khảo sát sự hiện diện của vi khuẩn e. coli sinh beta lactamase phổ rộng trên gà khỏe tại một số trại gà thuộc huyện trần đề tỉnh sóc trăng

TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG BỘ MÔN THÚ Y VÕ QUỐC NGUYỄN KHẢO SÁT SỰ HIỆN DIỆN CỦA VI KHUẨN E. coli SINH BETA LACTAMASE PHỔ RỘNG TRÊN GÀ KHỎE TẠI MỘT SỐ TRẠI GÀ THUỘC HUYỆN TRẦN ĐỀ TỈNH SÓC TRĂNG Luận văn tốt nghiệp Ngành: BÁC SĨ THÚ Y Cần Thơ, 2014 TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG BỘ MÔN THÚ Y Luận văn tốt nghiệp Ngành BÁC SĨ THÚ Y KHẢO SÁT SỰ HIỆN DIỆN CỦA VI KHUẨN E. coli SINH BETA LACTAMASE PHỔ RỘNG TRÊN GÀ KHỎE TẠI MỘT SỐ TRẠI GÀ THUỘC HUYỆN TRẦN ĐỀ TỈNH SÓC TRĂNG Giảng viên hƣớng dẫn Sinh viên thực HUỲNH NGỌC TRANG VÕ QUỐC NGUYỄN MSSV: 3102967 Lớp: CN10Y4A1 – K36 Cần Thơ, 2014 i TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG BỘ MÔN THÚ Y Đề tài: “Khảo sát diện vi khuẩn E. coli sinh beta lactamase phổ rộng gà khỏe số trại gà thuộc huyện Trần Đề tỉnh Sóc Trăng”, sinh viên Võ Quốc Nguyễn thực phòng thí nghiệm Bộ môn Thú Y, khoa Nông Nghiệp & Sinh Học Ứng Dụng, trƣờng Đại Học Cần Thơ. Từ tháng đến tháng 12 năm 2014. Cần Thơ, ngày….tháng… năm 2014 Cần Thơ, ngày….tháng… năm 2014 Giảng viên hƣớng dẫn Duyệt Bộ Môn Huỳnh Ngọc Trang Cần Thơ, ngày….tháng… năm 2014 Duyệt Khoa Nông Nghiệp Sinh Học Ứng Dụng ii LỜI CẢM ƠN Trong trình học tập thực luận văn nổ lực thân, có nguồn động viên dạy bảo tận tình cha mẹ thầy cô. Tôi xin thành kính dâng lên cha mẹ lòng biết ơn sâu sắc, ngƣời dành đời cho cất bƣớc đến trƣờng. Xin chân thành cảm ơn cô Bùi Thị Lê Minh cô Huỳnh Ngọc Trang bảo, tận tình giúp đỡ trình thực đề tài. Quý thầy cô Bộ môn Thú Y Bộ môn Chăn Nuôi truyền đạt cho kiến thức, kinh nghiệm quý báu, lẫn nhận thức xã hội trình học tập trƣờng . Xin chân thành cảm ơn tất anh chị cao học k19, bạn bè lớp Dƣợc Thú y k36 em thú y k37 giúp đỡ suốt thời gian học tập thực đề tài. Cuối lời xin chúc quý thầy cô anh, chị, em bạn dồi sức khỏe thành đạt sống. Võ Quốc Nguyễn iii TÓM LƢỢC Đề thực để khảo sát diện vi khuẩn Escherichia coli ESBL gà khỏe huyện Trần Đề. Qua khảo sát 22 gà khỏe trại huyện Trần Đề tỉnh Sóc Trăng phương pháp đĩa kết hợp thử nghiệm kháng sinh đồ, từ tháng đến tháng 12 năm 2014. Kết diện E. coli ESBL gà khỏe có tỉ lệ cao 50%. Sự diện E. coli ESBL phân 50%, thịt 4,54%, phổi 18,18%, không phát E. coli sinh ESBL gan. Từ 11 mẫu dương tính E. coli ESBL chon 23 khuẩn lạc E. coli sinh ESBL để kiểm tra tính nhạy cảm với kháng sinh ghi nhân vi khuẩn kháng với ampicillin, cofaclor đồng tỉ lệ 100%, trimethoprim – sulfamethoxazole 95,65% cefuroxime 86,96%. Tuy nhiên, vi khuẩn nhạy với amikacin, doxycycline đồng tỉ lệ 100%, fosfomycin 95,65%. Các chủng E. coli ESBL đa kháng từ đến loại kháng sinh với 14 kiểu hình đa kháng, kháng lúc loại kháng sinh 43,47% phổ biến. iv DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Chữ viết đầy đủ CSLI Clinical and Laboratory Standards Institute E. coli Escheriachia coli MHA Mueller Hinton Agar NA Nutrient Agar MR Methyl Red VP Voges ProsKauer MC MacConkey Agar ESBL Extended spectrum beta lactamase PBP Penicillin – binding protein v MỤC LỤC TRANG BÌA . .i TRANG DUYỆT ii LỜI CẢM ƠN . iii TÓM LƢỢC iv DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT v DANH SÁCH BẢNG . viii DANH SÁCH HÌNH ix CHƢƠNG 1. ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG 2. CƠ SỞ LÝ LUẬN .2 2.1. Tổng quan vi khuẩn Escherichia coli 2.1.1 Đặc điểm hình thái 2.1.2 Đặc điểm nuôi cấy 2.1.3 Đặc điểm sinh hóa 2.1.4 Sức đề kháng tính gây bệnh . 2.2 Kháng sinh nhóm beta lactam . 2.2.1 Cấu trúc kháng sinh nhóm beta lactam . 2.2.2 Phân loại kháng sinh nhóm beta lactam . 2.2.3 Cơ chế tác dụng kháng sinh nhóm beta lactam 2.3 Đề kháng kháng sinh . 2.3.1 Hiện tƣợng đề kháng kháng sinh 2.3.2 Cơ chế đề kháng kháng sinh . 2.4 Men beta lactamase phổ rộng 2.4.1 Tổng quan ESBL 2.4.2 Một số phƣơng pháp phát vi khuẩn sinh ESBL 2.5 Tình hình nghiên cứu giới CHƢƠNG 3. PHƢƠNG TIỆN VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 12 3.1 Phƣơng tiện nghiên cứu 12 3.1.1 Thời gian, địa điểm, đối tƣợng . 12 3.1.2 Thiết bị, dụng cụ hóa chất thí nghiệm . 12 vi 3.2 Phƣơng pháp nghiên cứu . 12 3.2.1 Phƣơng pháp lấy mẫu . 12 3.2.2 Phƣơng pháp phân lập vi khuẩn E. coli ESBL . 13 3.3 Phƣơng pháp làm kháng sinh đồ . 14 3.4 Phƣơng pháp xử lý số liệu . 17 CHƢƠNG 4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .18 4.1. Kết diện E. coli ESBL gà khỏe huyện Trần Đề tỉnh Sóc Trăng. 18 4.2 Kết diện vi khuẩn E. coli ESBL thân thịt mẫu phân gà khỏe 19 4.3 Kết khảo sát tính nhạy cảm E. coli ESBL với số kháng sinh . 21 4.4 Kết tính đa kháng vi khuẩn E. coli ESBL 23 CHƢƠNG 5. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ .25 5.1 Kết luận . 25 5.2 Đề nghị 25 TÀI LIỆU THAM KHẢO .26 PHỤ CHƢƠNG 29 vii DANH SÁCH BẢNG Bảng Tên bảng Trang 3.1 Đặc tính sinh hóa vi khuẩn E. coli 15 3.2 Tiêu chuẩn phân tích kết đƣờng kính vô khuẩn kháng sinh (CLSI, 2014) 16 4.1 Tỉ lệ gà khỏe dƣơng tính với E. coli ESBL 18 4.2 Tỉ lệ dƣơng tính với E. coli ESBL phân, gan, thịt, phổi 19 4.3 4.4 4.5 Tỉ lệ dƣơng tính với E. coli ESBL phân, gan, thịt, phổi gà thịt gà đẻ Đánh giá tính kháng, trung gian, nhạy kháng sinh vi khuẩn E. coli ESBL Tỉ lệ đa kháng kiểu hình đa kháng E. coli ESBL viii 20 21 23 DANH SÁCH HÌNH Hình Tên Hình Trang Vi khuẩn E. coli dƣới kính hiển vi quang học (X=10µm) Quy trình phân lập vi khuẩn E. coli ESBL 13 Phản ứng sinh hóa xác định E. coli 15 Vi khuẩn E. coli môi trƣờng MC 15 ix 3.4 Phƣơng pháp xử lý số liệu Xử lý số liệu tỷ lệ nhiễm gà đẻ thịt loại mẫu phƣơng pháp Chi – square test sử dụng phần mềm Minitab 16 Microsoft Exel 2010. 