canh khuẩn: chủng vi khuẩn E. coli ESBL khẳng định phương pháp đĩa kết hợp, tăng sinh môi trường NA khoảng 24 giờ. Sau pha canh khuẩn, đem canh khuẩn so độ đục với Mac Farland 0,5 tương đương có chứa vi khuẩn khoảng 108 CFU/ml. Chuẩn bị môi trường MHA, độ dày thạch khoảng 4mm. Các đĩa kháng sinh bảo quản theo yêu cầu nhà sản xuất. Không dùng kháng sinh hạn, kháng sinh ẩm ướt. Khi lấy từ tủ lạnh phải để 1-2 nhiệt độ lọ nhiệt độ phòng. Phương pháp tiến hành: dùng tăm vô trùng tẩm canh khuẩn sau trải lên khắp mặt thạch MHA. Sử dụng kẹp đầu nhọn vô trùng để đặt khoanh đĩa kháng sinh lên đĩa thạch. Đặt đĩa kháng sinh lên mặt thạch cho đĩa kháng sinh cách mép đĩa thạch 2cm- 2,5cm đĩa cách 2,5cm – 3,5cm, phải đảm bảo đĩa kháng sinh tiếp xúc phẳng với mặt thạch. Đem ủ 37oC 16-18 giờ. Cách đọc kết kháng sinh đồ: việc đọc kết kháng sinh đồ thực cách đo đường kính vòng vô khuẩn, sau so sánh với bảng tiêu chuẩn đường kính vòng vô khuẩn kháng sinh theo CLSI (2014). 3.2.4 Phương pháp phân tích thống kê. So sánh tỉ lệ dương tính E. coli ESBL lứa tuổi gà thịt phương pháp yates test, gà thịt gà đẻ phương pháp chi bình phương sử dụng phần mềm Minitab 16.0. 19 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 Kết tỉ lệ E. coli ESBL dương tính gà thịt Qua nuôi cấy phân lập E. coli ESBL phương pháp đĩa kết hợp từ mẫu phân 12 gà thịt gồm gà tuần tuổi gà tháng tuổi từ số trại gà công nghiệp huyện Kế Sách - tỉnh Sóc Trăng, kết tỉ lệ vi khuẩn E. coli ESBL dương tính thể bảng 4.1. Bảng 4.1: Tỉ lệ E. coli ESBL dương tính gà thịt Số mẫu khảo sát Số mẫu dương tính Tỷ lệ dương tính (%) Gà thịt tuần tuổi 66,7a Gà thịt tháng tuổi 83,3a Tổng 12 75 Loại gà Các chữ a,b cột khác khác có ý nghĩa thống kê (P < 0,05) Kết bảng 4.1 cho thấy tỉ lệ vi khuẩn E. coli ESBL dương tính phân gà thịt trạng thái khỏe mạnh cao (75%), tỉ lệ vi khuẩn E. coli ESBL dương tính gà thịt tuần tuổi 66,7%, gà thịt tháng tuổi 83,3%. Sự khác biệt ý nghĩa thống kê (P > 0,05). Tỉ lệ gà tuần tuổi dương tính với E. coli ESBL gà thịt cao (66,7%) nhiều nguyên nhân gà bị nhiễm vi khuẩn từ ngày tuổi nhiễm mầm bệnh từ môi trường ấp máy ấp, dụng cụ ấp (Bruce et al., 2008). Theo Hồ Thị Việt Thu (2012) vi khuẩn E. coli diện gà từ ngày tuổi đến nhiều ngày sau nở, hầu hết trường hợp trứng bị nhiễm từ phân nhiễm từ vòi trứng hay ống dẫn trứng, vi khuẩn xuyên qua vỏ trứng lây nhiễm cho gà con, có khoảng 26,5% trứng nhiễm vi khuẩn E. coli từ gà mẹ. Tỉ lệ gà tháng tuổi dương tính với E. coli ESBL gà thịt cao (83,3%) nguyên nhân thời gian thực đề tài cho thấy, hình thức chăn nuôi trại nuôi lớp độn chuồng trấu. Trong đó, gà tháng tuổi có thời gian dài thường xuyên tiếp xúc trực tiếp với phân trấu, mà vi khuẩn E. coli chủ yếu thải qua phân, tỉ lệ gà nhiễm vi khuẩn E. coli cao. Để hạn chế tỉ lệ nhiễm vi khuẩn gà thịt người chăn nuôi cần giữ vệ sinh chuồng nuôi thật tốt sát trùng chuồng trại cẩn thận, vệ sinh sát trùng trứng, 20 máy ấp trước tiến hành ấp trứng để gà sau nở không bị nhiễm E. coli từ phân mang vi khuẩn. Qua kết nghiên cứu cho thấy gà thịt có tỉ lệ E. coli ESBL dương tính tương đối cao không quan tâm chăm sóc, vệ sinh sát trùng chuồng trại cẩn thẩn dịch bệnh dễ xảy hiệu điệu trị thấp. Kết tỉ lệ gà dương tính với E. coli ESBL đề tài cao so với kết nghiên cứu Lin Li et al. (2010) Trung Quốc 18,5%, Duru Carissa et al. (2013) Nigeria 22% Daniela Costa et al. (2009) Bồ Đồ Nha 42,1%. 4.2 So sánh tỉ lệ E. coli ESBL dương tính gà thịt gà đẻ Qua khảo sát ta có tỉ lệ vi khuẩn E. coli ESBL dương tính gà thịt gà đẻ thể bảng 4.2. Bảng 4.2: Kết tỉ lệ E. coli ESBL dương tính gà thịt gà đẻ Loại gà Số mẫu khảo sát Số mẫu dương tính Tỷ lệ dương tính (%) Gà thịt 12 75a Gà đẻ 12 16,7b Tổng 24 11 45,8 P=0,004 Các chữ a,b cột khác khác có ý nghĩa thống kê (P < 0,05) Theo kết bảng 4.2 tỉ lệ dương tính với vi khuẩn E. coli ESBL phân gà thịt 75% cao gà đẻ 16,7%, khác biệt có ý nghĩa thống kê (P = 0,004). Tỉ lệ E. coli ESBL dương tính gà thịt cao gà đẻ nguyên nhân vi khuẩn E.coli diện thường xuyên ruột thải qua phân với số lượng lớn. Bệnh lây qua đường tiêu hóa, qua vết thương da, qua niêm mạc bị tổn thương, (Hồ Thị Việt Thu, 2012) gà dễ nhiễm vi khuẩn E. coli từ phân gà bị nhiễm thải chuồng. Theo thực tế địa bàn, gà đẻ nuôi chuồng lồng, nên việc vệ sinh phân sát trùng chuồng trai thực tốt hơn, gà thịt nuôi chuồng, việc vệ sinh hạn chế. Do thường xuyên tiếp xúc với phân nên gà thịt có tỉ lệ dương tính với E. coli ESBL cao gà đẻ. 21 Để hạn chế tỉ lệ E. coli ESBL dương tính gà thịt người chăn nuôi cần quan tâm tới việc chăm sóc nuôi dưỡng gà đẻ, trứng gà sử dụng làm sản phẩm cho người, trứng bị nhiễm khuẩn, ảnh hương đến sức khỏe người sử dụng gây nên tượng ngộ độc thực phẩm. Ngoài trứng gà sử dụng cho ấp nở tạo giống, gà mẹ mang mầm bệnh gà dể bị nhiễm vi khuẩn sau nở. Do đó, để hạn chế tỉ lệ E. coli ESBL dương tính gà đẻ cần thực vệ sinh sát trùng chuồng lồng cẩn thận, thu nhặt trứng thường xuyên, loại bỏ trứng bị dính phân trứng bị nứt để tránh trứng nhiễm khuẩn bị vỡ ảnh hưởng đến gà không bị nhiễm đàn. Kết nghiên cứu tỉ lệ dương tính gà đẻ bảng 4.2 16,7% kết cao so với kết Sunday A Mamza et al. (2010), Nigeri 5,8%. 4.3 Kết kiểm tra độ nhạy cảm vi khuẩn với kháng sinh Hình 4.1: Kết kháng sinh đồ 22 Qua kết khảo sát tính nhạy cảm 29 khuẩn lạc E. coli ESBL phân lập từ 11/24 mẫu phân gà khỏe huyện Kế Sách tỉnh Sóc Trăng với loại kháng sinh trình bày bảng 4.3. Bảng 4.3: Kết tính nhạy cảm E. coli ESBL với kháng sinh Số khuẩn lạc E. coli ESBL (n=29) STT Kháng Loại kháng sinh Nhạy Ampicillin Số khuẩn lạc 29 Ceftazidime 14 48,3 20,7 31,0 Cefuroxime 25 86,2 0,0 13,8 Cefotaxime 24 82,8 10,3 6,9 Cefaclor 26 89,7 10,3 0,0 Gentamicin 28 96,6 3,4 0,0 Streptomycin 29 100,0 0,0 0,0 Kanamycin 25 86,2 13,8 0,0 Amikacin 0,0 29 100,0 0,0 10 Tetracycline 20,7 22 75,9 3,4 11 Doxycycline 6,9 20 69,0 24,1 12 Norfloxacin 24 82,8 10,3 6,9 13 Ofloxacin 20 69,0 10,3 20,7 14 Fosfomycin 31,0 20 69,0 0,0 29 100,0 0,0 0,0 15 100,0 Số khuẩn lạc Trung gian Tỉ lệ (%) 0,0 Số khuẩn lạc 0,0 Tỉ lệ (%) Tỉ lệ (%) Trimethoprim/ sulfamethoxazole Hình 4.1: Kết kháng sinh đồ mẫu E. coli ESBL phân lập Kết bảng 4.3 cho thấy vi khuẩn E. coli ESBL phân lập từ huyện Kế Sách tỉnh Sóc Trăng nhạy cảm với kháng sinh như: amikacin (100%), tetracycline (75,9%), 23 doxycycline fosfomycin (69%). Tuy nhiên chủng kháng hầu hết với kháng sinh nhóm ß-lactam, kháng sinh bị kháng mạnh (100%) như: ampicillin, streptomycin, trimethoprim/sulfamethoxazole, gentamycin (96,6%), cefaclor (89,7%), cefuroxime kanamycin (86%), cefotaxime norfloxacin (82,8%). Theo kết ampicillin bị kháng E. coli ESBL 100% cao so với kết khảo sát Nigeria năm 2010 ampicillin bị kháng 66,7%. Một nghiên cứu khác Nigeria năm 2013 vi khuẩn E. coli ESBL kháng mạnh (100%) với cefotaxime, nhiên kết nghiên cứu cho thấy cefotaxime bị kháng thấp (82,6%). Hiện tượng đề kháng kháng sinh E. coli ESBL gà cao qui trình nuôi gà thịt người chăn nuôi thường sử dụng nhiều kháng sinh để phòng trị bệnh, kháng sinh trộn vào thức ăn để kích thích tăng trọng. Theo Phạm Kim Đăng ctv. (2012) khảo sát tình hình sử dụng kháng sinh số trại chăn nuôi gà tỉnh Hải Phòng, số 38 loại kháng sinh sử dụng trại, kháng sinh nhóm ß-lactam sử dụng cho phòng bệnh 32,6% trị bệnh 26,7% có loại kháng sinh sử dụng trộn vào thức ăn để kích thích tăng trọng như: chlortetracycline, oxytetracycline, maduramycin, monensin, salinomycin, bambermycin, bacitracin methylene-disalicylate (BMD) colistin. Để hạn chế việc đề kháng kháng sinh đòi hỏi người chăn nuôi cần phải có ý thức quan tâm đến việc sử dụng kháng sinh thật hợp lí, không lạm dụng kháng sinh phòng trị bệnh trộn vào thúc ăn. 24 4.3 Tính đa kháng vi khuẩn E.coli ESBL loại kháng sinh Bảng 4.4 Kết kiểm tra tính đa kháng chủng E.coli ESBL phân lập Số loại kháng sinh đề kháng Số chủng (n=29) Kiểu đa kháng 1. 2. Am + Sm + Bt + Cz + Cu + Ct + Cr Am + Sm + Bt + Ge + Cz + Kn + Nr 1. 2. 3. 