17 CHƢƠNG 4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1. Kết diện E. coli ESBL gà khỏe huyện Trần Đề tỉnh Sóc Trăng Qua phân lập vi khuẩn E. coli ESBL gan, thịt, phổi phân 22 gà gồm 11 gà thịt 11 gà đẻ số trại gà công nghiệp huyện Trần Đề - tỉnh Sóc Trăng, kết đƣợc trình bảng 4.1. Bảng 4.1: Tỉ lệ gà khỏe dƣơng tính với E. coli ESBL Nhóm mẫu Số mẫu khảo sát (con) Dƣơng tính Tỉ lệ(%) Gà thịt 11 81,82a Gà đẻ 11 18,18b Tổng 22 11 50 Những cột có chữ số mũ a, b khác khác biệt có ý nghĩa thống kê (p [...]... ngành chăn nuôi gà và đang hình thành một số trang trại chăn nuôi tập trung, công nghiêp với các mô hình sản xuất liên doanh, do đó vi c nghiên cứu sự hiện diện E coli ESBL là rất cần thiết Đề tài Khảo sát sự hiện diện của vi khuẩn E coli sinh beta lactamase phổ rộng trên gà khỏe tại một số trại gà thuộc huyện Trần Đề tỉnh Sóc Trăng đƣợc thực hiện Mục tiêu của đề tài: - Khảo sát sự hiện diện của vi. .. ức chế vi khuẩn E coli ESBL nhƣ acid clavulanic, sulbactam, tazobactam vào kháng sinh nhóm beta lactam 24 CHƢƠNG 5 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận Qua thời gian thực hiện đề tài đƣa đến một số kết luận sau: Sự hiện diện E coli ESBL trên gà khỏe tại huyện Trần Đề tỉnh Sóc Trăng tƣơng đối cao 50% Trong đó sự hiện diện E coli ESBL trên gà thịt cao hơn gà đẻ Phát hiện sự hiện diện E coli ESBL trên mẫu... sở giết mổ tại Pháp nhiễm E coli ESBL, 18 tƣơng dƣơng với nghiên cứu của Gundogan and Avci (2013) 66,6% mẫu thịt gà tại Thổ Nhĩ Kỳ nhiễm E coli ESBL 4.2 Kết quả sự hiện diện của vi khuẩn E coli ESBL trên thân thịt và mẫu phân của gà khỏe Khảo sát từ 22 mẫu thân thịt và mẫu phân của gà khỏe tại huyện Trần Đề tỉnh Sóc Trăng tỉ lệ dƣơng tính với vi khuẩn E coli ESBL đƣợc thể hiện qua 2 bảng sau: Bảng 4.2... thƣờng xuyên kiểm tra tính nhạy cảm của vi khuẩn với kháng sinh bằng kháng sinh đồ hoặc nồng độ ức chế tối thiểu để biết đƣợc sự nhạy cảm của vi khuẩn với kháng sinh ở từng trại để sử dụng kháng sinh hiệu quả 22 4.4 Kết quả tính đa kháng của vi khuẩn E coli ESBL Khảo sát 23 chủng E coli ESBL từ 11/22 mẫu gà khỏe tại huyện Trần Đề tỉnh Sóc Trăng với sự đa kháng với các kháng sinh đƣợc trình bày qua bảng sau:... xử lý số liệu Xử lý số liệu về tỷ lệ nhiễm giữa gà đẻ và thịt các loại mẫu bằng phƣơng pháp Chi – square test sử dụng phần mềm Minitab 16 và Microsoft Exel 2010 17 CHƢƠNG 4 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 Kết quả sự hiện diện E coli ESBL trên gà khỏe tại huyện Trần Đề tỉnh Sóc Trăng Qua phân lập vi khuẩn E coli ESBL trên