4. Am + Sm + Bt + Ge + Cz + Cr + Nr + Of Am + Sm + Bt + Ge + Cu + Ct + Cr + Kn Am + Sm + Bt + Ge + Cz + Cu + Kn + Nr Am + Sm + Bt + Ge + Cz + Kn + Nr + Of 10 11 12 13 1. Am + Sm + Bt + Ge + Cu + Ct + Cr + Kn + Of 2. Am + Sm + Bt + Ge + Cu + Ct + Cr + Kn + Te 1. Am + Sm + Bt + Ge + Cz + Cu + Ct + Cr + Kn +Te 2. Am + Sm + Bt + Ge + Cz +Cu + Ct + Cr + Kn + Nr 3. Am + Sm + Bt + Ge + Cu +Ct + Cr + Kn + Nr + Of 4. Am + Sm + Bt + Ge + Cu + Ct + Cr + Kn + Nr + Fo 1. Am + Sm + Bt + Ge + Cz + Cu + Ct + Cr + Kn + Nr + Of 2. Am + Sm + Bt + Ge + Cu + Ct + Cr + Kn + Nr + Of + Fo 3. Am + Sm + Bt + Ge + Cz + Cu + Ct + Cr + Kn + Nr + Fo 1. Am + Sm + Bt + Ge + Cz + Cu + Ct + Cr + Kn + Te +Nr + Of 2. Am + Sm + Bt + Ge + Cu + Ct + Cr + Kn + Te + Dx + Nr + Of 1. Am + Sm + Bt + Ge + Cz + Cu + Ct + Cr + Kn + Te + Dx + Nr + Of 25 Số chủng Tỉ lệ (%) 1 2 1 1 3,45 3,45 6,90 6.90 3,45 3,45 3,45 17,24 3,45 3,45 6,90 3,45 3,45 10,34 6,90 24,13 6,90 17,24 6,90 31,04 6,90 3,45 10,34 3,45 3,45 Kết bảng 4.4 cho ta thấy chủng E.coli ESBL phân lập kháng đồng thời với nhiều loại kháng sinh với 18 kiểu đa kháng kháng đồng thời với 11 loại kháng sinh chiếm 31,04%, 10 loại kháng sinh chiếm 24,13%, loại kháng sinh 17,24%, loại kháng sinh 6,9%, 12 loại kháng sinh chiếm 10,34% 13 loại kháng sinh chiếm 3,45%. Theo kết kháng sinh đồ E. coli ESBL đề kháng cao với kháng sinh ampicillin, streptomycin, trimethoprim/sulfamethoxazole (100%), gentamycin (96,6%), cefaclor (89,7%), cefuroxime kanamycin (86%), cefotaxime norfloxacin (82,8%). Đồng thời kháng sinh có tỉ lệ xuất thường xuyên kiểu đa kháng, phối hợp kháng sinh điều trị bệnh vi khuẩn E. coli gây cần phải ý tới kháng sinh này. Hiện tượng đa kháng thuốc kháng sinh bổ sung thường xuyên vào thức ăn nước uống để phòng trị bệnh, việc sử dụng kháng sinh không hợp lí không theo khuyến cáo chăn nuôi (Quednau et al., 1998). Qua bảng kết tỉ lệ E. coli ESBL dương tính gà thịt gà đẻ, cho thấy tỉ lệ dương tính E. coli ESBL gà cao (45,8%), kết diện E. coli sinh men ß-lactamase đàn gà công nghiệp huyện Kế Sách tỉnh Sóc Trăng lí có bệnh xảy công tác điều trị số trại gà lại hiệu quả. 26 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1. Kết luận Qua thời gian thực đề tài “Khảo sát diện E. coli sinh men β– lactamase phổ rộng gà khỏe huyện Kế Sách tỉnh Sóc Trăng” đưa đến số kết luận sau: - Tỉ lệ vi khuẩn E. coli ESBL dương tính phân gà khỏe cao (45,8%). - Tỉ lệ vi khuẩn E. coli ESBL dương tính gà thịt (75%) cao gà đẻ (16,7%). - Các chủng E. coli ESBL phân lập nhạy cảm tốt với amikacin (100%), tetracycline (75,9%), doxycycline (69%), fosfomycin (69%). - Các chủng E.coli ESBL phân lập kháng đồng thời với nhiều loại kháng sinh với 18 kiểu đa kháng, kháng đồng thời với 11 loại kháng sinh chiếm 31,04%. 5.2 Đề Nghị Trong trình chăn nuôi người chăn nuôi cần quan tâm vệ sinh sát trùng chuồng trại cẩn thận trước sau thả gà, để hạn chế thấp mức độ vi khuẩn chuồng nuôi. Các đề tài huyện Kế Sách tỉnh Sóc Trăng nên nghiên cứu thêm đến kiểu gen phổ biến mã hóa men β–lactamase phổ rộng. Các kháng sinh amikacin, tetracycline, doxycycline, fosfomycin tiếp tục sử dụng để phòng trị bệnh cho gà kháng sinh hiệu cao với E. coli ESBL. Đối với kháng sinh nhóm β–lactam bị đề kháng mạnh như: ampicillin, cefaclor, cefotaxime, cefuroxime, kết hợp với chất ức chế để nâng cao hiệu sử dụng kháng sinh này. Không nên lạm dụng kháng sinh sử dụng kháng sinh hợp lí, cách, thời gian, liều lượng bệnh. 27 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt 1. Đào Trọng Đạt, Phan Thanh Phượng, Lê Ngọc Mỹ, 1999. Bệnh lợn nái lợn con. Nhà xuất Nông Nghiệp Hà Nội. Trang 57-82. 2. Hồ Thị Việt Thu Nguyễn Đức Hiền, 2012. Bệnh truyền nhiễm gia súc. Nhà xuất Đại học Cần Thơ. Trang 305-314, 321-325. 3. Nguyễn Vĩnh Phước, 1970, Vi sinh vật học Thú Y, tập 2. Nhà xuất Đại học Trung học chuyên nghiệp. 4. Nguyễn Như Thanh, Nguyễn Bá Hiền, Trần Thị Lan Hương, 1997. Vi sinh vật Thú Y. Nhà xuất Nông nghiệp. Trang 80 – 85. 5. Nguyễn Đức Hiền, 2009. Giáo trình Bệnh truyền nhiễm gia cầm. Nhà xuất Trường Đại học Cần Thơ. 6. Nguyễn Văn Hiệp, 2000. Khảo sát diện vi khuẩn Salmonella spp, E.coli Staphylococcus aureus môi trường chăn nuôi gà công nghiệp sản phẩm chăn nuôi hai sở thuộc Thành Phố Hồ Chí Minh. Luận văn Bác sĩ Thú y. Trường Đại Học Nông Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh. 7. Nguyễn Ngọc Hải, 2012. Giáo trình thực hành nghiên cứu vi sinh vật. Nhà xuất lao động. Trang 35, 36, 38, 46. Trường Đại học nông lâm TPHCM. 8. Nguyễn Thanh Hiền, 2013. Phân lập vi khuẩn E. coli Salmonella gà bị tiêu chảy hai trại gà thịt thuộc huyện Châu Thành tỉnh Sóc Trăng. Luận văn Bác Sĩ Thú y. Trường Đại Học Cần Thơ. 9. Phạm Kim Đăng, Nguyễn Tú Nam, Bùi Thị Tho, 2012. Điều tra tình hình sử dụng kháng sinh chăn nuôi gà thành phố Hải Phòng. Khoa học kỹ thuật thú y, số 5, trang 19. 10. Trần Cẩm Vân, 2001. Giáo trình vi sinh vật học môi trường. Nhà xuất Bộ Giáo Dục Hà Nội. Trang 126 – 129. 11. Võ Thị Trà An, 2010. Dược lý thú y. Nhà xuất Nông Nghiệp Thành Phố Hồ Chí Minh. 12. Võ Thị Chi Mai, Ngô Thị Huỳnh Hoa, Huỳnh Công Lý, Lê Kim Ngọc Giao, Hoàng Thị Kim Dung. Trực Khuẩn đường ruột tiết β–lactamase phổ rộng gây nhiễm 28 khuẩn chiếm cư đường ruột phân lập bệnh viện chợ rẫy. Y học TP HCM, 12 (2), 2010). Tài liệu Tiếng Anh 1. Bruce, J. 2008. Automated system rapidly indentifies and characterizes microganisms in food technol, 50, pp 77-81. 