gan, thịt, phổi và phân của 22 con gà gồm 11 gà thịt và 11 gà đẻ tại 1 số trại gà công... khuẩn E coli ESBL trên gà khỏe ở huyện Trần Đề tỉnh Sóc Trăng Thử tính nhạy cảm đối với một số loại kháng sinh của vi khuẩn E coli ESBL 1 CHƢƠNG 2 CƠ SỞ LÝ LUẬN 2.1 Tổng quan về vi khuẩn Escherichia coli Trực khuẩn ruột già Escherichia coli (E coli) còn có tên là Bacterium coli commune, Bacillus coli communis đƣợc Escherich phân lập năm 1885 từ phân trẻ em bị tiêu chảy Đây là một trong những loài vi. .. và ngày càng nghiêm trọng gây nhiều khó khăn trong điều trị Sự hiện diện của gene ESBL trong E coli từ động vật sản xuất thực phẩm nhƣ gà có thể gây nguy hiểm đến sức khỏe con ngƣời (Laube, 2013) Một số nghiên cứu trên thế giới cho thấy sự hiện diện của vi khuẩn E coli ESBL đã xuất hiện trên gà khỏe, theo nghiên cứu của Delphine Girlich (2007) có E coli ESBL 10,7% có trong phân manh tràng của gà kh e.. . Valeria Bortolaia et al (2010) thử nghiệm sự nhạy cảm của vi khuẩn E coli ESBL với kháng sinh của 67 E coli ESBL từ 1 trang trại gà giống và 4 trang trại gà thịt nằm ở Đông Bắc Italy Lấy 18 mẫu thử kháng sinh đồ trong đó trại 1: gà thịt 12 ngày tuổi (n=3), trại 2: gà thịt 35 ngày (n=2), trại 3: gà thịt 70 ngày (n=8), trại 4: (n=1) gà thịt 35 ngày tuổi, trại 5: gà giống (n=4) Kết quả 94% (17/18) phân... hạn chế sự bùng phát của mầm bệnh thì sử dụng kháng sinh và thuốc thú y trong điều trị ngày càng nhiều, tuy nhiên vi c sử dụng rộng rãi kháng sinh tạo điều kiện để vi khuẩn E coli có khả năng kháng kháng sinh Trong đó bệnh nhiễm khuẩn E coli là bệnh nhiễm khuẩn phổ biến nhất trên gia cầm Vi khuẩn E coli kháng kháng sinh nhóm beta lactam bằng cách sinh men beta lactamase phổ rộng (ESBL) là một trong... là phổ biến 5.2 Đề nghị Tiếp tục khảo sát trên gà khỏe và gà bệnh cùng 1 địa điểm để so sánh tỉ lệ hiện diện của E coli ESBL Nghiên cứu các kiểu gene mã hóa men beta lactamase nhƣ TEM, SHV, CTX Cần vệ sinh sát trùng , xử lý chất thải tại các trại chăn nuôi hạn chế sự lây lan của vi khuẩn E coli ESLB Cần phải thƣờng xuyên kiểm tra tính nhạy cảm của vi khuẩn với kháng sinh bằng kháng sinh đồ hoặc nồng . từ 92 7 mẫu phân trực tràng trên ngƣời tại 4 bệnh viện phía nam Hà Lan, 89 mẫu thịt gà và 85 mẫu thịt bò và 57 mẫu thịt heo. Kết quả đa phần E. coli ESBL dƣơng tính trên thịt gà (68/ 89) 76 ,8%,. nhiệt độ thích hợp là 37 o C, pH thích hợp là 7, 2 - 7, 4, có thể phát triển đƣợc ở pH từ 5 - 8 (Lƣu Hữu Mãnh, 20 09) . Môi trƣờng thạch dinh dƣỡng (NA): sau khi ủ 24 giờ ở 37 o C hình thành khuẩn. phần E. coli ESBL dƣơng tính trên thịt gà (68/ 89) 76 ,8%, thịt bò 4 ,7% (4/85), và thịt heo 1,8% (1/ 57) . Có tổng cộng 4 ,9% (4,5 /92 7) mẫu phân trực tràng trên ngƣời dƣơng tính với E. coli ESBL. Kết