2. CLSI, 2014. Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing; Twenty – Second Informational Supplement M100 – S24. Vol.34 No.1 3. Daniela C, aura V, Patricia P et at., (2009). Prevalence of extended-spectrum betalactamase-producing Escherichia coli isolates in faecal samples of broilers. Veterinary Microbiology, 138, pp 339-344. 4. Duru C, Nwanegbo E, Adikwu M (2013). Extended-Spectrum eta-LactamaseProducing Escherichia coli Strains of Poultry Origin in Owerri, Nigeria. World Journal of Medical Sciences, 8(4), pp 349-354. 5. David L. Paterson, Robert A. Bonomo (2005), Extended-Spectrum β-Lactamases: a Clinical Update. Clinical Microbiolory Reviews. 6. Gyles, C. L., Fairbrother J. M., 2010. Escherichia coli. In: Gyles C. L., Prescott J. F., Songer J G and C. O. Thoen (ed). Pathogenesis of Bacterial Infections in Animals 4th, pp 267 – 298. 7. Maryvonne Dho-Moulin, John Morris Fairbrother (1999). Avian pathogenic Escherichia coli. Veterinary Research, BioMed Central, 30 (2-3), pp 299-316. 8. Lin Li, Zhi-Gang Jiang, Li-Ning Xia et at., (2010). Characterization of antimicrobial resistance and molecular determinants of beta-lactamase in Escherichia coli isolated from chickens in China during 1970–2007. Veterinary Microbiology, 144, pp 505–510. 9. Sunday A. M, Godwin E, Gideon G. M (2010). Antibiotic susceptibilitypatterns of beta-lactamase producing Escherchia coli and Staphylococcus aureus isolated for chicken in Maidurugi, Nigeria. Veterinarski arhiv, 80(2), pp 283-297. 10. Quednau, M., Ahrne, S., Petersson, A.C., Molin, G. 1998. Antibiotic resistant strains of Enterooccus isolated from Swedish and Danish retailed chicken and pork. J Appl Microbiol, 84, pp 1163-1170 29 Trang web 1. Chăn nuôi Việt Nam (2013), http://channuoivietnam.com/thong-ke-chan-nuoi/, ngày cập nhật 2/12/2014. 2. Http://en.wikipedia.org/wiki/Beta-lactamase, ngày cập nhật 9/12/2014 3. Http://www.thepoultrysite.com/publications/6/diseases-of-poultry/178/escherichiacoli-infections, ngày cập nhật 9/12/2014. 4.Http://biology.clc.uc.edu/fankhauser/labs/microbiology/gram_stain/Gram_stain_ima ges/index_gram_stain_images.html, ngày cập nhật 10/12/2014. 30 PHỤ CHƯƠNG 1. Một số hình ảnh ghi nhận thời gian thực đề tài Hình 1: Khuẩn lạc E. coli trường MC môi Hình 3: Đĩa kết hợp khẳng định E. coli ESBL Hình 2: Sinh hóa khẳng định vi khuẩn E. Coli Hình 4: Khuẩn lạc E. coli môi trường NA 31 2. Kết phân tích thống kê So sánh tỉ lệ dương tính E.coli ESBL phân gà thịt tuần tuổi gà thịt tháng tuổi Số mẫu dương tính Đối tượng STT Gà thịt tuần tuổi Gà thịt tháng tuổi Trị số Chi Bình Phương Độ Tự P (Ho) = 0,813664 Số mẫu âm tính Số mẫu phân lập 6 0,055556 NS Kết luận: tỉ lệ nhiễm E.coli ESBL gà tuần tuổi gà tháng tuổi khác ý nghĩa thống kê. So sánh tỉ lệ dương tính E. coli ESBL phân gà thịt gà đẻ Đối tượng STT Gà thịt Gà đẻ Số mẫu dương tính Số mẫu âm tính 10 Số mẫu phân lập 12 12 Chi-Square Test: Dương. Âm Expected counts are printed below observed counts Chi-Square contributions are printed below expected counts Dương 5,50 2,227 Âm 6,50 1,885 Total 12 5,50 2,227 10 6,50 1,885 12 Total 11 13 24 Chi-Sq = 8,224. DF = 1. P-Value = 0,004 Kết luận: tỉ lệ nhiễm E.coli ESBL gà thịt với gà đẻ khác có ý nghĩa thống kê (p=0,004). 32 [...]... 2010) Hiện nay, ở Việt Nam việc nghiên cứu về E coli ESBL trên động vật nói chung cũng như gà nói riêng còn hạn chế Xuất phát từ tình hình thực tế trên nên đề tài Khảo sát sự hiện diện của E coli sinh men β–lactamase phổ rộng trên gà khỏe tại huyện Kế Sách tỉnh Sóc Trăng được thực hiện với mục tiêu sau: - Xác định tỉ lệ E coli ESBL dương tính trên gà khỏe ở một số trại gà công nghiệp thuộc huyện Kế Sách. .. 5,8% 4.3 Kết quả kiểm tra độ nhạy cảm của vi khuẩn với kháng sinh Hình 4.1: Kết quả kháng sinh đồ 22 Qua kết quả khảo sát tính nhạy cảm của 29 khuẩn lạc E coli ESBL phân lập từ 11/24 mẫu phân gà khỏe tại huyện Kế Sách tỉnh Sóc Trăng với các loại kháng sinh được trình bày ở bảng 4.3 Bảng 4.3: Kết quả tính nhạy cảm của E coli ESBL với kháng sinh Số khuẩn lạc E coli ESBL (n=29) STT Kháng Loại kháng sinh Nhạy... mẫu phân của 12 gà thịt gồm 6 gà 1 tuần tuổi và 6 gà 1 tháng tuổi từ một số trại gà công nghiệp ở huyện Kế Sách - tỉnh Sóc Trăng, kết quả tỉ lệ vi khuẩn E coli ESBL dương tính được thể hiện trong bảng 4.1 Bảng 4.1: Tỉ lệ E coli ESBL dương tính trên gà thịt Số mẫu khảo sát Số mẫu dương tính Tỷ lệ dương tính (%) Gà thịt 1 tuần tuổi 6 4 66,7a Gà thịt 1 tháng tuổi 6 5 83,3a Tổng 12 9 75 Loại gà Các chữ... Nguyễn văn Hiệp (2000), khảo sát sự hiện diện của vi khuẩn E coli trong môi trường chăn nuôi gà công nghiệp và sản phẩm chăn nuôi trên địa bàn Thành phố Hồ Chí Minh cho biết có 131/366 mẫu khảo sát có sự hiện diện của E coli chiếm 35,79%, trong đó phân nhiễm 46,87% Theo kết quả nghiên cứu của Duru Carissa et al (2013) có 45/159 mẫu swab phân lập trên gà tại Nigeria nhiễm E coli chiếm tỉ lệ 28,3% Theo... phát hiện của E coli ESBL là 42,1% (Daniela Costa et al., 2009) Theo kết quả nghiên cứu của Lin Li et al (2010), khảo sát trên 347 mẫu swab từ lổ huyệt của cả gà khỏe và gà bệnh tại các tỉnh Liêu Ninh, Hà Bắc, Sơn Đông, Bắc Kinh, Hà Nam, Giang Tây, Tứ Xuyên và Quảng Đông của Trung Quốc từ năm 2004 – 2007 cho tỉ lệ phát hiện của E coli ESBL là 18,5% Tại Maiduguri thuộc Nigeria, kết quả nghiên cứu trên. .. và gà đẻ, cho thấy tỉ lệ dương tính E coli ESBL trên gà khá cao (45,8%), đây là kết quả đầu tiên về sự hiện diện của E coli sinh men ß-lactamase trên đàn gà công nghiệp tại huyện Kế Sách tỉnh Sóc Trăng và đây cũng là một trong những lí do tại sao khi có bệnh xảy ra công tác điều trị tại một số trại gà lại kém hiệu quả 26 ... còn hạn chế Hiện nay ESBL thường gặp trong các chủng vi khuẩn đường ruột 8 như Klebsiella sp và E coli, trong đó đặt biệt là vi khuẩn E coli được phát hiện nhiều nhất 2.2.2 Tình hình nghiên cứu về E coli ESBL Một số nghiên cứu ở nước ngoài cho thấy tỉ lệ vi khuẩn E coli ESBL dương tính trên gà được thể hiện như sau: Tại các tỉnh phía bắc Bồ Đồ Nha, kết quả khảo sát trên 76 mẫu phân gà thịt tại lò mổ... được sử dụng rộng rãi nên tỉ lệ vi khuẩn đề kháng các kháng sinh này rất cao Hiện nay đã xuất hiện nhiều chủng vi khuẩn gram âm sinh men ß-lactamase phổ rộng đề kháng các kháng sinh nhóm ß-lactam Kết quả nghiên cứu ở Nigeria cho thấy tỉ lệ E coli ESBL dương tính trên phân gà thịt là 22% (Duru Carissa et al., 2013) Từ năm 2004 – 2007 ở Trung Quốc tỉ lệ phát hiện E coli ESBL trong phân gà là 18,5% (Lin... vệ sinh sát trùng chuồng trại cẩn thẩn thì dịch bệnh dễ xảy ra và hiệu quả điệu trị sẽ thấp Kết quả tỉ lệ gà dương tính với E coli ESBL trong đề tài cao hơn so với kết quả nghiên cứu của Lin Li et al (2010) tại Trung Quốc là 18,5%, Duru Carissa et al (2013) tại Nigeria là 22% và Daniela Costa et al (2009) tại Bồ Đồ Nha là 42,1% 4.2 So sánh tỉ lệ E coli ESBL dương tính trên gà thịt và gà đẻ Qua khảo sát. .. sát ta có tỉ lệ vi khuẩn E coli ESBL dương tính trên gà thịt và gà đẻ được thể hiện trong bảng 4.2 Bảng 4.2: Kết quả tỉ lệ E coli ESBL dương tính trên gà thịt và gà đẻ Loại gà Số mẫu khảo sát Số mẫu dương tính Tỷ lệ dương tính (%) Gà thịt 12 9 75a Gà đẻ 12 2 16,7b Tổng 24 11 45,8 P=0,004 Các chữ a,b trong cùng một cột khác nhau thì khác nhau có ý nghĩa thống kê (P < 0,05) Theo kết quả bảng 4.2 tỉ lệ dương . thực hiện đề tài. Chân thành cảm ơn! iv TÓM LƯỢC Đề tài Khảo sát sự hiện diện của Escherichia coli sinh men β–lactamase phổ rộng trên gà khỏe tại huyện Kế Sách tỉnh. TRÊN GÀ KHỎE TẠI HUYỆN KẾ SÁCH TỈNH SÓC TRĂNG ii TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG BỘ MÔN THÚ Y Đề tài Khảo sát sự hiện diện của Escherichia coli sinh men. gà khỏe tại huyện Kế Sách tỉnh Sóc Trăng được thực hiện với mục tiêu sau: - Xác định tỉ lệ E. coli ESBL dương tính trên gà khỏe ở một số trại gà công nghiệp thuộc huyện Kế Sách tỉnh Sóc Trăng.